白细胞介素-17在狼疮性肾炎外周血单个核细胞上的表达及意义

目的　探讨白细胞介素 - 17(IL - 17)在狼疮性肾炎患者 (LN)外周血单个核细胞 (PBMC)表达和分泌及其与LN疾病活动性的关系。方法　用酶联免疫吸附法 (ELISA)检测LN活动期患者血浆及PBMC体外自发培养或刺激培养的上清液中IL - 17蛋白水平 ,流式细胞仪免疫荧光分析法检测PBMC表达IL - 17的水平 ;用逆转录 -聚合酶联反应 (RT -PCR)法测定LN活动期患者PBMC体外自发培养和刺激培养后的IL - 17mRNA的表达水平。结果　LN活动期患者血浆检测不出IL - 17(<5ng/L) ;PBMC自发培养和PHA刺激培养下 ,LN活动期、LN静止期和正常对照 ,三组均检测不出IL - 17;而PBMC在CD3mAb +CD2 8mAb和PMA +ionomycin刺激培养下 ,较自发培养和PHA刺激培养 ,上述 3组IL - 17水平均明显升高 (P <0 .0 1) ,LN活动期PBMC表达、分泌IL - 17水平与SLE疾病活动指数 (SLEDAI)呈明显正相关。结论　LN活动期患者PBMC表达、分泌IL -17水平存在明显异常 ,并能反映LN疾病活动程度     

白细胞介素13诱导足细胞损伤及其作用机制

目的:探讨Th2细胞因子IL-13是否直接介导足细胞损伤,并初步探讨其作用机制. 方法:RT-PCR和免疫组化方法检测温度敏感的小鼠足细胞系(HSMP)上IL-13受体的mRNA和蛋白质表达.使用不同浓度(10 ng/ml,50 ng/ml,100 ng/ml)的IL-13干预足细胞不同时间(8h、12h、24h),免疫荧光法分析足细胞骨架相关蛋白F-actin和细胞间连接蛋白ZO-1的变化情况.并进一步应用Western blot方法检测细胞内信号通路STAT 6的磷酸化水平,探讨IL-13损伤足细胞的作用机制. 结果:HSMP上存在IL-13 Ⅰ型受体mRNA和蛋白质表达.骨架蛋白F-actin和ZO-1的染色结果显示:IL-13可呈剂量和时间依赖性对足细胞造成损伤.50ng/ml IL-13作用24h即可造成足细胞明显损伤.F-actin变细、紊乱,向细胞边缘聚集;ZO-1明显减弱和断裂.进一步的研究还表明,IL-13可诱导足细胞内细胞因子相关的STAT 6信号通路的活化.STAT 6信号通路特异性抑制剂leflunomide可阻断IL-13对足细胞骨架蛋白结构和细胞间连接蛋白的影响. 结论:足细胞表面存在IL-13受体,IL-13可通过与其受体结合损伤足细胞的骨架结构和细胞间连接蛋白.IL-13对足细胞的损伤作用与STAT 6信号通路的活化有关.     

白细胞介素10对肝星状细胞激活的调节

目的 探讨白细胞介素10(IL-10)通过血小板衍生生长因子(PDGF)和丝裂原活化激酶(MAPK)信号通路蛋白对肝星状细胞(HSC)激活的影响。 方法 将培养的HSC随机分为4组:1组:对照组;2组:加入1 ng/ml IL-10;3组:加入5 ng/ml IL-10;4组:加入25 ng/ml IL-10。培养2d后,逆转录-聚合酶链反应法检测各组细胞中PDGF mRNA的表达;western blot法检测各组细胞PDGF、MAPK信号通路蛋白细胞外信号调节激酶(ERK)和p38以及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。 结果 1、5、25 ng/ml的IL-10作用后,与对照组相比HSC的ERK、p38以及α-SMA的表达显著降低(F值分别为240.47、21.39、28.86,P值均<0.01),并呈量效依赖关系;5、25 ng/ml的IL-10可以使PDGF表达显著降低(P值均<0.01),并呈量效依赖关系。 结论 IL-10可通过PDGF/MAPK信号通路抑制肝星状细胞激活。     

