奶粉中阪崎肠杆菌PCR检测方法的建立

[目的]建立奶粉中阪崎肠杆菌的PCR检测方法。[方法]根据阪崎肠杆菌zpx基因设计引物建立PCR检测方法,进行方法的特异性验证和灵敏度检测,并对模拟样品和实际奶粉样品进行检测。[结果]所建立的阪崎肠杆菌PCR检测方法的纯菌检测灵敏度达102cfu/ml,6株阪崎肠杆菌菌株PCR扩增均可扩增出180bp的目的条带,而31株非阪崎肠杆菌则无目的条带出现;模拟阪崎肠杆菌污染样品经前增菌后均可检出;对实际样品的检测显示该方法与传统的分离培养方法具有较好的一致性。[结论]该方法灵敏度高,特异性强,快速、简便,易于推广,可很好地应用于奶粉中阪崎肠杆菌的检测和鉴定。     

LAMP法和PCR法快速检测阪崎肠杆菌的比较

[目的]建立阪崎肠杆菌环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)快速检测技术,并与PCR检测方法进行比较,为阪岐肠杆菌感染的快速诊断提供实验依据。[方法]根据阪崎肠杆菌外膜蛋白OmpA基因,设计特异性引物,建立LAMP和PCR检测技术体系,并对2种方法检测的灵敏度、特异性和实际样品的检测结果进行比较。[结果]建立了优化的LAMP和PCR检测体系,灵敏度检测结果显示,LAMP检测限为101cfu/ml,PCR检测限为102cfu/ml,LAMP检测灵敏度高于PCR;对36株近源菌进行特异性检测,结果显示,LAMP仅8株阪崎肠杆菌得到阳性结果,PCR产物则出现非特异性条带,LAMP特异性比PCR高。应用于46份奶粉样品的检测,LAMP和PCR均有清晰、特异的预期条带和结果产生,并与常规检测结果一致。[结论]LAMP检测技术作为一种快速检测阪崎肠杆菌的方法具有简便、灵敏快速,与PCR方法比较,特异性强、操作简便、检测成本低,耗时短,更有望发展成为快速检测阪岐肠杆菌的有效手段。     

分子信标-实时PCR法快速检测阪崎肠杆菌的研究

目的:建立分子信标-实时PCR检测婴幼儿乳粉中阪崎肠杆菌的快速方法。方法:根据GenBank公布的阪崎肠杆菌ATCC29544株ompA基因的保守序列,设计引物和分子信标探针,建立阪崎肠杆菌的分子信标-实时PCR技术快速检测,应用于食品检测。结果:检测方法特异性强,无非特异性扩增;分子信标-实时PCR反应体系DNA灵敏度为95fg/PCR反应体系,无交叉反应;以此反应体系检测23份样品,其中3份为阳性,余未检出,与传统检测方法结果一致。结论:分子信标-实时PCR检测体系快速、灵敏度高、特异性强,可用于婴幼儿乳粉中阪崎肠杆菌的快速检测。     

阪崎肠杆菌环介导等温扩增检测方法建立

目的 针对当前国内外传统检测方法缺点,建立阪崎肠杆菌快速检测法.方法 根据阪崎肠杆菌外膜蛋白(OmpA)基因,设计4条特异性引物(内、外引物各2条),建立并优化环介导等温扩增(100p-mediattA isothermalamplification,LAMP)检测体系及反应条件,并进行LAMP反应的灵敏度、特异性实验及实际样品检测.结果 LAMP检测阪崎肠杆菌,优化后的条件选择为:Mg2+浓度6 mmoVL,dNTP浓度0.6 mmoVL,甜菜碱浓度0.8 moVL,外引物与内引物的浓度比1:4,扩增温度580C 60min;细菌纯培养检测灵敏度为101cfu/mL;对11种细菌共26株菌进行LAMP扩增,仅8株阪崎肠杆菌得到阳性扩增结果,证明引物具有很高的特异性;对实际样品进行增菌检测,采用试剂盒提取DNA,从样品处理到报告结果,耗时26 h;并采用传统检测方法验证,正确性为100%.结论 该方法检测阪岐肠杆菌特异性强、灵敏度高,并且操作简便、检测成本低、耗时短,有望成为快速检测阪岐肠杆菌的有效方法.     

