瘦素拮抗缺氧诱导胎肺Ⅱ型上皮细胞凋亡及其机制

瘦素（1eptin）是ob基因编码的一种蛋白质类激素，与胎儿生长发育关系密切。最近，发现瘦素可以促进胎儿肺发育，但其机制不明。有报道认为，瘦素促胎肺发育的作用可能与瘦素增强细胞分裂蛋白激酶活性和促进气管上皮细胞增殖有关。也有研究证实，瘦素可以调节大鼠肺Ⅱ型上皮细胞（AECⅡ）的分化。而瘦素是否能够通过阻止AECⅡ凋亡来改善肺发育尚未见相关文献报道。为此，本研究建立了缺氧诱导胎肺AECⅡ凋亡模型，并观察瘦素对AECⅡ凋亡及细胞周期的影响，旨在从细胞水平上探讨瘦素促进胎肺成熟的可能机制。     

细胞周期蛋白B1在卵巢癌中的研究进展

细胞周期蛋白B1（cyclin B1）是细胞周期G2／M期的重要调控因子，主要促进细胞有丝分裂和卵母细胞的成熟。生理情况下，cyclin B1在S期合成，G2期达高峰，M期进入胞核促进细胞分裂增殖。许多研究显示，cyclin B1含量的增加通常出现在永生化的肿瘤细胞，cyclin B1参与卵巢细胞网络调控系统。其改变与卵巢癌的发生及恶性生物学行为密切相关。cyclin Bl蛋白在卵巢癌细胞周期中异常表达，呈现出癌基因的特性，cyclin Bl过表达与定位的改变受多个基因的调节，而且与卵巢癌的发生发展、预后、诊断和治疗密切相关。     

细胞周期蛋白B1在卵巢癌中的研究进展

细胞周期蛋白B1(cyclin B1)是细胞周期G2/M期的重要调控因子,主要促进细胞有丝分裂和卵母细胞的成熟.生理情况下,eyclin B1在S期合成,G2期达高峰,M期进入胞核促进细胞分裂增殖.许多研究显示,eyelin B1含量的增加通常出现在永生化的肿瘤细胞,cyclin B1参与卵巢细胞网络调控系统,其改变与卵巢癌的发生及恶性生物学行为密切相关.cyclin B1蛋白在卵巢癌细胞周期中异常表达,呈现出癌基因的特性,cyclln B1过表达与定位的改变受多个基因的调节,而且与卵巢癌的发生发展、预后、诊断和治疗密切相关.     

细胞周期素D1和p53蛋白在人子宫内膜癌共同异常表达

在正常细胞周期中,肿瘤抑制基因产物p53和细胞周期素D1有协同作用。如果这种协同作用异常就可导致细胞的恶变。许多人类癌瘤中已确定突变型p53蛋白的过度表达。为探讨周期素D1在子宫内膜癌发生中的作用,对58例正常子宫内膜和74例子宫内膜癌进行研究。据FIGO分期和分级,其中Ⅰ期51例,Ⅱ期8例,Ⅲ期15例,内有G1 39例,G2 23例,G3 12例。所有标本均用10％磷酸盐缓冲的     

骨化三醇对人宫颈癌SiHa细胞维生素D受体及S期激酶相关蛋白的影响

目的：检测骨化三醇对人宫颈癌SiHa细胞维生素D受体（VDR）及S期激酶相关蛋白2（Skp2）表达的影响,探讨其抗癌机制。方法：选用人宫颈癌SiHa细胞进行体外培养。CCK-8法测定骨化三醇对细胞生长抑制率的影响;流式细胞仪进行细胞周期分析;Western blot法检测VDR及Skp2表达的变化。结果：（5×10^-8～10^-6）mol／L骨化三醇作用于SiHa细胞1～4天,细胞生长增殖均受到显著抑制;且随着作用浓度增加,细胞增殖能力逐渐下降。10^-7mol／L骨化三醇作用于SiHa细胞后,G0／G1期细胞比例增加,S、G2／M期细胞比例降低,细胞增殖指数（PI）降低（P〈0.05）;VDR蛋白表达增加（P〈0.05）,Skp2蛋白表达显著减少（P〈0.01）。结论：骨化三醇对人宫颈癌SiHa细胞的增殖具有显著的抑制作用,其机制可能是通过上调VDR的表达,参与Skp2基因转录的调控,降低Skp2表达。     

