3p杂合性缺失与非小细胞肺癌的相关性

目的 探讨3号染色体短臂(3p)多个等位基因位点的杂合性缺失(loss of heterozygosity,LOH)与非小细胞肺癌(NSCLC)发生发展之间的相关性.方法 采用微切割技术和PCR-SSLP银染结合微卫星重复序列多态性,分析53例NSCLC石蜡切片中肺癌组和对照组中3p25,3p22～p24.3,3p21～p23,3p21.3,3p14.2和3p12多个位点的杂合性缺失(LOH).结果 53例肺癌标本中的LOH检出率分别为57.5%(3p25)、65.4%(3p22～p24.3)、58.3%(3p21～p23)、76.5%(3p21.3)、66.0%(3p14.2)和66.7%(3p12),而对照组的LOH检出率分别为10.2%(3p25)、11.3%(3p22～p24.3)、15.4%(3p21～p23)、32.1%(3p21.3)、0(3p14.2)和1.9%(3p12),肺癌组的缺失率明显高于对照组(P＞0.05);鳞癌的LOH频率明显高于腺癌,差别具有统计学意义,分别为3p25(P=0.006)、3p22～p24.3(P=0.004)、3p21～p23(P=0.001)、3p21.3(P=0.000)、3p14.2(P=0.001)和3p12(P=0.000);3p LOH发生率与TNM分期和性别无明显关系(P＞0.05).结论 3p等位基因LOH几乎可见于所有的NSCLC组织且常为多个位点缺失,提示在3p中存在多个与肺癌发生发展相关的抑癌基因.     

血浆游离FHIT基因杂合性缺失在非小细胞肺癌中的临床意义

目的 探讨脆性组氨酸三联体(fragile histidine triad,FHIT)基因在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者血浆及组织中杂合性缺失(loss of heterozygosity,LOH)的特点,检测血浆游离FHIT基因的LOH在NSCLC研究中的临床意义.方法 通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)-银染法检测69例NSCLC患者(手术前、后)血浆和新鲜癌组织标本中FHIT基因的3个微卫星位点D3S1300、D3S1234、D3S4103的LOH,并进行比较;15例肺良性病变患者静脉血、组织标本及5例健康志愿者的静脉血标本作对照.对应的组织病理切片进行FHIT蛋白的免疫组化染色.结果 NSCLC患者术前血浆和组织FHIT基因的3个微卫星位点上LOH阳性率分别为53.6%(37/69例)、72.5%(50/69例),其共同检出率达74.0%(37/50例).肺良性病变及健康人血浆中未检出该基因突变,两组相比差异有显著性意义(P<0.05).不同病理类型的肺癌患者手术前后血浆FHIT基因LOH之间差异无统计学意义(P＞0.05);有淋巴结转移的肺癌患者与无淋巴结转移者相比,血浆更易检测到FHIT基因的LOH,差异有统计学意义(P<0.05);不同临床分期患者术前血浆FHIT基因LOH之间差异无统计学意义(P＞0.05),而术后同一患者血浆FHIT基因的LOH的检出率差异有统计学意义(P<0.05);免疫组化染色发现在78.3%(54/69)NSCLC患者肿瘤组织中检测出FHIT蛋白表达缺失,而在FHIT蛋白表达缺失的54例肿瘤组织中,有39例患者血浆FHIT基因存在1个或2个上述微卫星位点的LOH.结论 NSCLC患者血浆与肿瘤组织中FHIT基因LOH有较高的一致性变化;LOH可能是NSCLC肿瘤组织FHIT蛋白表达下调的重要机制之一,血浆FHIT基因的LOH检测对于评估肺癌的预后、转移具有潜在的价值和广阔的应用前景.     

