Lactobacillus casei胞外多糖对BALB/c小鼠肠相关淋巴细胞调控的初步研究

目的:探讨干酪乳杆菌胞外多糖(EPS)对BALB/c小鼠小肠相关淋巴细胞增殖及细胞因子TNF-α、IL-17及IFN-γ分泌的影响.方法:Percoll不连续密度梯度分离法从小鼠小肠中分离上皮内淋巴细胞(IEL)、固有层淋巴细胞(LPL)、派氏集合淋巴结淋巴细胞(PPL)和肠系膜淋巴结淋巴细胞(MLNL).实验组分别加入10、25、50、100和200 μg/ml浓度的干酪乳杆菌胞外多糖.水溶性四氮唑(WST-1)法检测淋巴细胞增殖;ELISA法测定细胞上清液中细胞因子TNF-α、IL-17及IFN-γ的含量.结果:EPS能够一定程度地促进IEL、LPL、PPL的增殖,且均在100 μg/ml浓度时达到最大值,在50～ 200 μg/ml浓度范围内促进MLNL增殖呈剂量依赖性,EPS能够使IEL、LPL和PPL上清液中TNF-α含量降低,且在50～ 200 μg/ml浓度时差异极显著(P＜0.01),但对MLNL分泌TNF-α无明显抑制作用,在200 μg/ml时有显著提高(P＜0.01);EPS可以使IEL、LPL、PPL及MLNL上清液中IL-17含量升高;EPS对IEL、LPL、PPL及MLNL上清液中IFN-γ无明显影响.结论:EPS可以促进小鼠小肠相关淋巴细胞的增殖,并能够调控细胞因子TNF-α及IL-17的分泌水平.     

香菇多糖体外抗HIV的免疫调节作用的实验研究

目的：探讨香菇多糖在HIV感染中发挥的免疫调节作用，为HIV／AIDS治疗中的免疫重建探讨新的途径。方法：将香菇多糖与不同浓度的感染，未感染HIV的人PBMC经体外培养后通过ELISA法分别检测PBMC分泌IL-2、IL-12、IFN-γ、IL-4、IL-10、TNF-α的情况。结果：PBMC在感染HIV前后与香菇多糖体外共培养60小时后，都可检测到IL-2、IL-12、IFN-γ分泌增加、IL-4、IL-10、TNF-α分泌减少，感染HIV组表现更为明显，并且表现出浓度依赖关系。结论：香菇多糖促进感染，未感染HIV的PBMC分泌Ⅰ类细胞因子，抑制分泌Ⅱ类细胞因子。香菇多糖抑制感染HIV-1的PBMC分泌TNF-α。     

猪苓多糖对巨噬细胞RAW264.7的双向免疫调节作用

目的观察猪苓多糖对γ干扰素(IFN-γ)诱导M1亚型巨噬细胞膜表面蛋白的影响及对相关细胞因子IL-1β、IL-6及TNF-αm RNA的作用,探讨猪苓多糖对巨噬细胞的免疫调节作用。方法实验分为空白对照组、IFN-γ模型组、猪苓多糖组和IFN-γ加猪苓多糖组。IFN-γ诱导巨噬细胞极化为M1型后用猪苓多糖干预,采用流式细胞术检测膜蛋白CD14、TLR4、CD86、CD40、CD16/32的阳性表达率,ELISA法检测细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6、TGF-β、IL-17及IL-10的表达量,实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测TNF-α、IL-1β、IL-6、TGF-β及IL-10 m RNA的相对表达量。结果 IFN-γ可单独诱导M1巨噬细胞模型,猪苓多糖作用于M1型巨噬细胞,分泌的因子增加,但是对膜蛋白影响不大;猪苓多糖单独作用于巨噬细胞,可以增加膜白蛋的表达量,分泌的因子和空白对照组比较有统计学差异。结论猪苓多糖可以极化巨噬细胞为M1型,可以增加由IFN-γ诱导的M1炎症因子的表达,同时也增加抑炎因子的表达,有着双向的调节作用。     

