依那普利对大鼠慢性支气管肺炎肺组织蛋白组表达变化的影响

目的 采用蛋白组学方法研究丙烯醛雾化吸入致大鼠慢性支气管肺炎模型中依那普利干预后肺组织蛋白组的表达变化,探讨依那普利干预慢性支气管肺炎的分子机制.方法 运用双向电泳和质谱分析技术找出丙烯醛雾化吸入组和依那普利干预组的差异蛋白质.结果 在两组凝胶图谱中平均检测到545个蛋白点.依那普利干预组与丙烯醛吸入组比较,发现3个明显差异蛋白.经质谱鉴定, 3个差异蛋白分别是甘油醛-3-磷酸脱氢酶,T-激肽原-1-前体,二氢嘧啶酶-2.定量分析结果显示依那普利干预导致肺组织中二氢嘧啶酶-2上调,甘油醛-3-磷酸脱氢酶下调,而T-激肽原-1-前体消失.结论 依那普利对大鼠慢性支气管肺炎的干预作用可能与肺组织中这3种蛋白表达变化有关.     

依那普利对炎性损伤肺组织IL-1β和IL-6表达的影响

目的 探讨依那普利对丙烯醛吸入致大鼠炎性损伤肺组织中IL-1β、IL-6表达变化的影响.方法 将大鼠随机分为4组:生理盐水雾化吸入组,丙烯醛雾化吸入组,依那普利治疗组,依那普利自身对照组.用丙烯醛雾化吸入造成大鼠气道黏液高分泌炎性气道肺损伤模型.于造模及依那普利处理后1、3,6周分别用免疫组织化学染色、原位杂交、RT-PCR和蛋白免疫印迹技术检测肺组织IL-1β和IL-6蛋白及mRNA的定位与表达量.结果 IL-1β、IL-6主要分布于肺上皮细胞,胞浆染色为主.丙烯醛吸入后3周,肺组织炎症反应明显,IL-1β和IL-6的mRNA和蛋白水平均明显上调,6周达到高峰(P＜0.05),而依那普利治疗下调IL-1β和IL-6 mRNA和蛋白水平(P＜0.05).结论 依那普利的抗炎作用可能与IL-1β和IL-6的表达下调有关.     

丙烯醛致大鼠气管和肺损伤中AngⅡ的表达变化

目的 探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)在丙烯醛所致大鼠气道损伤中的表达变化及其可能作用.方法 用丙烯醛雾化吸入造成大鼠气道黏液高分泌,建立模拟慢性阻塞性肺疾病模型.造模后1、3、6周分别用阿辛蓝-过碘酸雪夫(AB/PAS)法检测气道黏液分泌量.免疫组化、蛋白质印迹法检测肺上皮细胞AngⅡ的表达变化.结果 大鼠丙烯醛吸入后3至6周,气管和肺组织中黏液分泌均明显增加,AngⅡ表达水平明显上调,与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 在丙烯醛吸入气道损伤模型中,AngⅡ明显上调,提示AngⅡ在慢性阻塞性肺疾病发病机制中可能是一个关键分子.     

大鼠气道损伤后脑源性神经营养因子表达变化

目的 探讨丙烯醛吸入损伤对大鼠气道脑源性神经营养素（BDNF）表达的影响。方法 用丙烯醛雾化吸入造成成年雄性健康大鼠气道黏液高分泌损伤模型,损伤后不同时间点(1周、3周和6周各11只)取气管上皮,以生理盐水雾化吸入为对照（1、3、6周各11只）。用免疫组化和原位杂交染色检测BDNF蛋白和mRNA的定位分布,RT-PCR检测气道BDNF mRNA不同时程的表达变化。结果 气管上皮和平滑肌可见BDNF阳性细胞,胞浆染色。RT-PCR显示与对照组相比,丙烯醛吸入1周气管中BDNF mRNA表达明显上调（P<0.05）,随后逐渐回落,到第3周回到对照组水平,持续至第6周（P均>0.05）。结论 丙烯醛吸入致大鼠气道损伤过程中,气管上皮和平滑肌BDNF表达早期明显上调,提示BDNF参与了气道损伤过程中神经源性炎性反应调控。     

