Fas抗体介导的嗜酸细胞凋亡及其清除机制

目的探讨Fas单抗对嗜酸细胞(EOS)凋亡的诱导作用及凋亡EOS的清除机制。方法分离正常人外周血EOS,加入白细胞介素(IL)5与不同浓度(1～1000ng/ml)Fas单抗培养,台盼蓝拒染法和末端标记法分别检测细胞存活和凋亡变化,观察凋亡EOS能否被巨噬细胞(MΦ)吞噬。结果Fas单抗对IL-5介导的EOS存活呈浓度和时间依赖性抑制作用。高浓度的IL-5(106U/L)不能抑制Fas单抗的作用。Fas单抗(100ng/ml)处理24h后EOS即有明显的凋亡［（35±6）%］,72h后增至(96±3)%,前后比较差异有显著性（P<0.01）。Fas单抗(100ng/ml)处理24、48和72h的EOS与MΦ培养,吞噬凋亡EOS的阳性MΦ百分率分别为(20±5)%、(38±6)%和(45±6)%,MΦ吞噬新分离的EOS阳性百分率为（1±2）%,与前者比较差异均有显著性（P<0.01）。结论Fas抗体能有效诱导EOS凋亡,凋亡EOS能被MΦ所吞噬清除。     

辛伐他汀诱导嗜酸粒细胞凋亡的体外研究

目的研究降脂药辛伐他汀对支气管哮喘(简称哮喘)外周血嗜酸粒细胞(EOS)凋亡的影响及其机制。方法分离10例患者外周血EOS,加入不同浓度辛伐他汀(1、5、10、20μmol/L)和甲羟戊酸(MVA,100μmol/L)进行体外培养,并以0μmol/L辛伐他汀作为空白对照组,用流式细胞术检测EOS凋亡,用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测EOS活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase3)水平。结果(1)EOS与辛伐他汀(5μmol/L)共同孵育6、12、24、48h凋亡率分别为(32±4)%、(47±7)%、(62±9)%、(86±14)%,对照组分别为(23±3)%、(24±3)%、(41±6)%、(70±12)%,两组在同一时点比较差异有统计学意义(P=0.000)。(2)EOS体外培养12h,1μmol/L辛伐他汀即可促进EOS凋亡,此作用在5μmol/L时达最大效应。1、5、10、20μmol/L辛伐他汀共培养EOS凋亡率分别为(37±3)%、(51±3)%、(53±4)%、(52±4)%,与空白对照组[(24±3)%]比较差异也有统计学意义(P=0.000)。(3)活化caspase3水平变化与EOS凋亡率一致。EOS体外培养12h时1、5、10、20μmol/L辛伐他汀共培养分别为(14±4)μg/L、(22±4)μg/L、(24±4)μg/L、(23±5)μg/L,与空白对照组[(8±3)μg/L]比较,差异有统计学意义(P=0.000～0.003)。(4)辛伐他汀可促进EOS凋亡及增加EOS活化caspase3水平的作用可被     

促红细胞生成素对尿毒症患者中性粒细胞功能的影响

目的　观察促红细胞生成素 ( EPO)对尿毒症患者中性粒细胞功能的影响。方法　分三组进行中性粒细胞墨汁吞噬试验、粘附试验和硝基兰四唑试验 ( NBT)。结果　三组吞噬率分别为 38 7%± 6 4%、 16 0 %± 5 1%和 2 1 9%± 6 3% ( P<0 0 5 ) ;粘附率分别为 67 6%±10 7%、 37 4%± 15 1%和 5 3 3%± 15 9% ( P<0 0 5 ) ;NBT阳性率分别为 4 3%± 2 7%、 3 6%± 2 9%和 5 8%± 4 5 % ( P>0 0 5 )。结论　尿毒症患者中性粒细胞功能受损 ,接受 EPO治疗后 ,其功能得到改善。     

