涎腺腺样囊性癌转移细胞株的Notch基因表达

目的 筛选与涎腺腺样囊性癌转移相关的候选基因,并对其进行初步验证. 方法 限制片段差异显示PCR技术(RFDD-PCR)构建涎腺腺样囊性癌高低转移细胞株(ACC-M、ACC-2)基因表达谱.生物信息学分析两个表达谱的Notch基因,半定量RT-PCR技术对两细胞株的Notch基因差异表达进行验证. 结果 用RFDD-PCR方法成功构建涎腺腺样囊性癌高低转移细胞株(ACC-M、ACC-2)的表达谱,共获得5 420个基因片段,其中包含3个Notch基因.半定量RT-PCR证实Notch2、Notch4在ACC-M的表达高于ACC-2,Notchl在两表达谱未见表达,半定量RT-PCR发现其在ACC-M的表达高于ACC-2.Notch3在两个细胞株表达的差别无统计学意义.结论 Notch1、Notch2、Notch4可能与涎腺腺样囊性癌的发生、发展、转移有关.     

Notch信号通路相关基因的表达与涎腺腺样囊性癌转移的关系

目的筛选与涎腺腺样囊性癌转移相关的Notch信号通路基因。方法对已构建的涎腺腺样囊性癌高低转移细胞株ACC-M、ACC-2基因表达谱进行生物信息学分析,在与Notch信号通路基因进行比对后,筛选出差异基因,通过荧光实时定量PCR技术对相关基因的表达差异进行初步验证。结果涎腺腺样囊性癌的表达谱中有46个基因与Notch信号通路有关。验证发现,Notch-1,Notch-2,Notch-4,CHUK,FOXC1,FZD2,FZD3,GBP2和RUNX1在2个细胞株中的表达差别有统计学意义（P〈0．05）,同时Notch-1在发生转移的涎腺腺样囊性癌中的表达明显高于未发生转移的涎腺腺样囊性癌（P〈0．05）。结论Notch信号通路中的多个基因可能参与了涎腺腺样囊性癌的发生和发展;Notch-1的表达与涎腺腺样囊性癌的发生、转移密切相关。     

腺病毒介导的P~(53)基因对涎腺腺样囊性癌细胞系生长的影响

目的研究P53基因对涎腺腺样囊性癌细胞系生长的影响。方法以人涎腺腺样囊性癌细胞系SACC-83、SACC-LM、ACC-2、ACC-M和NACC为实验对象,将载有人野生型P53cDNA的重组腺病毒(Ad5CMV-P53)感染涎腺腺样囊性癌细胞系,观察Ad5CMV-P53对涎腺腺样囊性癌细胞生长的影响。结果5种涎腺腺样囊性癌细胞系转染Ad5CMV-P53病毒后,均可以诱导其发生凋亡,使细胞系生长受到明显的抑制。结论Ad5CMV-P53介导的野生型P53基因,可能是一种有效的治疗涎腺腺样囊性癌的辅助手段。     

趋化因子受体CXCR4在涎腺腺样囊性癌肺高转移细胞株中的表达

目的:观察趋化因子受体CXCR4在涎腺腺样囊性癌(adenoid cystic carcinoma,ACC)肺高、低转移细胞株中的表达,探讨趋化因子受体CXCR4表达在ACC肺侵袭转移中的作用.方法:选取ACC肺高转移细胞株(ACC-M)和低转移细胞株(ACC-2)以及舌癌-8113细胞株(Tca-8113),分别应用单克隆抗体免疫荧光标记流式细胞术和Western印迹检测CXCR4在上述3种细胞中的表达.结果:3种细胞表面均有CXCR4受体的表达,其中ACC肺高转移细胞株ACC-M表达阳性率为(77.32±6.96)%,显著高于肺低转移细胞株ACC-2的(35.32±6.71)%和舌癌Tca-8113细胞株的(33.82±5.56)%,(P<0.05).Western印迹结果证实3种细胞株均有特征性的蛋白质表达条带,其中ACC-M的蛋白质表达条带最为显著.结论:趋化因子受体CXCR4在ACC肺高转移细胞株中高表达,提示CXCR4可能与ACC嗜肺转移的生物学特性有关.     