免疫磁珠与荧光定量PCR联合检测乳制品中阪崎肠杆菌的实验研究

[目的]建立一种免疫磁珠吸附-荧光定量PCR(IMB-FPCR)快速检测阪崎肠杆菌的方法,探讨在乳制品污染监测及食物中毒快速诊断中的应用。[方法]根据阪崎肠杆菌rpsU-dnaG基因序列设计引物和探针,采用基因重组技术构建用于金黄色色葡萄球菌检测的定量标准品,建立阪崎肠杆菌IMB-FPCR检测方法。[结果]成功构建了阪崎肠杆菌重组质粒标准品和阪崎肠杆菌IMB-FPCR方法。阪崎肠杆菌的免疫磁珠吸附试验显示磁珠对奶粉中的阪崎肠杆菌吸附率达77.7%。通过特异性、敏感性、稳定性和重复性验证,结果表明具有较好的特异性,最低检测限为10cfu/ml的菌细胞,并具有良好的稳定性和重复性。整个检测仅需时1d。[结论]IMB-FPCR简便快速、灵敏度高及特异性强,为准确检测乳制品中阪崎肠杆菌提供了一个新的途径,可广泛应用于食品卫生监管、商品检验检疫以及临床诊断等。     

婴幼儿配方奶粉中阪崎肠杆菌分子检测方法探讨

目的：对婴幼儿配方奶粉中阪崎肠杆菌的分子检测方法进行探讨。方法：分别用常规PCR方法和实时荧光PCR方法对32份奶粉样品进行阪崎肠杆菌鉴定。结果：32份样品中检出2株阳性株,阳性率为6.25%,两种检测方法结果相符。结论：市售婴幼儿配方奶粉中存在阪崎肠杆菌污染,应尽快制订婴幼儿食品中阪崎肠杆菌的检测标准,分子检测方法可快速准确检测阪崎肠杆菌。     

环介导等温扩增法检测进口宠物乳粉中阪崎肠杆菌

目的:建立并验证一种能够简单,准确和快速检测进口宠物乳粉中阪崎肠杆菌的方法。方法:应用环介导等温扩增技术(LAMP)建立宠物乳粉中阪崎肠杆菌检测方法,并通过常规方法对其结果进行验证。结果:LAMP方法从5种进口宠物乳粉中检出两份阪崎肠杆菌阳性,与VITEK 2生化鉴定结果一致。结论:该方法特异性好、灵敏度高,检测时间短,适用于奶粉及其他食品中阪崎肠杆菌检测。     

应用VITEK 32检验奶粉中阪崎肠杆菌的探讨

目的阪崎肠杆菌（Enterobacter sakazakii）是乳制品中新发现的引起广泛关注的一种致病菌，加强对该菌的检验，对预防与控制由该菌所致的感染流行十分重要。方法采用中华人民共和国出入境检验检疫行业标准：SN／T1632．1—2005《奶粉中阪崎肠杆菌检验方法》第1部分：奶粉中阪崎肠杆菌的分离与计数方法，应用VITEK32（全自动微生物鉴定和药敏分析仪）进行检验。结果从原产法国的婴幼儿营养配方奶粉中检出阪崎肠杆菌。结论检出菌株与质控菌株的生化特征基本一致，该方法可使样品中极少量的阪崎肠杆菌被检测和定量。     

阪崎肠杆菌和沙门菌多重PCR检测方法的建立

目的建立阪崎肠杆菌和沙门菌的多重PCR检测方法。方法针对阪崎肠杆菌外膜蛋白A(ompA)基因和沙门菌属侵袭性抗原保守基因(invA)基因设计引物,建立其多重PCR检测方法,并对反应条件进行优化。结果两对引物分别能扩增出469bp和284bp的目的条带,结果具有高度特异性,反应条件优化后,两菌可同时检出的浓度限度为106cfu/ml。结论该方法敏感、特异,为快速检测阪崎肠杆菌、沙门菌提供了新的有效手段。     

深圳市售进口婴幼儿配方粉中阪崎肠杆菌污染状况调查

目的了解深圳市进口婴幼儿配方粉中阪崎肠杆菌的污染情况。方法对抽取的79份进口婴幼儿配方奶粉和米粉进行阪崎肠杆菌荧光定量PCR检测,同时参照GB/T4789.40-2008进行分离培养、鉴定。结果共6份样品经荧光定量PCR检测出阪崎肠杆菌阳性;其中一份分离出菌株。结论深圳市进口婴幼儿配方粉中存在阪崎肠杆菌污染隐患。     

