链球菌组蛋白样蛋白对人脐带静脉血管内皮细胞的损伤作用

组蛋白样蛋白(Histone-like protein，HlpA)存在于多种链球菌中，在生理状态下与细菌染色质相结合。中性粒细胞可使HlpA从菌体中释放出来，成为链球菌感染引起的心内膜炎、风湿性心肌炎和肾小球肾炎等疾病的一个毒力因素，在病变局部引起炎症和免疫病理反应。链球菌与血管内皮细胞相互作用被认为是触发多种血管内感染的重要原     

TNF-α对人脐静脉内皮细胞活性及PD-L1蛋白表达的影响

目的研究外源性肿瘤坏死因子α（TNF-α）对原代人脐静脉内皮细胞（HUVECs）活性及程序性死亡因子配体PD-L1蛋白表达的影响,探讨动脉粥样硬化的免疫机制。方法体外培养HUVECs,加入不同浓度TNF-α持续刺激48h,CCK-8法检测450nm波长处吸光度值（OD值）,计算细胞生长存活率。选同代细胞重复培养并干预,Westernblot方法检测细胞PD-L1蛋白表达。使用SB203580阻断p38MAPK通路后再用TNF-α干预HUVECs,比较各组细胞PD-L1蛋白表达。结果实验组HUVECs在450nm波长处的吸光度值较空白对照组明显降低（P〈0.05）,细胞存活率依次下降。实验组细胞PD-L1蛋白表达随TNF-α浓度增高逐渐降低（P〈0.05）。TNF-α单独刺激组PD-L1蛋白表达较TNF-α与SB203580共刺激组明显降低（P〈0.05）,SB203580阻断效应明显。结论 TNF-α可明显抑制HUVECs细胞活性,并降低PD-L1蛋白表达,p38MAPK通路可能参与了这一过程。     

肿瘤坏死因子对培养的人脐静脉内皮细胞骨架的影响

目的：用肿瘤坏死因子（TNF－α）处理培养的人脐静脉内皮细胞研究不同作用浓度和不同作用时间的TNF－α的刺激对内皮细胞的形态和骨架的影响。结果：2000U的TNF－α处理内皮细胞8小时,细胞形态发生改变,细胞间的紧密接触变的松攻,间隙增宽,骨架失去原有的网状形态,呈块状收缩,24小时后骨架结构开始恢复。细胞形态似成纤维细胞,1000U的TNF－α对内皮细胞影响比较明显,8小时后细胞变圆,细胞间的接触消失,骨架浓缩,网状结构消失,24小时后出现特征性“鸟喙”样改变,72小时后不完全恢复,不同浓度的TNF－α刺激内皮不同时间,均可使内皮细胞内游离钙比对照组明显增加。结论：TNF－α可改变内皮细胞的形态结构。影响其屏障机能,并可能与胞内游离钙浓度相关。     

生物材料对血管内皮细胞IL-8和TNF-α表达的影响

目的是研究不同生物材料对血管内皮细胞中细胞因子表达水平的影响，探讨与血栓形成有关的细胞因子mRNA表达变化与生物材料血液相容性之间的关联性。实验选择8％有机锡的聚氯乙烯为阳性对照，细胞培养用的聚苯乙烯为阴性对照，聚四氟乙烯、膨体聚四氟乙烯以及两种医用聚氨酯（PU-50和PU-60）作为实验材料，采用人脐静脉内皮细胞株ECV-304，通过细胞与不同材料的接触，运用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法，测定内皮细胞中与凝血功能密切相关的两种重要的细胞因子：白介素-8（IL-8）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的mRNA表达水平。结果显示：与阴性材料相接触的内皮细胞其IL-8和TNF-α的表达均呈阴性，与阳性材料接触的细胞因子表达均呈强阳性，两种聚氨酯材料尽管在细胞生长、附着和形态变化等方面经肉眼观察未见明显差异，但是两者在细胞因子的表达上却出现显著的不同，其中PU-60组表达水平明显高于PU-50组；聚四氟乙烯和膨体聚四氟乙烯材料表现出程度不等的表达增强，前者比后者更明显。将IL-8和TNF-α在上述6种材料中的表达情况进行秩相关分析，得到相关系数为r=0.88571（P〈0.05）。由此提示：血管内皮细胞对不同生物材料刺激所产生的反应在细胞水平和分子水平上可出现不完全一致的现象，后者显然较前者更为灵敏，通过检测血管内皮细胞中IL-8和TNF-α的mRNA表达改变，在一定程度上可推测生物材料血液相容性的优劣。     