猪苓多糖对M1型巨噬细胞细胞因子表达的调节作用

目的通过诱导构建M1型巨噬细胞模型研究猪苓多糖对白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)和转化生长因子β(TGF-β)、IL-10 mRNA的表达影响,探讨猪苓多糖对巨噬细胞的免疫调节机制。方法实验分为空白对照组、γ干扰素(IFN-γ)诱导的M1型巨噬细胞模型组、猪苓多糖高中低剂量组,浓度分别为200μg/mL、100μg/mL、50μg/mL。用IFN-γ诱导RAW264.7巨噬细胞,用流式细胞术检测M1型巨噬细胞特异性指标CD16/CD32、CD86的表达,实时荧光定量PCR检测IL-1β、IL-10、iNOS、TNF-α、TGF-β的mRNA表达,观察不同剂量猪苓多糖对M1型巨噬细胞的影响。结果与空白组比较,IFN-γ的诱导RAW264.7巨噬细胞分化M1型巨噬细胞的特异性标志物CD16/CD32、CD86的表达明显升高。100μg/mL猪苓多糖组在3、6、9、12、24 h,IL-1β、iNOS、IL-10、TGF-β、TNF-α的mRNA表达升高,不同剂量猪苓多糖给药6 h后各因子的表达量升高(P0.01)。结论 IFN-γ单独作用于巨噬细胞,可以有效的诱导RAW264.7巨噬细胞极化为M1型巨噬细胞;猪苓多糖促进M1型巨噬细胞IL-1β、iNOS、IL-10、TNF-α的mRNA表达。     

雷公藤治疗类风湿关节炎大鼠肠道T淋巴细胞的免疫应答

目的 探讨雷公藤内酯在胶原免疫性关节炎(collagen induced arthritis,CIA)的大鼠的肠道的免疫应答,肠道内上皮内T淋巴细胞(intraepithelial lymphocyte,IEL)、固有层T淋巴细胞(lamina propria lymphocyte,LPL)的变化规律.方法 4～6周的...     

沉默转录因子YY1表达对胶原诱导的关节炎小鼠肠道菌群的影响

目的：通过干扰慢病毒探讨沉默转录因子阴阳1(YY1)表达对胶原诱导关节炎（CIA）小鼠肠道菌群的影响。方法：采用Ⅱ型胶原免疫DBA/1J小鼠构建CIA模型;实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测TNF-α、IFN-γ、IL-6和IL-17 mRNA相对表达量;采用16S rRNA高通量测序方法进行肠道微生物测序,测序结果采用Microbial Ecology相关软件和数据库进行分析。结果：与对照组（NC）相比,在CIA小鼠体内干扰YY1表达后,小鼠的关节炎症评分降低,外周血单个核细胞中TNF-α、IFN-γ和IL-6 mRNA相对表达量降低;反映菌群分布丰度的ACE和Chao指数无明显差异;反映菌群多样性的Shannon指数增加,Simpson指数降低;Intestinimonas和Acetobacteroides菌属含量增加;京都基因与基因组百科全书（KEGG）分析显示磷酸代谢和丙二酚降解等功能有差异。结论：在CIA小鼠体内沉默YY1表达可影响其肠道菌群的多样性和分布。     

山茱萸总苷抗类风湿关节炎免疫作用机理的初步研究

目的：探讨山茱萸总苷抗Ⅱ型胶原（CⅡ）诱导的类风湿关节炎的免疫作用机理。方法：建立Ⅱ型胶原诱导的类风湿关节炎（CIA）大鼠模型，对山茱萸总苷对大鼠在免疫诱导期、关节炎急性期、慢性缓解期血清中CⅡ抗体的水平、腹股沟引流淋巴结细胞IFN-γ的自发分泌和刺激性分泌以及淋巴结细胞的特异增殖能力的影响进行动态观察。结果：山茱萸总苷对类风湿关节炎有明显的防治作用，特异性抑制免疫大鼠抗CⅡ抗体的产生、腹股沟淋巴结Th1型细胞因子IFN-γ的分泌及细胞增殖。结论：山茱萸总苷抗类风湿关节炎的免疫作用机理之一是抑制CⅡ特异性体液免疫和Th1型细胞免疫。     