4-氯-2-氟-3-甲氧基苯硼酸的急性毒性研究

目的探讨4-氯-2-氟-3-甲氧基苯硼酸的急性经口毒性,急性经皮毒性,急性皮肤刺激和急性眼刺激性.方法 按照《化学品测试方法》(国家环境保护总局,2004年)开展急性经口毒性试验,急性经皮毒性试验,急性皮肤刺激试验和急性眼刺激性试验. 结果①急性经口毒性试验:雌性大鼠急性经口LD₅₀为369mg/kg,95%可信区间为227mg/kg~599mg/kg;雄性大鼠急性经口LD₅₀为233mg/kg,95%可信区间为160mg/kg ~399mg/kg.对死亡大鼠解剖见肺脏充血.②急性经皮毒性试验:大鼠急性经皮LD₅₀ >2500mg/kg.③急性皮肤刺激试验:对大耳白兔染毒后各观察时点皮肤刺激反应总积分平均值和皮肤刺激反应时点最高积分均值均为0分.④急性眼刺激性试验:对大耳白兔眼刺激试验分级为5级.结论 4-氯-2-氟-3-甲氧基苯硼酸对雌雄性大鼠急性经口毒性分别属"低毒","中毒".靶器官可能是肺脏;对大鼠急性经皮毒性属"实际无毒";对大耳白兔皮肤不产生刺激性,但可对眼睛产生中等刺激性.     

麝香保心丸治疗冠心病心绞痛的疗效观察

目的观察麝香保心丸治疗冠心病心绞痛的疗效。方法将84例冠心病心绞痛患者随机分成两组,治疗组44例在常规治疗的基础上加用麝香保心丸,对照组40例仅用常规治疗,用药过程中严密观察心绞痛发作次数及心电图变化。结果治疗组治疗后心绞痛发作次数少于对照组,差异有统计学意义(P<0.01),治疗组的心电图好转总有效率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论心绞痛病人早期使用麝香保心丸,能有效预防和治疗心绞痛,减少心血管事件发生。     

空气苯浓度与呼出苯及尿酚的关系研究

目的对苯接触水平和接触者可能受到的有害影响进行卫生学评价。方法对１０名苯接触者和６名志愿苯接触者进行研究,用苯呼出气作为生物学监测指标。结果班前呼出苯大多为未检出,班中及班后呼出苯与空气苯时间加权平均浓度均有密切相关;班前尿酚与空气苯时间加权平均浓度无相关,班后尿酚及次晨尿酚均与空气苯ＴＷＡ浓度密切相关;班中、班后呼出苯均与班后尿酚及次晨尿酚密切相关,且以班中呼出苯与班后尿酚的相关性最高（ｒ＝０．９３５３）。呼出苯的快速排出相为脱离接触１０分钟（占班后呼出苯８２．２５％）,其排出稳定相在脱离接触后９０分钟左右。接触空气苯浓度ＴＷＡ７．９～２１７．８ｍｇ／ｍ３时,无论是呼出苯或尿酚在接触后２４小时与空气苯均无相关。结论在呼出苯的快速排出相采集终末呼出气可反映工人当时的接触浓度,采集排出稳定相终末呼出气,其浓度较稳定可反映接触者吸收入血液的浓度,并以此来估测环境浓度与接触水平。呼出苯的呼吸排出规律以及采样方便、无损伤,检出灵敏,呼出苯作为接触水平监测指标较其他指标优越。     

气相色谱法测定3-氯-1,2-丙二醇的方法研究

目的:以硅藻土(ExtrelutTM20)为吸附剂,采用柱层析分离,用正己烷-乙醚(9+1)洗脱样品中非极性的脂质组分,用乙醚洗脱样品中的3-氯-1,2-丙二醇,用七氟丁酰基咪唑(HFBI)溶液为衍生化试剂。方法:选用Rtx-225毛细管柱(0.32 mm×30 m×0.25μm;made in USA),气相色谱,电子捕获进行外标法定量分析食品中3-氯-1,2-丙二醇的含量。结果:方法检出限为0.01 mg/kg,回收率可达95%-104%。结论:方法快捷,灵敏度高,重现性好。     

人尿8-羟基脱氧鸟嘌呤的HPLC电化学测定方法

目的：建立高效液相色谱-电化学检测法（HPLC-ECD）测定人尿中8-羟基脱氧鸟嘌呤核苷（8-OHdG）的检测方法。方法：采用Bond Elute C18小柱固相萃取尿液，ODS C18分析柱，8％甲醇醋酸缓冲液为流动相，电化学检测器检测，电极电压750mV。结果：本方法线性范围25～400μg/L，r=0．9892，回收率为91．2％～108．8％，批内和批间精密度分别为3．9％～7．5％和4．3％～8．6％，检测限为2μg/L。结论：本方法操作简便、准确度较好，已应用于正己烷接触者现场尿样的测定。     