IL-18BP重组蛋白对TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞的作用研究

目的探讨人重组白细胞介素-18结合蛋白(rhIL-18BP)对肿瘤坏死因子(TNF-α)诱导的内皮细胞炎症、凋亡的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),用20 ng/ml的TNF-α和不同质量浓度的rhIL-18BP孵育相应时间,提取mRNA并用PCR及实时定量PCR检测细胞因子(IL-6、IL-8)、黏附分子(ICAM-1、VCAM-1)的mRNA表达;ELISA法检测细胞上清液中细胞因子(IL-6、IL-8)、可溶性黏附分子(sICAM-1、sVCAM-1)的蛋白含量;流式细胞术检测细胞凋亡的变化。结果 1)IL-18BP可以抑制TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞中炎症因子的表达;2)IL-18BP能抑制TNF-α诱导的HUVECs的凋亡。结论 rhIL-18BP对TNF-α诱导的内皮炎症反应有抑制作用,并可以抑制TNF-α诱导的内皮细胞凋亡。     

TNF-α对人脐静脉内皮细胞氧化代谢产物和细胞因子MCP-1表达的影响

目的： 探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对体外培养的人血管内皮细胞(HUVECs)氧化代谢产物和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达的影响。方法：TNF-α刺激体外连续培养的人脐静脉内皮细胞，通过流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS)和细胞自发荧光产物的变化；用半定量RT-PCR法检测MCP-1 mRNA水平。结果：第2代细胞在TNF-α作用下，HUVECs产生活性氧的荧光强度值由324.11±96.46增加到676.32±133.73 (P＜0.05)；细胞代谢产生的自发荧光产物则由1.35±0.62增加到3.69±0.95 (P＜0.05)；细胞因子MCP-1的表达由0.81±0.05增加到0.95±0.11 (P＜0.05)。上述变化在复制性老化的细胞中表现得更为明显。结论：TNF-α刺激下，HUVECs活性氧成分和细胞代谢产物明显增加。MCP-1表达增强是导致HUVECs损伤和功能异常的重要环节。     

TNFα对培养的脐静脉内皮细胞的损伤作用

目的 :探讨肿瘤坏死因子α(TNFα)对脐静脉内皮细胞的损伤作用。方法 :将培养的内皮细胞分为对照组和实验组 ,实验组培养液中含有TNFα(4× 10 5U/L) ;通过普通光镜、扫描电镜、透射电镜观察TNFα对内皮细胞形态和超微结构的影响 ,并运用免疫组化染色来观察TNFα对内皮细胞表达细胞间粘附分子 (ICAM 1)的影响。结果 :(1)光镜、电镜观察结果显示 :实验组内皮细胞拉长 ,由原来的多边形变为成纤维状 ,细胞间距不均且变大 ;微绒毛变短甚至呈泡状 ,个别拉长 ,有些部位细胞膜有缺损以及内质网扩张、线粒体凝聚等改变。并且这些改变有时间依赖性。 (2 )实验组内皮细胞ICAM 1表达明显增强。结论 :TNFα(4× 10 5U/L)对内皮细胞有明显的损伤作用     

TNF-α对内皮细胞白介素-8基因表达的影响

IL-8作为一种趋化细胞因子在炎症反应中具有重要作用,其在内皮细胞内的表达受多种细胞因子的调节。本文用TNF-α孵育培养的人脐静脉内皮细胞不同时间后,用RT-PCR法检测内皮细胞内IL-8mRNA的表达,并用免疫细胞化学染色法检测内皮细胞内NF-κB的激活。结果发现(1)未用TNF-α孵育的内皮细胞IL-8表达量很少,TNF-α孵育1小时后IL-8表达明显增加,3h进一步增加;6hIL-8表达降低,9h进一步降低至基础水平;(2)未用TND-α孵育的内皮细胞核NF-κBp65免疫细胞化学染色呈阴性,NF-α孵育1,3h后NF-κBp65免疫细胞化学染色呈阳性,6h时后呈弱阳性,9h后呈阴性。提示TNF-α可诱导内皮细胞表达IL-8并可激活内皮细胞内NF-κB,二者的时相过程基本一致。作者认为TNF-α诱导IL-8在内皮细胞内表达可能与转录因子NF-κB的激活有关。     