1,25二羟维生素D3联合顺铂对子宫内膜癌HEC-1-A细胞增殖及Skp2/p27表达的影响

目的:探讨1,25二羟维生素D3[1,25(OH)2D3]与顺铂(DDP)联合抑制人子宫内膜癌HEC-1-A细胞的增殖,测定二者作用下S期激酶相关蛋白(Skp2)、抑癌基因p27蛋白的表达。方法:用CCK-8法测定1,25(OH)2D3、DDP及二者联合处理后细胞增殖情况,用流式细胞仪分析细胞周期,用W estern blot检测Skp2及p27蛋白表达的变化。结果:与对照组相比,1,25(OH)2D3、DDP作用下细胞吸光度(OD)值减少,细胞增殖受到抑制(P0.01),二者联用时此作用明显增强;1,25(OH)2D3、DDP均能增加G0/G1期细胞比例,降低S、G2/M期细胞比例,从而降低细胞增殖指数(P0.01);二者作用下Skp2表达减少,p27蛋白表达增多。结论:1,25(OH)2D3有增强DDP抗肿瘤的作用,二者均可能通过下调Skp2、上调p27蛋白表达,抑制癌细胞增殖。     

丹参酮ⅡA诱导人卵巢癌SKOV3细胞凋亡及机制的研究

目的：观察中药丹参有效提取成分之一丹参酮ⅡA（TanⅡA）对人卵巢癌细胞株SKOV3的增殖和凋亡的诱导作用,及对基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响,探讨其可能的抗肿瘤作用机制。方法：体外培养卵巢癌SKOV3细胞,随机分组,实验组给予不同浓度TanⅡA处理细胞,倒置显微镜及四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法观察实验组与对照组细胞增殖抑制情况;流式细胞术检测凋亡率及细胞周期变化;免疫荧光细胞化学法检测细胞MMP-2、VEGF蛋白表达改变;实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测MMP-2、VEGFmRNA表达水平。结果：TanⅡA对人卵巢癌SKOV3细胞的增殖具有抑制作用,呈时间-剂量依赖性;实验组较对照组G0/G1期细胞数量增多,而S期细胞数量减少;MMP-2、VEGF蛋白表达及基因表达明显下调,与对照组相比差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：TanⅡA对卵巢癌SKOV3细胞有明显的增殖抑制及诱导凋亡作用;TanⅡA可下调细胞MMP-2、VEGF的表达,这可能是其抗肿瘤作用机制之一。     

p21CIP1/WAF1蛋白和增殖细胞核抗原在子宫内膜癌中的表达

目的：研究细胞周期调控与子宫内膜癌的关系。方法：应用免疫组化技术对45份子宫内膜癌组织中P21CIP1／WAF1蛋白和增殖细胞核抗原（PCNA）进行检测。结果：45份子宫内膜癌组织中30份（66．7％）P21CIP1／WAF1蛋白阳性，对照组均为阳性（P＜0．01）、PCNA（＋）18份，（＋＋）21份。P21CIP1／WAF1阳性率与PCNA指数呈负相关（P＜0．05）。结论：子宫内膜癌的发生与细胞周期调控有关。     

Cyclin G1的异常表达与子宫内膜癌发生的关系

目的:探讨细胞周期蛋白G1(cyclin G1)与子宫内膜癌发生的关系。方法:运用免疫组织化学、原位杂交技术检测25例内膜癌组织cyclin G1蛋白和mRNA的表达,并与30例正常子宫内膜进行对照。结果:免疫组化结果显示,cyclin G1蛋白在正常增殖期子宫内膜上皮细胞仅有微弱表达,而在分泌期子宫内膜上皮细胞呈高表达,且定位在细胞核内,但在高中分化和低分化子宫内膜腺癌中均无表达。原位杂交结果所示,cyclin G1 mRNA的表达与蛋白水平的表达一致,但mRNA定位于细胞的胞浆中。结论:cyclin G1低表达可能与子宫内膜癌的发生有关。     

