光滑念珠菌性阴道炎小鼠模型的构建

目的:构建光滑念珠菌性阴道炎的小鼠模型.方法:采用ICR雌性小鼠,预先静脉注射链脲菌素或腹腔注射地塞米松,再皮下注射苯甲酸雌二醇以造成小鼠的假发情,然后小鼠阴道内注射约5×108cfu/mL光滑念珠菌稳态芽生孢子并进行阴道灌洗液的真菌载量分析以及阴道组织病理观察.结果:与对照组小鼠比较,实验组小鼠阴道灌洗液的真菌载量分析显示自第7 d开始可分离出高水平的菌量,并延续到接种后21 d;阴道组织病理结果发现自第7 d至实验结束均可见阴道黏膜浅层有芽生孢子生长,并有炎细胞浸润.结论:小鼠胰岛功能丧失及全身免疫抑制,加以雌激素化及阴道内高浓度菌悬液接种可以构建稳定的光滑念珠菌阴道炎模型,此动物模型可用于念珠菌性阴道炎的相关研究.     

雌激素化小鼠念珠菌性阴道炎模型中COX-2,TSLP的表达及其意义

目的探讨环氧化酶2(cyclooxy genase,COX-2)、胸腺间质淋巴细胞生成素(thymic stromal lymphopoietin,TSLP)在雌激素化小鼠念珠菌性阴道炎模型中的表达及其在致病中的作用。方法将60只小鼠随机分为雌激素化白念珠菌感染组(EI组)、雌激素化非感染组(E组)及正常对照组(C组),EI组采用皮下注射雌激素及阴道内接种白念珠菌造模,E组仅皮下注射雌激素。念珠菌接种后第2,4,7,14天,3组小鼠阴道冲洗液中真菌量的动态变化采用集落形成单位(CFU)计数。各组小鼠阴道组织中的念珠菌感染情况,COX-2和TSLP的表达分别采用PAS染色、免疫荧光激光共聚焦检测,并进行统计学分析。结果 EI组CFU自接种后第2天升高、第4天达到高峰、之后下降。EI组CFU平均值(3.47±1.82)×103/mL高于E,C组(E,C组无念珠菌生长,P<0.01);第7天,EI组COX-2绿色荧光程度较强(0.252±0.020),明显高于E组(0.155±0.005)和C组(0.098±0.006),经比较差异具有统计学意义(P<0.001);第7天,EI组TSLP红色荧光最强(0.391±0.011)明显高于E组(0.243±0.020)和C组(0.155±0.006),经比较差异有统计学意义(P<0.001)。结论在雌激素化小鼠念珠菌感染模型中,黏膜中COX-2,TSLP表达的上调可能在念珠菌致病中起重要作用。     

Balb/c小鼠白念珠菌性阴道炎模型中IGFBP7的表达及其意义

目的探讨胰岛素样生长因子结合蛋白7(IGFBP7)在小鼠白念珠菌性阴道炎模型中的表达及其临床意义。方法建立Balb/c小鼠白念珠菌性阴道炎模型,采用PAS染色、免疫组化及荧光PCR检测感染组与正常组中念珠菌感染情况、半胱氨酸蛋白酶3(caspase3)、IGFBP7表达的差异。结果成功构建Balb/c小鼠白念珠菌性阴道炎模型,感染组阴道分泌物涂片及阴道组织见大量念珠菌丝及炎症细胞浸润,caspase3,IGFBP7在感染组中较正常组高表达(P<0.01),且两者表达呈正相关rs=0.791。结论IGFBP7高表达可能在念珠菌性阴道炎中起重要的致病作用。     