外周血血浆中p16基因异常甲基化对非小细胞肺癌患者的检测意义

目的 了解非小细胞肺癌患者外周血血浆中p16基因异常甲基化发生情况及其在非小细胞肺癌临床辅助诊断中的应用价值.方法 选取72例肺部手术患者的血浆和组织标本,其中49例为非小细胞肺癌,23例为良性肺部疾病,采用甲基化特异性聚合酶链反应（MSPCR）方法 检测了p16基因启动子的异常甲基化情况.结果 在非小细胞肺癌患者的血浆和肿瘤组织中,p16基因甲基化检出率分别为55.1%和63.3%;非小细胞肺癌患者血清、肿瘤组织中p16基因的甲基化异常事件与肿瘤分期、分型无明显相关性.在23例良性肺部疾病,其血浆和手术切除标本均未检测出p16基因启动子的异常甲基化存在.结论 检测非小细胞肺癌患者血浆中p16基因异常甲基化情况有可能成为有价值的非小细胞肺癌临床辅助诊断手段.     

NSCLC患者ctDNA与病理组织中EGFR、PIK3CA基因突变检测结果一致性及影响因素

目的 探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血中循环肿瘤DNA(ctDNA)与病理组织中上皮生长因子受体(EGFR)、磷脂酰肌醇3-激酶催化亚基α(PIK3CA)基因突变检测结果的一致性,并分析其影响因素。方法 纳入2019年12月—2020年12月我院收治的118例NSCLC患者作为研究对象。检测患者外周血ctDNA及病理组织中EGFR、PIK3CA及c-Met、TP53、FGFR1、BRAF、STK11、FANCA、KRAS、ERBB2基因状态,比较ctDNA与组织中EGFR、PIK3CA检测结果的一致性,并将患者分为一致组和非一致组;比较两组患者的临床资料,多因素Logistic回归分析影响检测结果一致性的因素;Kaplan-Meier法绘制生存曲线分析ctDNA检测EGFR、PIK3CA突变患者1年生存情况。结果 ctDNA检测结果显示,84例(71.19%)患者检出至少1个EGFR突变位点,19del、L858R、T790M突变检出率分别为37.29%、23.73%、33.05%,33例(27.97%)检出至少1个PIK3CA突变位点,p.E545K、p.H1047R、p.E...     

前列腺癌染色体8p22-8p12基因杂合性丢失研究

目的探讨中国人前列腺癌染色体8p22～8p12基因杂合性丢失的发生率及细胞生物的意义.方法采用PCR-变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和硝酸银染色技术,对32例前列腺癌组织及癌旁组织进行8p22-8p12区域内的5个微卫星多态标志物等位基因杂合性丢失(LOH)分析.结果5个微卫星平均发生率为76.6%,其中LPL-3GT位点LOH发生率最高(88.9%),D8S87位点最低(59.1%);8p22-p12位点LOH发生率与肿瘤分化密切相关.其中D8S133和D8S135位点LOH发生率与肿瘤分化程度呈正相关(P＜0.01),LPL-3GT、NEFL和D8S87位点LOH与肿瘤细胞分化程度无统计学意义(P＞0.05).结论研究结果提示,前列腺癌p22-8p12是LOH的频发区域,该区域等位基因LOH与前列腺癌的发生密切相关.不同位点LOH的发生其细胞生物学意义不同,提示可能存在生物学功能不同的肿瘤抑制基因.     