抗中性粒细胞胞浆抗体相关抗原诱导人胎肾内皮细胞凋亡的研究

目的　探讨抗中性粒细胞胞浆抗体 (ANCA)相关抗原蛋白酶 3(PR 3)对体外培养人胎儿肾小球内皮细胞凋亡的影响及诱导机制。方法　采用ANCA阳性系统性红斑狼疮 (SLE)患儿外周血中性粒细胞分离纯化其细胞质中PR 3 ,并用该蛋白酶诱导培养人胎肾内皮细胞发生凋亡。观察不同剂量PR 3于不同时间点对内皮细胞存活情况及其形态学变化的影响。用碘化丙啶染色DNA以评价凋亡的发生率 ,观察核染色质固缩及DNA片段的形成。用琼脂糖凝胶电泳确定凋亡小体的形成和凋亡梯形。结果　ANCA阳性SLE患儿中性粒细胞胞浆蛋白酶PR 3以剂量、时间依赖性形式诱导人胎肾内皮细胞发生凋亡 [PR 3 10 μg·ml-1·2 4h-1细胞凋亡率为 (75 5± 2 6 5 ) % ],与阴性对照组 [(1 8± 1 2 ) % ]比较差异有显著性 (P <0 0 1)。凋亡的内皮细胞与培养基分离、悬浮、呈碘化丙啶强染的大小不等的碎片 ,核染色体固缩。DNA电泳提示凋亡核小体形成 ,出现凋亡梯形。结论　中性粒细胞胞浆蛋白酶PR 3可诱导胎肾内皮细胞凋亡 ,在ANCA相关性血管炎性疾病的发生发展中可能具有重要的病理生理意义     

全反式维甲酸对大鼠胃粘膜上皮异型增生细胞凋亡及调控基因（Bcl …

目的　研究全反式维甲酸对胃粘膜上皮异型增生大鼠胃粘膜上皮细胞凋亡及调控基因(Bcl 2、Fas、ICE)蛋白表达的影响 ,探讨维甲酸治疗胃粘膜癌前病变的作用机制。方法　用N 甲基 N 硝基 N 亚硝基胍 (MNNG)建立大鼠胃粘膜异型增生模型 ,设立空白组、造模组和维甲酸治疗组 ,对大鼠胃粘膜用TUNEL法检测细胞凋亡 ,用免疫组织化学法检测Bcl 2、Fas、ICE蛋白表达水平。结果　空白组、维甲酸治疗组和造模组癌前病变发生率分别为 0、2 6.67%和 73 .3 3 % ,细胞凋亡指数分别为 8.3± 3 .1、7.8± 2 .6和 2 .2± 0 .4 ,Bcl 2蛋白表达率分别为 13 .3 %、3 3 .3 %和 66.7% ,过量表达率分别为6.7%、6.7%和 3 3 .3 % ,治疗组与造模组比较 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ,与空白组比较 ,差异无显著性(P >0 .0 5 ) ;Fas蛋白表达率分别为 4 6.7%、4 0 %和 6.7%、过量表达率分别为 13 .3 %、2 6.7%和 13 .3 % ;ICE蛋白表达率分别为 2 0 %、60 %和 13 .3 % ,过量表达率分别为 0、13 .3 %和 6.7%。治疗组与造模组比较 ,表达率均差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ,过量表达率比较差异均无显著性 (P >0 .0 5 ) ,与空白组比较 ,差异均无显著性 (P >0 .0 5 )。结论　维甲酸治疗可抑制大鼠胃粘膜Bcl 2基因蛋白的表达 ,促进Fas基因蛋白的表达     