CHB患者Th17-Treg失衡中IL-21的作用及机制

目的研究慢性乙型肝炎(CHB)患者外周Th17/调节性T细胞(Treg)失衡中IL-21的作用及其初步机制。方法流式细胞仪分别检测59例CHB患者和20例健康人外周血细胞中Th17细胞和Treg细胞频数,同时以ELISA法检测血清细胞因子IL-21、IL-17、IL-10、TGF-β水平。体外分别以IL21、IL-2刺激CHB患者外周血单核细胞(PBMC),以实时PCR检测培养细胞转录因子RORγt mRNA及Foxp3 mRNA表达水平,以ELISA法检测培养上清细胞因子IL-17、IL-10和TGF-β水平。结果与正常人群相比,IL-21、IL1 7、TGF-β水平显著升高(P均0.05),CHB患者外周Th17/Treg比例显著升高(P0.05),IL-21水平与Th1 7/Treg比例呈正相关(P=01.008)。与IL-2相比.IL-21刺激CHB患者PBMC的RORγt mRNA表达水平明显升高(P=0.016)而Foxp3 mRNA表达水平明显降低(P=0.018),相对应的培养上清中,IL-1 7水平显著上升(P=0.049)而IL-10、TGF-β水平明显降低(P=0.017,P=0.004)。结论 C、HB患者中IL-21能通过提高RORγt mRNA表达,同时抑制Foxp3 mRNA表达进而促进Th1 7/Treg失衡。     

胆管癌细胞中白细胞介素-6/Stat3通路对c-Met的调控作用

目的探讨胆管癌细胞中白细胞介素(IL)-6/Stat3和肝细胞生长因子(HGF)/c-Met通路的活化情况及其相互调控作用。方法体外培养胆管癌细胞HCCC-9810,应用Western印迹检测IL-6/Stat3和HGF/c-Met通路的活化及其相互调控,用ELISA试剂盒检测HCCC-9810细胞IL-6和HGF的分泌,RT-PCR检测IL-6/Stat3对c-Met转录的影响。结果胆管癌细胞HCCC-9810中Stat3和c-Met均呈高度磷酸化,HCCC-9810细胞有较高水平IL-6分泌,无HGF分泌。IL-6/Stat3通路通过增强c-Met的稳定性维持胆管癌细胞c-Met的高表达,进而导致c-Met的异常活化。结论胆管癌细胞中IL-6/Stat3信号通路对c-Met的异常活化起重要作用,IL-6/Stat3信号通路能通过c-Met信号通路发挥促胆管癌作用。     

普伐他汀抑制C-反应蛋白诱导的人外周血单核细胞白细胞介素-6 mRNA表达

目的观察普伐他汀对急性冠状动脉综合征(ACS)患者外周血单核细胞(PBMC)在一定浓度的C-反应蛋白(CRP)诱导下IL-6基因表达与分泌的影响.方法体外培养3组人群[ACS组(15例)、稳定型心绞痛组(SAP组,13例)与对照组(15例)]的PBMC,CRP(20μg/ml)刺激24 h.普伐他汀以不同浓度(0.1×10-6,1×10-6,5×10-6 ,10×10-6mol/L)预先孵育ACS组PBMC 2 h后继以CRP刺激24 h.酶联免疫吸附试验(ELISA)分析培养液上清中的IL-6水平,RT-PCR分析细胞IL-6 mRNA表达水平.结果20μg/ml CRP刺激状态下3组的IL-6分泌均较其基础状态显著增加(P<0.05),CRP明显增加PBMC IL-6的分泌;ACS组PBMC受CRP刺激后IL-6表达水平为(3129.5±333.4 )ng/L,较对照组(987.3±102.3)ng/L和SA组(990.9±134.8) ng/L明显增高(P<0.05).普伐他汀以剂量依赖方式下调ACS组PBMC IL-6mRNA表达和IL-6分泌.结论CRP明显增强ACS组PBMC IL-6mRNA表达和IL-6分泌.一定浓度的CRP能诱导血单核细胞IL-6表达增加,在ACS患者中更为明显,普伐他汀有效降低CRP对ACS患者单核细胞的致炎症效应.     