二氟甲基鸟氨酸对宫颈永生化细胞细胞周期的影响及调控机制

目的观察二氟甲基鸟氨酸（DFMO）对人宫颈永生化上皮细胞细胞周期的影响，并探讨其细胞周期调控机制。方法官颈永生化上皮细胞系（H8细胞）单层培养，应用磺酰罗丹明B（SRB）法，绘制细胞生长曲线，并获得抑制50％细胞生长所需药物浓度（IC50）。应用流式细胞仪分析细胞周期。应用免疫荧光分析检测细胞周期调控因子cyclinD1、CDK4、p21的蛋白表达。应用RT-PCR半定量检测cyclinD1、CDK4、p21的mRNA表达。结果DFMO对宫颈永生化上皮细胞（H8）有生长抑制作用，DFMO对H8细胞作用第5天的IC50为1mM。DFMO作用后使H8细胞阻滞于G1期。DFMO作用后降调节H8细胞cyclinD1蛋白（P〈0．01）和mRNA（P〈0.05）的表达。DFMO对H8细胞的CDK4蛋白表达无明显影响（P〉0．05），但使CDK4mRNA的水平降低（P〈O．05）。DFMO对H8细胞p21蛋白和mRNA表达均无明显影响（P〉0．05）。结论DFMO使宫颈永生化上皮细胞细胞周期阻滞于G1期，其作用机制之一主要是通过降调节cyclin D1 mRNA和蛋白的表达。DFMO可能作为一种细胞周期调控剂来治疗宫颈癌前病变。     

神经肽P物质对高氧暴露下Ⅱ型肺泡上皮细胞的影响及其与细胞外信号调节激酶信号转导通路关系研究

摘要：目的　探讨感觉神经肽P物质（SP）对高氧暴露下Ⅱ型肺泡上皮细胞（AECⅡ）的影响及其与细胞外信号调节激酶（ERK）信号转导机制的关系。 方法　分离纯化原代早产鼠AECⅡ,随机分为空气暴露组、高氧暴露组、SP干预空气暴露组、SP干预高氧暴露组,空气暴露组氧体积分数为0.21（21%）,高氧暴露组氧体积分数为0.95（95%）,SP干预组于暴露前加入SP 1×10-6 mol/L,在置于氧体积分数为0.21（21%）和0.95（95%）中各组分别暴露12、24和48 h,电镜观察AECⅡ的形态变化;MTT法及流式细胞仪测定其增殖率和凋亡率;蛋白质免疫印迹法（Western blot）检测磷酸化ERK的动态变化。 结果　与空气暴露组比较,高氧组暴露12、24、48 h 后AECⅡ增殖率明显降低,凋亡率明显增加,而SP干预后其增殖率明显增加,凋亡率明显下降,形态学的损伤也有明显的改善。高氧刺激可导致ERK的磷酸化激活,磷酸化ERK在高氧损伤的AECⅡ表达明显增加,SP干预后,磷酸化ERK表达更明显。结论　SP可促进高氧暴露AECⅡ的增殖并抑制其凋亡,其通过促进ERK信号激活对氧化应激状态下的AECⅡ细胞可起到保护作用。     

他莫昔芬对人子宫内膜癌细胞增殖及细胞内钙的影响

目的探讨他莫昔芬（Tamoxifen,TAM）对人子宫内膜癌细胞Ishikawa细胞周期及细胞内Ca^2＋的影响。方法利用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法测定TAM对细胞增殖量效的影响;采用流式细胞仪检测TAM对Ishikawa细胞周期的影响;应用激光共聚焦显微镜动态检测TAM作用后细胞内Ca^2＋的变化。结果TAM浓度为1×10^-9～1×10^-6mol/L时,呈剂量依赖性促进Ishikawa细胞的增殖,TAM浓度为1×10^-7mol/L时,作用最显著;TAM（10^-7mol/L）可促进细胞周期由G0/G1期进入S期,G0/G1期的DNA含量由51.58%下降到44.85%,S期的DNA含量由34.73%上升到43.64%;TAM使细胞内钙的荧光强度快速升高,约在20 s后开始增高,90 s左右到达峰值,约为静息状态的2.52倍,持续约120 s。结论TAM通过调节细胞周期和介导细胞内Ca2＋浓度的快速增高来促进Ishikawa细胞增殖。     

