急性白血病病人黏着斑激酶的表达及临床意义

目的观察黏着斑激酶(FAK)在急性白血病(AL)病人白血病细胞中的表达及临床意义。方法采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测50例AL病人白血病细胞FAK mRNA的表达水平,以10例健康人作为正常对照。收集病人骨髓细胞,用24h常规培养方法制备染色体,采用R显带技术分析其染色体核型。结果正常对照组FAK mRNA阳性表达率为20.0%,AL病人为66.0%,差异有显著性(χ2=5.49,P<0.05)。其中急性淋巴细胞白血病(ALL)和急性非淋巴细胞白血病(ANLL)病人FAK mRNA阳性表达率和表达水平均高于正常对照组(P=0.04,χ2=4.44,t=7.98、5.60,P<0.05),但ALL和ANLL比较差异无显著性(P>0.05)。初诊和复发AL病人白血病细胞FAK mRNA阳性表达率和表达水平比较差异无显著性(P>0.05),但均高于正常对照组(χ2=9.38,P=0.02,t=8.79、7.58,P<0.05)。缓解组病人FAK mRNA阳性表达率和表达水平明显低于初诊组和复发组(χ2=10.26,P=0.02,t=4.43、7.82,P<0.05),与正常对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。AL病人异常核型检出组FAK mRNA的表达率和表达水平均明显高于未检出组(χ2=5.82,t=6.72,P<0.05)。结论 FAK mRNA在AL中存在较高的表达,且与疾病的转归相关,可能为白血病的治疗提供新靶点。     

抗凋亡基因Livin在成人急性淋巴细胞白血病细胞中的表达及临床意义

目的 探讨成人急性淋巴细胞白血病(ALL)原代细胞Livin基因的表达及临床意义.方法 采用RT-PCR检测52例成人急性淋巴细胞白血病患者Livin基因表达与否及相对表达水平,以12名健康人为正常对照.结果 LivinmRNA在初治ALL患者中的阳性表达率明显高于正常对照组(P＜0.05);治疗缓解后表达率明显下降(P＜0.05);复发后其表达率又升高.在初治成人ALL患者中,Livin mRNA表达阳性的患者完全缓解率低于表达阴性的患者(P＜0.05).结论 Livin基因的表达可能和成人ALL的发病、复发相关;Livin基因阳性表达的患者完全缓解率低,预后不良;Livin基因检测可能作为成人急性淋巴细胞白血病的发病、复发及预后判断的指标之一.     

急性白血病患者P-糖蛋白的表达及功能分析

目的:研究P-糖蛋白(P-gp)在急性白血病(AL)患者中的表达及功能.方法:用免疫组化检测CD34、P-gp的表达,用流式细胞术检测P-gp的表达、功能.结果:CD34表达与P-gp表达、功能呈正相关(P=0.001,r=0.475;P=0.003,r=0.429),P-gp表达与功能呈正相关(P=0.031,r=0.341).初治急性早幼粒细胞白血病(APL)组中无P-gp表达 、P-gp功能 ,明显低于初治急性髓细胞白血病(AML)组(41.1%,35.3%,P＜0.05).初治急性淋巴细胞白血病(ALL)组中P-gp表达 28.6%,P-gp功能 28.6%,与初治AML组无差异(P＞0.05).初治AL组P-gp表达 25%,复发/难治组中P-gp表达 33.3%,两组无差异(P＞0.05);P-gp功能 22.7%,低于复发/难治组P-gp功能 66.7%(P＜0.05).＜50岁初治AL组P-gp表达 26.3%,与≥50岁初治AL组无差异(P＞0.05);P-gp功能 15.8%,低于≥50岁初治AL组(P＜0.05).结论:P-gp功能的检测对AL的化疗更有临床指导意义.     