非小细胞肺癌患者外周血及组织中p53基因突变的研究

目的 探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血中p53 基因突变检测的可行性及其临床意义.方法 应用PCR-SSCP分析技术,检测69例原发性NSCLC 患者血浆(手术前、后)及对应新鲜肺肿瘤组织中p53基因5～8外显子的突变情况,以15例肺良性病变组织及血浆、5例健康献血员血浆作对照.并同时对相应的组织病理切片进行p53蛋白的免疫组化染色检测.结果 NSCLC患者血浆(术前)和对应肿瘤组织中p53基因突变率分别为38%(26/69例)、54%(37/69例),其共同检出率达54%(20/37例);而对照组肺良性病变及健康人血浆中均未检出该基因突变.术后血浆中p53突变率明显低于术前,仅7例(10%)检测到p53突变,包括Ⅲ期3例,Ⅳ期4例, 多为有远处转移的患者.免疫组化染色p53蛋白表达阳性率为64%(44/69例), PCR-SSCP分析与免疫组化染色两种方法检测符合率为81%(56/69例).NSCLC患者血浆(术前)中p53基因突变在不同临床分期及有无淋巴结转移间差异有统计学意义(P<0.05).肿瘤组织中该基因的突变及表达在有无淋巴结转移患者间差异有统计学意义(P<0.05),而在不同病理分型、分化程度及临床分期间差异均无统计学意义(均P>0.05).结论 p53基因突变在NSCLC患者血浆与原发肿瘤组织中有较高的一致性和检出率,且其改变与NSCLC临床分期和转移相关;监测肺癌患者手术前、后血浆中p53突变具有一定意义,通过检测外周血中p53基因的改变可能对肺癌的诊断、预后判断及术后追踪具有一定价值.     

非小细胞肺癌患者外周血中肺表面活性蛋白CmRNA的表达及临床意义

目的:探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血中肺表面活性蛋白C mRNA(SP-C mRNA)在病理确诊后的表达及其意义。方法:应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术来检测44例非小细胞肺癌患者外周血中SP-C mRNA的表达,并以20例肺良性病变患者和10名健康人作为对照。结果:44例肺癌患者外周血SP-C mRNA表达阳性率为59.1%;20例肺良性病变患者和10名健康人的外周血中无SP-C mRNA表达。结论:通过检测非小细胞肺癌患者外周血,SP-C mRNA可能是良好的微转移分子标志物。     

外周血表皮生长因子受体和LUNX mRNA表达对肺癌微转移诊断的价值

目的:分析非小细胞肺癌(NSCLC)患者和肺良性病变患者外周血表皮生长因子受体(EGFR)mRNA和LUNX mRNA表达情况,探讨其在肺癌微转移诊断中的价值.方法:采用荧光定量PCR方法检测42例肺癌患者和18例肺良性疾病患者外周血EGFR mRNA和LUNX mRNA表达.结果:42例NSCLC患者EGFR mRNA表达的阳性率为45.2%(19/42),LUNX mRNA表达的阳性率为40.5%(17/42),两者联合检测阳性率可提高到64.3%.良性肺部疾病患者均为阴性.结论:EGFR mRNA和LUNX mRNA可作为检测NSCLC患者外周血微转移的分子标志物,联合检测可提高外周血癌细胞的检出率.     

基于PTEN-PI3K-AKT信号通路探讨非小细胞肺癌Treg细胞上调的分子机制

目的:通过观察肺癌患者Treg细胞PTEN-PI3K-AKT信号通路分子的表达变化,探讨肺癌患者Treg细胞上调的作用机制。方法:选择30例非小细胞肺癌为研究组,30例健康人作为对照组,采用流式细胞术检测各组人群外周血Treg细胞表达变化;运用免疫磁珠法分选外周血单个核细胞中Treg细胞,Western-blot、Real-time PCR技术检测Treg细胞PI3K、AKT、PTEN蛋白及PTEN mRNA、PI3K mRNA、AKT mRNA的表达情况。结果:研究组外周血Treg细胞占CD+4T细胞的比例(Treg/CD4=4.53%±1.85%)明显高于对照组(Treg/CD4=1.87%±0.93%),差异有统计学意义(P0.05);与对照组比较,研究组PI3K、AKT蛋白表达明显升高,PTEN表达明显降低,差异有统计学意义(P0.05);与对照组比较,研究组PI3K mRNA、AKT mRNA表达明显升高,PTEN mRNA表达明显降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论:肺癌患者外周血Treg细胞水平明显升高,其机制可能与PTEN表达下调进而激活PI3K-AKT信号通路相关。     

