血清γ-谷氨酰基转肽酶ELISA检测方法的建立及其在原发性肝癌诊断中的临床应用研究

目的建立可用于血清蔓陀罗凝集素(DSA)-γ-谷氨酰基转肽酶(GGT)检测的酶联免疫吸附法(ELISA),并探讨其在原发性肝癌(PHC)诊断中应用价值。方法制备抗DSA-GGT单克隆抗体(McAb),经蛋白G亲和层析柱色谱纯化后进行生物素标记,构建血清DSA-GGT生物素-链霉亲和素ELISA检测方法。用建立的方法对健康者、PHC患者和非PHC患者进行DSA-GGT检测,并进行方法学评价;采用受试者工作曲线(ROC曲线)确定DSA-GGT诊断PHC的临界值。结果所构建ELISA检测方法的最低检测限为2μg/L,平均批内、批间变异分别为8.9%和11.5%。健康者血清DSA-GGT水平呈正态分布,参考范围为(1.50±0.51)μg/L;经ROC曲线分析,确定其诊断PHC的临界值为3.25μg/L;其诊断PHC灵敏度为66.7%(28/40)、特异度为91.8%(112/122)。结论所建立的血清DSA-GGT生物素-链霉亲和素ELISA检测方法具有良好方法学性能,其诊断PHC的灵敏度、特异度良好,为PHC实验室诊断提供了新的方法。     

生物素-链霉亲和素ELISA检测血清CTGF方法的建立及其初步应用

目的 建立生物素-链霉亲和素ELISA检测血清CTGF的方法(简称“系统ELISA血清CTGF法”),初步评估CTGF在诊断慢性肝炎(CHB)患者肝纤维化的临床价值.方法 用生物素化抗CTGF单克隆抗体和多克隆抗体建立生物素-链霉亲和素ELISA方法,测定CHB患者血清CTGF水平.264例CHB患者根据肝穿刺病理诊断...     

BAS-TRFIA法检测抗环瓜氨酸肽抗体方法学的建立

目的利用生物素-链霉亲和素放大系统建立一种可快速、灵敏地定量检测患者血清中抗环瓜氨酸肽(anticyclic citrullinated peptide,CCP)抗体的时间分辨荧光免疫分析法(time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA)。方法将链霉亲和素同铕标记二乙烯三胺五乙酸酐结合制备铕标记链霉亲和素衍生物;生物素同兔抗人IgG抗体结合制备生物素化IgG抗体,后者在免疫检测系统中可联结铕标记亲和素和抗CCP抗体从而形成复合物。最后通过测量Eu3+-链霉亲和素在615nm的荧光值计算血清抗CCP抗体水平。结果该方法具有更宽的线性范围,其线性范围为0.58-9463U/ml,而应用ELISA试剂盒检测线性范围只有18.48-591.4U/ml。此外,该方法的抗CCP抗体检测限可达0.5U/mL。回收率为96.45-104.63%。用BAS-TRFIA和ELISA法测得的值具有很好的相关性(R2=0.892 7)。结论本研究数据表明我们的建立的BAS-TRFIA法在测定抗CCP抗体上较传统ELISA试剂盒有很大改进,为RA的诊断和治疗提供了一个更为理想的免疫方法学选择。     

BSA系统ELISA检测前列腺特异抗原方法的建立

前列腺特异抗原(PSA)作为肿瘤标志物,可用于前列腺癌的早期诊断,病理分析及疗效监测等[1]。国外大多利用放射免疫法检测,其灵敏度高,但需要特殊设备。我们利用生物素-链霉亲和素(BSA)系统建立了检测PSA的方法,特予介绍。一、材料和方法1.材料　PSA及兔抗PSA血清见文献[2];活化生物素及链霉亲和素(SA),章谷生教授惠赠。2.方法(1)活化生物素标记兔抗PSA及最佳条件选择　活化生物素用二甲基酰胺法标记兔抗PSA。经多次棋盘滴定确定,每mg抗体标记150μg活化生物素最好,抗体最佳包被浓度为2.5μg/ml,Bio-Ab最适工作滴度为1∶300。(2)SA…     

生物素—链霉亲和素免疫学法测定地高辛直接包被方法的研究

笔者曾经成功地应用德国ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＭａｎｈｅｉｍ公司生产的现成的链霉亲和素包被管建立了生物素－链霉亲和素免疫学潮测定地高辛的反应模型。本文用国产的链霉亲和素自行包被，采用的是一种直接包被方法，即将链霉亲和素溶于去离子水，冰箱过液包被２４ｈ，并应用到地高辛的临床检测中，其灵敏度为０．０７８１μｇ／Ｌ，最低检测限为０．１９５２μｇ／Ｌ，测定三份低、中、高浓度血清标本，批内变异系数分别为８．７％     