小鼠念珠菌性阴道炎中维A酸相关孤儿受体、白细胞介素17表达

目的：探讨Th17/白细胞介素（IL）17轴在小鼠念珠菌性阴道炎发病中作用。方法120只雌性BALB/c小鼠随机分为雌激素感染组（Ei）、雌激素非感染组（En）、对照感染组（Ci）和对照非感染组（Cn）。Ei、En组在阴道接种前3 d于后腿皮下注射雌二醇0.05 mg,而Ci、Cn组皮下注射灭菌大豆油0.1 ml,以后隔日注射1次直至实验结束;Ei、Ci组在接种日在阴道内接种白念珠菌悬液10μl（5×104个孢子）,而En、Cn组阴道内注入10μl无菌磷酸盐缓冲液。接种后3、7、14 d,每组于各时间点分别随机取10只小鼠处死,完整切取阴道组织作液氮冷冻或石蜡包埋,实时荧光定量PCR （qRT?PCR）、Western印迹和免疫荧光染色分别检测阴道组织中维A酸相关孤儿受体（ROR）γt、RORα、IL?17 mRNA、蛋白表达及免疫荧光强度。结果激光共聚焦显微镜显示,En、Cn组中RORγt、RORα和IL?17主要表达于阴道固有膜及血管中炎症细胞,Ci组中主要表达于黏膜上皮及其表面附着的菌丝、固有膜及血管中炎症细胞,Ei组中则广泛分布于黏膜上皮、固有膜及血管中炎症细胞、阴道腔和黏膜上皮中内吞菌丝。qRT?PCR和免疫荧光检查显示,En、Ci和Ei组中RORγt、RORα、IL?17 mRNA表达及其免疫荧光强度在相同时间点均显著高于Cn组（均P<0.05）,且Ei组显著高于En、Ci组（P<0.05）;除Cn组外,其余各组中RORγt、RORα、IL?17 mRNA表达及其免疫荧光强度均随时间延长有增加的趋势,其中RORγt、RORαmRNA和免疫荧光强度及IL?17 mRNA一般在14 d时最高,而IL?17免疫荧光强度在7 d时最高（P<0.05）。Western印迹显示,Ci、Ei组中RORγt和IL?17蛋白表达在相同时间点均明显高于Cn、En组（RORγt：F组别=45.685,P<0.001;IL?17：F组别=29.655,P<0.01）,其中Ei组表达水平最高（P<0.05）,而Cn、En组表达差异无统计学意义（P>0.05）;Ci、Ei组中二者表达均在感染后7 d明显上调,14 d无显著增加（RORγt：F时间=13.137,P<0.001;IL?17：F时间=11.182, P<0.001）。结论阴道念珠菌感染可上调RORγt、RORα、IL?17表达,提示Th17/IL?17轴可能参与BALB/c小鼠念珠菌性阴道炎发生。     

小鼠白念珠菌性阴道炎局部组织中Th1/Th2因子的表达

目的：研究小鼠白念珠菌性阴道炎局部组织中Th1/Th2细胞因子的表达。方法：构建ICR小鼠白念珠菌性阴道炎模型,采用RT-PCR方法检测不同时间小鼠阴道局部组织中Th1/Th2细胞因子（IL-2/IL-4、IL-10、TGF-β1）的表达。结果：雌激素化组接种小鼠阴道局部组织中IL-2水平在早期显著升高,IL-4则轻度升高,但均很快开始下降。IL-10的水平在感染后期缓慢升高并保持在高水平,而TGF-β1在整个感染过程中均在高水平且高于其他因子。结论：IL-2在感染早期及IL-10在后期的高表达分别与其参与清除及维持白念珠菌感染有关。TGF-β1可能在阴道黏膜缺乏针对白念珠菌的明显细胞免疫时发挥重要作用。     

白介素-27在小鼠白念珠菌性阴道炎局部的表达及其意义

目的：了解小鼠白念珠菌性阴道炎阴道局部白介素-27（IL-27）的水平变化特点和在感染中的作用以及与小鼠机体免疫状况的关系。方法：建立免疫系统正常（A组）与免疫抑制雌激素化（B组）感染小鼠模型，另设未雌激素化免疫系统正常感染对照组（c组），用逆转录聚合酶链检测鼠模型阴道组织中IL-27p28mRNA水平的变化。结果：A组在感染后第4、第7和第14dIL-27p28mRNA的表达高于C组，差异有显著性（P〈0．01）；B组在感染后第7dIL-27p28mRNA的表达高于C组，差异有显著性（P〈0．01）。A组在第4和第14dIL-27p28mRNA的表达水平较B组高（P〈0．01）。A组和B组在感染的第2和第4dCFU与局部IL-27p28mRNA水平成负相关（P〈0．01或P〈0．05）。结论：阴道局部IL-27可能参与实验性小鼠白念珠菌阴道感染的发病，并起到一定的保护作用。免疫抑制状态下白念珠菌易感性的增加可能与IL-27局部组织含量减少有一定关系。     

