高糖刺激血管平滑肌细胞血管内皮生长因子的表达

平滑肌细胞可分泌血管内皮生长因子 (ＶＥＧＦ) 〔1〕,在糖尿病视网膜组织中ＶＥＧＦ表达明显增高〔2〕。ＶＥＧＦ的主要功能是增加血管通透性、促进内皮细胞增生和促进新血管增殖。推测ＶＥＧＦ与糖尿病视网膜血管病的病理变化直接相关。本研究探讨Ｄ 葡萄糖浓度、作用时间以及波动糖浓度刺激对ＶＥＧＦ表达的影响。一、材料和方法1.血管平滑肌细胞培养 :无菌条件下取大鼠胸主动脉段 ,按Ｈｏｆｍａｎ的贴片法原代培养血管平滑肌细胞。本实验选用 5～ 10代细胞进行实验。2 .细胞总ＲＮＡ的提取 ,ＲＮＡ变性电泳 ,转膜 :采用异硫氰酸胍一步法…     

血管内皮生长因子抑制同型半胱氨酸所致血管内皮细胞生长停滞的研究

目的:研究血管内皮生长因子(VEGF)对同型半胱氨酸所致血管内皮细胞生长停滞的作用及其分子机制。方法:用[3H]-胸腺嘧啶脱氧核苷掺入法测定细胞DNA合成率,基因表达测定采用RT-PCR。结果:①同型半胱氨酸诱导血管内皮细胞生长停滞、CHOP基因表达升高。VEGF能显著地抑制同型半胱氨酸诱导血管内皮细胞生长停滞,但不影响CHOP表达;②VEGF诱导核糖体蛋白RPS3a表达升高;③瞬时转染RPS3a基因抑制诱导血管内皮细胞生长停滞;④PI3K抑制剂wortmannin显著拮抗VEGF的作用,MEK抑制剂PD98059没有影响。结论:VEGF可通过PI3K信号途径上调RPS3a表达,抑制同型半胱氨酸诱导血管内皮细胞生长停滞,提示VEGF是一个潜在的抑制同型半胱氨酸所致动脉粥样硬化的药物。     

糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子mRNA及蛋白表达的影响

目的研究糖基化终产物（AGEs）对人脐静脉山皮细胞血管内皮生长凼子（VEGF）mRNA及蛋白表达的影响，探讨AGEs在糖尿病动脉粥样硬化中的作用。方法将人脐静脉内皮细胞株ECV304用BSA及小同浓度的AGEs孵育24h及400mg／L的AGEs孵育0、12、24及36h，采用原位杂交及Westem blot方法检测VEGFmRNA及蛋白的表达。结果人脐静脉内皮细胞在100、200及400mg／LAGEs孵育24h后，VEGFmRNA及蛋白表达均显著高于BSA对照组（P〈0．05），在用400mg／LAGEs分别孵育12．24及36h后，各组内皮细胞VEGF mRNA及蛋白表达量也明显高于0h对照组（P〈O．05）。结论AGEs可增加人脐静脉内皮细胞VEGF mRNA及蛋白的表达，且与浓度和时间呈正相关。     

血管内皮生长因子预防血管成形术后再狭窄的机制研究

目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)预防血管成形术后再狭窄的机制.方法:用高脂饲养建立实验性动脉粥样硬化家兔模型,将VEGF作用于正常健康兔和动脉粥样硬化家兔主动脉血管内皮细胞(VEC).采用亚硝酸还原法测一氧化氮(NO),放免法测内皮素(ET)、6-酮-前列腺素1α( 6-keto-PGF1α),采用发色底物显色法测定血浆纤溶酶原激活物(t-PA)和纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)活性.并用WST-1比色法观察VEGF对上述VEC增殖的影响.结果:与空白对照组(VEGF 0 μg/L)比较, 10 μg/L、20 μg/L VEGF处理组NO、6-keto-PGF1α、PAI均明显增加,而ET、t-PA、t-PA/PAI均明显降低,并呈剂量依赖性.与正常健康兔VEC(正常VEC)比较,动脉粥样硬化家兔VEC(异常VEC)分泌ET、PAI、t-PA均明显增加,而NO、6-keto-PGF1α、t-PA/PAI均明显降低.结论:动脉粥样硬化家兔伴有内皮功能异常,而VEGF能促进正常和异常VEC的增殖并分泌NO、PGI2、PAI,而抑制ET、t-PA的分泌,使t-PA/PAI降低.     