结合链霉亲和素的高分子造影剂的制备及其初步应用

目的 制备一种结合链霉亲和素的高分子超声造影剂,并与生物素化抗体结合,考察其体外寻靶能力.方法 采用双乳化法制备高分子材料PLGA-COOH超声造影剂;并用碳二亚胺法将造影剂与亲和素耦联,制备出结合链霉亲和素的高分子超声造影剂.检测该造影剂一般特性;采用红外与免疫荧光检测亲和素与PLGA-COOH超声造影剂连接的情况.检测生物素-亲和素技术使该造影剂与生物素化抗体结合后其体外寻靶能力.结果 红外检测与免疫荧光检测显示亲和素被成功地连接在高分子造影剂上,并存在活性.体外寻靶实验显示,与生物素化单抗结合后的靶向高分子造影剂较多并牢固地聚集到肝癌细胞表面.结论 成功制备了结合链霉亲和素的高分子超声造影剂,该造影剂与生物素化抗体结合后于体外对肝癌细胞具有较强的亲和力.     

检测血清p185糖链凝集素酶联免疫吸附试验的建立及初步应用

目的建立检测血清p185糖链的凝集素酶联免疫吸附试验(ELISA),并初步应用于乳腺癌的临床诊断。方法用改良过碘酸钠氧化法制备c-erbB-2单克隆抗体-辣根过氧化物酶结合物(A18-HRP),经棋盘滴定确认A18-HRP、生物素化麦胚凝集素(B io-WGA)及链霉亲和素(SA)的最适浓度(或稀释度),建立了检测p185糖链的凝集素ELISA,用所建立的方法检测血清p185糖链,免疫组化方法检测组织p185蛋白表达。结果乳腺癌患者血清p185糖链水平明显高于乳腺增生和正常对照(P<0.01),免疫组化阳性和阴性的乳腺癌患者血清p185糖链水平均高于乳腺增生和正常对照(P<0.01),乳腺增生患者血清p185糖链与正常对照相比差异无显著性(P>0.05)。血清p185糖链诊断乳腺癌的敏感度为86.7%,特异度为94.6%,准确度为91.9%。结论本实验建立的凝集素ELISA检测血清p185糖链诊断乳腺癌与病理学诊断符合率高,临床具有实用价值。     

肺移植前后可溶性细胞间黏附分子1的变化

背景:应用生物素一链亲和素系统建立的可溶性细胞间黏附分子1测定法,是一种敏感度高、可测范围广的检测方法.目的:建立可溶性细胞间黏附分子1生物素链亲和素系统时间分辨荧光免疫分析方法并应用于临床,探讨肺移植前后血清可溶性细胞间黏附分子1的变化及临床意义.方法:使用2株匹配的单克隆抗体分别作为捕获抗体和检测抗体,利用制备的铕标记链亲和素(SA-Eu")作为示踪物并与生物素化的检测抗体特异结合,建立双位点多层夹心法,通过对30例健康人血清可溶性细胞间黏附分子1检测和26例肺移植受者手术前后血清可溶性细胞间黏附分子1的变化测定,对可溶性细胞间黏附分子1生物素链亲和素系统方法学和在肺移植术前后的临床应用价值进行评价.结果与结论:30例健康对照测定结果为(348.63±69.12)μg/L.移植前可溶性细胞间黏附分子1与对照组无显著性差别;移植后,各组与对照组之间比较差异有显著性意义(P<0.05),急性排斥反应时血清可溶性细胞间黏附分子1升高,并发感染时降低,但各组之间比较无明显差别.表明可溶性细胞间黏附分子1生物素一链亲和素系统是一种新型的高灵敏度、宽范围的非放射性标记免疫分析法,对肺移植受者移植前后监测血清可溶性细胞间黏附分子1可作为辅助诊断急性排斥反应的免疫学指标.     

生物素—链霉亲和素系统试剂在检测HBsAg中的应用

从ELISA用于检测抗原抗体以来,衍生的各种改良方法不断涌现,使乙型肝炎诊断技术逐步改进和完善。ELISA与生物素一亲和素系统的结合,增高了检测的敏感性,但由于亲和素(AV)对聚苯乙烯有较高的阴性显色,近几年,链霉亲和素(SA)的问世,     