不同免疫状态下小鼠白念珠菌性阴道炎局部组织中Th1/Th2因子的表达

目的：研究不同免疫状态下小鼠白念珠菌性阴道炎局部组织中Th1/Th2因子的表达。方法：构建ICR小鼠白念珠菌性阴道炎模型D组及地塞米松构建免疫抑制鼠模型G组；采用RT-PCR方法检测D、G、H组（未雌激素化组感染）不同时间局部阴道组织中Th1／Th2因子表达。结果：正常免疫组D组局部组织中IL-2在感染早期升高较为显著，而IL-10仅在后期有短暂的升高。TGF-β1则有持续较高水平的表达。免疫抑制组G组的IL-2水平则明显下降，而IL-4、m一10和TGF-β1则在接种后不同的时间点表达水平不同程度上高于D组。结论：IL-2在感染早期的高表达与其参与清除白念珠菌有关；IL-4、IL-10的表达增加明显提高小鼠对白念珠菌的易感染性。     

念珠菌性阴道炎模型小鼠阴道黏膜中CD11c+树突状细胞的变化

目的:研究白念珠菌感染后,小鼠阴道黏膜树突状细胞(DC)的变化。方法:8~10周龄ICR系小鼠,建立激素依赖型小鼠念珠菌性阴道炎模型,于感染后第2、4、7、14、21d取材,进行阴道灌洗液真菌载量分析及组织病理观察并用免疫组化方法检测小鼠阴道黏膜DC的变化。结果:实验组小鼠阴道灌洗液真菌载量显示,自接种后第2天起即有高水平的CFU计数,并持续到观察期末;阴道组织病理学检查可见大量菌丝附着黏膜表面和黏膜组织内,并有炎性细胞浸润;白念珠菌感染后小鼠阴道黏膜内CD11c DC平均光密度值明显高于对照组(P<0.05)。结论:白念珠菌感染后小鼠阴道黏膜CD11c DC的表达增高,CD11c DC可能参与宿主抗念珠菌感染的免疫机制。     

孕激素在小鼠外阴阴道念珠菌病模型中的作用

目的探讨孕激素在雌激素诱导小鼠外阴阴道念珠菌病模型中的作用。方法 8～10周龄雌性Balb/c小鼠在阴道接种10μL白念珠菌悬液(5×104个孢子)前72h皮下注射不同剂量雌二醇和/或黄体酮,接种后3,7,14和21d各组随机取2只小鼠进行阴道菌落计数和组织病理检查。结果各组菌落计数在接种后3d最高,7d明显减少,21d几乎为0。与E0P0组比较,单用雌激素组在3d和7d菌落计数均明显升高(P<0.05),但单用孕激素组无明显变化(P>0.05)。单用雌激素组的阴道黏膜炎症反应比单用孕激素组出现早、程度重。结论单用孕激素不能有效诱导小鼠阴道白念珠菌感染,但联用雌激素可起到促进或协同作用。     

阴道念珠菌病小鼠模型中单核细胞趋化蛋白-1的表达及其意义

目的检测阴道念珠菌病小鼠模型中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的表达,并对其在阴道念珠菌病发病中的作用进行探讨。方法建立阴道念珠菌病小鼠模型,以免疫组化染色SABC法检测小鼠阴道黏膜中MCP-1蛋白的表达,并应用HMIAS-2000型全自动医学彩色图像分析系统对小鼠阴道黏膜MCP-1的表达进行半定量分析。结果与对照组及正常小鼠相比,感染组小鼠阴道黏膜MCP-1表达水平明显升高,且随时间延长逐渐升高,14天达到高峰,第21天略有下降。结论MCP-1可能在局部阴道黏膜内对白念珠菌的感染起一定的防御作用。     