心力衰竭患者血清血管内皮生长因子和C-反应蛋白的变化及意义

目的检测心力衰竭(HF)患者血清血管内皮生长因子(VEGF)和C-反应蛋白(CRP)的水平,探讨VEGF在HF发生和发展过程中的作用。方法选取HF患者100例,其中男性53例,女性47例。将慢性HF患者按NY-HA标准进行心功能分级,心功能Ⅱ级为Ⅱ组(37例),心功能Ⅲ~Ⅳ级为Ⅲ组(32例),急性HF患者为Ⅳ组(31例)。测定VEGF及CRP水平,比较各组间VEGF、CRP的变化,并与正常对照组(Ⅰ组,n=35)比较,同时分析VEGF和CRP之间的相关性。分析原发性高血压、高胆固醇血症、糖尿病、及稳定型心绞痛对HF患者VEGF水平的影响。结果(1)Ⅱ~Ⅳ组的VEGF和CRP水平均显著高于Ⅰ组(P均<0.05)。(2)Ⅳ组VEGF水平显著高于Ⅲ组和Ⅱ组(P均<0.05);Ⅱ组和Ⅲ组VEGF水平无显著差异(P>0.05);Ⅲ组CRP水平显著高于Ⅱ组(P<0.05);Ⅳ组和Ⅲ组CRP水平无显著差异(P>0.05)。(3)HF患者血清VEGF与CRP无相关性(r=0.1786,P>0.05)。(4)原发性高血压HF组和血压正常HF组VEGF无显著差异(P>0.05)。高胆固醇HF组和胆固醇正常HF组比较、糖尿病HF组和非糖尿病HF组比较、稳定型心绞痛HF组和不合并心绞痛HF组比较VEGF均无显著差异(P均>0.05)。结论HF患者VEGF及CRP水平显著升高。急性HF组高于慢性HF组.VEGF及CRP水平均随着HF程度的加重而升高。原发性高血压、高胆固醇血症、糖尿病、及稳定型心绞痛对HF患者血清VEGF水平可能无明显影响。     

血管内皮生长因子与细胞黏附分子-1的表达及其对血管内皮功能的影响

目的 通过观察高脂血症大鼠NO、血管内皮生长因子(VEGF)与血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)水平及调脂药物辛伐他汀对其表达的影响,探讨高脂血症在动脉粥样硬化早期对内皮功能的损伤机制.方法 将30只SD大鼠随机分为正常对照组、高脂血症组及辛伐他汀治疗组,分别检测3组大鼠血脂变化及NO、VEGF、VCAM-1水平.结果 与正常对照组比较,高脂血症组NO水平较低、VCAM-1表达较强且范围较广,黏附于内皮的白细胞数明显增多(P＜0.05);VEGF水平与对照组比较,差异无统计学意义;高脂血症组血NO2-/NO3-水平为(29.6±7.2)μmol/L,与正常对照组(38.0±9.9)μmol/L比较明显降低(P＜0.05);辛伐他汀组血NO2-/NO3-水平为(37.4±9.5)μmol/L,高于高脂血症组(P＜0.05),VEGF较高脂血症组明显增高(P＜0.05);血NO2-/NO3-与VEGF呈正相关(r=0.644,P＜0.05).血清NO浓度与VCAM-1表达强度及范围呈负相关(r分别为-0.676、-0.684,均为P＜0.05).结论 NO、VCAM-1参与高脂血症血管内皮的损害;辛伐他汀对内皮功能的改善,可能是通过提高NO水平、减少内皮细胞VCAM-1的表达及促进VEGF的分泌而实现的.     

血管内皮生长因子及其受体与类风湿关节炎的相关性

近年来的研究表明，血管内皮生长因子(vaseular endothelial growth factor，VEGF)在类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)病理过程中起着关键作用。VEGF通过与其受体结合发挥生物学作用，可增加血管通透性，提高炎性渗透．促进内皮细胞生长、迁移和新生血管形成，有助于滑膜血管翳形成．而血管翳形成则是构成滑膜炎症、骨质破坏乃至整个RA疾病进展的一部分。本研究就VEGF及其受体与RA发生、发展和治疗方面的研究进行综述。     