VEGF-C对宫颈癌细胞增殖和凋亡信号传导通路的影响

目的:研究VEGF-C对体外培养的宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响;研究VEGF-C受体KDR、信号通路PI3K、MAPK在VEGF-C对宫颈癌增殖和凋亡调控中的作用。方法:应用重组人VEGF-C蛋白体外刺激宫颈癌HeLa细胞,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡,Western blot检测增殖与凋亡相关基因Bcl-2、CyclinD1蛋白表达;应用KDR-Ab、信号通路PI3K抑制剂LY294002、信号通路MAPK抑制剂PD98059预处理HeLa细胞,再进行VEGF-C刺激,观察上述指标的变化。结果:重组VEGF-C(50ng/μl)刺激HeLa细胞后增殖指数增加(2.13 vs 1),细胞周期S期比率增多[(64.26±0.20)%vs(30.91±0.09)%,P<0.05],细胞凋亡率降低(3.29±0.35 vs 7.44±0.55,P<0.05);Bcl-2、Cyclin D1表达增加(P<0.05)。KDR-Ab、LY294002预处理后与VEGF-C组相比增殖指数降低,细胞周期S期比率下降,凋亡指数升高,Bcl-2、Cyclin D1表达降低。PD98059预处理后,与VEGF-C组相比增殖指数降低、细胞周期S期比率下降、Bcl-2、Cyclin D1表达降低,但对VEGF-C诱导的凋亡无明显影响。结论:外源性VEGF-C作用于肿瘤细胞自身的KDR受体,激活细胞内信号传导通路MAPK途径和(或)PI3K途径诱导Cyclin D1表达,使肿瘤细胞S期加快,促进细胞周期的进程,进而促进He-La细胞增殖;通过PI3K途径诱导Bcl-2表达,抑制凋亡。     

卵巢上皮性肿瘤的临床病理特征及其细胞周期素D1和p53蛋白表达的研究

目的研究卵巢上皮性癌（卵巢癌）和交界性上皮性肿瘤的临床病理特征及其细胞周期素D1（cyclin D1）和p53蛋白表达的情况,探讨卵巢癌和交界性上皮性肿瘤在发病机制上的联系。方法分析45例卵巢癌（卵巢癌组）和54例卵巢交界性上皮性肿瘤（交界性肿瘤组）的临床病理资料,采用免疫组化法检测两组组织中cyclin D1、p53蛋白的表达情况,并分析其与临床病理特征的相关性。结果（1）临床病理特征：①年龄：交界性肿瘤组平均年龄为42．5岁（14～82岁）,中位数年龄41岁;卵巢癌组平均年龄为53．5岁（26～80岁）,中位数年龄51岁。②分期：按国际妇产科联盟（FIGO）分期标准,交界性肿瘤组Ⅰ期48例、Ⅱ期3例、Ⅲ期3例;卵巢癌组Ⅰ期6例、Ⅱ期8例、Ⅲ期26例、Ⅳ期5例。③病理类型：交界性肿瘤组以黏液型为主[占56％（30／54）],其次为浆液型[其中普通型11例,微乳头型5例;占30％（16／54）];卵巢癌组以浆液型（其中低度恶性19例,高度恶性3例）为主[占49％（22／45）]。④病理分化程度：卵巢癌组高分化5例,中分化17例,低分化或未分化23例。⑤预后：交界性肿瘤组5年生存率为98％,卵巢癌组为51％,两组比较,差异有统计学意义（P=0．000）。（2）cyclin D1和p53蛋白的表达及其与卵巢癌和交界性肿瘤临床病理特征的相关性：卵巢癌组cyclin D1和p53蛋白的阳性表达率分别为31％（14／45）和56％（25／45）,p53蛋白表达强度与病理分化程度呈正相关（r=0．320,P=0．032）;交界性肿瘤组cyclin D1和p53蛋白的阳性表达率分别为69％（37／54）和6％（3／54）。其中,普通型浆液性交界性肿瘤与高度恶性浆液性癌比较（两者cyclin D1蛋白阳性表达率分别为91％和26％,p53蛋白分别为0和58％）,差异有统计学意义（P〈O．01）;而微乳头型浆液性交界性肿瘤与低度恶性浆液癌比较（两者cyclin D1蛋白阳性表达率分别为3／5和2／3,p53蛋白分别为1／5和1／3）,差异则无统计学意义（P〉0．05）。结论cyclin D1蛋白的过度表达常见于卵巢浆液性交界性肿瘤及低度恶性浆液性癌组织中,而p53蛋白的过度表达更多见于高度恶性浆液性癌组织中。卵巢浆液性交界性肿瘤与高度恶性浆液性癌具有不同的发病机制,而微乳头型浆液性交界性肿瘤与低度恶性浆液性癌的关系可能更为密切。     