胸腺基质淋巴细胞生成素与变应性皮肤病

变应性皮肤病是一类Th2细胞占优势并伴有嗜酸粒细胞浸润和XgE升高为特点的一类疾病,Th1/Th2细胞平衡失调是其重要的发病机制.胸腺基质淋巴细胞生成素是一种IL-7样细胞因子,因为其在变应性皮肤病中的独特作用而引起了众多学者的关注.目前认为其可能在启动Th2驱动的变应性皮肤病中起总开关和主调节器的作用.概述胸腺基质淋巴细胞生成素及其受体的结构、胸腺基质淋巴细胞生成素如何诱导Th2型细胞反应以及其在变应性皮肤病中的重要作用.

Abstract：

Allergic dermatoses are a group of diseases characterized by Th2 predominance, eosinophilic infiltration and IgE elevation. The imbalance of Th1ATh2 is an important pathogenesis of allergic dermatoses. Thymic stromal lymphopoietin (TSLP) is an interleukin 7-like cytokine, and has attracted a lot of attention for its distinct roles in allergic dermatoses. Up to now, it has been regarded as a general switch or mater regulator in the triggering of Th2-driven inflammation. Here, the authors review the structure of TSLP and its receptor, how TSLP induces Th2 cell responses and the crucial role of TSLP in allergic dermatoses.     

Transient receptor potential vanilloid-3 (TRPV3) channel induces dermal fibrosis via the TRPV3/TSLP/Smad2/3 pathways in dermal fibroblasts

BackgroundExcessive wound healing can lead to hypertrophic scars, which are not only a cosmetic issue but could also be itchy or painful. Previously, we reported that, in comparison with normal tissue, thymic stromal lymphopoietin (TSLP) expression was increased in skin burn scars when the activation of transient receptor potential vanilloid-3 (TRPV3) of keratinocytes was increased. However, the functional role of TRPV3 in dermal fibrosis remains unclear.ObjectiveWe aimed to determine whether TRPV3 affects the collagen production of human primary dermal fibroblasts (HPDFs) and to investigate the mechanism involved.MethodHuman primary dermal fibroblasts were cultured and transformed into myofibroblasts using TSLP and carvacrol. Expression levels of α-SMA, fibronectin, and COL1A1 were determined using qPCR, western blotting, and immunofluorescence staining. Ca²⁺ influx was measured using a calcium-sensitive fluorescent dye, Fura3-AM. Nuclear factor of activated T-cells (NFAT) and phosphorylated-Smad2/3 were determined by western blotting. Silencing of TRPV3 with TRPV3-specific small interference RNA was evaluated using qPCR and western blotting.ResultsThe expression levels of α-SMA, fibronectin, COL1A1, and TSLP were significantly increased in carvacrol-treated HPDFs. The expression levels of α-SMA, fibronectin, and COL1A1 were significantly increased by TSLP. The expression levels of TSLP and COL1A1 were significantly blocked by TRPV3 silencing in HPDFs. Regulation of Ca²⁺ influx and the expression levels of NFAT and p-Smad2/3 were significantly increased in carvacrol-treated HPDFs. ECM productions induced via the TRPV3/TSLP/Smad2/3 pathways.ConclusionsThe activation of the TRPV3 channels regulates dermal fibrosis by reducing extracellular matrix production via the TRPV3/TSLP/Smad2/3 pathways in dermal fibroblasts.     