人涎腺腺样囊性癌细胞系中RUNX3基因5'-CpG岛甲基化及蛋白表达

目的 探讨人涎腺腺样囊性癌细胞株中RUNX3基因启动子5'-CpG岛甲基化及其表达情况.方法 以定量甲基化特异性PCR(qMSP)检测ACC-2、ACC-3和ACC-M细胞在甲基转移酶抑制剂5-氮脱氧胞苷(5-Aza-dc)处理前后RUNX3基因5'-CpG岛甲基化状况,并分别用反转录-聚合酶链反应、免疫荧光化学和Western印迹法分析RUNX3的表达变化.结果 RUNX3在ACC-2和ACC-3细胞中弱表达,在ACC-M中表达缺失.经5-Aza-dc处理后,RUNX3在ACC-2和ACC-3细胞中表达增加,在ACC-M中恢复表达.激光共聚焦发现RUNX3蛋白主要定位在细胞质中,经300 nmol/L5-Aza-dc处理72 h后,在ACC-2和ACC-3细胞核中出现表达,而在ACC-M细胞中仍定位在细胞质中.RUNX3基因启动子区域5'-CpG岛在ACC-2、ACC-M和ACC-3中均为部分甲基化,其甲基化程度分别为50%、75%和33%.5-Aza-dc处理后,RUNX3基因在三株细胞株中均呈现为非甲基化状态.结论 RUNX3甲基化是ACCs中RUNX3表达缺失的主要原因之一,而RUNX3蛋白在ACCs细胞质中的异位表达,也可能与RUNX3蛋白的功能被抑制有关.     

FZD2基因与涎腺腺样囊性癌增殖及侵袭转移能力的关系

目的 探讨FZD2基因表达与涎腺腺样囊性癌转移的相互关系及其对癌细胞增殖和侵袭能力的影响.方法 采用免疫组织化学方法分析FZD2基因在转移和非转移的涎腺腺样囊性癌组织样本中的表达,并采用siRNA干扰技术下调FZD2基因的表达,观察FZD2基因表达对涎腺腺样囊性癌细胞增殖能力、侵袭能力的影响.结果 FZD2基因在涎腺腺...     

蛋白激酶CK2-α′在腺样囊性癌细胞中的表达

目的 通过检测蛋白激酶CK2-α′在涎腺腺样囊性癌中的表达分布特征,探讨蛋白激酶CK2-α′与涎腺腺样囊性癌的关系及临床病理意义.方法 应用免疫荧光技术对蛋白激酶CK2-α′在同一来源不同转移能力涎腺腺样囊性癌细胞(SACC-83)及涎腺腺样囊性癌肺转移细胞(SACC-LM)的表达进行分析.结果 蛋白激酶CK2-α′在涎腺腺样囊性癌细胞及涎腺腺样囊性癌肺转移细胞中都存在高表达,并且细胞核中的表达都高于在细胞质中的表达.结论 蛋白激酶CK2-α′的表达与涎腺腺样囊性癌的肺转移呈正相关.     

LAPTM4B⁃35蛋白在涎腺腺样囊性癌中的表达及临床意义

目的：检测溶酶体相关4次跨膜蛋白B（lysosome?associated protein transmembrane?4 beta,LAPTM4B）?35蛋白在正常涎腺及涎腺腺样囊性癌中的表达水平,探讨其与肿瘤患者临床病理特征的相关性。方法：收集95例涎腺腺样囊性癌和20例正常涎腺组织,以及相关临床病理资料,应用免疫组织化学法检测LAPTM4B?35在正常涎腺组织、涎腺腺样囊性癌的表达水平,卡方检验或Fisher精确检验及多因素Logistic回归分析探讨LAPTM4B?35表达水平与涎腺腺样囊性癌临床病理特征的关系。结果：LAPTM4B?35蛋白在正常涎腺组织不同细胞中呈差异性表达：在腺泡细胞中表达为阴性,在导管和闰管细胞中表达很弱,在纹状管细胞中表达中等。在涎腺腺样囊性癌组织中,48.00%的高级别涎腺腺样囊性癌LAPTM4B?35表达增高,显著高于低级别涎腺腺样囊性癌。此外,LAPTM4B?35高表达与临床分期晚亦呈显著相关。结论：LAPTM4B?35蛋白在正常涎腺组织细胞中呈差异性表达,与涎腺腺样囊性癌的组织学分级和临床分期显著相关。     

nm23在涎腺腺样囊性癌中的表达及意义

目的研究肿瘤转移抑制基因nm23在涎腺腺样囊性癌（Salivary adenoid cystic carcinoa,SACC）中的表达,并探讨与SACC的临床特点及转移的关系。方法采用免疫组化通用型二步法检测30例SACC中nm23的表达,分析nm23基因表达变化与涎腺腺样囊性癌的病理特点及其转移的关系。结果12例nm23基因阴性表达病例中11例发生转移,肿瘤转移率91.7%,而18例nm23基因阳性表达病例中5例发生转移,阳性表达者肿瘤转移率仅为38.4%,两者比较有显著性差异（P〈0.05）。经检验等出nm23基因阴性表达者与腺样囊性癌转移有显著相关性,即nm23基因阴性表达者易发生转移,而阳性表达时不易发生转移。并发现nm23基因与患者的年龄、性别、病理类型及肿瘤大小等无关。结论nm23在口腔腺样囊性癌转移中起重要的作用。     