肾小球系膜细胞白细胞介素-6基因表达与白细胞介素-13的关系

目的探讨白细胞介素-13(IL-13)对于体外培养大鼠系膜细胞白细胞介素-6(IL-6)分泌及其基因表达的影响,以研究IL-13对肾小球疾病状态下肾脏系膜细胞炎症反应的抑制作用。方法用酶联免疫吸附法(ELISA)测定系膜细胞IL-6分泌量,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测系膜细胞IL-6mRNA表达。结果正常培养条件下系膜细胞IL-6mRNA表达及IL-6分泌水平较低,脂多糖(LPS)可刺激系膜细胞IL-6mRNA的表达及IL-6分泌水平,而IL-13则呈剂量依赖性地抑制LPS诱导的系膜细胞IL-6分泌及其mRNA表达。结论IL-13抑制LPS诱导的体外培养的系膜细胞IL-6产生,故可能对于肾小球疾病状态下肾脏的系膜细胞炎症反应具有抑制作用。     

穿心莲内酯对慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞的免疫调节作用

目的 探讨穿心莲内酯对体外培养慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血单个核细胞(PBMC)表达Th1细胞因子IFN-γ mRNA及Th2细胞因子IL-4 mRNA和IL-10 mRNA的影响及其抗HBV的活性.方法 分别应用穿心莲内酯10mg/L(实验组)及0.1%二甲基亚砜(对照组)加入细胞培养液中刺激CHB患者PBMC.不同浓度穿心莲内酯(实验组)及阿德福韦(对照组)刺激HepG2.2.15细胞系,实时荧光定量PCR检测处理后PBMC的IFN-γ tuRNA、IL-4 mRNA及IL-10mRNA表达水平及HepG2.2.15细胞系HBV DNA复制水平.结果 穿心莲内酯10 mg/L处理16 h后,实验组PBMC的IFN-γ mRNA表达水平高于对照组(Z=-2.78,P=0.05),IL-4 mRNA及IL-10 mRNA的表达水平明显低于对照组(Z=-3.82,P<0.01),IFN一γ/IL-4 mRNA的比例较对照组明显提高(Z=-3.82,P<0.01),不同浓度穿心莲内酯对HepG2.2.15细胞系HBV DNA复制无明显影响(t=11.88,P>0.05),而阿德福韦对HBV DNA有抑制作用(t=15.95,P<0.05).结论 穿心莲内酯对CHB患者PBMC内IFN一γ mRNA、IL-4 mRNA及IL-10 mRNA的表达水平有调节作用,改善Th1/Th2平衡,对HBV DNA无直接抑制作用.     

MicroRNA-26b对糖氧剥夺诱导的BV-2细胞表达白介素-6的靶向调控作用研究

目的研究microRNA-26b对糖氧剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)诱导BV-2细胞释放白介素-6(interleukin6,IL-6)的影响。方法 OGD诱导小鼠胶质细胞系BV-2细胞活化,通过ELISA和RT-qPCR定量培养上清IL-6浓度及BV-2细胞IL-6 mRNA水平。转染IL-6microRNA-26b模拟物(miR-26b mimics)和阴性对照(negative control,NC)至BV-2细胞后,经OGD处理检测培养上清IL-6浓度。通过共转miR-26b mimics和携带有IL-6 mRNA3'UTR的双荧光素酶报告质粒至293T细胞,明确miR-26b对IL-6的靶向调节作用。结果与对照组比较,经1 h OGD处理后的BV-2细胞IL-6 mRNA水平和培养上清中IL-6增加(P<0.05);转染microRNA-26b可以减少OGD引起的IL-6释放(P<0.05);共转miR-26b和双荧光素酶报告质粒后萤火虫荧光素酶活性高于对照组(P<0.05)。结论microRNA-26b可结合至IL-6 mRNA的3'UTR区,可能通过这一机制下调OGD诱导的BV-2细胞IL-6表达。     

老年支气管哮喘患者Tim-3 mRNA表达水平及作用机制

目的探讨老年支气管哮喘(EBA)患者外周血单个核细胞(PBMC)中黏蛋白域蛋白(Tim)-3 mRNA、Ⅰ型辅助性T细胞(Th1)、Ⅱ型辅助性T细胞(Th2)、白细胞介素(IL)-2和IL-4的表达水平及Tim-3 mRNA在老年支气管哮喘发生发展中的作用。方法 EBA缓解期患者20例(缓解组),轻-中度急性发作期患者20例(发作组),另选同期健康志愿者20例(对照组),定量反转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测两组哮喘患者PBMC细胞中Tim-3 mRNA的表达水平,流式细胞术检测外周血中Th1和Th2细胞的分布,酶联免疫吸附(ELISA)法检测外周血中IL-2和IL-4的含量,分析Tim-3 mRNA表达水平与IL-2和IL-4的相关性。结果发作组和缓解组Tim-3 mRNA表达、Th1和Th2的细胞数、IL-4的含量均高于对照组,且发作组的Tim-3 mRNA的表达、Th1和Th2的细胞数、IL-4的含量均高于缓解组,IL-2的变化趋势则反之(均P<0.05)。发作组和缓解组中Tim-3 mRNA的表达水平与IL-2呈负相关,与IL-4呈正相关(均P<0.05)。结论 EBA患者PBMC中Th1和Th2细胞数增加,Tim-3蛋白可能参与EBA的发生发展。     