白细胞介素5和嗜酸粒细胞趋化因子在支气管哮喘大鼠肺和骨髓信号传导中的作用

目的探讨支气管哮喘(简称哮喘)大鼠模型中白细胞介素5(IL-5)和嗜酸粒细胞趋化因子(eotaxin)是否参与肺和骨髓间信号传导,观察不同干预措施的影响。方法清洁级雄性Wistar大鼠40只,按随机数字表法分为正常对照组和哮喘组,每组20只。用卵白蛋白(OVA)致敏和激发制作哮喘模型,于激发后30 min及6、12、24、48 h处死大鼠,分别取外周血涂片、骨髓细胞涂片。肺组织以10％甲醛固定做石蜡切片。将血涂片、骨髓涂片、肺组织切片行苏木精-伊红(HE)染色,观察细胞总数和嗜酸粒细胞(EOS)比例。取不同时间点肺组织匀浆,用酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定肺组织匀浆IL-5和eotaxin浓度。将不同时间点的肺组织匀浆与正常对照组和哮喘组大鼠骨髓细胞共同孵育,并分别加入地塞米松(DXM)、半乳凝素3(Galectin-3)、孟鲁司特钠、抗IL-5抗体进行干预,采用抗IL-5、抗IL-SRα、抗eotaxin、抗CD34和抗CC趋化因子受体3(CCR3)多克隆抗体进行免疫组化染色,检测两组骨髓细胞中EOS计数和IL-5+细胞、IL-5Rα+细胞、CCR3+细胞、eotaxin+细胞、CD34+细胞的百分比。结果哮喘大鼠外周血、骨髓、肺组织中EOS数分别为0．020 0±0．002 0、0．023±0．003、0．025 0±0．009 0,正常对照组分别为0．010 0±0．003 0、0．009±0．003、0．009 0±0．002 0,两组比较差异有统计学意义(t值分别为2．547、2．718、2．718,P均<0．05);哮喘大鼠肺组织匀浆于激发6 h的IL-5为(89．3±2．4)pg/ml,12 h的eotaxin水平为(4．9±0．5)pg／ml,48 h均回到基线[(1．45±0．23) pg／ml]水平;除30 min外,各时间点哮喘大鼠肺组织匀浆均能诱导正常对照组或哮喘组大鼠骨髓细胞中CD34+、EOS、IL-5+、IL-SRα+、CCR3+、eotaxin+细胞表达增加,Galectin-3干预哮喘大鼠骨髓细胞后,骨髓EOS、IL-5+、IL-5Rα+、CCR3+、eotaxin+和CD34+细胞表达减少(分别为0．021±0．005、0．074±0．007、0．138±0．014、0．067±0．010、0．040±0．005、0．087±0．012)。结论IL-5 mRNA转录选择性抑制物(Galectin-3)能抑制EOS炎症,有可能成为一种特异性的抗哮喘药物。     

系统性红斑狼疮患者外周血中性粒细胞CD64的表达

目的　探讨系统性红斑狼疮 (SLE)患者外周血中性粒细胞CD64表达对鉴别SLE患者感染和活动的意义。方法　 6 5例SLE患者根据细菌学和影像学检查分为感染组 (19例 )和非感染组(46例 ) ,用流式细胞仪检测外周血中性粒细胞CD64表达。结果　感染组SLE患者外周血中性粒细胞CD64的表达率为 (7 8± 2 1) % ,显著高于非感染组 (3 2± 1 4 ) %和正常对照组 (3 0± 1 1) % (P <0 0 5 ) ,而非感染组与正常对照组间比较差异无显著性 (P >0 0 5 )。 2组SLE患者中 ,活动期和静止期外周血中性粒细胞CD64表达率差异无显著性 (P >0 0 5 )。虽然感染组中革兰阴性菌感染的SLE患者CD64表达率 [(9 2± 1 6 ) % ]高于革兰阳性菌感染的患者 [(7 2± 2 2 ) % ],但二者差异无显著性(P >0 0 5 )。SLE感染组经抗感染治疗后CD64表达水平下降。将CD64表达率分别与抗ds DNA、补体C3 、血沉和C 反应蛋白、SLE活动指数评分和荧光抗核抗体进行相关性比较 (r =0 10 4 ,P =0 4 0 9;r =- 0 12 5 ,P =0 32 2 ;r =- 0 138,P =0 2 74 ;r =0 2 2 8,P =0 0 6 8;r =0 2 0 4 ,P =0 310 ;r =- 0 2 13,P =0 0 89) ,差异均无显著性 (P >0 0 5 )。结论　外周血中性粒细胞CD64表达水平可帮助鉴别SLE患者的感染和活动。     