降钙素原生物素-链霉亲和素酶联免疫吸附分析法的建立

目的建立生物素一链霉亲和素酶联免疫吸附分析（biotin．streptavidinamplifiedELISA,BA．ELISA）法半定量检测人血清中降钙素原含量。方法通过双抗体夹心法,结合生物素一链霉亲和素系统的放大作用,建立降钙素原的半定量检测方法。并对该试剂的各项性能指标进行评价。结果该方法的最低检测限为0．12mg／mE,线性范围为0．12～20ng／mL,回收率为98．59％。分析内和分析间变异系数分别为4．9％～16．8％和7．1％～14．9％。与降钙素原结构类似物及血清中常见的干扰物质特异性良好。通过对73例血清样本进行检测分析,当阈值为0．5ng／mL时,敏感性和特异性分别为100％和96．0％。结论本研究建立的降钙素原生物素一链霉亲和素酶联免疫吸附分析法具有灵敏、简便、准确等特点,具有良好的应用前景。     

铁蛋白笼形纳米颗粒应用于HIV-1P24抗原高灵敏检测的研究

目的构建以铁蛋白笼形纳米颗粒为基础的分子展示平台,并应用于HIV-1P24抗原检测,实现低丰度、高灵敏检测。方法采用分子生物学手段,构建生物素耦联的铁蛋白笼形纳米颗粒,基于链霉亲和素与生物素特异性结合,将其应用于HIV-1P24抗原的酶联免疫吸附测定(ELISA)检测中,并测试其检测灵敏度。结果构建出具有链霉亲和素特异性结合能力的生物素化铁蛋白笼形纳米颗粒,应用到HIV-1的P24抗原ELISA检测中,实现0.1ng/mL的检测下限,显著提高检测灵敏度。结论成功建立基于铁蛋白笼形纳米结构的分子展示平台,以HIV-1P24抗原ELISA检测为例,该平台能够应用于低丰度、高灵敏检测。     

BSA系统ELISA检测前列腺特异抗原方法的建立

前列腺特异抗原(PSA)作为肿瘤标志物,可用于前列腺癌的早期诊断,病理分析及疗效监测等[1].国外大多利用放射免疫法检测,其灵敏度高,但需要特殊设备.我们利用生物素-链霉亲和素(BSA)系统建立了检测PSA的方法,特予介绍.     

生物素—链毒亲和素免疫学测定地高辛间接包被方法的研究

笔得曾经成功地应用德国Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｈｅｉｍ公司生产的现成的链霉亲和素小管建立了生物素－链霉亲和素测定地高辛的反应模型，本文用国产的甸霉亲和素自行包被，采用的是一种间接包被方法。首先人工合成ＢＮＨＳ－ＢＳＡ，将其先行包被于板上，然后加入６．２５μｇ／Ｌ的链霉亲和素溶液，室温（２０－２５℃）３ｈ，并应用到地高辛的临床检测中。     

生物素-亲和素ELISA技术检测H BeAg与抗H Be

生物素-亲和素系统(BAS)是一种新型生物反应放大系统,具有很高的灵敏度和特异性.我们参考有关文献建立了生物素-亲和素ELISA 检测技术,提高了检测HBeAg和抗HBe的灵敏度。     

核心链霉亲和素基因的克隆及其在大肠埃希氏菌中的表达

目的 克隆、表达核心链霉亲和素(core-strepavidin,core-SA)基因.方法 人工合成核心链霉亲和素基因;克隆到pET22b原核表达载体中,转化大肠埃希氏菌BL21,IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE分析;目的 蛋白经Ni-NTA亲和层析纯化,采用改良过碘酸钠法标记HRP,ELISA法检测比较HRP-SA与商品化HRP-SA的活性.结果 人工合成的354bp DNA片段经测序确证为核心链霉亲和素基因.将构建的重组表达质粒pET 22b-core SA转化大肠埃希氏菌BL21,经IPTG诱导后得到可溶性的表达产物.SDS-PAGE显示目的 蛋白相对分子质量为14 000,与理论值相符.在非变性条件下纯化目的 蛋白,经HRP标记后用ELISA法检测,结果 表明自制的HRP-SA与商品化HRP-SA的活性相当.结论 成功克隆和表达了核心链霉亲和素基因.     

可溶性细胞间粘附分子-1时间分辨荧光免疫分析法的建立及对肺癌诊断的临床应用

目的建立可溶性细胞间粘附分子-1生物素-亲和素系统（BSA）时间分辨荧光免疫分析方法 ,并对其方法学及对肺癌诊断临床应用价值进行评价。方法用2株匹配的单克隆抗体分别作为捕获抗体和检测抗体,利用制备的铕标记链亲和素（SA-Eu3＋）作为示踪物并与生物素化的检测抗体特异结合,建立双位点多层夹心法BSA-TRFIA法,检测68例正常对照者和61例肺癌患者血清sICAM-1水平,对其方法学和临床应用价值进行评价。结果 sICAM-1TRFIA检测灵敏度为1.32μg/L,批内和批间CV分别为4.24%和6.83%,平均回收率为99.87%,与ELISA法测定值的相关系数为0.939,可测范围为2.5-933μg/L,肺癌组与健康对照组比较具有显著性差异（P〈0.01）。结论 sICAM-1时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）是一种新型非放射性标记免疫分析法,具有良好的特异性、准确度、稳定性,可作为肺癌的辅助诊断指标。     