舌鳞癌和涎腺腺样囊性癌细胞株中MAGE-1和MAGE-3基因的表达

目的：观察肿瘤特异性抗原基因MAGE－1、MAGE－3在人舌鲜癌细胞株Tca-8113、人涎腺腺样囊性癌细胞株ACC－2和ACC－M中的表达状况，以评价这些基因作为舌鳞癌和涎腺腺样囊性癌的免疫学检测和免疫治疗、基因治疗分子标志物的可行性。方法：采取Tca-8113、ACC－2和ACC-M细胞株培养后，用Trizol试剂提取总RNA，逆转寻合成cDNA，而后应用聚合酶链反应扩增目的片段，经琼脂糖凝胶电泳确认目的片段。以GAPDH基因作为检测内对照，并与正常组织比较。结果：在人舌鳞癌细胞株Tca-8113、人涎腺腺样囊性癌细胞株ACC－2和ACC－M中，MAGE－1、MAGE－3基因均有表达。在正常组织中未见上述基因的表达。结论：MAGE－1、MAGE－3基因有可能作为舌癌和涎腺腺样囊性癌免疫学检测的分子标志物，并且具有作为免疫治疗、基因治疗特异性靶位的潜在价值。     

钙黏素家族相关基因与涎腺腺样囊性癌转移的关系

目的筛选与涎腺腺样囊性癌转移相关的钙黏素（CDH）家族基因。方法对涎腺腺样囊性癌转移能力不同的两个细胞株的基因表达谱进行生物信息学分析,筛选出可能与转移相关的CDH家族基因,通过荧光实时定量PCR技术对相关基因的表达差异进行验证,并用免疫组织化学技术研究有差异的CDH基因在临床样本中的表达及其与转移的关系。结果生物信息学分析发现,表达谱中有14个CDH家族基因在两个细胞株中的表达有差异,实时定量PCR验证发现CDH4、CDH5、CDH12在两细胞株之间的表达差别有统计学意义（P〈0.05）,免疫组织化学发现CDH12在有转移的临床标本中的表达高于没有转移的标本（（P〈0.05）。结论 CDH12可能与涎腺腺样囊性癌的高转移能力有关。     

熊果酸人腺样囊性癌对ACC-83侵袭与转移的影响

目的探讨熊果酸对人腺样囊性癌ACC-83细胞体外侵袭及转移的影响。方法应用不同浓度熊果酸处理人腺样囊性癌ACC-83细胞,通过Transwell小室模型测定其侵袭力及粘附力,细胞迁移实验测定细胞的运动能力,光学显微镜下观察细胞形态学变化。结果熊果酸能有效抑制人腺样囊性癌ACC-83细胞侵袭力、粘附力及运动能力（P〈0.05）,呈剂量效应关系（P〈0.05）。同时发现熊果酸处理组悬浮细胞增多,细胞体积变小,形态较圆,伪足数目较少。结论熊果酸具有抑制人腺样囊性癌ACC-83细胞侵袭与转移的作用。     

Effect of Exogenous bFGF on the Proliferation of Human Adenoid Cystic Carcinoma ACC-2 Cells

To observe the effects of basic fibroblast growth factor （bFGF） on human adenoid cystic carcinoma ACC-2 cell line proliferation and ERK, cyclin D1/p21^waf/cip1 signaling pathways, human adenoid cystic carcinoma cells （ACC-2） were cultured and the influence of bFGF of different concentrations on cell proliferation was determined by MTT. Protein was detected by immuno-precipitation and ERK activity by using ERK agent kit. p-ERK1/2 and down-stream cyclin D1, p21^waf/cip1 expression were detected by Western blotting and the interfering role of mitogen protein-activated kinase （MEK） suppressor U0126 in the afore-mentioned indicators was examined. MTT demonstrated ACC-2 cell proliferation was substantially enhanced by bFGF, immuo-precipitation displayed ERK activity was up-regulated by bFGF, and immuno-imprinting also showed p-ERK1/2, cyclin D1 expression was greatly enhanced and p21^waf/cip1 expression was inhibited by bFGE U0126 suppressed the effect of bFGF. It is concluded that bFGF can promote the proliferation of human adenoid cystic carcinoma ACC-2 cells, and its pathways are associated with the up-regulated activity and expression of p-ERK1/2, inhibited p21waf/cip1 expression and enhanced cyclin D1 expression.     

siRNA干扰survivin表达对腺样囊性癌细胞株ACC-M的抑制作用

目的探讨靶向survivin基因RNAi对腺样囊性癌增殖的抑制效应。方法设计、合成siRNA(small interfering RNA),构建表达载体pGenesil-shRNA-survivin,将重组质粒导入人腺样囊性癌ACC-M细胞株。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western-blot法分别检测转染后的ACC-M细胞中survivin mRNA和蛋白表达的变化,用噻唑蓝(MTT)法来检测细胞的增殖。结果测序证实表达载体构建成功,在pGenesil-shRNA-survivin的ACC-M细胞株中,survivin mRNA及蛋白表达明显降低,ACC-M细胞增殖受到抑制。结论pGenesil-shRNA-survivin重组质粒能有效抑制腺样囊性癌细胞增殖。