吸入一氧化氮对急性肺损伤大鼠肺组织一氧化氮合酶的影响

目的　探讨诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)在急性肺损伤 (ALI)发病中的作用及吸入一氧化氮对肺损伤的影响。方法　以内毒素和油酸复制大鼠ALI模型 ,随后对肺损伤大鼠进行低剂量一氧化氮 (NO)吸入治疗 ,同时以生理盐水作对照。应用免疫组织化学方法和图像分析系统 ,检测实验组肺组织中iNOS表达。结果　实验组iNOS表达为 :生理盐水组和NO对照组为 63 .3 3± 2 6.65和 42 .89± 2 8.91;内毒素和油酸ALI模型组为 176.44± 2 1.47和 176.5 6± 2 8.71;内毒素和油酸模型的NO治疗组为 78.11± 2 1.66和 83 .78± 44 .3 ;两个模型组与对照组和NO治疗组比较差异有显著性(P <0 .0 1)。结论　iNOS在ALI发病中起着重要作用 ,吸入小剂量外源性NO ,对缓解ALI有一定的作用     

依那普利对丙烯醛致大鼠气道黏液高分泌中NF-κB表达的影响

目的 探讨依那普利在丙烯醛所致大鼠气道黏液高分泌中的作用及其分子机制.方法 用丙烯醛雾化吸入制作大鼠气道黏液高分泌模型,以依那普利作为治疗措施,于造模后1、3、6周分别用AB/PAS法检测气道黏液分泌量.免疫组化、原位杂交、RT-PCR、蛋白质印迹检测NF-κB蛋白及mRNA在气道的定位与表达量.结果 丙烯醛吸入后3周,气道黏液分泌显著增加,NF-κB蛋白和mRNA表达水平明显上调,6周达到高峰;而依那普利治疗可明显下调它们的表达和黏液分泌.结论 依那普利能有效控制丙烯醛所致大鼠气道黏液高分泌.其分子机制可能与NF-κB减少有关.     

辛伐他汀对丙烯醛暴露大鼠NF-kB表达的影响

目的 通过检测辛伐他汀对大鼠肺组织中NF活性的影响,了解其对减少丙烯醛引起的气道黏液高分泌的可能机制.方法 大鼠雾化吸入丙烯醛建立气道黏液高分泌模型.干预组在雾化吸入丙烯醛同时用不同浓度辛伐他汀灌胃.蛋白印迹(western blot)检测MUC5AC蛋白的表达,凝胶阻滞迁移分析方法(EMSA)检测NF-<,k>B的活性.结果 丙烯醛吸入刺激后12天,与正常对照组相比,MUC5AC蛋白、NF-<,k>B活性增加.辛伐他汀干预后,与丙烯醛组相比,MUC5AC蛋白、NF-<,k>B活性降低,应用甲羟戊酸后可以部分抵消辛伐他汀的作用,使MUC5AC蛋白产生、NF-<,k>B活性增加.结论 辛伐他汀可抑制丙烯醛所致气道粘液高分泌,其部分机制可能通过甲羟戊酸途径抑制NF-<,k>B活性.     

MMP-2和TIMP-2在脂多糖诱导的新生大鼠急性肺损伤中表达的变化

目的 探讨基质金属蛋白酶-2(matrix metallo proteinase-2,MMP-2)及其组织抑制剂(tissue inhibitors of metallo proteinase-2,TIMP-2)在脂多糖(LPS)诱导的新生大鼠急性肺损伤中的作用.方法 选择30只新生7日龄SD大鼠,随机分为生理盐水对照组(n=6)和急性肺损伤组(n=24),后者进一步分为1、2、4及6h亚组,每组6只.以LPS 腹腔注射建立急性肺损伤模型,观察注射LPS后不同时间点大鼠肺组织的病理改变,用免疫组织化学法和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测大鼠肺组织中MMP-2和TIMP-2的蛋白及mRNA表达.结果 病理学检查证实新生大鼠急性肺损伤模型复制成功.与生理盐水对照组比较,急性肺损伤组注射LPS后MMP-2蛋白及mRNA均表达增加,4～6h达高峰,差异有统计学意义(均P<0.05).TIMP-2蛋白及mRNA表达在6h内可见微弱增加趋势,但与生理盐水对照组比较差异无统计学意义(均P>0.05).结论 LPS致新生大鼠的急性肺损伤存在MMP-2和TIMP-2的表达失衡,进而可能通过破坏基底膜参与急性肺损伤的病理过程.     