重症肺炎大鼠干扰素-γ、白细胞介素-6和肿瘤坏死因子-α含量变化

目的：研究SD大鼠细菌性重症肺炎模型中的IFN-γ、IL-6、TNF-α含量变化。方法:SD大鼠随机分为模型Ⅱ组、模型Ⅰ组和对照组，每组分为3小组，前两组每小组8只，对照组每小组4只。其中，模型Ⅱ组和模型Ⅰ组分别接种相同浓度不同剂量的肺炎克雷伯菌菌液，对照组接种剂量相同的生理盐水。分别与接种后的第2、4、6 d分批处死动物，动态观察动物的干扰素-γ（IFN-γ）、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的变化情况。结果:模型Ⅱ组和模型Ⅰ组的IL-6、TNF-α于接种后第2、4、6 d呈逐渐升高的趋势，尤以接种高剂量菌液模型Ⅱ组升高明显；IFN-γ呈逐渐下降的趋势，尤以接种高剂量菌液模型Ⅱ组下降明显；而模型Ⅰ组则无明显变化。结论:诸多细胞因子可能参与重症肺炎发病的病理生理过程。随着接种一定浓度菌液剂量的增加，致使大鼠肺炎明显加重，IL-6、TNF-α、IFN-γ较一般肺炎变化更显著。     

核因子-κB诱骗剂处理的DC对胶原诱导性关节炎大鼠外周血IFN-γ、IL-1O、抗Ⅱ型胶原抗体水平的影响

目的 探讨核因子-κB诱骗剂(NF-κB ODN Decoy)处理的DC对Ⅱ型胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠血清IFN-γ、IL-10、抗Ⅱ型胶原抗体水平的影响及作用机制.方法 建立Ⅱ型胶原诱导性大鼠关节炎模型,NF-κB诱骗剂处理并负载牛Ⅱ型胶原(BⅡC)的大鼠脾脏来源的DC,在初次免疫第5天经尾静脉注射到CIA大鼠体内,并设空白对照组、CIA模型组和BⅡC-decoy-DC实验组.42 d后观察各组关节炎指数和病理变化,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组大鼠血清中IFN-γ、IL-10、抗Ⅱ型胶原抗体的含量.结果 与空白对照组相比,CIA模型组大鼠血清中IFN-γ、抗Ⅱ型胶原抗体含量升高,而IL-10含量降低(P＜0.05),而BⅡC-decoy-DC实验组经NF-κB诱骗剂处理并负载BⅡC获得的DC注射后,与CIA模型组相比,血清中IFN-γ、抗Ⅱ型胶原抗体含量降低,而IL-10含量升高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 NF-κB诱骗剂处理并负载BⅡC的DC具有明显抑制CIA大鼠外周血IFN-γ和抗BⅡC抗体产生,促进IL-10水平的增加,对类风湿关节炎有较好的治疗作用.     

结核杆菌热休克蛋白肽段对胶原诱导性关节炎保护作用的研究

目的：研究结核杆菌HSP65肽段（P256-270）和结核杆菌HSP70肽段（P111-125）对类风湿关节炎动物模型——胶原诱导性关节炎（CIA）大鼠的保护性作用。方法：结核杆菌HSP肽段滴鼻免疫大鼠，观察其对CIA的防治效果，观察指标包括关节炎指数评分、关节病理学分析、酶联免疫斑点实验（ELISPOT）检测脾脏淋巴细胞分泌细胞因子（IL4、IFN-γ）水平、流式细胞术分析外周血T淋巴细胞亚群及酶联免疫吸附实验（ELISA）测定血清中抗CⅡ抗体水平。结果：分别经结核杆菌HSP65和HSP70肽段滴鼻免疫的实验组大鼠，与阳性对照组比较，关节炎指数明显下降（P〈0．05），病理变化减轻，抑制性细胞因子IL-4水平升高（分别为P〈0．05和P〈O．01），而炎性细胞因子IFN-1水平降低（P〈0．01），CD4^＋／CD8^＋T细胞比值降低（P〈0．05），血清中抗CIⅡ抗体水平也降低（分别为P〈0．05和P〈0．01）。结论：应用结核杆菌HSP65肽段或HSP70肽段能减轻CIA大鼠的症状和体征，其作用机制与调节T细胞的功能有关，此研究可为探讨人类RA新的免疫治疗方法提供依据。     

