大鼠丘脑前核神经元内γ-氨基丁酸及其受体的表达

目的:探讨大鼠丘脑前核内γ-氨基丁酸(GABA)及其GABAA受体(GABAARα1和β2subunits)的表达,从形态学角度为系统研究丘脑前核的功能提供依据。方法:分别采用包埋后胶体金免疫电镜技术和原位杂交检测丘脑前核内GABA及GABAARα1和β2mRNA的表达。结果:(1)在丘脑前核,GABAARα1和GABAARβ2阳性神经元分布较密集,细胞形态较一致。空白对照切片为阴性,未见GABAARα1和GABAARβ2mRNA表达阳性神经元。(2)GABA胶体金免疫反应切片上,GABA胶体金颗粒浓重标记GrayⅡ型轴突终末,而树突、神经元、胶质细胞及背景标记极少。GABA能阳性轴突终末与中小型树突形成对称性轴-树突触,也与神经元胞体形成对称性轴-体突触。结论:提示在丘脑前核能够合成GABAARα1和GABAARβ2,且GABA能轴突终末与神经元的树突或胞体形成对称性突触。     

谷氨酸受体与γ-氨基丁酸_A受体在APPswe转基因小鼠海马结构中的表达

目的探讨谷氨酸受体和γ-氨基丁酸A(GABAA)受体在阿尔茨海默病(AD)发生、发展中的作用。方法利用免疫荧光技术标记正常及APPswe转基因小鼠P0至P360各年龄段海马CA3区N-甲基-D-天门冬氨酸受体亚单体1(NMDAR1)、GluR2/3和GABAARα1-6阳性细胞,并利用免疫印迹法对海马组织内NMDAR1和GABAARα1-6的活化片段进行半定量分析。结果在模型组与对照组小鼠海马CA3区,NMDAR1、GluR2/3和GABAARα1-6在出生后P7时明显增加,P30达到高峰,以后逐渐下降至成年水平;与同龄对照组相比,老龄(P360)模型鼠NMDAR1和GluR2/3阳性细胞密度明显减少(P0.05),而GABAARα1-6阳性细胞密度变化不明显(P0.05)。免疫印迹法检测结果与免疫荧光技术统计结果吻合。结论 NMDAR1和GluR2/3表达下降与AD相关的神经退行性疾病有关;而GABAARα1-6在AD发病中的作用尚不能确定。     

GABA和GABAARα1在皮质发育障碍模型鼠大脑中的表达

目的:观察液氮损伤诱导局灶性皮质发育障碍(FCD)大鼠脑皮质和海马中γ-氨基丁酸(GABA)和),γ-氨基丁酸A受体α1亚型(GABAARα1)的表达,探讨其与癫癎发生的关系。方法:实验随机分为正常对照组、假手术组和液氮损伤组,建立FCD大鼠模型,喂养至16～18周处死取脑,经病理学HE、Nissl染色,免疫组织化学方法用SABC法,肉眼观察,光镜下观察小脑回及周围结构和海马CA1～CA4、齿状回中GABA和GABAARα1阳性细胞表达情况,免疫组化图像仪分析。结果:大鼠脑嘴尾方向形成了一微脑回。在液氮冻损伤组,微脑回及前额和海马CA1、齿状回的GABA和GABAARα1阳性着色神经元的表达均较正常对照组或假手术组的表达减少,经统计学分析差异有显著意义(P<0．05),但在其他脑皮质和海马结构区的表达则无明显改变。结论:微脑回及周围和同侧海马结构中CA1及齿状回的GABA和GABAARα1下调和抑制功能的降低可能在癫癎发病机制中起到了重要作用。     