氟美松对嗜酸粒细胞凋亡的作用及其机制

目的　探讨氟美松对体外嗜酸粒细胞凋亡的作用及其机制。方法　在不同浓度白细胞介素 (IL) 5和氟美松的条件下体外培养嗜酸粒细胞 ,锥虫蓝拒染法和原位凋亡检测法观察嗜酸粒细胞凋亡的变化及嗜酸粒细胞凋亡抑制基因bcl 2表达的变化。结果　IL 5显著抑制嗜酸粒细胞凋亡 ,氟美松呈浓度和时间依赖性抑制IL 5介导的嗜酸粒细胞存活 ,10 -6mol/L氟美松显著抑制 1× 10 4 U/LIL 5介导的嗜酸粒细胞存活 ,培养 3d嗜酸粒细胞存活率为 (7± 3) % (P <0 .0 1) ,抑制率达 (90± 4) %。IL 5使嗜酸粒细胞bcl 2表达增强 ,氟美松对此具有抑制作用。但高浓度的IL 5 (1× 10 6U/L)可抑制氟美松的凋亡诱导作用。结论　氟美松具有诱导嗜酸粒细胞凋亡的作用 ,其机制可能与抑制嗜酸粒细胞bcl 2表达有关。     

糖皮质激素对支气管哮喘患者痰嗜酸粒细胞和中性粒细胞凋亡的影响

为观察吸入糖皮质激素对支气管哮喘(简称哮喘)患者诱导痰中嗜酸粒细胞(EOS)和中性粒细胞凋亡的影响,我们对哮喘患者经糖皮质激素治疗前、后诱导痰中EOS和中性粒细胞凋亡进行对比研究。对象与方法　2 0例来自本院2 0 0 2年11月～2 0 0 3年3月门诊哮喘患者,男11例,女9例,平均年龄( 4 1±11)岁,符合1997年中华医学会呼吸病学分会哮喘学组的诊断标准[1] ,均为急性发作期(轻、中度) ,2 0例患者吸入糖皮质激素前为A组,给予吸入丙酸氟替卡松(商品名:辅舒酮,葛兰素史克公司) 2 5 0 μg ,每天2次,吸入4周后,视为B组,期间给以硫酸沙丁胺醇(商品名:…     

抗细胞间黏附分子-1单克隆抗体对老年人中性粒细胞与缺氧内皮细胞黏附的影响

目的测定健康老年人中性粒细胞与人脐静脉内皮细胞细胞株ECV-304的黏附率,探讨抗细胞间黏附分子(ICAM-1,CD54)单克隆抗体对其影响。方法培养的人脐静脉内皮细胞株ECV-304经(或不经)缺氧和抗ICAM-1单抗处理后,分别加入健康老年人中性粒细胞并检测黏附率。结果ECV-304经缺氧处理后,与中性粒细胞黏附率由(21.87±2.47)%增高到(57.05±2.47)%;抗ICAM-1单抗可以部分抑制中性粒细胞与ECV-304黏附,与中性粒细胞黏附率由(21.87±2.47)%降低到(19.55±2.91)%。结论血管内皮细胞在缺氧/复氧后活化,与中性粒细胞之间黏附性增强;ICAM-1参与介导中性粒细胞与血管内皮细胞的黏附,抗ICAM-1单抗可起部分阻断作用。     

肿瘤坏死因子α及caspase-3表达与暴发性肝衰竭细胞凋亡

目的　研究肿瘤坏死因子α(TNFα)与caspase 3表达在实验性暴发性肝衰竭 (FHF)中对肝细胞凋亡的作用。方法　用脂多糖和D 氨基半乳糖制备FHF小鼠模型 ;ELISA和逆转录PCR法检测血清TNFα水平及肝组织TNFαmRNA表达 ;原位杂交法检测肝组织内caspase 3表达 ;DNA琼脂糖凝胶电泳和末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记 (TUNEL)检测肝细胞凋亡。结果　用药后 2h开始 ,TNFαmRNA表达增加 ( 0 91± 0 75 ,正常值 0 32± 0 10 ) ,血清TNFα水平升高 [( 32 0 5 0± 86 5 7)ng/L ,正常值 ( 16 6 6± 7 0 1)ng/L],caspase 3少量表达 ;8h后 ,血清ALT和总胆红素 (TBil)水平显著增加 [分别为 ( 5 6 0 6 6± 6 0 2 0 )U/L和 ( 16 3 6 6± 34 5 1) μmol/L ,正常值为 ( 2 3 5 6± 8 0 3)U/L和 ( 14 90± 4 80 ) μmol/L],caspase 3表达至最高峰 ,并出现典型的肝细胞凋亡改变 ;12h后 ,血清ALT和TBil水平达最高峰 ,caspase 3表达较 8h减少 ,肝细胞坏死和凋亡同时存在。抗TNFα单抗阻断试验后 ,肝细胞凋亡和坏死明显减轻 ,TUNEL和caspase 3表达显著减少。 结论　TNFα有促进肝细胞凋亡与坏死作用 ,肝细胞凋亡与caspase 3的激活有关 ,在时间上肝细胞凋亡先于坏死。     