微小RNA－16参与上皮性卵巢癌细胞周期调控的实验研究

目的：研究微小RNA－16（miR－16）调控靶基因CCNDl及其蛋白表达产物一细胞周期相关蛋白DI（cyclinDl）在卵巢肿瘤细胞系SKOV3及其耐药株SKOV3／DDP中的表达,并初步探讨其逆转卵巢癌耐药的可能机制。方法：脂质体Lipofectamine2000介导miR－16成体模拟物（mimics）及其阴性对照片段（NC）成功转染人卵巢癌细胞顺铂耐药株SKOV3／DDP;流式细胞仪检测转染前后细胞周期的变化;Western blot法检测转染前后cy—clinDl表达的变化。结果：（1）成功转染miR－16后,SKOV3／DDP细胞系G1期细胞所占比例显著升高（P〈0．01）;（2）SKOV3／DDP细胞的cyclinDl蛋白相对表达量显著高于SK—OV3细胞：转染miR－16后,cyclinDl相对表达量显著下降（P〈0．01）。结论：miR－16很可能通过下调靶基因CCNDl及cyclinDl蛋白的表达,阻止细胞由C,期向S期转换,抑制肿瘤细胞无限增殖与生长。     

细胞周期G1／S期调控元件异常与卵巢癌关系研究进展

细胞周期调控需要有多个元件参与，起关键作用的在于G1／S期调控元件，包括p21，p27，p53，p16，p15，Cyclin E，Cyclin D，CDK2，CDK4和CDK6等。对卵巢癌组与正常对照组的研究常发现在卵巢癌组有p53高表达且p21低表达，或p27低表达，或p16和p15缺失，或Cyclin D1过度表达，表明这些因素与卵巢癌的发生、发展有关。对卵巢癌预后指标的研究发现p53高表达且p21缺失，或p16和p15缺失，或Cyclin D1高表达，或Cyclin E高表达与患者预后差显著相关，而p16和p15缺失组或p21低表达组常表现为对铂类化疗不敏感。关键词卵巢癌细胞周期细胞周期蛋白类     