TSLP Polymorphisms in Atopic Dermatitis and Atopic March in Koreans

BackgroundAtopic march (AM) is the progression from atopic dermatitis (AD) to allergic rhinitis and asthma. The development of AD is as high as 20% in children worldwide and continues to increase. AD seems to be caused by both genetic and environmental factors. Recently, polymorphisms of the thymic stromal lymphopoietin (TSLP) gene associated with allergic disorders were reported in ethnic groups from various countries.ObjectiveIdentification of TSLP polymorphisms in Koreans with AD or AM.MethodsWhole-exome sequencing was performed in 20 AD and 20 AM patients.ResultsNine single nucleotide polymorphisms (SNPs) of TSLP were detected (rs191607411, rs3806933, rs2289276, rs2289277, rs2289278, rs139817258, rs11466749, rs11466750, rs10073816). These SNPs have been correlated with susceptibility to allergic diseases in ethnic groups from China, Japan, Turkey, and Costa Rica in previous studies. Remarkably, one of 20 patients in the AD group lacked all SNPs, compared to six of 20 patients in the AM group. Odds ratios showed that Korean patients without the nine TSLP variants had an 8.14 times higher risk of moving from AD to AM. Two haplotype blocks were validated in 60 AD and 59 AM patients using Sanger sequencing. The haplotype blocks (rs3806933 and rs2289276) and (rs11466749 and rs11466750) were in high linkage disequilibrium, respectively (D′=0.97, D′=1).ConclusionThe increase of major allele frequency of respective nine TSLP variants may enhance the risk of AM. These data will contribute to improved genetic surveillance system in the early diagnosis technology of allergic disease.     

120例健康育龄妇女阴道sIgA浓度检测及其与阴道念珠菌感染的关系

用放射免疫法检测了１２０例健康育龄妇女、４１例念珠菌性阴道炎患者和２９例阴道念珠菌带菌者阴道ｓＩｇＡ的浓度。念珠菌性阴道炎组根据白带直接镜检下念珠菌的形态分为两组：以孢子、芽管为主者为念珠菌性阴道炎１组，以菌丝为主者为念珠菌性阴道炎　组。结果表明，健康育龄妇女阴道ｓＩｇＡ浓度范围为２０６．０　１００．１　ｇ／ｍｌ，念珠菌带菌者阴道ｓＩｇＡ与健康对照组无差异。念珠菌性阴道炎　组阴道ｓＩｇＡ低于健康对照组，念珠菌性阴道炎　组则相反。     

Filaggrin knockdown and Toll-like receptor 3 (TLR3) stimulation enhanced the production of thymic stromal lymphopoietin (TSLP) from epidermal layers

Keratinocytes constitute the first-line barrier against exogenous antigens and contain Toll-like receptors (TLRs), which function as pattern-recognition molecules to activate antimicrobial innate immune responses. In an effort to ascertain whether or not filaggrin (filament-aggregating protein) expression affected the TLR-mediated responses of keratinocytes, we transfected filaggrin siRNA into HaCaT human keratinocyte cells and determined that thymic stromal lymphopoietin (TSLP) and IL-6 secretion were increased by poly(I:C) stimulus. Additionally, TSLP expression is increased in filaggrin knockdown as well as TLR3 stimulation in reconstituted human epidermal layers. Therefore, the findings of this study show that reduced filaggrin levels may influence innate immune responses via TLR stimuli and may contribute to the pathogenesis of inflammatory skin disease via TSLP expression.     