白血病c-FLIP mRNA表达的初步研究

目的:探讨c-FLIPmRNA在白血病中的表达及其意义.方法:应用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测37例白血病骨髓单个核细胞c-FLIP mRNA的表达.包括急性白血病(AL)27例,其中初治21例及复发和完全缓解(CR)后AL各3例、慢性粒细胞性白血病(CML)5例、慢性中性粒细胞性白血病(CNL)1例和慢性淋巴细胞性白血病(CLL)4例.结果:在初治和复发AL、初治CML、CNL、CLL中c-FLIP mRNA均呈异常增高表达,初治AL中c-FLIP mRNA的表达与复发AL比较差异无统计学意义(P＞0.05),其FAB各亚型之间的表达差异亦无统计学意义(P＞0.05).初治AL与CLL c-FLIP mRNA的表达显著高于初治CML(P＜0.001),但初治AL与初治CLL比较差异无统计学意义(P＞0.05).对照组和CR后AL均为阴性表达.c-FLIPmRNA的表达与初治AL患者年龄、性别、初诊白细胞数、LDH以及核型、免疫表型无关.初治未达CR的AL患者其c-FLIPmRNA表达高于CR者,但并无统计学意义(P＞0.05).结论:白血病c-FLIP mRNA的表达异常增高.c-FLIP mRNA能反映白血病细胞的凋亡抑制情况,并与白血病的类型、疾病状态、临床疗效和预后密切相关.     

急性白血病病人白血病细胞Survivin基因的表达及其临床意义

目的观察Survivin基因在急性白血病（AL）病人白血病细胞中的表达,并分析其与预后关系。方法应用RT-PCR方法检测62例不同时期AL病人白血病细胞Survivin mRNA的表达情况,以10例健康人作为对照。结果62例AL病人白血病细胞Survivin mRNA阳性表达率为72．58％。ALL细胞Survivin mRNA阳性表达率（76．5％）与ANLL细胞（71．1％）比较差异无显著性,二者均高于正常对照组（x^2=6．01、7．02,P〈0．05）。初治和复发AL病人白血病细胞Survivin mRNA阳性表达率分别为78．95％、85．71％,明显高于对照组（x^2=．77、9．77,P〈0.05）。白血病细胞Survivin mRNA表达阴性者接受1个疗程化疗后骨髓缓解率（BMR）为77．78％,明显高于阳性表达者的31．03％（x^2=9,P〈0.05）。结论Survivin基因表达在白血病细胞的增殖分化和（或）抗凋亡过程中发挥了重要作用,可能是导致AL细胞对化疗药物不敏感的原因之一,Survivin基因可作为靶向白血病治疗的一个潜在靶点。     

Survivin在儿童急性白血病骨髓及外周血单个核细胞中的表达及意义

目的研究survivin在急性白血病(AL)儿童骨髓及外周血单个核细胞(MNC)的表达情况及意义.方法应用RT-PCR的方法检测21例AL患儿骨髓及外周血MNC中survivin mRNA的表达.结果 12例初诊AL患儿骨髓MNC中survivin阳性表达6例(50%);11例外周血MNC中survivin阳性表达4例(36.37%),均明显高于对照组(P<0.05).初诊组急性淋巴细胞白血病(ALL)和急性髓细胞白血病(AML)患儿survivin表达无显著差异(P>0.05).完全缓解组患儿中1 例骨髓survivin阳性表达(11.11%),明显低于初诊组(P<0.05),该例患儿7周后复发.AL初诊组4例外周血MNC survivin阳性表达者与7例阴性表达者外周血原始和/或幼稚细胞平均值分别为(76.43±43.28)×109/L和(5.86±13.85)×109/L,有显著性差异(P<0.05 ).结论① Survivin在AL初诊患儿骨髓及外周血MNC中高表达,提示survivin可能参与了儿童AL的发生发展;②完全缓解患儿骨髓survivin阳性表达可能可作为AL复发的早期指标.     

急性白血病死亡相关蛋白激酶基因启动子的甲基化

目的 研究死亡相关蛋白激酶(DAPK)基因启动子甲基化和基因表达在初治急性白血病患者中的临床意义.方法 采用MSP方法和RT-PCR方法分别检测60例急性髓系白血病患者、55例急性淋巴细胞白血病患者和17例正常人DAPK基因的甲基化状态及其mRNA的表达,统计学分析各组之间的表达差异.结果 急性淋巴细胞白血病组的DAPK甲基化阳性率(29.1％)高于急性髓细胞白血病组(5％)和正常组(0％)(P＜0.0l25),但甲基化与急性淋巴细胞白血病组患者临床特征无关(P＞0.05).DAPK基因mRNA的表达水平以正常组最高,急性髓细胞白血病组次之,急性淋巴细胞白血病组最低(P=0.000).急性淋巴细胞白血病组患者DAPK mRNA表达与其启动子甲基化呈显著负相关(P＜0.05).结论 DAPK基因启动子在初治急性淋巴细胞白血病患者中甲基化率高于初治急性髓细胞白血病患者和正常人,但与患者临床特征无关.急性淋巴细胞白血病患者DAPK基因表达水平低或不表达可能与其甲基化有关.     