NMDA受体1和雌激素受体在白细胞介素-2致痫大鼠脑内的表达变化和共存

目的 探讨白细胞介素2(IL-2)致痫与NMDA受体(NMDAR)和雌激素受体(ER)的关系.方法 应用免疫组织化学、免疫荧光双标和激光共焦显微镜技术研究IL-2致痫大鼠及经免疫抑制剂预处理后再致痫大鼠脑内NMDAR-1、ER的表达变化以及NMDAR/ER和NMDAR/IL-2R共存情况.结果 大鼠侧脑室注射IL-2以后,动物出现明显的癫痫发作,其大脑皮质和海马部位NMDAR-1及ER表达较对照组明显增多,免疫反应平均吸光度(A)值与对照组相比有极显著性差异;而用IL-2抑制剂环胞霉素(CsA)或糖皮质激素(G)预处理后再注射IL-2,动物未出现或仅出现轻微的癫痫发作,其NMDAR-1和ER表达较IL-2组明显减少(P＜0.05).研究还观察到大鼠脑内大脑皮质和海马部位NMDAR/ER或NMDAR/IL-2R之间存在着广泛共存.结论 IL-2有致痫作用,NMDAR-1、IL-2R和ER在致痫活动中可能存在协同和互动作用.     

经皮三叉神经电刺激减轻戊四氮诱导的大鼠癫痫发作并抑制海马内IL-1β和TNF-α的表达

 目的:探讨经皮三叉神经电刺激预处理对戊四氮（PTZ）诱发的急性癫痫大鼠的行为学及海马致痫细胞因子白细胞介素1β(IL-1β)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)的影响。方法:动物随机分为对照组、致痫组（PTZ组）和经皮三叉神经电刺激组,分别给予7 d、14 d和28 d的假刺激和三叉神经电刺激预处理后,腹腔注射PTZ 建立急性癫痫动物模型,观察给药后大鼠癫痫行为学表现,并分别用免疫组织化学方法及ELISA方法对海马IL-1β、TNF-α进行检测。结果:经皮三叉神经电刺激可以明显减轻大鼠的痫性发作级别,减少癫痫发作持续的时间（P<0.05）, 且海马细胞因子IL-1β及TNF-α的表达明显少于PTZ组（P<0.05或P<0.01）。结论:经皮三叉神经电刺激预处理在PTZ 急性点燃癫痫大鼠模型中不仅具有抗惊厥作用, 还可以减少海马致痫细胞因子IL-1β及TNF-α的表达,可能为癫痫的防治带来新的策略。       

大鼠中枢运动核团内谷氨酸受体、GABAA受体、甘氨酸受体和阿片μ受体的定位分布

目的观察大鼠中枢运动核团内谷氨酸受体、γ-氨基丁酸受体(GABAAR)、甘氨酸受体(GlyR)和阿片μ受体(MOR)的定位分布,搞清谷氨酸、GABA、甘氨酸和脑啡肽在中枢运动核团内的作用部位. 方法免疫组织化学染色技术. 结果在动眼神经核、滑车神经核、三叉神经运动核、展神经核、面神经核、疑核、舌下神经核、E-W核、上涎核、迷走神经背核和脊髓前角内均可见NMDAR1样和GluR2/3样阳性胞体,但NMDAR1样和GluR2/3样阳性纤维和终末仅见于动眼神经核、E-W核、滑车神经核、三叉神经运动核和迷走神经背核,除三叉神经运动核、疑核和脊髓前角能见到少量GABAAR β亚单位样阳性胞体外,上述各核团也可见GABAAR β亚单位样阳性的纤维和终末,而GABAARα亚单位样阳性胞体主要见于疑核、舌下神经核、迷走神经背核和脊髓前角;中枢运动核团内均可见GlyR和MOR样阳性的纤维和终末. 结论谷氨酸、GABA、甘氨酸和脑啡肽在中枢运动核团可能通过突触前和突触后机制,对中枢运动神经元发挥调控作用.     

地塞米松和苯妥英钠对癫痫大鼠脑内的GFAP和Fos表达的抑制作用

目的：探讨糖皮质激素（GC）的抗痫效应和抗痫机制。方法：动物行为学观察和免疫细胞化学染色。结果：戊四氮（PTZ）可诱发癫痫大发作,如诺在注入PTZ前30min先注入地塞米松或苯妥英钠（DPH）能减轻或抑制大鼠癫痫发作症状。免疫细胞化学染色结果表明,PTZ致痫组大鼠大脑皮质、海马回、齿状有大量肥大的胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）阳性的星形胶质细胞。GC或DPH抗痫组GFAP免疫反应明显减弱,阳性细胞数量减少,突起短而少,Fos蛋白在PTZ组大鼠致痫后1－1．5h有大量表达,而在上述两抗痫组显著少于PTZ致痫组。结论：1．通过与苯妥英钠（传统抗痫药）的抗痫效果相比较,进一步证明糖皮质激素具有抗痫效应。2．糖皮质激素的抗痫机制可能与抑制星形胶质细胞的活动有关。3．Fos蛋白表达的变化与癫痫活动有直接关系。     