中药多糖对柔嫩艾美尔球虫感染鸡细胞因子水平的影响

本文选用天然免疫活性多糖．香菇（Lentinus edodes）、银耳（Tremella fuifformisBerk）和黄芪（Astragalus membranaceus Bge）多糖,研究其对柔嫩艾美尔球虫感染鸡细胞因子IFN-γ和IL-2水平的影响。选择180只雏鸡并将其随机分为9组：3个多糖提取物添加组（LenE、TreE和AstE）,3个添加提取物并免疫接种疫苗组（LenE＋V、TreE＋V和AstE＋V）,1个球虫免疫组和2个对照组（球虫感染组和非感染组）。检测球虫感染后第7、14天鸡血清IFN-γ效价和脾淋巴细胞IL-2的水平。结果显示,球虫感染后第7、14天,添加多糖提取物并疫苗免疫组的血清IFN-γ效价显著高于单纯疫苗组（P〈0．01）。然而,单纯提取物添加组与单纯疫苗组之间没有显著差异。3种多糖提取物相比,感染第7天后,AstE组的IFN-γ效价最高,而TreE＋V组的IFN-γ的效价显著高于LenE＋v组和AstE＋v组。脾脏细胞IL-2产量与血清IFN-γ效价的表现基本一致。感染后第7天,提取物加疫苗免疫组的平均IL．2水平显著（P〈0．01）高于单纯疫苗组,提取物添加组的平均IL-2水平与单纯疫苗组之间没有显著差异。感染第14天后,多糖提取物添加组及多糖提取物加疫苗组的平均IL-2水平都与单纯疫苗组没有显著差异。IL-2产量在不同多糖提取物添加组间没有显著差异。本实验结果表明,多糖提取物抗球虫作用可能与刺激免疫细胞分泌IFN-γ和IL-2等细胞因子、提高T-细胞免疫应答有关;中药免疫活性多糖对球虫感染鸡有很好的免疫保护作用,当多糖与疫苗一起使用时,效果尤为明显。     

黄酮类化合物柚皮苷抑制HaCaT细胞RANTES产生的研究

目的：分析肿瘤坏死因子口（TNF-α）和γ干扰素（IFN-γ）是否诱导体外培养角质形成细胞株HaCaT产生趋化因子RANTES，了解柚皮苷是否影响TNF-α和IFN-γ／对合成RANTES的诱导作用。方法：TNF-α和IFN-γ刺激培养的HaCaT细胞，应用定量RT-PCR方法测定RANTES的mRNA表达，应用ELISA方法测定上清液中RANTES。结果：正常培养HaCaT细胞RANTES微弱表达，TNF-α和TFN-γ刺激使HaCaT细胞RANTES的mRNA表达与分泌量显著增加。柚皮苷0．5，0．25mmol·L^-1能抑制TNF-α和TFN-γ诱导的RANTES分泌。结论：柚皮苷可抑制TNF-α和TFN-γ引起的HaCaT细胞分泌RANTES。     

复方猪苓多糖对小鼠免疫功能的调节

目的 比较猪苓多糖单、方剂对机体的免疫调节作用,验证中药制剂增强机体免疫功能和拮抗肿瘤的正向调节作用。方法 本实验旨在观察猪苓多糖单、方剂对环磷酰胺免疫抑制效应的调节作用。通过检测小鼠淋巴细胞转化功能、ＮＫ细胞杀伤活性、Ｔ细胞亚群和ＩｇＧ水平等指标来比较。结果 复方猪苓多糖具有：（１）提高免疫功能低下小鼠Ｔ,Ｂ淋巴细胞转化能力;（２）增强免疫功能低下小鼠ＮＫ细胞杀伤肿瘤细胞的能力;（３）上调免疫功     