血管分泌因子Rspondin3调控Wntβ-catenin信号通路促进急性肺损伤组织修复的机制研究

目的:探讨血管分泌因子Rspondin3通过wnt/β-catenin信号通路参与急性肺损伤大鼠模型肺的分子机制。方法:40只SPF级SD大鼠建立急性肺损伤模型，将大鼠分为对照组(n=10)、模型组(n=10),阴性对照(Negative control,NC)组(n=10)和Rspondin3组(n=10),模型组、NC组、Rspondin3组建立LPS诱导的大鼠急性肺损伤模型，NC组和Rspondin3建立模型后分别通过尾静脉注射(Negative control,NC)质粒和Rspondin3过表达质粒,对照组和模型组给与等量生理盐水灌，2周后，HE染色检测各组大鼠病肺组织理病变水平，通过Elisa实验检测各组大鼠大鼠肺组织白细胞介素-1(Interleukin-1,IL-1),白细胞介素-2(Interleukin-2,IL-2),白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)水平的变化，Western blot检测大鼠肺组织wnt-3a及β-环联蛋白(β-catenin)蛋白表达水平，透射电镜技术检测各组大鼠肺组织超微结构变化。结果:与对照组相比，模型组和NC组组织可...     

氧化苦参碱对新生鼠高氧性肺损伤的保护作用及机制探讨

目的观察高氧致慢性肺疾病（CLD）新生大鼠肺组织转化生长因子β1（TGF？β1）、Smad3、Smad7及结缔组织生长因子（CTGF）水平的动态变化,以探讨氧化苦参碱对高氧性肺损伤的保护作用及机制。方法新生Wistar大鼠128只随机分为空气对照组、氧化苦参碱治疗组、盐水对照组和高氧组,每组各32只,高氧组、盐水对照组和氧化苦参碱治疗组的新生Wistar大鼠（连同母鼠）生后即置于氧舱内,持续吸入高浓度氧（FiO2=0.90）21 d,造成高氧性肺损伤模型;空气对照组吸入空气。氧化苦参碱治疗组于生后当日始每日腹腔注射氧化苦参碱（100 mg/kg）,盐水对照组每日腹腔注射等量生理盐水。每组分别于实验开始后第3、7、14、21天随机选取8只麻醉后处死。肺组织采用免疫组化方法检测TGF？β1、Smad3、Smad7及CTGF蛋白的表达并同时观察肺组织形态学变化。结果与空气对照组比较,高氧组、盐水对照组肺组织TGF？β1、Smad3、CTGF蛋白表达在实验后第14天明显升高,第21天达高峰（P〈0.05或P〈0.01）,氧化苦参碱治疗组上述指标与高氧组、盐水对照组比较明显降低（P〈0.05或P〈0.01）,Smad7蛋白表达明显增多（P〈0.01）。高氧组、盐水对照组第14天肺组织间质细胞增多,出现纤维化改变。第21天正常肺泡结构消失,肺组织出现严重的纤维化。氧化苦参碱治疗组肺组织纤维化病变明显减轻。结论氧化苦参碱干预抑制了高氧致CLD新生大鼠肺组织TGF？β1、Smad3、CTGF蛋白表达,增加Smad7蛋白表达,减轻了肺纤维化病变,这可能是氧化苦参碱对高氧性肺损伤具有保护作用的机制之一。     