非小细胞肺癌中 VEGF-936C/T 多态位点相关分析

目的:检测非小细胞肺癌患者血清中VEGF表达水平,探讨其与非小细胞肺癌发生和发展的关联性,并检测其基因位点936C/T多态性与非小细胞肺癌的遗传易感性. 方法:运用ELISA法及聚合酶链式反应-连接酶检测反应方法检测80例非小细胞肺癌患者和80例健康体检者外周血中VEGF的表达水平,对其基因位点936C/T多态分型进行检测,并分析与非小细胞肺癌的相关性. 结果:非小细胞肺癌组VEGF表达水平显著高于对照组,P=0.001( P<0.05) ,差异具有统计学意义;两组间的基因型频率(χ2=0.960,0.7500.05)和等位基因频率(χ2=0.968,0.2500. 05)差异无统计学差异,基因型与非小细胞肺癌组的相关性分析( PTC=0.554,PTT=0.670,P>0.05)差异亦无统计学意义. 结论:VEGF在非小细胞肺癌中呈过表达状态,且VEGF与非小细胞肺癌的发生、发展具有相关性;但VEGF基因位点936C/T多态与非小细胞肺癌的发生、发展并无明显相关性.     

非小细胞肺癌患者血浆游离DNA 3p杂合性缺失的研究

目的 研究血浆游离ＤＮＡ第３号染色体短臂的杂合性缺失（ＬＯＨ）在非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）诊断中的价值。方法 ２７例ＮＳＣＬＣ手术病例在术前抽取全血,术后在癌中心切取组织。１５例健康志愿者和７６例非手术ＮＳＣＬＣ患者也抽取全血标本。用ＰＣＲ－银染法对ＮＳＣＬＣ２７例手术病例、７６例非手术病例血浆中游离ＤＮＡ的３ｐ部位进行ＬＯＨ分析。结果 ２７例病理组织标本ＬＯＨ的发生率为６３％（１７／２７）,在１７例病理组织阳性的病例中,血浆游离ＤＮＡ同时发生ＬＯＨ的百分率为８４．４％（１４／１７）;７６例非手术病例中,血浆游离ＤＮＡＬＯＨ的发生率为６４．５％（４９／７６）。结论 血浆游离ＤＮＡ ３ｐ部位的ＬＯＨ在ＮＳＣＬＣ诊断中有一定的诊断价值。     

外周血cTnI-mRNA对扩张型心肌病的诊断价值

目的: 探讨外周血心肌肌钙蛋白I (cTnI)-mRNA在外周血的分布规律及其对扩张型心肌病的诊断价值。方法: 32例扩张型心肌病患者,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法,分别从外周全血及单个核细胞扩增cTnI-mRNA,同时对照研究外周血心肌酶谱(肌酸激酶及其同工酶、天门冬氨酸氨基转移酶、乳酸脱氢酶)活性及cTnI定性;1例心脏移植标本作病理学观察;20例正常献血标本设为对照组。结果: 电镜观察,可见心肌线粒体肿胀、嵴断裂、严重空泡样变及细胞核异形变、染色质浓缩边聚;所有病例外周血单个核细胞扩增cTnI-mRNA均为阴性,外周全血扩增cTnI-mRNA 14例阳性;对照组单个核细胞及外周全血扩增均为阴性;32例中,酶学检测6例异常,外周血cTnI定性检测5例异常,RT-PCR法检测外周血cTnI-mRNA 14例阳性,RT-PCR的阳性率均高于酶学及cTnI定性检测(P<0.05和P<0.01)。结论: cTnI-mRNA存在于外周血浆;RT-PCR法扩增外周血cTnI-mRNA较酶学、cTnI定性检测对扩张型心肌病的诊断有更高的敏感性。     

Detailed deletion mapping of loss of heterozygosity on 9p13-23 in laryngeal squamous cell carcinoma by microsatellite analysis