Survivin、bcl-2在儿童急性白血病的表达及其临床意义

目的探讨survivin和bcl-2在儿童急性白血病的表达情况及其临床意义.方法确诊为急性白血病的患儿53例,将其分为初诊组、完全缓解组和复发组.用RT-PCR的方法检测survivin、bcl-2的mRNA.结果初诊组患儿survivin、bcl-2阳性表达病人分别是26例(60.47%,n=43)、26例(60.47%,n=43)均高于对照组(P<0.05).急性淋巴细胞性白血病和急性髓细胞性白血病患儿survivin、bcl-2阳性表达率无显著性差异(P>0.05).完全缓解期患儿survivin和bcl-2阳性表达明显低于初诊白血病患儿 (P<0.005).初诊患儿中survivin、bcl-2两者阳性的患者16例(37.21%,n=43),两者的阳性符合率为61.54%(16/26例),但是bcl-2阳性和阴性组,survivin阳性表达的患者分别为16例(61.54%,n=26)和10例(58.82%,n=17),两者相比无显著性差异(P>0.05).survivin阳性和阴性表达患儿外周血白细胞总数的平均值分别为(37.20±69.90)×109/L和(51.86±95.47)×109/L,两者相比无显著性差异(P>0.05).结论 survivin和bcl-2参与了儿童白血病的发生发展.survivin和bcl-2的表达与急性白血病的类型无关.survivin的阳性表达与外周血白细胞总数无关.survivin、bcl-2 mRNA表达之间的没有相关性.完全缓解期的患儿,随着其临床症状的缓解survivin和bcl-2的阳性表达率下降.     

急性和慢性白血病Livin基因表达的研究

目的：研究Livin基因在急、慢性白血病中的表达,探讨其临床意义。方法：采用半定量逆转录．聚合酶链反应（RT—PCR）检测91例急性白血病（AL）和17例慢性粒细胞性白血病（CML）患者LivinmRNA的表达水平,21名健康人的标本作正常对照。结果：初治AL患者中Livin的表达较正常对照明显升高,治疗缓解后的表达水平下降,复发时又再次升高;慢性粒细胞白血病慢性期（CML—CP）、加速／急变期（CML-AP／BP）患者Livin的表达水平均高于正常对照组;初治AL患者中,Livin阳性的患者缓解率低于表达阴性的患者。结论：Livin基因的过度表达参与了急、慢性白血病的发病,并且是AL复发的高危因素;Livin基因的高表达是判断急性白血病预后不良的指标之一。     

急性白血病的抗原表达及其临床意义

目的　探讨成人急性白血病 (AL)的抗原表达及其临床意义。方法　采用直接免疫荧光法标记 ,流式细胞仪检测分析 6 9例 AL 的免疫表型。结果　 12 9例成人急性淋巴细胞白血病 (AL L)髓系抗原阳性表达率为 30 % ,其中 CD1 3为 2 0 .7% ,CD33 为 10 .3% ,T- AL L 和 B- AL L 髓系抗原表达无显著性差异 (P=0 .36 7) ;CD34表达阳性的 AL L 髓系抗原表达率明显高于 CD34表达阴性的 AL L 髓系抗原表达率 (77.8% vs13.3% ,P=0 .0 36 ) ;AL L髓系抗原阳性表达的 CR率明显低于髓系抗原阴性表达的 CR率 (33.3% vs80 % ,P=0 .0 2 0 3)。 2 40例急性髓性白血病 (AML)淋系抗原表达率为 30 % ,其中 CD7为 15 % ,CD1 9为 12 .5 % ,CD2 为 2 .5 % ,CD7主要分布在 M1 、M2亚型中 ;CD34阳性 AML 的淋系抗原表达率明显高于 CD34阴性 AML 的淋系抗原表达率 (6 1.1% vs4.5 % ,P=0 .0 0 0 12 5 ) ;AML 淋系抗原阳性表达的 CR率低于淋系抗原阴性表达的 CR率 ,但差异无显著性 (5 0 % vs71.4% ,P=0 .12 6 )。结论　成人 AL 的抗原错译表达率约为 30 % ;CD34阳性 AL 的抗原错译表达率明显高于 CD34阴性 AL的抗原错译表达率 ;有抗原错译表达的 AL 的 CR率低于无抗原错译表达的 AL 的 CR率     