依拉普利对丙烯醛诱导的气道炎症干预作用的研究

目的应用丙烯醛建立气道炎症模型,给予依拉普利进行干预,了解其对气道炎症的影响,并探讨核因子(NF-κB)在这一过程中的作用。方法健康雄性SD大鼠24只,随机分为4组,每组6只。A组:空白对照组(吸入生理盐水);B组:依拉普利自身对照组(单纯依拉普利灌胃),依拉普利0.5mg/(kg.d)灌胃;C组:模型组(丙烯醛),大鼠吸入4mg/L丙烯醛,每次3h,每天两次;D组:依拉普利干预组(吸入丙烯醛 依拉普利灌胃),处理同模型组,并给予依拉普利0.5mg/(kg.d)灌胃。21d后处死大鼠,采集标本。采用免疫组化方法检测肺组织中血管紧张素和气道上皮NF-κB p65的表达,并计算NF-κB p65的入核率。采用Western blot方法检测肺组织胞浆中的NF-κB。收集支气管肺泡灌洗液,检测其中的中性粒细胞数,用ELISA的方法检测TNF-α、IL-8。结果免疫组化结果显示模型组大鼠肺组织中AngⅡ、NF-κB p65的表达,NF-κB p65入核率较空白对照组明显增高,依拉普利干预组各项指标较模型组明显减少。Western blot检测发现细胞浆中NF-κB的表达量显著增高(P<0.05),依拉普利干预可以使NF-κB p65的表达有一定程度的降低(P<0.05)。支气管肺泡灌流液(BALF)中中性粒细胞数以及ELISA检测的BALF中的炎性细胞因子IL-8和TNF-α模型组显著高于对照组,依拉普利干预组中均有明显降低(P值均<0.05)。结论在丙烯醛诱导的气道和肺的炎症模型中,AngⅡ起了重要的作用,依拉普利可部分抑制这一炎症反应,其机制可能与它抑制了NF-κB的激活有关。     

吉非替尼在丙烯醛诱导气道黏液高分泌中的作用

目的研究表皮生长因子酪氨酸受体抑制剂(EGFR-TKI)——吉非替尼(gefitinib)在丙烯醛诱导气道黏液高分泌中的作用。方法采用丙烯醛诱导气道黏液高分泌建立大鼠模型,将大鼠分为正常对照组(A组,不予以任何干预),模型组(B组,丙烯醛雾化吸入),药物干预组(C、D、E组,在丙烯醛雾化前30 min,分别以10 mg/kg、20 mg/kg、30 mg/kg的吉非替尼灌胃),药物对照组(F组,生理盐水雾化前30 min,以30 mg/kg吉非替尼灌胃),每组6只大鼠。上述处理持续3周后处死实验动物并取其肺组织,分别进行RT-PCR检测黏蛋白MUC5ACmRNA的表达,免疫组化检测气道MUC5AC和EGFR的蛋白表达,阿尔辛蓝-过碘酸雪夫氏染色(AB-PAS)检测杯状细胞数目。结果模型组大鼠肺组织MUC5AC、EGFR表达增强,杯状细胞数增加;吉非替尼对丙烯醛引起的MUC5AC表达、杯状细胞数增加均具有抑制作用,随着浓度的增加,抑制作用加强;吉非替尼对EGFR信号通路中EGFR蛋白表达具有抑制作用。结论丙烯醛活化EGFR使MUC5AC过度表达,吉非替尼通过对EGFR信号通路的调节,在气道黏液高分泌中具有保护作用。     

雌激素对新生大鼠高氧肺损伤的影响

[目的]探讨雌激素对高氧所诱发新生大鼠肺损伤的影响.[方法]选用生后2d、体重为5～10g的新生Wistar大鼠,雌雄不拘,随机分为空气对照组、高氧模型组及雌激素治疗组.将空气对照组新生大鼠暴露在室内空气中,其他各组新生大鼠暴露在90%(体积分数)氧中共14d,雌激素治疗组新生大鼠每日分别腹腔内注射给予雌激素2mg/kg,空气对照组和高氧模型组腹腔内注射给予生理盐水.实验开始第3,7,14天时间点记录各组新生大鼠自然死亡数目,计算死亡率;每组处死10只,取肺组织,在光学显微镜下观察肺组织的病理变化,采用免疫组织化学染色方法观察肺组织中γ干扰素(IFN-γ)的表达.[结果]随着高氧暴露时间的延长,高氧模型组及雌激素治疗组死亡率均呈增高趋势,高氧模型组暴露7 d后开始死亡率迅速升高,而雌激素治疗组死亡率明显降低,相比较差异具有统计学意义(P<0.05).空气对照组IFN-γ无阳性表达,而高氧模型组中的阳性表达在第7天时达到高峰,第14天时明显下降,但仍高于空气对照组;雌激素治疗组中的IFN-γ表达强度在各时间段均明显低于高氧模型组(P<0.01).[结论]雌激素对新生大鼠高氧肺损伤有保护作用.     