丙肝病毒核心抗原与丙肝病毒抗体检测的比较研究

目的：应用酶联免疫法分别检测丙肝病毒核心抗原（HCV-cAg）和抗体（HCV-Ab），了解丙肝病毒核心抗原检测的意义。方法：采用军事医学科学院基础医学研究所研发并由湖南景达基因公司推出的商业化的HCV游离核心抗原试剂盒，对来自入院前或手术前筛查的180例临床样本和24例丙肝或疑似丙肝患者的血清样本进行HCV-cAg和HCV-Ab检测，阳性者用反转录多聚酶链反应（RT-RNA）证实。结果：180例筛查样本HCV-Ab均为阴性，HCV-cAg阳性2例，其中RT-RNA阳性1例；24例HCV-Ab阳性的样本检出HCV-cAg阳性12例，RT-RNA阳性14例。HCV-cAg与RT-RNA符合率为85．71％（12／14）。结论：HCV核心抗原检出时间早于抗体，HCV-cAg检测试剂盒可作为HCV抗体检测的补充试剂，尤其对术前HCV筛查的患者联合应用更具有临床价值。     

加强院前急救管理 提高院前急救质量

院前急救中心是急诊医疗服务体系的重要组成部分。从强化硬件配置入手,通过完善制度、实施人才战略、注重青年价值观培养及加大宣传力度、普及急救知识等手段,探索提升院前急救管理水平的方法,旨在为急救中心院前急救质量的持续改进提供借鉴。     

1-磷酸鞘氨醇对体外培养的人视网膜色素上皮细胞α-SMA表达的影响

目的 研究1-磷酸鞘氨醇对人视网膜色素上皮细胞α-平滑肌肌动蛋白表达的影响.方法 对RPE细胞常规培养,取传3～4代生长良好的细胞用于实验,以106个/ml接种于24孔培养板中,加入含1-磷酸鞘氨醇无血清培养液,使1-磷酸鞘氨醇终浓度为1、1×10-1、1×10-2、1×10-3、1×10-4 μg/ml,加入不含1-磷酸鞘氨醇的无血清培养液为对照组,采用免疫荧光法分析1-磷酸鞘氨醇对α-平滑肌肌动蛋白表达的影响.结果 1、1×10-1、1×10-2 μg/ml 1-磷酸鞘氨醇组中表达α-平滑肌肌动蛋白阳性的细胞与对照组相比差异具有明显统计学意义（P=0.000、0.000、0.000） 而1×10-3、1×10-4 μg/ml组表达α-平滑肌肌动蛋白阳性细胞与对照组相比差异无明显的统计学意义（P=0.832、0.781）.结论 α-平滑肌肌动蛋白主要在RPE细胞的胞浆中表达.随着1-磷酸鞘氨醇浓度的增加,RPE细胞α-平滑肌肌动蛋白的表达增强.     

细胞因子在初治肺结核患者血液中表达的研究

目的研究初治肺结核患者IL-2、IL-4、IL-18、IFN-γ及MMP-9的表达情况,并了解其在肺结核病治疗过程中的变化。方法应用ELLSA法检测100例初治肺结核患者治疗前后及90例健康志愿者血清IL-2、IL-4、IL-18、IFN-γ及MMP-9的表达。结果 100例结核涂阳患者,治疗2个月后79例转阴,痰菌转阴率79%;研究组与对照组比较,研究组治疗前各种细胞因子水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P0.01);研究组治疗后IL-4、IL-18水平高于对照组,差异有统计学意义(P0.05),IL-2、IFN-γ及MMP-9与对照组比较,差异无统计学意义(P0.05);研究组治疗后各种细胞因子水平明显低于治疗前(P0.05),差异有统计学意义(P0.05);转阴患者五种细胞因子与未转阴患者间比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论在进行抗肺结核物治疗时动态观察细胞因子水平,有利于监测肺结核病情的转归,利用细胞因子的变化趋势,可以预知治疗方案的有效性。     

17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯对荷瘤小鼠抑瘤作用的实验研究

目的 观察17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯及联合¹³⁷Cs γ射线对白血病L1210的抑制作用。方法 通过肿瘤细胞悬液接种法,制备IRM-1小鼠L1210白血病动物模型,实验分对照组、单放组、17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯(低、中、高)药物组及药物合用照射组,采用腹腔注射给药法,连续7d,1次/d,末次给药第5天处死动物,分别检测肿瘤抑制率、骨髓有核细胞数、胸腺与脾重指数指标,比较各组间的差别。结果 17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯各组瘤重明显小于对照组,合用照射组对荷瘤小鼠L1210白血病有较强抑制作用。结论 17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯对L1210白血病有明显的抑瘤作用及保护小鼠的免疫器官的作用,与γ射线合用时,能提高抑瘤疗效。