肿瘤坏死因子α和血管紧张素Ⅱ对人血管内皮细胞组织因子表达的影响

已知组织因子异常表达可启动血液凝固机制。用细胞发色底物法、ＲＴ－ＰＣＲ等方法分别从蛋白活性、基因表 达水平研究与动脉粥样硬化及高血压发病相关的肿瘤坏死因子、血管紧张素Ⅱ对血管内皮细胞组织因子表达的影响。 结果表明：肿瘤坏死因子α和血管紧张素Ⅱ均诱导血管内皮细胞组织因子的表达,并使其ｍＲＮＡ表达增加。此项研 究为进一步探讨动脉粥样硬化和高血压的共同发病机制打下基础。     

青藤碱抑制TNF-α诱导人脐静脉内皮细胞VCAM-1表达

目的： 研究青藤碱（SN）对肿瘤坏死因子-α（TNF-α）诱导脐静脉内皮细胞（HUVECs ）VCAM-1表达的影响。方法： 从新鲜脐带中分离培养HUVECs。用TNF-α诱导HUVECs表达VCAM-1，实验组加入不同浓度的SN(0.25、0.5和1.0 mol/L)或地塞米松（1.0×10^-6 mol/L）进行干预，培养12 h后收获细胞，用实时定量PCR检测VCAM-1 mRNA的表达，用流式细胞仪检测细胞表面VCAM-1表达。结果： TNF-α可诱导VCAM-1 mRNA和VCAM-1的表达。进行药物干预后，各干预组相对VCAM-1 mRNA表达有不同程度下降(P<0.05)。SN（1.0 mol/L）和SN（0.5 mol/L）干预组细胞表面VCAM-1表达下降(P<0.05)。SN（0.25 mol/L）和地塞米松（1.0×10^-6 mol/L）干预组未显示对TNF-α 诱导的VCAM-1表达有抑制作用。结论： SN可抑制TNF-α诱导的脐静脉内皮细胞VCAM-1的表达。     

登革病毒Ⅱ型对人脐静脉血管内皮细胞通透性的研究

目的 研究登革病毒Ⅱ型(DENV-2)对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)通透性的影响.方法 DENV-2病毒滴定,DENV-2接种HUVEC单层细胞,用间接免疫荧光法动态观察DENV-2感染HUVEC的情况(30 min,l、3、6、12、24、30、36、42、48、72 h),实时定量荧光PCR方法检测病毒载量,transwell法检测DENV-2对HUVEC通透性的影响,透射电镜观察细胞超微结构的改变.结果 DENV-2对HUVEC通透性的影响30 min时作用最为明显,其次为42 h时.且病毒载量与HUVEC通透性改变呈正相关.透射电镜结果显示有细胞微绒毛脱落,胞质溶解,部分核膜间隙增宽,甚至是细胞核中也存在裂隙,部分线粒体嵴消失甚至空化,线粒体髓样变,包膜不完整.结论 DENV-2对HUVEC通透性有影响,为探究登革病毒的发病机制提供一定的理论依据.

Abstract：

Objective To research Dengue virus type 2 (DENV-2) to human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) permeability. Methods The titration of DENV-2 was detected and HUVEC infection DENV-2 layer of cells. At different time points after infection (30 min, 1 h, 3 h, 6 h, 12 h, 30 h,36 h, 24 h, 42 h, 48 h,72 h), the permeability in HUVEC were detected after Dengue virus infection. The virus load in HUVEC was detected by quantitative real-time PCR. And ultrastructure in HUVEC was observed by electron microscope. Results The permeability in HUVEC was changed after Dengue virus infection by time lasting. The most permeability in HUVEC was changed after Dengue virus infection at 30 min and 42 h. And at the same time the virus load were most value in all of time. The results of the cell membrane were changed by electron microscope. The deciduous cell microvillus and dissd endochylema were founded. And some of nuclear membrane blank was wided by Dengue virus. Even the leakage was founded in cell nucleus. The other change included that disappearance mitochondrial and vacuolization crista, elder pith change mitochondria. In addition, the complete of cell membrane were dissolved. Conclusion The permeability of HUVEC was changed by DENV-2. To explore the pathogenesis of Dengue virus provide certain theoretical basis.     