IL-1β对谷氨酸致痫大鼠大脑皮质、海马内NMDAR_1免疫反应变化的影响

为了进一步探讨 IL -1β在促进癫痫发作中的机制 ,用免疫组织化学方法比较了单纯用致痫量谷氨酸钠致痫的大鼠和预先向侧脑室注射 IL-1β再用阈下剂量的谷氨酸钠共同致痫的大鼠脑内 NMDAR1 免疫反应的变化。结果表明 ,IL-1β和谷氨酸钠共同致痫的大鼠大脑皮质及海马 CA3区 NMDAR1 免疫反应较对照组明显增强 (P<0 .0 5 ) ,与单纯用谷氨酸钠致痫的大鼠没有明显区别。如果预先给予 IL-1ra或 D-AP5则 IL-1β和谷氨酸钠的共同致痫效果不出现 ,脑内 NMDAR1 免疫反应与对照组比较未见明显增强 (P>0 .0 5 )。本实验结果表明 ,IL -1β具有促进癫痫发作的效应 ,这种促癫痫效应的发挥与谷氨酸受体具有协同作用 ,并与通道型 NMDA受体 R1 亚单位表达的增加有关     

颈部迷走神经干刺激对癫痫大鼠脑内Fos样表达的影响

目的 研究颈部迷走神经干刺激（VNS）抑制癫痫发作上传通路过程中的关键核团及相关脑区。方法 利用红藻氨酸（KA）诱发大鼠复杂部分性癫痫发作。并结合Fos免疫组织化学方法观察左颈部迷走神经干电刺激后全脑及延髓内Fos的分布及电刺激的影响。结果 VNS后脑干双侧孤束核、蓝斑、臂旁核、中脑导水管周围灰质有很强的特异性Fos表达，外侧缰核、丘脑室旁核、菱形核、下丘脑室旁核、杏仁中央核、终纹床核、隔外侧核、梨状皮质等脑区亦可见Fos阳性细胞。预先给予电刺激后海马、齿状回、额、顶、颞皮质区域Fos表达明显受到抑制。结论 VNS后Fos阳性的脑区及核团可能是电刺激发挥抑痫作用的关键部位，其神经元活性的改变或递质调节可能间接或直接影响大脑皮质的功能。     

大鼠迷走神经刺激的启动时间与抗痫效果

目前迷走神经刺激术 (vagusnervestimulation ,VNS)在临床应用中存在的主要问题是怎样实施才能最大限度地发挥其应有的作用。为此 ,我们用海人藻酸复制大鼠癫痫模型 ,以ECoG、行为学表现为观测指标 ,探讨VNS的启动时间是否与癫痫治疗的效果有关。1　材料和方法1 1　动物及分组 :Wistar大鼠 34只 ,腹腔注射 3%戊巴比妥钠 (4 0mg/Kg) ,刺激电极安放在左侧迷走神经干 ,利用银球电极记录ECoG。颈部皮下注射海人藻酸 (10mg/kg体重 )致痫。实验动物随机分为 (1)海人藻酸致痫组 (KA组 ) ;(2 )痫性发作前先行VNS组 (VNS +KA组 ) ;(3)痫性…     