支气管哮喘淋巴细胞Fas抗原的表达

目的探讨哮喘患者淋巴细胞Ｆａｓ抗原的表达状况。方法取哮喘患者外周血淋巴细胞，加入地塞米松１０５ｍｏｌ／Ｌ进行细胞培养，分别于０、２、８、２４小时以流式细胞仪测定淋巴细胞表面的Ｆａｓ（ＣＤ９５）抗原。结果哮喘患者淋巴细胞Ｆａｓ抗原的自发表达较正常对照组低，哮喘组Ｆａｓ为５３％±２０％，正常组为８５％±１８％，（Ｐ＜０．０５）。体外经地塞米松诱导后其Ｆａｓ抗原表达显著增加（Ｐ＜０．０１）。结论哮喘患者免疫亢进可能与免疫细胞Ｆａｓ抗原自发性降低有关。地塞米松可诱导淋巴细胞Ｆａｓ抗原的高表达，可能是地塞米松诱导细胞凋亡的机理之一。     

嗜酸细胞凋亡在激素抵抗型哮喘中的意义

目的 观察激素抵抗型（ＳＲ）哮喘是否存在嗜酸细胞（ＥＯＳ）凋亡功能的异常及促炎症细胞因子白细胞介素５（ＩＬ－５）和粒－巨细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）的调节作用。方法 分离ＳＲ（１５例）、激素敏感型（ＳＳ,３０例）两组哮喘患外周血单个核细胞（ＰＢＭＣＳ）及ＥＯＳ,体外培养后测定：（Ｆ１）ＰＢＭＣＳ在糖皮质激素处理前、后和细胞因子的能力;（２）自发的或糖皮质激素诱导的或用ＰＢＭＣＳ培养上液处理后     

中性粒细胞与白细胞介素8在哮喘发病中的作用

目的探讨中性粒细胞与白细胞介素8（IL-8）在支气管哮喘(简称哮喘)发病中的作用。方法对轻度哮喘患者行气道激发试验,对哮喘患者中性粒细胞超氧阴离子（O(*)/(2)）产生、血浆及诱导痰IL-8、丙二醛(MDA)水平进行测定分析。结果中、重度哮喘患者每106个周围血中性粒细胞O(*)/(2)产生水平为［（20.9±5.1）nmol/L］,与轻度哮喘患者［(15.2±4.2)nmol/L］比较,差异有显著性（P<0.01）,轻度哮喘组与正常人［(11.3±2.4)nmol/L］比较,差异有显著性(P<0.05);周围血中性粒细胞O(*)/(2)产生与气道反应性指标一秒钟用力呼气容积下降20%时所需的累积量(PD20FEV1)呈显著负相关(r=-0.693,P<0.05);急性发作期哮喘患者血浆及诱导痰IL-8水平［(585±75)ng/L、(791±103)ng/L］、MDA水平［(6.3±1.6)mmol/L、(21.8±6.3)mmol/L］,与缓解期哮喘患者血浆及诱导痰IL-8水平［(227±54)ng/L］、［(322±95)ng/L］、MDA水平［(5.4±1.0)mmol/L］、［(15.1±5.6)mmol/L］比较,差异有显著性（P<0.01）;缓解期哮喘患者与正常人血浆及诱导痰IL-8水平［(188±46)ng/L］、［(224±51)ng/L］及MDA水平［(4.1±0.4)mmol/L］、［(9.5±4.2)mmol/L］比较,差异有显著性（P<0.05）,诱导痰MDA水平与PD20FEV1呈显著负相关(r=-0.708,P<0.01);诱导痰IL-8水平与诱导痰中性粒细胞百分数呈显著正相关（r=0.838,P<0.01）。结论中性粒细胞产生的氧自由基可能参与哮喘气道炎症及气道高反应的形成。     