Background This study was designed to investigate the hot spots of microsatellite loss of heterozygosity (LOH) on 9p13-23 in laryngeal squamous cell carcinoma and to find out the correlation between the incidence of microsatellite LOH and the clinicopathological parameters.Methods Tumor tissues were obtained from paraffin embedded sections with microdissection. Genomic DNA was extracted from tumor tissues and peripheral blood lymphocytes with the phenol-chloroform. Polymerase chain reaction (PCR) amplification and denaturing gel electrophoresis were carried out in a set of 42 squamous cell carcinoma (SCC) of larynx and corresponding peripheral blood lymphocytes using 13 highly polymorphic microsatellite markers on 9p13-23. The correlation was analyzed between microsatellite LOH at the high frequency on 9p13-23 and clinicopathological parameters in the patients with squamous cell carcinoma of larynx.Results Of the 42 laryngeal cancers, 41 (97.6%) showed LOH in at least one of the microsatellite markers tested on 9p13-23. The most frequently deleted marker was D9S162 in 17 of the 19 (89.5%) informative samples. The marker D9S171, which is located on 9p21, had LOH detected in 12 of the 15 informative cases (80.0%). LOH at the D9S1748 marker (closest to the p16 gene locus) was detected in 18 of the 36 informative cases (50.0%). Allelic deletion mapping revealed two minimal regions of LOH encompassing markers D9S161-D9S171 on 9p21 and IFNA-D9S162 on 9p22-23. Multiple LOH (≥4) on 9p21-23 was found more frequently in the patients under 60 years, with supraglottic SCC or cervical lymph node metastasis than those over 60 years, with glottic SCC or without cervical lymph node metastasis (P&lt;0.01 or 0.01, 0.05, respectively). On the contrary, there was no correlation between T stages or pathologic classification and the frequency of LOH on 9p21-23 in 42 SCC of Larynx.Conclusions These findings imply the presence of at least two putative tumor suppressor genes on 9p13-23 in laryngeal SCC. Multiple genetic alterations are probably implicated in supraglottic SCC with cervical lymph node metastasis in younger patients.     

原发性胃癌等位基因丢失的研究

本实验选择了３个ＤＮＡ探针，对胃癌病人最可能发生改变的３对染色体的基因位点进行了等位基因的丢失研究。应用于限制性片段长度多态性分析了３２例原发性胃癌及其癌周正常胃粘膜组织的等位基因变化。     

CEA mRNA及CK19mRNA在非小细胞肺癌外周血中的表达及其与临床病理参数的关系

目的检测非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血中癌胚抗原mRNA(CEA mRNA)及细胞角蛋白19 mRNA(CK19mRNA)的表达及与临床病理参数(病理类型、分期、细胞分化程度、淋巴结转移)之间的相关性。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测48例NSCLC患者、15例肺良性疾病(BLD)患者和10例健康人外周血中CEA mRNA及CK19 mRNA的表达。结果 NSCLC患者外周血中CEAmRNA及CK19 mRNA的阳性表达率分别为58.33%(28/48)、68.75%(33/48),在BLD患者中的阳性表达率分别为6.67%(1/15)、13.33%(2/15),而健康对照组均无表达,差异有统计学意义(P<0.05)。其中Ⅰ、Ⅱ期NSCLC患者外周血中CEA mRNA及CK19 mRNA阳性表达率分别为27.78%(5/18)、83.33%(10/12)及44.44%(8/18)、75%(9/12)。外周血CEA mRNA及CK19 mRNA的阳性表达与临床分期及淋巴结转移密切相关,而与病理类型及分化程度无关。结论 NSCLC患者早期(Ⅰ、Ⅱ期)外周血中也有微转移的存在,说明微转移可能是NSCLC预后不良的原因之一。CEAmRNA与CK19 mRNA均可作为检测NSCLC患者外周血微转移较为合适的分子标志物,联合检测有助于提高检测的准确度。     