糖皮质激素对致痫大鼠的行为、脑电图和代谢型谷氨酸受体1α的影响

目的探讨糖皮质激素的抗痫效应。方法应用脑电图仪和免疫细胞化学方法,分别研究地塞米松对马桑内酯或戊四氮致痫大鼠的脑电图（ＥＥＧ）和代谢型谷氨酸受体１α（ｍＧｌｕＲ１α）免疫反应性的影响,并观察大鼠行为的改变。结果大鼠注射马桑内酯或戊四氮前３０ｍｉｎ经静脉注入地塞米松,能防止严重的癫痫发作症状和脑电图中高电位的痫波发放,并能减少ｍＧｌｕＲ１α在海马区的表达。结论地塞米松具有抑制马桑内酯或戊四氮诱发癫痫的作用,海马内的ｍＧｌｕＲ１α可能在癫痫活动中起一定作用,地塞米松的抗痫效应可能与降低ｍＧｌｕＲ１α的表达有关。     

白细胞介素1β对谷氨酸致痫大鼠海马mGluR2和mGluR3 mRNA表达的影响

目的 探讨IL-1β对谷氨酸(Glu)致痫大鼠mGluR2和mGluR3 mRNA表达的影响。方法 将大鼠分为对照组；Glu组；IL-1β Glu组；IL-1β组；IL-1β D-AP5 Glu组，观察大鼠的行为变化，用RT-PCR半定量分析mGluR2和mGluR3 mRNA的表达。结果 IL-β Glu组大鼠的痫性发作潜伏期比Glu组明显缩短，发作程度也较重；mGluR2和mGluR3 mRNA在IL-1β Glu组和Glu组中的表达比其他组都显著增强，而mGluR2mRNA在IL-1β Glu组的表达与Glu组比较明显下降，mGluR3的表达在这两组中无明显差别。结论 IL-1β可能通过下调mGluR2的表达而促进癫痫发作。     

IL-1β对谷氨酸钠致痫大鼠海马代谢型谷氨酸受体5的表达的影响

目的：探讨IL-1β对谷氨酸钠(GluNa)致痫大鼠海马代谢型谷氨酸受体(mGluR)5的表达变化的影响。方法：把大鼠随机分为生理盐水组、GluNa组、IL-1β GluNa组、人重组IL-1受体拮抗剂(rhIL-1ra) IL-1β GluNa组及D-AP-5(非竞争性NMDA受体拮抗剂) IL-1β GluNa，利用免疫组织化学并结合图像分析进行研究。结果：Glu-Na注射后的大鼠均出现严重癫痫发作。mGluR5表达在生理盐水组大鼠海马中丰富，GluNa致痫组则明显下调，IL-1β GluNa组比GluNa组明显下调，rhIL-1ra IL-1β GluNa组和D-AP-5 IL-1β GluNa组比IL-1β十GluNa组明显增加。同时观察到3个组的mGluR5的表达主要集中在细胞膜上。结论：mGluR5在癫痫发作后表达下降可能在癫痫诱导过程方面具有重要作用，其与IL-1β受体之间可能存在相互作用。     

灵芝孢子粉对癫痫大鼠脑IGF-1、NF-κB表达及神经细胞凋亡的影响

目的： 观察和探讨灵芝孢子粉对戊四氮（PTZ）致痫大鼠脑胰岛素样生长因子-1（IGF-1）、核转录因子-κB（NF-κB）蛋白表达及神经细胞凋亡的影响。方法： 用亚惊厥剂量的PTZ复制大鼠慢性癫痫模型，用药组以灵芝孢子粉灌胃，记录癫痫发作的潜伏期及持续时间，采用免疫组织化学和TUNEL法分别检测脑IGF-1、NF-κB/P65的免疫反应性和神经细胞凋亡情况。结果： 大鼠海马和皮质区每高倍视野（×400）下平均凋亡细胞数模型组（18.80±2.13、16.87±2.00）明显多于对照组（0.97±0.52、0.58±0.25），IGF-1、 NF-κB/P65蛋白表达模型组明显高于对照组（均P<0.01）；在造模第17、21、25 d时用药组较模型组癫痫发作的潜伏期有所延长（分别为P<0.05，P<0.05，P<0.01），海马和皮质区凋亡细胞数用药组（12.30±2.46、10.48±1.33）明显少于模型组，NF-κB/P65蛋白表达用药组低于模型组，而IGF-1的免疫反应性用药组明显强于模型组。结论： IGF-1、NF-κB 及神经细胞凋亡均可能参与了PTZ致痫的发生发展过程,灵芝孢子粉能明显抑制NF-κB蛋白的表达，增强IGF-1的免疫反应性，可能是其对癫痫所致神经细胞凋亡有明显抑制，从而对神经细胞起保护作用的机制之一。     