Induction of apoptosis in human eosinophils by anti-Fas antibody treatment in vitro

Fas antigen (CD95) can induce apoptosis of cells such as lymphocytes and neutrophils. To determine whether Fas antigen is involved in eosinophil apoptosis, we examined its expression and function on eosinophils in vitro. Purified human eosinophils expressed low but consistently detectable levels of Fas antigen. Culture of eosinophils in up to 10 ng/mL interleukin-5 (IL-5) prolonged eosinophil survival; incorporation of 1 to 1,000 ng/mL Fas antibody led to significant reductions in IL-5-induced eosinophil viability after 48 to 72 hours of culture. Reductions in survival could not be overcome by IL-5 and also occurred in the absence of exogenous IL-5. Preactivation of eosinophils with platelet-activating factor (PAF) significantly reduced eosinophil viability without altering the survival-reducing effects of Fas antibody treatment. In contrast, RANTES did not affect eosinophil viability or Fas antibody-induced reductions in eosinophil survival. After treatment with Fas antibody, electron microscopy of eosinophils and gel electrophoresis of DNA extracted from eosinophils demonstrated changes consistent with apoptosis. These data demonstrate that Fas antigen can modify eosinophil survival by inducing apoptosis through a pathway that is, at least in part, independent of the survival- promoting effects of IL-5.     

神经生长因子在哮喘患者诱导痰炎性细胞的表达

目的　通过观察神经生长因子 (NGF)在哮喘气道炎性细胞的表达 ,探讨NGF与哮喘气道炎症形成的关系。方法　取 11例哮喘急性发作期、19例哮喘非急性发作期患者及 11例健康对照者的诱导痰 ,其中 12例哮喘非急性发作期患者予丙酸氟替卡松 (ICS)治疗 2周后再取诱导痰。做诱导痰炎性细胞分类计数 ;SP法测诱导痰炎性细胞NGF表达 ;ELISA测其上清中白细胞介素 (IL) 5浓度。结果　 (1)诱导痰巨噬细胞、淋巴细胞、粒细胞NGF表达阳性率哮喘组较健康对照组高 (P值均<0 0 1) ,且急性发作期较非急性发作期高 (P <0 0 1)。急性发作期IL 5水平较非急性发作期和健康对照组高 (P值均 <0 0 1)。 (2 ) 12例非急性发作期患者经ICS治疗后 ,诱导痰巨噬细胞、淋巴细胞、粒细胞NGF表达阳性率及IL 5水平均较治疗前下降 (P值均 <0 0 1)。 (3)巨噬细胞、粒细胞NGF表达阳性率与淋巴细胞相对计数构成比、IL 5水平均呈正相关。结论　哮喘患者气道内巨噬细胞、淋巴细胞和粒细胞NGF表达增加 ,提示NGF可能与哮喘气道炎症的形成有关。     