表皮角质细胞与血管内皮细胞共培养对血管内皮生长因子水平的影响

目的探讨人表皮角质细胞与血管内皮细胞共同培养对血管内皮生长因子(VEGF)作用的机制。方法购制人表皮角质细胞和血管内皮细胞进行体外培养,采用双腔通透性测定试剂盒建立细胞共培养模型,应用浓度为15 ng/ml的重组人血管内皮生长因子(VEGF)121和VEGF165作为对照组。利用荧光酶标仪测定不同时间段FITC-dextran量变化,观察血管内皮细胞单层通透性的改变。采用Griess法测定血管内皮细胞产生氧化氮(NO)的变化。结果共培养模型中,血管内皮细胞、表皮角质细胞生长良好,以连续单层形式存在;内池中VEGF121水平在5、30 min、1、2、3、4、5、6 h显著高于VEGF165(P0.05);在0、1、5、10 min,共培养模型内池中NO的含量低于VEGF121刺激组(P0.05),但高于VEGF165刺激组(P0.05)。结论 (1)表皮角质细胞分泌VEGF有时间依赖性,其中VEGF121含量较VEGF偏多。(2)表皮角质细胞分泌物可诱导NO产生,其能力介于VEGF121和VEGF165,因此考虑表皮角质细胞分泌物中引起NO产生增加的主要成分为VEGF。(3)表皮角质细胞分泌物可引起血管内皮通透性增加,其能力介于VEGF121和VEGF165,且数值接近于VEGF121,因此考虑表皮角质细胞分泌物中VEGF121较VEGF165含量高,且VEGF121较VEGF165引起血管通透性能力强。     

缺氧条件下血管活性因子对血管内皮细胞中血管内皮生长因子表达的影响

目的　探讨在缺氧条件下人脐静脉血管内皮细胞血管内皮生长因子 (VEGF)表达及缩血管活性物质内皮素 ,舒血管活性物质NO和NO抑制剂LNNA对VEGF基因表达的影响。方法　体外培养人脐静脉血管内皮细胞 ,经缺氧及血管活性物质处理 ,Northern杂交、酶联免疫检测和计算机图像分析等观察VEGFmRNA和蛋白表达水平。结果　缺氧 6h内皮细胞可见VEGF表达。ET可促进VEGFmRNA的表达 ,NO可明显抑制VEGFmRNA的表达 ,NO抑制剂LNNA也影响VEGFmRNA的表达。ELISA检测VEGF蛋白水平分别为 6h组 (8 2± 1 1) μg/L ,ET +6h组 (9 37± 1 0 2 ) μg/L ,NO +6h组 (2 86± 0 91) μg/L ,LNNA +6h组 (14 75± 1 87)μg/L。 结论　缺氧可诱导人脐静脉血管内皮细胞分泌VEGF并受血管活性物质的调控 ,ET促进其表达 ,NO抑制其表达。     

胃癌细胞血管内皮生长因子RNA干扰对血管内皮细胞生长的影响

目前抗肿瘤血管生成的研究多在动物模型中进行，这样虽然可以模拟肿瘤生长的微环境，但由于受到体内环境诸多因素的影响，促血管生成因子人为表达降低后，血管内皮细胞的生物学行为发生了哪些变化难以明确。采用分泌促血管生成因子的肿瘤细胞与血管内皮细胞共培养可以初步明确这一问题。本研究采用RNA干扰（RNAi）技术观察其抑制肿瘤细胞血管内皮生长因子（VEGF）表达后对血管内皮细胞生长的影响。     

血管抑素和内皮抑素抑制肿瘤血管新生的动物实验研究

目的　建立小鼠背部开窗模型 ,在直视下观察肿瘤生长情况及血管抑素 (AS)和内皮抑素 (ES)对肿瘤的影响。方法　免疫组化测定血管内皮细胞生长因子 (VEGF)、细胞表面磷酸化糖蛋白 (CD34 )的表达 ,了解肿瘤血管生长的情况。结果　本实验肿瘤细胞移植 1 3d后 ,对照组所有小鼠移植肿瘤均生长状态良好 ,肿瘤的生长已使小鼠的行动发生困难 ;而给药组肿瘤小 ,行动不受限制 ,也未见到药物副作用的表现。给药组肿瘤的生长被明显抑制 ,其肿瘤体积小 ,重量明显减轻 .。高剂量给药组与对照组间有显著性差异 (P<0 .0 1 ) ;而且抑制肿瘤生长的作用亦明显高于低剂量对照组 (P<0 .0 1 ) ;高剂量给药组肿瘤中心发生坏死也比较明显。结论　成功建立开窗可视模型 AS、ES抑制肿瘤血管新生起重要作用。     