氢气对吸入性损伤大鼠急性肺损伤的保护作用及量效研究

目的：探讨不同剂量氢气饱和生理盐水（HS）对烟雾吸入性损伤大鼠急性肺损伤的保护作用.方法：30只SD大鼠随机分为5组：对照组（C）、吸入性损伤组（Ⅰ）、氢气饱和生理盐水低剂量组（2.5 mL/kg,HSL）、中剂量组（5mL/kg,HSM）、高剂量组（10 mL/kg,HSH）,24 h后留取标本,透射电镜观察肺组织病理变化,检测血清中肿瘤坏死因子α（TNF-α）,肺组织匀浆的丙二醛（MDA）含量,免疫组织化学法测定肺组织核因子-κBp65（NF-κBp65）的表达,TUNEL检测肺组织凋亡情况.结果：中、高剂量氢气饱和生理盐水能明显减轻吸入性损伤大鼠的急性肺损伤,降低炎性因子（TNF-α）的释放,减轻组织氧化损伤（MDA低于致伤组）,抑制肺组织NF-κBp65的活化及细胞凋亡,且HSH优于HSM,HSM、HSH组间差异有统计学意义（P＜0.05）,而HSL组效果不明显.结论：氢气饱和生理盐水可减轻吸入性损伤大鼠的急性肺损伤,且存在一定的量效关系.     

BDNF抗体封闭对大鼠脑缺血损伤肺组织IL-6表达的影响

目的 探讨脑缺血肺损伤后脑源性神经营养因子(BDNF)是否能调节损伤肺组织炎症因子白细胞介素-6(IL-6)的表达。方法 将大鼠随机分为假手术组、脑缺血肺损伤组、脑缺血肺损伤给予BDNF抗体封闭组(BDNF抗体封闭组)。每组13只大鼠,于BDNF抗体干预后3 d处死,5只用于免疫组化,8只用于RT-PCR和Western blot,检测BDNF封闭对IL-6定位与表达量的影响。结果 免疫组化染色显示,气道上皮细胞和巨噬细胞可见IL-6表达,胞浆染色为主。RT-PCR和Western blot检测显示BDNF抗体封闭后3 d,肺组织IL-6 mRNA和蛋白表达下降,与脑缺血肺损伤组比较,差异有统计学意义（P<0.05）。 结论 BDNF抗体封闭减少脑缺血肺组织IL-6表达,提示BDNF可能通过调节IL-6参与脑缺血肺水肿。     

苦胆草对博来霉素致大鼠肺纤维化的防治作用

［摘要］目的　探讨苦胆草对博莱霉素致大鼠肺纤维化的防治作用．方法　健康成年SD大鼠40只（200±20）g随机分为4组:正常对照组（未做处理）、生理盐水组（气管滴入生理盐水）、模型组（气管滴入博莱霉素5 mg/kg）和苦胆草干预组［灌胃给予苦胆草片混悬液0.705 g/(100 g.d),2次/d、共5次,末次给药1 h,气管滴入博莱霉素5 mg/kg］．分别于气管内滴注后14 d和28 d处死动物,检测各项指标．采用碱水解法测定肺组织中羟脯氨酸（HYP）含量,HE染色和银染观察肺组织病理变化．结果　与正常对照组和生理盐水组比较,模型组大鼠肺组织HYP含量明显升高（P＜0.01）;与模型组比较,苦胆草干预组大鼠肺组织HYP含量明显降低（P＜0.01）;病理检查发现,模型组大鼠肺组织有明显肺纤维化样改变,苦胆草干预组可明显减轻肺纤维化程度．结论　苦胆草能降低博莱霉素致肺纤维化大鼠肺组织羟脯氨酸含量,减轻肺纤维化程度,有望成为防治肺纤维化的候选药物．     