戊四唑致痫大鼠脑内缝隙连接的作用

目的: 研究缝隙连接(gap junction, GJ)在癫痫发病中的作用及机制。方法: 以戊四唑 (pentylene-tetrazol, PTZ)致痫大鼠模型为研究对象,采用免疫组织化学和实时定量RT-PCR技术,分别检测缝隙连接蛋白Cx32和Cx43在癫痫发作后不同时点皮层和海马神经元的表达。加用卡马西平(carbamazepine, CBZ)和甘珀酸(carbenoxolone, CBX)干预,观察二者对Cx32/43表达以及大鼠癫痫发作的影响。结果: 免疫组织化学染色显示PTZ致痫2 h后大鼠脑内Cx32/43阳性细胞开始增多,8 h后增多更为明显。实时定量RT-PCR示致痫2 h Cx32 mRNA迅速升高,5 h达高峰。Cx43 mRNA表达水平较低,但明显高于对照组。CBX显著抑制了Cx32/43的表达,CBZ对Cx32和Cx43的表达无明显影响。二者均抑制了大鼠的痫样发作。结论: GJ参与癫痫的发病过程,具有促进癫痫发作的作用。CBZ不影响Cx32/43的表达,表明其抗癫痫作用机制与阻断GJ 无关。     

癫痫大鼠海马NMDA受体亚基NR2A和BDNF mRNA水平的检测

目的 通过锂-匹罗卡品癫痫模型(ithium-pilocarpine seizures rats model of epilepsy,LPS),研究NMDA受体亚基NR2A、BDNF mRNA的表达,探讨NR2A、BDNF在LPS中的作用.方法 建立氯化锂-匹罗卡品大鼠模型,运用原位杂交技术检测致痫后各组不同时间点海马CA1、CA3及DG区NR2A与BDNF mRNA的表达.结果 LPS海马NR2A、BDNF mRNA在各观察时间点及部位模型组与正常对照组比较均有明显上调,且有显著统计学差异(P＜0.05).模型组NR2A mRNA的表达上调7 d达峰值(P＜0.05);而BDNF mRNA表达上调14 d达峰值.VPA干预组NR2A mRNA在大鼠海马不同时间及部位(除1 d的CA3区)的表达较模型组明显下调(P＜0.05);BDNF mRNA在大鼠海马不同时间及部位(除28 d的DG区)的表达较模型组明显下调(P＜0.05).结论 锂-匹罗卡品腹腔注射可诱导大鼠海马NR2A和BDNF mRNA的表达明显上调;NR2A mRNA表达的增强可能是诱导调控BDNF mRNA表达增强的重要机制之一,说明NMDA受体亚基NR2A可能成为抑制癫痫发作的新靶点.     

白细胞介素-1β或白细胞介素-6致痫大鼠脑内γ-氨基丁酸和谷氨酸免疫反应性的变化

目的研究白细胞介素-1β（IL-1β）和白细胞介素-6（IL-6）致痫过程中谷氨酸（Glu）和γ-氨基丁酸（GABA）在大脑皮质及海马内表达的变化,探讨IL-1β及IL-6在癫痫发病中的作用机制。方法大鼠随机分为生理盐水对照组、IL-1β组、IL-6组,侧脑室注射相应试剂120min后观察大鼠行为变化,并采用免疫组织化学方法检测大脑皮质及海马内Glu及GABA的表达变化。结果动物行为学观察,生理盐水对照组无明显癫痫发作,IL-1β组、IL-6组发作程度达中度。免疫组织化学染色显示,在注射IL-1β或IL-6 120min后,IL-1β、IL-6组Glu表达在大脑皮质及海马较对照组明显升高,GABA表达较对照组明显降低,差异显著。结论IL-1β或IL-6可能通过升高Glu含量并降低γ-氨基丁酸的含量参与促痫和致痫过程,从而使神经元兴奋性升高促进癫痫发作。     