TNFα对培养的脐静脉内皮细胞增殖的影响

目的 :探讨肿瘤坏死因子α(TNFα,4× 10 5U/L)对血管内皮细胞增殖的影响。方法 :将传代培养的脐静脉内皮细胞随机分为实验组和对照组两组 ,分别在细胞传代时加入含TNFα(TNFα含量为 4× 10 5U/L)和等量的不含TNFα的培养液 ,通过描绘生长曲线及运用图像分析测定DNA相对含量来观察两组细胞增殖情况。结果 :处理因素作用 3天内实验组细胞增殖快于对照组 ,而 3天后则慢于对照组。结论 :TNFα(4× 10 5U/L)对培养的脐静脉内皮细胞的增殖的影响具有双向性。     

重组载体pEGFP-N1/TNFR 1在人脐静脉血管内皮细胞中的表达

目的： 构建肿瘤坏死因子受体1（TNFR 1）绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-N1/TNFR 1,并在人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)中表达。方法: 分离并培养HUVECs,将已成功构建的融合表达载体pEGFP-N1/TNFR 1,通过阳离子脂质体Lipofectin介导的方法转染到HUVECs中,RT-PCR检测TNFR 1 mRNA的表达,Western blotting检测融合蛋白的瞬时表达,同时在活细胞状态下用荧光显微镜直接观察。结果: 成功分离HUVECs,重组pEGFP-N1/TNFR 1融合表达载体转染HUVECs后,在细胞中检测到TNFR 1基因片段,Western blotting可以检测到TNFR 1在HUVECs表达,用荧光显微镜观察到转染细胞中有绿色荧光蛋白表达。结论: 重组pEGFP-N1/TNFR 1融合表达载体在HUVECs中获得了表达,融合蛋白具有TNFR 1和绿色荧光蛋白(GFP)的双重活性,为进一步研究TNFR 1转位的调控因素打下基础。     

脂多糖对人脐静脉血管内皮细胞的直接损伤作用

血管内皮细胞 (ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ,ＥＣ)炎症反应是感染性休克向不良方向演变的重要原因 ,有关激活剂 (ＬＰＳ、ＩＬ 1)导致ＥＣ活化的研究是败血症病理反应的中心课题。内毒素引起微循环ＥＣ损伤是内毒素性组织损伤的重要环节之一。本实验探讨了ＬＰＳ对体外培养脐静脉ＥＣ的直接损伤作用。1　材料与方法1 1　材料 :ＲＭＰＩ 16 40培养基、ＬＰＳ(Ｓｉｇｍａ产品 )1 2　细胞培养及鉴定 :内皮细胞传 4代。ＰＭＮ的分离采用Ｐｅｒｃｏｌｌ’ｓ分离液 5 0 0ｇ离心 2 0ｍｉｎ取白细胞层用培养基稀释成2× 10 6 ｍＬ备用。1 3　…     

葡萄糖胺对TNF-α诱导的血管内皮细胞VCAM-1表达的影响

目的探讨葡萄糖胺对肿瘤坏死因子-α(tumornecrosis factor-α,TNF-α)诱导的人脐带血管内皮细胞(HUVEC)血管细胞黏附分子(vascular cell adhesion molecule,VCAM-1)表达的影响。方法实时逆转录聚合酶链式反应(Real time RT-PCR)和免疫印迹法(Western blot)分别测定葡萄糖胺对VCAM-1的表达情况;Western blot法测定HUVEC核因子-κB(nuclear factor,NF-κB)磷酸化程度。结果葡萄糖胺抑制TNF-α诱导的VCAM-1在HUVEC的表达;NF-κB抑制剂BMS-345541抑制TNF-α诱导的VCAM-1的表达;葡萄糖胺抑制TNF-α诱导的NF-κB的磷酸化。结论葡萄糖胺抑制TNF-α诱导的VCAM-1的表达与抑制NF-κB的活化相关。     