当归补血汤含药血清对培养内皮细胞生长因子受体表达的影响

目的探讨当归补血汤含药血清对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子（VEGF）受体表达的影响。方法将培养的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）随机分为6组：①正常对照组；②100μmol／L H2O2低氧培养组；③bFGF＋100μmol／L H2O2组；④黄芪、当归液大剂量组＋100μmol／L H2O2；⑤黄芪、当归液中剂量组＋100μmol／L H2O2；⑥黄芪、当归液小剂量组＋100μmol／L H2O2。HUVEC VEGF受体的检测采用免疫荧光化学染色法，同时用RT-PCR方法测定VEGF mRNA的表达。结果采用H2O2可成功制备内皮细胞缺氧模型。与正常对照组比较。当归补血汤含药血清各组VEGF受体均有不同程度的表达，其中中剂量组和小剂量组具有明显的上调受体的作用。对于VEGF mRNA的表达，以H2O2低氧培养组、中剂量＋H2O2组和小剂量＋H2O2组较为显著。结论化学性H2O2损伤可以成功造成HUVEC缺氧损伤，益气活血中药当归补血汤可以上调VEGF受体，以及VEGF mRNA的表达，促进血管新生。     

姜黄素对人肝癌细胞中血管内皮生长因子表达的影响

姜黄素属于天然酚类抗氧化剂，可作为抗突变剂和抗促癌剂Ⅲ，具有安全、无显著不良反应等特点，美国国立肿瘤所已将其列为第三代癌化学预防药物。姜黄素的抗肿瘤机制是多方面的，其中抑制肿瘤新生血管的生成是姜黄素抗肿瘤作用的重要机制。血管内皮生长因子（VEGF）是肿瘤诱导产生新生血管最主要的细胞因子。而肝癌为富含血管的肿瘤，且VEGF在肝癌中有高表达，对姜黄素是否能抑制人肝癌细胞BEL-7402中VEGF蛋白和mRNA的表达，值得我们深入探讨。     

血管内皮生长因子和C-反应蛋白对鉴别结核性和恶性胸腔积液的诊断价值

血管内皮生长因子(VEGF)又称为血管通透性因子,是近年来发现的一种新的肿瘤标志物,有研究认为它能导致毛细血管通透性的增加,在渗出性胸液中起着重要作用;而C-反应蛋白(CRP)测定是临床上一种快速、实用、经济的实验室检查,已用于鉴别胸液的研究。检测胸水以及血清中VEGF和CRP,对于鉴别结核和恶性胸液有一定的实用价值,是较好的指标,为了提高灵敏度、特异度及准确度,主张联合检测VEGF和CRP,会有更好的临床意义。     

辛伐他汀对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子表达的影响

采用逆转录聚合酶链反应和Western Blot方法，观察促炎症因子肿瘤坏死因子α和白细胞介素1β对体外培养人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子及其受体表达的影响，并以辛伐他汀干预，观察其对上述过程的影响。结果发现，肿瘤坏死因子α和白细胞介素1β显著促进人脐静脉内皮细胞中血管内皮生长因子及其受体的表达，在不同水平辛伐他汀对促炎症因子的上述作用具有一定的抑制效应，由此推断辛伐他汀可能具有一定的抗炎症反应及抗动脉粥样硬化的作用。     

重组人血管内皮抑制素结合放化疗对鼻咽癌临床疗效、预后及血清血管内皮生长因子的影响

目的探讨重组人血管内皮抑制素结合放化疗对鼻咽癌患者临床疗效、预后及血清血管内皮生长因子(VEGF)水平的影响。方法90例老年鼻咽癌患者随机分为观察组和对照组。对照组采用放化疗方案进行治疗,观察组在对照组基础上采用重组人血管内皮抑制素进行治疗。治疗前及治疗后检测血清中VEGF水平,记录患者治疗期间不良反应发生情况,结束治疗4 w后采用鼻咽部MRI、鼻咽镜、胸部CT等手段进行疗效评价;对患者进行为期3年的随访,统计患者生存率(OS)及无进展生存时间(PFS)。结果观察组治疗有效率优于对照组(χ2=5.700,P<0.05);治疗后两组血清VEGF水平显著低于治疗前,且观察组显著低于对照组(均P<0.05);观察组OS及PFS均显著优于对照组(P<0.05);两组不良反应发生率差异无统计学意义(P>0.05)。结论重组人血管内皮抑制素结合放化疗手段可有效改善鼻咽癌患者临床疗效,提高患者预后并可有效改善血清中VEGF水平。     