Livinα和Livinβ在儿童急性白血病骨髓单个核细胞中的表达及临床意义

目的 研究Livinα和Livinβ在儿童急性白血病(childhood acute leukemia,CAL)骨髓单个核细胞(marrow mononuclear cell,MMNC)中的表达与临床意义.方法 采用实时PCR(real-time PCR)和Western blot检测Livinα和Livinβ在CAL骨髓单个核细胞中mRNA水平和蛋白质水平的表达.结果 Livinα和Livinβ在初诊的39例儿童急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)和12例急性髓细胞白血病(acute myeloid leukemia,AML)MMNC中的表达率和表达水平均高于对照组(P<0.05),Livinα的表达水平高于Livinβ(P<0.01).ALL化疗后第19天,幼稚细胞≤5%组Livinα和Livinβ的表达水平较化疗前明显降低(P<0.01).幼稚细胞5%组化疗后较化疗前也降低(P<0.05),但化疗后Livinα和Livinβ的表达水平仍明显高于对照组(P<0.01).结论 Livinα和Livinβ在CAL中高表达可能对评估CAL临床危险度及预后有重要意义;提示Livinα和Livinβ可作为观察CAL预后的分子指标之一.     

Survivin基因在急性白血病患者中的表达及其临床意义

目的:检测凋亡抑制基因Survivin在急性白血病(AL)患者骨髓细胞中的表达变化,探讨其与AL的发生、发展及预后的关系。方法:选取40例初发急性白血病患者为实验组和8例正常的骨髓细胞作对照组,采用逆转录PCR(RT-PCR)方法检测两组骨髓细胞SurvivinmRNA的表达情况以及采用免疫组化SP法检测Survivin蛋白的表达情况,分析急性白血病阳性表达和阴性表达间完全缓解率(CR)的差别,采用卡方检验进行统计学分析。结果:40例AL病人骨髓细胞SurvivinmRNA阳性表达率为67.5%,显著高于正常对照组12.5%(P<0.05);Survivin蛋白在急性白血病骨髓细胞中的阳性表达率65.0%(26/40)明显高于正常对照组12.5%(1/8)(P<0.05),骨髓细胞Survivin表达阴性者化疗后骨髓完全缓解率(CR)为70.0%,明显高于阳性表达者的CR为30.0%(P<0.05)。结论:(1)Survivin的过度表达与急性白血病的发生发展有关,其阳性表达可能显示急性白血病的预后不良;(2)Survivin基因表达在白血病细胞的增殖分化和(或)抗凋亡过程中发挥了重要作用,可能是导致AL细胞对化疗药物不敏感的原因之一,Survivin基因可作为靶向白血病治疗的一个潜在靶点。     