肿瘤坏死因子-α预处理人脐带间充质干细胞的条件培养基对人脐静脉内皮细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨100 ng/mL肿瘤坏死因子-α(TNF-α)预处理人脐带间充质干细胞(hUCMSC)的条件培养基对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖、凋亡的影响。 方法本实验按随机数字表法将HUVEC分为对照组、条件培养基组和预处理条件培养基组。首先使用含有100 ng/mL TNF-α的内皮细胞培养基刺激HUVEC 12 h后,对照组更换为原培养基,条件培养基组则更换为hUCMSC的条件培养基,以及预处理条件培养基组更换为TNF-α 预处理hUCMSC的条件培养基。采用MTT法测定HUVEC的增殖活性,流式细胞仪检测细胞的增殖周期,AO-EB染色和流式细胞仪定性、定量检测细胞的凋亡情况。数据比较采用重复测量方差分析。 结果MTT的检测结果提示,在培养24、48、72 h时,对照组细胞的吸光度值是0.51、0.43、0.32,而条件培养基组和预处理条件培养基组吸光度值是0.56、0.51、0.45和0.59、0.56、0.52。流式细胞仪检测细胞增殖周期(G2/M＋S期)的结果示：在培养24、48和72 h时,对照组细胞处于G2/M＋S期的比例是(22.34±1.03)%、(10.66±1.07)%、(9.58±0.82)%,而条件培养基组和预处理条件培养基组处于G2/M＋S期的比例则分别是(27.95±1.85)%、(18.59±1.48)%、(13.02±1.91)%和(31.17±1.29)%、(22.44±2.28)%、(16.28±1.11)%, 3组比较差异有统计学意义(F＝58.793,P<0.05)。此外,流式细胞仪定性检测结果表明：在培养24、48和72 h时,对照组细胞的凋亡率是(18.95±1.01)%、(16.66±1.51)%、(11.37±1.01)%,而条件培养基组和预处理条件培养基组细胞的凋亡率分别是(12.04±1.13)%、(10.88±1.39)%、(6.88±1.63)%和(8.16±1.44)%、(6.97±1.34)%、(2.97±1.44)%,3组比较差异有统计学意义(F＝119.372,P<0.05)。AO-EB定性检测细胞凋亡的结果与流式定量检测的结果趋势类似。 结论TNF-α预处理hUCMSC的条件培养基可发挥显著促进HUVEC的增殖和抑制HUVEC凋亡的作用。     

活化蛋白C对脂多糖诱导的人脐静脉血管内皮细胞凋亡的影响研究

目的：观察不同剂量活化蛋白C(APC)对脂多糖(LPS)诱导的人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）凋亡的作用。方法:将培养成功的HUVECs通过LPS（1 mg/L）孵育诱导细胞凋亡模型，并给予APC（10 μg/L）或APC（50 μg/L）建立药物治疗组，同时设立正常对照细胞组和单独LPS（1 mg/L）诱导细胞凋亡组。应用电镜观察细胞超微结构；DNA ladder与TUNEL荧光染色法检测细胞凋亡情况；Annexin-Ⅴ/PI双标记行流式细胞仪测定定量观察细胞凋亡率。同时采用MTT法测定细胞存活率和Western blotting测定增殖细胞核抗原（PCNA），以观察细胞的增殖变化。结果:通过细胞形态，DNA ladder和TUNEL荧光染色发现单独LPS诱导组的细胞可见明显的凋亡现象，而通过APC治疗组的细胞凋亡改变明显减轻和细胞凋亡率下降，同时细胞存活率和PCNA表达率增高，尤其在50 μg/L时，与单独LPS诱导组细胞比较差异显著（P<0.05）。结论:APC拮抗LPS诱导的血管内皮细胞凋亡并促进细胞的增殖，发挥保护细胞的作用。     

TNF-α、IL-1β 、LPS对人多核白细胞、脐静脉内皮细胞血小板内皮细胞粘附分子-1表达的影响

目的：初探炎性刺激对人多核白细胞（ＰＭＮ）和脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ）的血小板内皮细胞粘附分子－１（ＰＥＣＡＭ－１）表达的影响和ＰＥＣＡＭ－１的可能作用。方法：使用流式细胞仪和免疫组化法,观察脂多糖（ＬＰＳ）、白介素（ＩＬ）－１β和肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）－ａ对ＰＭＮ和ＨＵＶＥＣ ＰＥＣＡＭ－１表达的变化。结果：ＬＰＳ、１Ｌ－１β和ＴＮＦ－ａ可引起ＰＭＮ表达ＰＥＣＡＭ－１蛋白减少,而对ＨＵＶＥＣ　ＰＥＣＡＭ－１的表达无显著影响,但组化显著在ＨＵ－ＶＥＣ连接部的ＰＥＣＡＭ－１染色变淡。结论：上述炎性刺激物不仅可引起ＰＭＮ表达ＰＥＣＡＭ－１减少、激活ＰＭＮ,而且可改变内皮细胞ＰＥＣＡＭ－１的分布,因此ＰＥＣＡＭ－１在炎症中可能起重要作用。     

黄芪注射液对人脐静脉血管内皮细胞的增殖作用研究

目的：观察黄芪注射液对人血管内皮细胞的作用。方法：黄芪注射液与人脐静脉血管内皮细胞(human umbilicalvein endothelial cell line EVC-304)共同培养后，采用MTT法及形态学方法观察黄芪注射液对人脐静脉血管内皮细胞的作用。结果：黄芪注射液对人脐静脉血管内皮细胞有显著增殖效应，具剂量依赖性，且成正相关。