Decreased production of interleukin-12 and interferon-gamma is associated with renal involvement in systemic lupus erythematosus

OBJECTIVE: To analyze the type 1/type 2 cytokine balance in patients with systemic lupus erythematosus (SLE) according to the presence of renal disorder and activity status. METHODS: We measured the serum levels of type 1 (IFN-gamma, IL-12) and type 2 cytokines (IL-4, IL-10) as well as spontaneous and stimulated cytokine production from peripheral blood mononuclear cells (PBMC) in 40 patients with SLE. RESULTS: Patients with lupus nephritis (LN) showed significantly lower levels of serum IL-12 and IFN-gamma than those without LN. Production of IL-12 and IFN-gamma by stimulated PBMC were also decreased in patients with LN. The circulating IL-12 correlated positively with IFN-gamma, but inversely with IL-10. The SLEDAI scores correlated well with the ratio of IL-4/IFN-gamma levels. CONCLUSION: The reduced production of IL-12 and IFN-gamma and the resultant shift towards the type 2 cytokine phenotype may be associated with LN.     

Short communication: human lymphotropic virus type 1 coinfection modulates the synthesis of cytokines by peripheral blood mononuclear cells from HIV type 1-infected individuals

HIV-1 and HTLV-1 infect CD4(+) T lymphocyte but little is known about the impact of coinfection on patient's immune response. In this study we have evaluated the spontaneous production of interleukin (IL)-2, IL-4, IL-6, and IL-10 and interferon (IFN)-γ by unstimulated peripheral blood mononuclear cell (PBMC) cultures obtained from patients infected by HTLV-1, HIV-1, or both viruses. We have observed that HIV/HTLV-coinfected individuals presented significantly higher production of IL-2 and IFN-γ compared to both HIV single-infected and HTLV single-infected individuals. IL-6 and IL-10 synthesis was similar in all infected groups, but HTLV single-infected individuals presented a lower production of IL-4. These results show that HIV/HTLV-coinfected individuals presented a profile of higher production of Th-1 cytokines, suggesting a predominant stimulus of HTLV-1 in detriment to HIV-1 infection.     

狼疮肾炎患者外周血单个核细胞内白细胞介素-6 gp80与gp130基因表达的研究

目的　了解狼疮肾炎 (LN)患者外周血单个核细胞 (PBMCs)白细胞介素 6 (IL 6 )与IL 6受体 (gp80与gp130 )的mRNA表达情况 ,并分析它们之间及其与自身抗体的关系。 方法　采用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)方法检测 18例活动期LN患者、16例非活动期LN患者和 10名正常人PBMCs内IL 6、gp80与 gp130的mRNA表达水平。 结果　①活动期LN患者、非活动期LN患者及正常人PBMCsIL 6mRNA检出阳性率各为 72 2 %、37 5 %和 10 0 %,前者显著高于后两者 ,而后两者PBMCsIL 6mRNA的检出阳性率差异则无显著性 ;这三组人群PBMCs内gp80mRNA与 gp130mRNA的检出阳性率均无统计学差异。②活动期LN患者PBMCs中IL 6mRNA表达水平高于非活动期LN患者 ,后者又高于正常人 ;活动期LN患者PBMCs中有较高水平的gp80mRNA与 gp130mRNA表达 ,而非活动期LN患者PBMCsgp80mRNA与 gp130mRNA表达水平 ,与正常对照比较则无统计学差异。③活动期LN患者PBMCs内IL 6mRNA、gp80mRNA和gp130mRNA相对表达水平互呈正相关 ,但在非活动期LN患者中则未见这种正相关关系。活动期LN患者PBMCs内IL 6、gp80和gp130基因表达水平与血清ANA、抗ds DNA抗体和抗Sm抗体均无显著的相关性。 结论　活动期LN患者PBMCs内IL 6及其受体gp80和 gp130的mRNA表达均上调 ,且受体 g     