窄谱中波紫外线对特应性皮炎患者外周血血清胸腺基质淋巴细胞生成素、白细胞介素25及其受体的影响

目的 探讨窄谱中波紫外线（NB-UVB）对特应性皮炎（AD）患者血清胸腺基质淋巴细胞生成素（TSLP）、白细胞介素25（IL-25）及外周血单一核细胞（PBMC）TSLP受体（TSLPR）mRNA、IL-25受体（IL-25R）mRNA表达水平的影响。 方法 AD患者40例,采用NB-UVB照射治疗,双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）检测治疗前后血清中TSLP、IL-25水平;反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测治疗前后PBMC TSLPR mRNA、IL-25R mRNA的表达水平。采用欧洲的AD评分标准（SCORAD）评估疾病严重程度,视觉模拟标尺法（VAS）评价瘙痒程度。选取30例健康体检者作为对照。组间比较采用两独立样本t检验,治疗前后比较采用配对t检验。 结果 患者组经NB-UVB照射后总有效率达75%（30/40）,治疗后SCORAD评分（20.36 ± 5.12）及VAS评分（3.05 ± 1.02）均较治疗前（分别为55.26 ± 10.88和8.20 ± 1.37）明显降低,差异均有统计学意义（t值分别为10.29和8.16,P < 0.05）。AD患者组治疗前血清TSLP［（198.24 ± 29.47） ng/L］、IL-25含量（160.54 ± 34.89 ng/L）及TSLPR mRNA（8.57 ± 1.34）、IL-25R mRNA（6.81 ± 0.50）相对表达量均明显高于健康对照组［分别为（120.13 ± 19.65） ng/L、（120.41 ± 43.07） ng/L、1.94 ± 0.39、1.48 ± 0.47］,差异均有统计学意义（t值分别为29.70、14.65、7.07、18.89,P < 0.05）。NB-UVB治疗显著改善病情后,患者血清TSLP［（151.87 ± 14.78） ng/L］、IL-25含量［（130.52 ± 29.65） ng/L］及PBMC TSLPR mRNA（2.89 ± 0.53）、IL-25R mRNA（3.90 ± 0.37）相对表达量较治疗前明显降低,差异均有统计学意义（t值分别为18.56、9.07、5.21、7.35,均P < 0.05）。治疗后血清TSLP、IL-25含量,PBMC TSLPR mRNA、IL-25R mRNA相对表达量与健康对照组相比,差异均无统计学意义（P > 0.05）。 结论 TSLP、IL-25可能在AD的发病中起重要作用,NB-UVB下调TSLP、IL-25及其受体的表达可能是NB-UVB治疗AD的机制之一。     

IL-33–Induced Atopic Dermatitis–Like Inflammation in Mice Is Mediated by Group 2 Innate Lymphoid Cells in Concert with Basophils

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慢性特发性荨麻疹患者单一核细胞IL-2、4、10受体mRNA的表达

目的 探讨白介素2受体(IL-2R)、白介素4受体(IL-4R)、白介素10受体(IL-10R)在慢性特发性荨麻疹(CIU)患者外周血单一核细胞(PBMC)中的表达及与疾病的相关性.方法 收集30例确诊的CIU患者和30例正常人对照,收集PBMC,提取RNA.应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测研究对象IL-2R、IL-4R、IL-10RmRNA表达水平.结果 CIU患者IL-10RmRNA表达水平比健康人对照组增高,两组分别为0.806±0.072、0.373±0.027,差异有统计学意义(t=5.62,P<0.01).而IL-2R、IL-4RmRNA表达水平患者组与健康人对照组无统计学意义,分别为,IL-2R:0.688±0.357、0.670±0.527,t=1.16,P>0.05;IL-4R:0.679±0.055和0.549±0.049,t=1.77,P>0.05.结论 CIU患者IL-10RmRNA表达水平比健康人对照组增高,而IL-2R、IL-4RmRNA表达水平与健康人对照组无统计学意义.CIU患者存在T淋巴细胞细胞因子受体表达的异常.     

带状疱疹患者皮损程度与血清特异性IgG抗体、IgM抗体、IL-2、IL-10关系的研究

目的：了解带状疱疹患者不同皮损状态下血清水痘一带状疱疹病毒IgG抗体、IgM抗体、IL-2、IL-10的表达情况。方法：应用ELISA方法对带状疱疹30例早期轻症患者、30例早期重症患者、26例恢复期患者和30例正常对照血清IgG抗体、IgM抗体进行检测，同时检测了部分患者和健康者IL-2、IL-10的水平。结果：IgG抗体在早期轻症组与早期重症组、正常对照组之间有差异，与恢复期之间无差异，但在早期重症组与恢复期、正常对照组三者之间也无差异；IgM抗体、IL-2在四组之间无差异；IL-10在早期重症组高于早期轻症组，恢复期组和正常对照组与其相比均有显著性差异，而早期轻症组、恢复期组、正常对照组三者之间并无差异；IgG抗体、IgM抗体与IL-2、IL-10以及IL-2／IL-10之间经相关分析均无相关性。结论：带状疱疹患者血清IgG抗体、IgM抗体和IL-2水平与皮损严重程度之间无明显关系，IL-10水平在早期重症患者明显升高。