急性白血病患者血管内皮生长因子及其受体表达的动态观察

目的探讨急性白血病(AL)患者治疗前后骨髓中血管内皮生长因子(VEGF)及其受体的表达差异以及这种表达与血管生成的相关性.方法应用EnVision免疫组织化学二步法,检测122例次成人AL患者骨髓中造血细胞VEGF及其两种特异性受体fms-样酪氨酸激酶受体(Flt-1)、激酶插入嵌合受体(KDR)蛋白的表达情况.结果化疗后获得完全缓解(CR)的患者,其VEGF、KDR蛋白的表达在治疗前为6.0(3.3～12.0)和5.3(3.3～8.0),获CR后为5.3(3.3～9.0)和2.0(1.0～4.0)差异有显著性(P<0.05;P<0.01),而在化疗后未获得CR患者中的表达差异无显著性.在缓解后复发患者中的表达又升高到初发时的水平.各组初发患者Flt-1的表达水平与对照组之间差异无显著性,但CR期Flt-1的表达水平在CR组为3.3(1.7～5.3),复发组为3.3(2.0～5.3)与初发及对照组差异有显著性(P<0.01).微血管数处于高水平组的VEGF及KDR表达显著高于微血管处于低水平组者(P<0.01).骨髓原始细胞与急性髓系白血病(AML)初发患者VEGF和KDR的表达之间成正相关(r=0.429,0.359;P=0.005,0.02);与急性淋巴细胞白血病(ALL)初发患者VEGF的表达之间成正相关(r=0.522,P=0.03).结论 VEGF及其两种特异性细胞受体Flt-1, KDR在造血细胞及血管内皮细胞中表达.提示VEGF可能是白血病细胞的一种自分泌因子,同时作为一种旁分泌因子调控患者骨髓中的血管新生反应.VEGF及其细胞受体KDR可能构成抗血管新生和抗白血病治疗的新靶点.     

反义基因对肝癌血管内皮生长因子表达的抑制

原发性肝细胞癌(HCC)的生长很大程度上依赖新生血管的形成。抑制肿瘤血管的形成，特别是肿瘤血管形成调控因子血管内皮生长因子(VEGF)的基因治疗是近年HCC治疗研究的新方向。本文通过实验方法探讨不同序列的反义寡核苷酸(ODN)对VEGF表达的抑制效应，为今后肝癌VEGF的基因治疗提供实验基础。     

血管内皮生长因子和C-反应蛋白约而别结核性和恶性胸腔积液的诊断价值

血管内皮生长因子(VEGF)又称为血管通透性因子,是近年来发现的一种新的肿瘤标志物,有研究认为它能导致毛细血管通透性的增加,在渗出性胸液中起着重要作用;而-反应蛋白(CRP)测定是临床上一种快速、实用、经济的实验室检查,已用于鉴别胸液的研究.检测胸水以及血清中VEGF和CRP,对于鉴别结核和恶性胸液有一定的实用价值,是较好的指标,为了提高灵敏度、特异度及准确度,主张联合检测VEGF和 CRP,会有更好的临床意义.     

内分泌腺来源的血管内皮生长因子抑制胰腺癌细胞凋亡的信号转导机制研究

目的 探讨内分泌腺来源的血管内皮生长因子(EG-VEGF)在胰腺癌MiaPaCa细胞中抗凋亡作用及其相关分子机制.方法 以50、100、200 ng/ml EG-VEGF处理细胞,采用流式细胞仪检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测细胞p42/44MAPK、STAT3蛋白表达及其磷酸化,检测抗凋亡蛋白Mcl-1的表达.应用G蛋白耦联非特异受体阻断剂PTX、Rsa/ERK信号通路阻断剂PD98059和JAK/STAT3信号通路阻断剂AG490预处理细胞1 h,观察Mcl-1蛋白表达的变化.结果 100 ng/ml EG-VEGF可使MiaPaCa细胞的凋亡率从(28.4±4.6)%显著下降到(13.2±2.5)%(P<0.05).50 ng/ml的EG-VEGF处理后,MiaPaCaⅡ细胞p42/44MAPK的磷酸化增加(1.735 ±0.019)倍;STAT3的磷酸化增加(21.810±0.052)倍,均较对照组显著增加(P值均<0.05),但100、200 ng/ml EG-VEGF没有进一步增加蛋白的磷酸化.50 ng/ml的EG-VEGF处理后,Mcl-1蛋白的表达较对照组增加(3.460±0.002)倍,但100、200ng/ml EG-VEGF没有进一步增加蛋白的表达;应用PTX预处理后,Mcl-1蛋白表达的增加被完全抑制,用PD98059、AG490预处理后Mcl-1表达增加抑制率分别为52%和68%.结论 EG-VEGF可抑制MiaPaCa细胞的凋亡,其机制可能与激活Ras-MAPK和JAK-STAT3信号转导通路及增加Mcl-1蛋白的表达有关.