流式细胞仪检测胶原诱导的关节炎大鼠γδT细胞胞内TNF-α和IL-10的表达

目的研究牛Ⅱ型胶原诱导的关节炎模型(CIA)大鼠外周血中γδT细胞胞内TNF-α和IL-10的表达情况,探讨其在CIA中作用的分子机制.方法于Wistar大鼠背部及尾根部多点皮内注射牛Ⅱ型胶原乳剂制作CIA模型.运用流式细胞仪,通过直接荧光标记的抗TNF-α和抗IL-10抗体来检测单个细胞水平γδT细胞胞内细胞因子的表达.结果与正常大鼠相比,CIA模型大鼠外周血中γδT细胞所占淋巴细胞的百分比显著下降(P＜0.01),γδT细胞胞内TNF-α(P＜0.01)和IL-10(P＜0.01)的表达均明显降低.结论γδT细胞在CIA中其前炎症细胞因子表达下调,可能γδT细胞在CIA的发病中不起致病作用.     

15d-PGJ2对肾小管上皮细胞CD40及RANTES表达的影响

目的：观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）激动剂15d-PGJ2对干扰素-γ（IFN-γ）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）诱导的人近端肾小管上皮细胞（HK-2）CD40和RANTES表达的影响。方法：体外培养人近端肾小管上皮细胞株，分组如下：（1）正常对照组；（2）IFN-γ（50μg／ml）组；（3）TNF-α（10ng／ml）组；（4）IFN-γ（50μg/ml）＋TNF—α（10ng／ml）组；（5）IFN-γ（50μg／ml）＋TNF-α（10ng／ml）分别加1、3、5μmol／L15d-PGJ2组；（6）IFN-γ＋TNF-α．刺激＋15d-PGJ2（5μmol／L）＋GW9662（PPARγ特异拮抗剂）1μmol／L组。GW9662和15d-PGJ2分别在IFN-γ和TNF-α刺激前3和2小时加入。分别采用RT-PCR、流式细胞仪（FACS）和酶联免疫法（ELISA）检测CD40和RANTES基因和蛋白的表达水平。结果：正常HK-2细胞中，CD40、RANTES有基础水平表达。IFN-γ能显著上调HK-2细胞CD40蛋白的表达；TNF-α单独刺激对CD40表达无显著影响，但能增强IFN-γ的刺激效应。IFN-γ＋TNF-α显著增加HK-2细胞RANTES的表达和分泌。15d—PGJ2呈剂量依赖式在基因和蛋白水平显著抑制IFN-γ＋TNF-α．诱导的CIMO和RANTES的表达。加入PPARγ特异拈抗剂GW9662后，能够部分逆转15d-PGJ，对CIMO和RANTES表达的抑制效应，但并不能完全阻断其作用。结论：15d-PGJ2部分通过PPARγ介导的信号途径参与抑制IFN-γ＋TNF-α．诱导的人近端肾小管上皮细胞CD40和RANTES的表达，从而在肾脏局部发挥免疫调节和抗炎作用。     

共固定化肿瘤坏死因子和干扰素的协同抗癌作用

研究重组人干扰素（IFN-γ）和重组人肿瘤坏死因子（TNF-α）的共固定化对体外培养的人宫颈癌细胞（Hela）生长的影响。利用光固定化方法将IFN-γ、TNF-α共固定在24孔聚苯乙烯培养板（PSt）上，培养Hela细胞，分别设为：共固定（IFN-γ＋TNF-α）、单固定（IFN-γ、TNF-α）、游离（IFN-γ、TNF-α、IFN-γ＋TNF-α）各组培养，研究癌细胞生长抑制曲线，透射电镜、流式细胞仪检测Hela细胞的增殖和凋亡。结果表明共固定化干扰素和人肿瘤坏死因子对Hela细胞的抑制作用显著，最高达82％，显示IFN-γ对TNF-α具有良好的协同抗宫颈癌作用。     