血清中TIGAR的ELISA建立及初步临床试验

目的建立肿瘤蛋白53（TP53）诱导的糖酵解和凋亡的调控子（TIGAR）的定量酶联免疫吸附试验（ELISA）,并探讨血清中TIGAR定量测定在肿瘤患者诊断中的临床应用。方法构建TIGAR原核表达载体并诱导蛋白表达,纯化蛋白后免疫家兔获得多克隆抗体,以此兔抗TIGAR多克隆抗体为包被抗体,以生物素-辣根过氧化物酶标记链霉亲和素（SA-HRP）检测系统,建立TIGAR定量检测的双抗体夹心ELISA。测定40例肿瘤患者及40名对照者的血清TIGAR含量,并探讨其与肿瘤的关系。结果建立的TIGAR定量ELISA拟合曲线的相关系数（r）=0.99,肿瘤患者血清TIGAR含量高于对照组,差异有统计学意义（S=954.5,P〈0.01）。结论本研究成功建立了TIGAR定量ELISA,血清TIGAR含量测定对某些肿瘤的研究和临床检测可能有一定价值。     

肝癌患者血清高尔基体蛋白73检测及其意义

目的 探讨高尔基体蛋白73(GP73)在原发性肝癌(PHC)诊断中的临床应用价值.方法 分别采用ELISA法和化学发光法定量检测51例PHC患者、35例肝硬化患者以及40例健康体检者血清GP73以及甲胎蛋白(AFP)的水平.结果 血清GP73诊断PHC的临界值为127.5 μg/L,诊断灵敏度为66.7%,特异度为93.3%.PHC组中血清GP73水平[(185.1±62.9)μg/L]显著高于肝硬化组[(69.8±28.2)μg/L]及健康对照组[(36.7±13.3)μg/L],差异有统计学意义(P<0.05).与GP73及AFP单项检测比较,二者联合检测可提高PHC诊断的灵敏度以及总有效率(P<0.05),而特异度差异无统计学意义(P>0.05).结论 GP73水平在PHC患者血清中明显增高,可作为PHC诊断的血清标志物,且与AFP联合检测可提高PHC诊断效率.     

超声微泡连接特异性抗体的制备方法及靶向化处理因素对超声微泡物理性质的影响

目的 探讨超声微泡连接特异性抗体的制备方法及靶向化处理因素对超声微泡物理性质的影响.方法 应用生物素-链霉亲和素连接系统,使注射用六氟化硫微泡(SonoVue)与特异性抗血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)抗体相连接,用间接免疫荧光法检测抗体与微泡的连接,用马尔文激光粒径分析仪分别测定生物素化处理前后微泡的粒径,采用超声诊断仪评价微泡靶向化构建前后的显像效果.结果 SonoVue与特异性抗体成功连接,间接免疫荧光检测呈阳性.生物素修饰后的微泡粒径分布变窄,与普通微泡的超声显像效果略有差异.结论 通过生物素-链霉亲和素系统可以成功靶向化构建超声微泡,靶向化处理因素对微泡的粒径有一定影响,对微泡的超声显影效果略有影响.     

检测血清p185糖链凝集素酶联免疫吸附试验的建立及初步应用

目的 建立检测血清p185糖链的凝集素酶联免疫吸附试验（ELISA），并初步应用于乳腺癌的临床诊断。方法 用改良过碘酸钠氧化法制备c—erbB-2单克隆抗体-辣根过氧化物酶结合物（A18-HRP），经棋盘滴定确认A18-HRP、生物素化麦胚凝集素（Bio—WGA）及链霉亲和素（SA）的最适浓度（或稀释度），建立了检测p185糖链的凝集素ELISA，用所建立的方法检测血清p185糖链，免疫组化方法检测组织p185蛋白表达。结果 乳腺癌患者血清p185糖链水平明显高于乳腺增生和正常对照（P〈0．01），免疫组化阳性和阴性的乳腺癌患者血清p185糖链水平均高于乳腺增生和正常对照（P〈0．01），乳腺增生患者血清p185糖链与正常对照相比差异无显著性（P〉0．05）。血清p185糖链诊断乳腺癌的敏感度为86．7％，特异度为94，6％，准确度为91．9％。结论 本实验建立的凝集素ELISA检测血清p185糖链诊断乳腺癌与病理学诊断符合率高，临床具有实用价值。