靶向Livin反义寡核苷酸对结肠癌LoVo细胞增殖及对卡铂敏感性的影响

目的探讨靶向Livin反义寡核苷酸(ASODN)对结肠癌LoVo细胞增殖及Livin基因表达的影响,并观察其对卡铂敏感性的变化。方法 (1)用靶向Livin ASODN、随机寡核苷酸(RODN)分别转染LoVo细胞,反转录-聚合酶链式扩增反应检测Livin mRNA表达量变化;(2)流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况;(3)采用CCK-8法检测卡铂联合靶向Livin ASODN作用对肿瘤细胞的增殖抑制率。结果 Livin ASODN转染LoVo细胞明显抑制Livin mRNA表达,与空白对照组、RODN组比较差异均有统计学意义(P<0.01);流式细胞术碘化丙锭单染色显示,空白对照组、RODN组均未出现细胞亚二倍体峰;Livin ASODN组存在LoVo早期凋亡细胞,200、400 nmol.L-1的Livin ASODN组细胞亚二倍体百分率分别为(10.59±1.05)%、(11.63±1.27)%;卡铂单药半数抑制浓度(IC50)为3.33 mg.L-1,卡铂与Livin ASODN(100 nmol.L-1)联合,IC50为0.22 mg.L-1,表现为协同作用(Q≥1.15),增敏倍数15.14。结论靶向Livin ASODN下调Livin mRNA表达,诱导LoVo细胞凋亡并提高其对卡铂的敏感性。     

细胞周期蛋白A在成人急性白血病中的表达及意义

目的　探讨细胞周期蛋白A(cyclinA)在成人急性白血病 (AL)患者骨髓细胞中的表达及其临床意义。方法　采用RT PCR法对 10 0例初治及复发的AL患者进行cyclinAmRNA水平的检测 ,对其阳性表达的PCR扩增产物进行DNA测序分析。对其中 75例AL患者 ,用流式细胞术检测cyclinA蛋白表达水平 ,10例正常人作为对照。 结果　 (1)AL患者cyclinA蛋白表达在细胞周期中的分布无异常 ,cyclinA蛋白及mRNA的阳性率 (分别为 6 6 7% ,5 9 0 % )和中位表达水平 (分别为18 5 % ,0 5 39± 0 4 90 )明显高于正常人 ,同一实验条件下未发现在正常人中有cyclinA蛋白及mRNA阳性表达 (P <0 0 1) ;经测序分析发现cyclinA阳性扩增片段序列与基因库中的目标序列完全一致 ;(2 )cyclinA蛋白及mRNA水平与S期、G2 /M期细胞所占的比例呈正相关 (P <0 0 1)。 (3)复发组急性淋巴细胞性白血病 (ALL)患者的cyclinA蛋白表达水平 (15 4 % )明显低于初治组(2 9 5 % ) ,差异有统计学意义 (t=14 4 18,P =0 0 2 2 )。 (4 )cyclinA蛋白或mRNA高表达患者的完全缓解率 (分别为 87 9%、85 7% )明显高于低表达患者 (分别为 38 2 %、5 3 3% ) (P <0 0 5 )。结论　cyclinA在AL患者中是一种增殖标志 ,是影响AL患者完全缓解率的因素 ,其高表达可能是AL患者     

CXCR3在急性白血病患者外周血淋巴细胞的表达及其意义

目的探讨急性白血病(AL)患者外周血T淋巴细胞趋化因子受体CXCR3表达及其临床意义。方法采用流式细胞术结合直接免疫荧光法检测133例AL以及33例对照组外周血T淋巴细胞CXCR3表达。结果 AL患者外周血T淋巴细胞表面趋化因子受体CXCR3的表达阳性率明显高于对照组,分别为(28.24±18.14)%和(12.19±3.89)%(P<0.05)。在各型AL中,以B-ALL的表达率最高(40.14±17.56)%,而T-ALL型为(14.06±8.29)%,仅略高于正常对照(P>0.05);AL髓外浸润患者外周血T淋巴细胞CXCR3的表达为(34.54±19.87)%,明显高于非髓外浸润患者(20.44±12.15)%(P<0.01)。但AL患者外周血T淋巴细胞CXCR3的表达与白细胞总数、幼稚细胞百分率及CD3阳性率表达无关。结论 AL外周血T淋巴细胞CXCR3的表达可能与白血病的迁移、浸润密切相关。     

靶向Livin基因siRNA载体的构建和沉默效应观察

目的:构建针对人Livin基因的小干扰RNA(siRNA)表达载体,并观察该载体对食管癌细胞Livin基因表达的沉默效应。方法:依据siRNA设计原则,分析Livin mRNA序列,设计并合成2个Livin靶向的发夹状siRNA靶序列,退火后分别连接入pSUPER-neo载体,转化扩增后进行序列测定。用脂质体包裹法将重组质粒转染人食管癌细胞EC9706,采用RT-PCR检测转染细胞Livin mRNA的表达。结果:经过酶切鉴定与测序,构建的靶向Livinα和Livinβ基因的siRNA载体,结果正确;RT-PCR检测显示,转染细胞Livin mRNA的表达水平降低。结论:成功构建沉默细胞Livin基因表达的siRNA载体。     