丹参对急性痫性痉挛大鼠模型的影响

目的观察丹参对急性痫性痉挛模型大鼠行为学、脑电图和脑内胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）表达的影响,观察丹参的抗痫效果。方法将24只大鼠随机分为戊四氮（PTZ）致痫组、丹参干预组和正常对照组,戊四氮致痫组大鼠腹腔注射戊四氮（75 mg/kg）;丹参干预组先给大鼠腹腔注射丹参注射液（10 ml/kg）,30 min后再腹腔注射戊四氮;正常对照组大鼠腹腔注射等量的生理盐水。大鼠注射戊四氮后,观察其行为学改变,描记脑电图。各组大鼠于戊四氮注射24 h和72 h后处死,取含有海马的脑组织行GFAP免疫组织化学染色,光镜观察、照相,并用图像分析系统对各组大鼠海马结构内GFAP阳性细胞进行计数和平均灰度值测定。结果 （1）行为学改变：丹参干预组大鼠痫性发作等级和发作时间明显小于戊四氮致痫组（P〈0.05）。（2）脑电图显示,两组在发作期无明显的脑电图改变;在发作后恢复期,丹参组与PTZ组相比,脑电图出现棘波的频率低（1次/5s vs 8次/5s）,波幅低。（3）免疫组织化学结果显示：①24 h组：与正常组大鼠相比,PTZ组海马内GFAP表达量增多,以齿状回和CA3区最为明显。GFAP阳性细胞突起增多、增粗、分支增多,细胞着色加深。丹参治疗组GFAP表达较注射PTZ组增多,阳性细胞数量增加,突起数目增多,长度增长,细胞着色更深。②72 h组：PTZ组和丹参组与正常组相比,GFAP的表达无明显差异。结论丹参可以明显降低急性痫性痉挛模型大鼠的发作等级和发作时间,癫痫发生后24 h海马内GFAP表达增多对机体可能有保护作用;丹参可能是通过促进GFAP表达增高来发挥治疗作用。     

电针耳甲对癫痫大鼠行为学和脑电图的影响

目的: 探讨电针耳甲对癫痫大鼠的抑制效应及机制。方法: 健康成年雄性SD大鼠48只。行为学实验分为模型组、大椎组和耳甲组,每组8只。模型组大鼠腹腔注射戊四唑(PTZ)60 mg/kg造成急性癫痫模型。大椎组和耳甲组分别电针"大椎"和耳甲后腹腔注射PTZ。比较3组大鼠行为学的变化。电生理实验分为大椎组、颈迷走神经刺激组(VNS)组和耳甲组,每组8只,比较电针"大椎"、VNS和电针耳甲对癫痫大鼠脑电图的影响。结果: 与模型组和大椎组相比,耳甲组大鼠第1次大发作潜伏期延长,第1次大发作持续时间缩短,行为学积分减少。电针耳甲抑制脑电图癫痫波的时间与电针"大椎"相比增加;与VNS相比差异无显著。结论: 电针耳甲抑制癫痫发作的效应优于电针"大椎",与VNS相比无明显差异。由于电针耳甲创伤小,费用低,而且无明显副作用,可以作为治疗癫痫的替代疗法之一。     

TNF受体封闭肽对大鼠腹腔巨噬细胞功能的影响

目的：观察TNF受体封闭肽在体外对大鼠腹腔巨噬细胞功能的影响。方法：用NBT的方法检测呼吸爆发；用RT—PCR检测大鼠腹腔巨噬细胞IL-1β mRNA和TNF-α mRNA水平；用Western blot检测大鼠腹腔巨噬细胞NF-kBp65核转位。结果：TNF受体封闭肪可完全拮抗TNF-α诱导大鼠腹腔巨噬细胞呼吸爆发，明显抑制TNF-α诱导的IL-1βmRNA和TNF-αmRNA的转录，使腹腔巨噬细胞TNF-α诱导的NF-kBp65核转位明显减少。结论：TNF受体封闭肽在体外能有效抑制TNF-α诱导的大鼠腹腔巨噬细胞功能。