散发性结直肠癌3号染色体等位基因杂合缺失

目的 了解散发性结直肠癌（SCRC）3号染色体等位基因杂合缺失（LOH）发生情况。探讨其与临床病理特征间的关系,并对3号染色体上可能的SCRC相关基因进行初步定位。方法 用覆盖3号染色体的13个微卫星标记对83例散发性结直肠癌进行LOH扫描分析。结果 3号染色体至少有两个位点发生LOH者占39%（29/74）,3p所选4个位点中至少有一个发生LOH者占37%（27/74）,3q所选9个位点中至少有一个发生LOH者占53%（39/74）。整条染色体上以D3S1300（3q14.2)位点LOH率最高,达54%（23/43）。3qLOH在远端结直肠癌较近端高发,3q及D3S1300LOH阳性肿瘤多表现为浸润型生长和局部侵犯,并多发于大于50岁的老年患者。结论 3号染色体存在散在分布及区域性高频等位基因LOH,并与SCRC临床病理资料相关,提示其上SCRC相关基因的存在。高频LOH位点D3S1300的发现,提示3p14.2附近区域的FHIT基因可能作为肿瘤抑制基因在结直肠癌的发生发展中发挥作用。     

小细胞肺癌血浆中游离性DNA的3p位点杂合性缺失

目的 研究小细胞肺癌(Small cell lung cancer,SCIC)患者血浆游离性DNA的3p位点的杂合性缺失(Loss of heteroxygosity,LOG)在SCLC诊断中的价值。方法 用PCR—银染法对33例SCLC患者的病理组织及血浆标本中三个位点微卫星(3p14、3p21、3p25)杂合性缺失的情况。结果 33例病理组织标本LOH的发生率为54．5％(18／33)，血浆游离DNA同时发生LOG的百分率为42．4％(14／33)；二者相关性为77．8％(14／18)。结论 SCLC患者血浆游离DNA来自于肿瘤组织，其3p部位的LOH在诊断中有一定的价值。     

原发性肝癌全基因组杂合性缺失的研究

目的 研究肝癌全基因组等位基因杂合性缺失（ＬＯＨ）及其临床意义。方法 采用３８２对微卫星标志,对６５例肝癌２２条常染色体等位基因ＬＯＨ进行检测。结果 全组平均杂合子６８．１％。ＬＯＨ〉３０％的有１ｑ、３ｑ、４ｑ、８ｐ、１３ｑ、１６ｑ和１７ｐ。ＨＢｓＡｇ阳性者Ｄ４Ｓ２９６４ ＬＯＨ（６６％）较ＨＢｓＡｇ阴性者（３０％）高（Ｐ〈０．０５）;Ｄ３Ｓ３６８１和Ｄ１７Ｓ９３８ ＬＯＨ者术后复发率（９１％、８     

雅培CELL-DYNRuby全自动血细胞分析仪检测有核红细胞的准确性评价

目的探讨雅培CELL-DYN Ruby全自动血细胞分析仪检测有核红细胞（NRBC）的准确性。方法 2012年3月—2014年2月取镜检确认的外周血涂片有NRBC的标本102例,分别用显微镜镜检计数法和细胞计数仪法两种方法计数,得到两组数据进行比较分析。结果当标本中NRBC百分比〈5%时,两种检测方法比较,差异无统计学意义（P〉0.05）,说明雅培CELL-DYN Ruby全自动血细胞分析仪检测有核红细胞准确。当标本中NRBC百分比≥5%时,差异有统计学意义,两种检测方法有明显差异,说明在此种情况下检测有一定偏差。结论雅培CELL-DYN Ruby全自动血细胞分析仪检测有核红细胞时准确性较差,如在检测时有NRBC的提示时,一定要推血涂片镜检计数,并用公式计算出白细胞总数。