吸入一氧化氮对急性肺损伤大鼠肺组织炎症的影响

目的观察吸入不同浓度一氧化氮（NO）对急性肺损伤（ALI）大鼠肺组织的影响。方法将24只SD大鼠随机分为对照组、ALI模型组、低浓度NO组和高浓度NO组,每组6只。ALI模型组、低浓度NO组和高浓度NO组气管内滴注脂多糖（LPS）复制大鼠急性肺损伤模型,对照组气管内滴注生理盐水。接动物呼吸机,对照组与ALI模型组吸入正常空气,低浓度NO组和高浓度NO组吸入的空气中加入20×10-6mg/L和100×10-6mg/L的NO。观察各组大鼠6h后的肺部病理学变化,进行肺部炎症评分。采用免疫组化检测大鼠气道Toll样受体4（TLR4）的表达,ELISA法检测肺组织匀浆IL-6的水平。结果TLR4及IL-6在对照组大鼠气道内有广泛分布和表达。ALI模型组大鼠支气管、肺内炎症程度明显高于对照组,主支气管和肺内细支气管上皮细胞内TLR4表达明显增强,IL-6的含量较正常组明显增加。低浓度NO组气管和主支气管的炎症程度明显减轻,TLR4及IL-6的表达量较ALI模型组组明显减少。但高浓度NO组肺组织炎症程度、TLR4表达与ALI模型组无显著差异,IL-6水平反而显著增高。结论吸入适当浓度NO可降低ALI时肺组织TLR4及IL-6表达的增高,减轻肺组织炎症。     

犬烟雾吸入伤早期肺洗出液对大鼠肺损伤作用的研究

目的 研究犬烟雾吸入伤早期肺洗出液是否具有生物学活性及其活性强度的持续时间。方法 建立大急性重度烟雾吸入伤模型,伤后1h对伤肺进行生理盐水大容量灌洗,将一定量之洗出液经气管注入正常大鼠气道,观察自主呼吸24h间大鼠呼吸频率、血气及离体肺含水量和肺泡稳定性等变化。结果 与正常大鼠、等容量生理盐水或正常犬肺洗出液气道灌注大鼠相比,用烟雾吸入伤犬早期肺洗出液灌注大鼠气道24h内死亡率高;存活者RR波动大,PaO2显著下降;肺水含量高,静态总肺顺应性和肺扩张指数低提示肺泡稳定性差;肺组织氧化能力显著升高,总抗氧化能力显著下降。结论 犬烟雾吸入伤早期肺洗出液灌注大鼠气道可引起明确的损害反应,并表现出一定的小气道机械阻塞作用。洗出液具有肯定的生物学活性,引起的肺损害作用在灌注后24h已大部消除。     

辛伐他汀对大鼠烟雾吸入性肺损伤中炎症反应的抑制作用

目的 研究辛伐他汀对大鼠烟雾吸手性肺损伤中炎症反应的抑制作用.方法 将18只SD大鼠(雌雄不限)随机分为正常组、盐水组、辛伐他汀组,建立烟雾吸手性肺损伤模型,模型建立后30 min及12 h,辛伐他汀组给予辛伐他汀溶液50 mg/kg灌胃,盐水组大鼠给予等量生理盐水灌胃,正常组大鼠正常饲养.于致伤后24 h取右上肺肺组织行病理检查并行病理学评分.经腹主动脉取全血离心留取上层血清,并行左侧支气管肺泡灌洗留取肺泡灌洗液(BALF),采用ELISA法检测血清及BALF中白介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α的含量.取右下肺部分肺组织以Western blot法检测蛋白提取物中IL-6、TNF-α及胞质中NF-κB p65的蛋白表达情况.结果 光镜下观察正常组肺泡结构正常,盐水组肺泡间隔水肿,肺泡腔内可见大量的中性粒细胞浸润,而与盐水组相比,辛伐他汀组上述症状减轻且肺组织病理学评分降低(P＜0.05).盐水组、辛伐他汀组血清和BALF中IL-6、TNF-α的含量以及肺组织蛋白提取物中IL-6、TNF-α和NF-κB的表达均较正常组明显升高(P＜0.05).而与盐水组相比,辛伐他汀组大鼠血清和BALF中IL-6、TNF-α的含量以及肺组织蛋白提取物中IL-6、TNF-α及NF-κB p65的表达均降低(P＜0.05).结论 辛伐他汀通过抑制炎症介质的产生及炎症细胞的浸润,减轻吸手性肺损伤的炎症反应,对肺组织起到了一定的保护作用.