SiRNA沉默Livin基因促骨肉瘤MG-63细胞凋亡的实验研究

目的:研究特异性小分子干扰RNA(siRNA)沉默骨肉瘤MG-63细胞Livin基因对细胞凋亡的影响?方法:设计针对人源Livin基因的siRNA,转染至对数生长期的人骨肉瘤MG-63细胞株;RT-PCR检测转染后骨肉瘤MG-63细胞Livin基因表达的变化,Western blot检测转染后骨肉瘤MG-63细胞Livin蛋白表达的变化,PI染色后流式细胞仪检测转染后细胞凋亡的变化?结果:Livin特异性siRNA转染骨肉瘤MG-63细胞后,Livin基因表达较空白对照和阴性对照显著减少(0.195 ± 0.019 vs 0.539 ± 0.031?0.438 ± 0.029)?Western blot检测结果显示Livin蛋白质水平较空白对照和阴性对照显著减少(0.165 ± 0.022 vs 0.632 ± 0.034?0.625 ± 0.035)?流式细胞仪检测见siRNA组骨肉瘤MG-63细胞凋亡率较对照组明显增加?结论:RNA干扰能有效沉默骨肉瘤MG-63细胞Livin基因表达,促进骨肉瘤MG-63细胞凋亡?     

急性白血病多药耐药性与临床疗效关系的探讨

目的：探讨白血病细胞的多药耐药性与临床疗效及预后的关系。方法：采用逆转录聚合酶链法（RT－PCR）检测65例急性白血病（AL）患者的多药耐药基因（MDR1mRNA)表达。同时采用MTT法对35例患者做体外药物敏感试验。结果：初治组MDR1mRNA阳性表达率为31．1％,复发难治组性表达率为75．0％;MDR1mRNA阳性表达组完全缓解率和总缓解率均低于MDR1mRNA阴性表达组（P＜0．01）。药敏试验与化疗疗效相关,总临床符合率为80．0％。结论：MDR1mRNA表达及体外药敏检测与AL的化疗效果及预后密切相关,可作为判断疗放与预后的重要指标。     

表达PTEN同时沉默Livin基因载体的构建和鉴定

目的 构建表达PTEN基因、同时又沉默Livin基因的复合载体,探讨调控PTEN和Livin基因对胃癌细胞的影响.方法 根据GenBank中人DNA的PTEN基因(NM_000314)和Livin(NM_139317)基因的全长序列设计,分别构建出表达PTEN基因的真核表达载体pCL-neo-PTEN和沉默Livin基因的siRNA载体pRNAT-U6.1-Livin.切下pRNAT-U6.1-siLivin中的Livin siRNA单元,将其重组入pCL-neo-PTEN;鉴定得到表达PTEN同时沉默Livin基因的重组载体pCL-neo-PTEN-siLivin.脂质体包裹3个重组载体分别转染胃癌BGC823细胞,荧光定量RT-PCR和Western印迹检测胃癌BGC823细胞PTEN和Livin基因mRNA和蛋白表达情况.结果 经过限制性酶切和测序鉴定得到重组子pCL-neo-PTEN、pRNAT-U6.1-Livin和pCL-neo-PTEN-siLivin.转染pCL-neo-PTEN-siLivin的胃癌BGC823细胞中PTEN基因mRNA(0.897±0.112)和蛋白高水平表达,与对照组细胞(0.277±0.036)比较差异有统计学意义(P<0.05),与转染pCL-neo-PTEN的比较差异无统计学意义(P>0.05);转染pCL-neo-PTEN-siLivin的胃癌BGC823细胞中Livin基因mRNA(0.071±0.009)和蛋白表达抑制,与对照组细胞(0.338±0.044)差异有统计学意义(P<0.05),与转染pRNAT-U6.1-siLivin的差异无统计学意义(P>0.05).结论 成功构建出表达PTEN基因同时又沉默Livin基因的重组载体.