胰岛素受体α、β及胰岛素受体底物-1在子宫内膜癌的表达及其临床意义

目的 探讨胰岛素受体α（IRα）、β（IRβ）及胰岛素受体底物-1（IRS-1）在子宫内膜癌的表达及其临床意义。方法 用免疫组织化学法检测10例正常子宫内膜：18例子宫内膜增生及57例子宫内膜癌组织中IRα、IRβ及IRS-1蛋白的表达。结果 IRα、IRβ、IRS-1的表达在10正常子宫内膜表达分别为80．00％（8／10）、60．00％（6／10）及70．00％（7／10）；在18例子宫内膜增生组织中分别为77．78％（14／18）、61．11％（11／18）及77．78％（14／18）；在子宫内膜癌组织中分别为47．37％（27／57）、54．39％（31／57）及63．16％（36／57）。IRα的表达在子宫内膜癌组织与正常子宫内膜组及子宫内膜增生比较差异有显著性（P〈0．05），其余差异无统计学意义（P〉0．05）；Ⅰ期子宫内膜癌组织中IRα的阳性表达率明显低于Ⅱ～Ⅳ期者（P〉0．05）；IRβ及IRS-1各组间的阳性表达率与Ⅱ～Ⅳ期者相近（P〉0．05）；IRS-1的阳性表达率Ⅰ期明显低于Ⅱ～Ⅳ期者（P〉0．05）；IRα、β、IRS-1蛋白的表达在子宫内膜癌G1—2与G3差异有显著性（P〈0．05），与肌层浸润深度及淋巴结转移与否差异无显著性（P〉0．05）。结论 IRα及IRS-1的表达与子宫内膜癌的期别有关，提示其表达的改变可能是子宫内膜腺癌发生的早期事件。     

三苯氧胺对人子宫内膜癌细胞系Ishikawa细胞增殖的影响

目的:探讨三苯氧胺(TAM)在体外对Ishikawa人子宫内膜癌细胞株增殖的影响及其作用机制。方法:采用MTT法观察不同浓度TAM作用不同时间对Ishikawa细胞增殖的影响,另应用MTT法、流式细胞术、免疫细胞化学方法观察比较TAM、17β-雌二醇(17β-E2)及两者联合作用不同时间后对Ishikawa细胞增殖率,细胞周期时相分布以及C-myc、bcl-2、Bax 3种蛋白表达的影响。结果:TAM对Ishikawa细胞的促增殖作用在一定剂量范围内有浓度依赖性,可使G0/G1期细胞比例下降,S期细胞比例升高;C-myc、bcl-2蛋白表达增加,Bax蛋白表达下降。结论:体外TAM可能通过调节细胞周期时相分布及上调C-myc蛋白、bcl-2蛋白,下调Bax蛋白表达,促进Ishikawa人子宫内膜癌细胞增殖。     

卵巢上皮性癌nm23-H1基因蛋白的表达及其意义

目的：探讨卵巢上皮性癌病人nm23-H1基因蛋白表达与临床分期、分化程度及预后的关系及意义。方法：采用单克隆抗体免疫组织化学方法S－P法，对70例卵巢上皮性癌手术标本经10％福尔马林固定，石蜡包埋组织进行nm23-H1基因蛋白表达的测定。结果：I－Ⅱ期卵巢上皮性癌nm23-H1基因蛋白表达阳性率为81．2％。Ⅲ-Ⅳ期阳性率为46．3％，差异具有显著意义（P＜0．05），随着卵巢上皮性癌病理学分级的增高，nm23-H1基因蛋白表达阳性率下降，差异具有极其显著意义（P＜0．01）。Ⅲ-Ⅳ期卵巢上皮性癌nm23-H1基因蛋白表达在生存期大于或等于3年及小于3年间差异具有极其显著的意义（P＜0．01）。结论：测定卵巢上皮性癌组织中nm23-H1基因蛋白表达，对判断预后有积极的作用。     

NK-1受体拮抗剂对Ishikawa细胞抑制作用的研究

目的:探讨NK-1受体拮抗剂对子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖、凋亡、细胞周期及侵袭影响。方法:体外培养子宫内膜腺癌Ishikawa细胞,将不同浓度NK-1受体拮抗剂与其共培养48h后,采用MTT法检测Ishikawa细胞增殖情况;采用流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞周期分布;利用Transwell实验检测细胞侵袭能力。结果:NK-1受体拮抗剂可明显抑制Ishikawa细胞增殖(P0.05);促进细胞凋亡,使细胞周期中G0/G1期比例增加,S期及G2/M期比例降低(P均0.05);抑制细胞侵袭,并且其对Ishikawa细胞的这些作用均呈剂量依赖性。结论:NK-1受体拮抗剂可明显抑制子宫内膜癌细胞增殖、阻滞细胞周期、诱导凋亡及抑制侵袭,有望成为子宫内膜细胞治疗的新途径。