γ干扰素质粒基因转染对支气管哮喘小鼠气道炎症的影响

目的观察气道内γ干扰素(IFNγ)基因转染对支气管哮喘(简称哮喘)小鼠气道炎症的影响。方法健康6周龄SPF级C57BL/6小鼠40只,按随机数字表法分为4组。正常对照组(A组)、哮喘模型组(B组)、模型空质粒干预组(C组)、模型IFNγ质粒干预组(D组),每组10只。B组、C组及D组以0.1%卵白蛋白(OVA)0.1ml腹腔注射致敏,以1%的OVA50μl滴鼻激发建立哮喘模型;A组用等量生理盐水分别代替0.1%的OVA0.1ml和1%OVA50μl;C组和D组分别经鼻滴入空质粒pcDNA3.1()和Lipofentamine2000混合液50μl或重组IFNγ质粒和Lipofentamine2000混合液50μl。观察各组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中的细胞成分、白细胞介素4(IL4)、IL5、IFNγ和肺组织病理学变化。结果B组小鼠BALF中炎性细胞总数、嗜酸粒细胞(EOS)、中性粒细胞和淋巴细胞计数分别为(0.102±0.020)×109/L、(0.0193±0.0047)×109/L、(0.0107±0.0039)×109/L、(0.0255±0.0042)×109/L,A组分别为(0.082±0.012)×109/L、(0.0041±0.0009)×109/L、(0.0051±0.0016)×109/L、(0.0201±0.0019)×109/L,A、B两组比较差异有统计学意义(P<0.05);D组小鼠BALF中炎性细胞总数、EOS、中性粒细胞和淋巴细胞计数分别为(0.086±0.016)×109/L、(0.0116±0.0031)×109/L、(0.0062±0.0018)×109/L、(0.0182±0.0041)×109/L,与B组比较差异有统计学意义(P<0.05)。B组小鼠BALF中IL4、IL5、IFNγ水平分别为[(39.2±5.1)pg/ml、(83.7±4.7)pg/ml、(15.7±2.7)pg/ml],A组小鼠分别为[(13.3±1.9)pg/ml、(12.1±2.3)pg/ml、(31.8±7.9)pg/ml],A、B两组比较差异有统计学意义(P<0.05);D组小鼠BALF中IL4、IL5、IFNγ水平分别为[(16.4±3.2)pg/ml、(26.3±3.4)pg/ml、(65.4±10.4)pg/ml],与B组比较差异有统计学意义(P<0.05)。A组小鼠气道无明显炎症变化,B和C组小鼠小支气管、血管黏膜下和周围肺组织有明显的炎症细胞浸润,血管壁明显水肿;D组小鼠气道炎症明显减轻。结论气道内转染干扰素质粒能有效改善哮喘小鼠细胞因子IL4、IL5和IFNγ异常,同时对EOS、中性粒细胞数和淋巴细胞肺内募集、肺组织炎症改变有一定抑制作用。     

钾通道对人支气管平滑肌细胞增殖与凋亡及其相关基因表达的影响

目的　探讨电压依赖性延迟整流钾通道 (KV)、钙激活钾通道 (KCa)和ATP敏感性钾通道 (KATP)对人支气管平滑肌细胞 (HBSMCs)增殖与凋亡及其相关基因表达的影响。方法　支气管组织取材于 5例肺癌切除术患者癌旁正常的肺组织 ,将培养的HBSMCs分为 4组 :(1)对照组 (用不含药物的无血清培养基处理 ) ;(2 ) 4 氨基吡啶 (4 AP)组 (含 4mmol/L的 4 AP) ;(3)四乙铵 (TEA)组 (含 1mmol/L的TEA) ;(4)格列本脲 (Glib)组 (含 0 1mmol/L的Glib)。采用流式细胞术观察细胞的周期 ;应用荧光光度法检测细胞内钙 ;四甲基偶氮唑盐 (MTT)微量比色分析法检测细胞的增殖 ;原位末端标记法 (TUNEL)检测细胞的凋亡 ;免疫细胞化学技术检测增殖细胞核抗原 (PCNA)及凋亡相关基因Fas和FasL的表达 ,以观察 3种钾通道阻断剂对培养的HBSMCs增殖及凋亡的影响。结果 (1)对照组HBSMCs吸光度 (A)值为 0 30± 0 0 8,4 AP组为 0 6 7± 0 14 ,两组比较差异有统计学意义 (P <0 0 1) ;对照组PCNA的阳性率为 (2 3± 5 ) % ,4 AP组为 (89± 7) % ,两组比较差异有统计学意义 (P <0 0 1) ;对照组细胞内Ca2 浓度为 (98± 7)nmol/L ,4 AP组为 (2 5 5± 17)nmol/L ,两组比较差异有统计学意义 (P <0 0 1) ;对照组S G2 M期细胞数为 (12 6±