黄芪多糖对浆细胞样树突状细胞功能及成熟的影响

目的:通过体外实验研究黄芪多糖(Astragalus polysaccharide,APS)对浆细胞样树突状细胞(Plasmacytoid dendritic cell,pDC)功能及成熟的影响,为进一步阐明黄芪多糖的免疫学活性提供依据。方法:从健康志愿者外周血分离单个核细胞,流式细胞仪分选pDC,加入0、50、100、200mg/L的黄芪多糖共孵育,24小时后收集上清液,应用酶联免疫吸附试验检测pDC分泌的IFN-α、TNF-α、IL-6量,5天后收集细胞,应用流式细胞仪检测树突状细胞(Dendritic cell,DC)表型CD11c、CD80、CD86阳性率、光镜观察DC的形态、扫描电镜观察DC的超微结构。结果:黄芪多糖显著提高pDC分泌的IFN-α、TNF-α、IL-6量,并且呈黄芪多糖浓度依赖性(P0.05);黄芪多糖可促进pDC向DC的分化和成熟,并呈黄芪多糖浓度依赖性(P0.05)。结论:黄芪多糖能够增强pDC的功能,并促进其向DC的分化和成熟。     

类风湿关节炎前后肠道T淋巴细胞的分布变化

目的探讨在类风湿关节炎条件下大鼠小肠(十二指肠、空肠、回肠)上皮内T淋巴细胞(intraepithelial lymphocyte,IEL)、固有层T淋巴细胞(lamina propria lymphocyte,LPL)的变化规律。方法通过免疫组织化学染色方法,观察正常组和致病组肠管黏膜的T淋巴细胞的变化规律,然后分别对IEL和LPL计数,并进行统计学分析。结果大鼠致病组肠道各部分(十二指肠、空肠、回肠)上皮层和固有层可见T淋巴细胞数量增多。结论通过免疫组织化学方法可见在类风湿关节炎条件下,肠道黏膜的上皮层和固有层均可见T淋巴细胞的分布增多,肠道各段的IEL、LPL可能在黏膜免疫应答中起着关键的生物学作用。     

香菇多糖联合丙肝核酸疫苗诱导抗原特异性免疫应答研究

目的：探讨香菇多糖（Lentinan,LNT）联合丙型肝炎病毒（HCV）非结构蛋白NS3核酸疫苗诱导NS3抗原特异性免疫作用。方法：将不同剂量香菇多糖与等量HCVNS3质粒（100μg/只）,采用初次加强免疫法联合免疫BALB/c小鼠。第二次免疫10天后取小鼠脾脏,制备脾细胞悬液,与NS3抗原多肽共育作为效应细胞。另培养NS3抗原致敏的P815细胞作为靶细胞。采用MTT法分别检测NS3抗原特异性T细胞增殖反应和细胞毒T细胞特异性杀伤反应（CTL）。同时采用ELISA方法检测血清中细胞因子IL-4和IFN-γ分泌水平。结果：研究发现高剂量及中剂量香菇多糖与NS3质粒联合在效靶细胞比为50：1时,可明显加强NS3抗原特异性CTL反应,与单用NS3质粒相比有显著差异（P〈0.01和P〈0.05）;中剂量和低剂量香菇多糖与NS3质粒联用明显增强NS3抗原特异性T细胞增殖反应（均为P〈0.01）;细胞因子分析显示中剂量和低剂量香菇多糖与NS3质粒联用使IFN-γ分泌增加（均为P〈0.01）。结论：采用初次加强免疫法将中剂量香菇多糖（0.1ml/10g）与HCVNS3质粒联合免疫BALB/c小鼠,可激发明显增强的抗原特异性T细胞增殖和CTL反应,并伴有大量的IFN-γ分泌,提示香菇多糖可作为丙肝病毒NS3核酸疫苗的免疫佐剂,加强抗原特异性免疫应答效应。