Levels of interleukin 12, a cytokine of type 1 helper T cells, are elevated in sera from patients with systemic sclerosis

OBJECTIVE: To determine serum levels and spontaneous production by peripheral blood mononuclear cells (PBMC) of interleukin 12 (IL-12), a potent inducer of type 1 helper (Th1) T cells, in patients with systemic sclerosis (SSc). METHODS: Serum IL-12 levels and spontaneous production levels of IL-12 in culture supernatants from PBMC were examined by ELISA. Serum levels of IL-4, IL-6. IL-10, and IL-13 and production levels by PBMC of IL-6 and IL-10 were also examined by ELISA. Renal vascular damage was determined as a pulsatility index (PI) by color flow Doppler ultrasonography of kidneys. RESULTS: Serum IL-12 levels were significantly elevated in patients with SSc (n = 62) compared with healthy controls (n = 20). Similarly, spontaneous production levels of IL-12 by PBMC in patients with SSc (n = 47) were higher than those in controls (n = 20). Serum IL-12 levels did not correlate with serum levels of any Th2-type cytokines such as IL-4, IL-6, IL-10, and IL-13. However, spontaneous production levels of IL-10 by PBMC significantly correlated with serum IL-12 levels in patients. Patients with elevated serum IL-12 levels had the increased PI values more frequently than those with normal IL-12 levels. Further, serum levels of IL-12 and production levels of IL-12 by PBMC correlated significantly with the PI values in patients with SSc. CONCLUSION: These results suggest that the increased levels of IL-12 may relate to the activation of Th1 cells in SSc and that IL- 12 overproduction may be associated with renal vascular damage.     

Suppression by Candida albicans beta-glucan of cytokine release from activated human monocytes and from T cells in the presence of monocytes

The effect of a soluble beta-glucan from Candida albicans (CSBG) on cytokine production by cultured human peripheral blood mononuclear cells (PBMC) was assessed. CSBG induced a slight increase in the spontaneous release of proinflammatory cytokines, such as interleukin (IL)-6, but significantly suppressed endotoxin-induced IL-6 production in cultures of PBMC and monocytes isolated from PBMC. CSBG also suppressed the release of type 1 cytokines, IL-2, and interferon-gamma. These findings suggest that CSBG suppresses monocyte functions directly and thus suppresses T cell function indirectly. CSBG may play a role in the development of candidiasis.     

CD3单抗和淋巴细胞功能相关抗原-1对狼疮肾炎外周血单个核细胞的共刺激作用

目的：探讨CD3单抗（mAb)和淋巴细胞功能相关抗原－1单抗（LFA－1mAb)对狼疮肾炎（LN）患者外周血单个核细胞（PBMC）的共刺激作用。方法：2例LN患者被分为活动期（n=14)和非活动期（n=15)，以12例健康献血员为对照，观察CD3mAb或（和）LFA－1mAb共刺激及阻断1－磷酯酰肌醇3－激酶（PI3－K）对体外培养96h后PBMC增生和IL－2产生的影响。PBMC提取采用Ficoll密度梯度离心法，细胞增生实验采用^3H-TdR掺入法，IL－2测定采用ELISA法。结果：PBMC培养96h后，自然生长的LN非活动期和活动期PBMC ^3H-TdR掺入量和IL－2合成与正常对照无明显差异（P值均＞0或0．05）；与自然生长的PBMC相比，CD3mAb单独处理增加了LN非活动期（P值均＜0．05）和活动期（P值均＜0．05）PBMC^3H-TdR掺入量和IL－2合成。而单独CD3mAb对正常对照PBMC^3H-TdR掺入量和IL－2合成没有影响（P值均＞0．05）。与CD3mAb单独处理组相比，CD3mAb和LFA－1mAb共刺激均增加了LN活动期（P值均＜0．05）和非活动期（P值均＜0．05）及正常对照（P值均＜0．05）PBMC ^3H-TdR掺入量和IL－2合成；与对照组相比，CD3mAb和LFA－1mAb共刺激后活动期（P值均＜0．01）和非活动期（P值均＜0．01）PBMC^3H-TdR掺入量和IL－2合成均增加，但活动期效应明显强于非活动期（P＜0．01）。PI3－K特异抑制剂Wortmannin(WT)的加入明显抑制了CD3mAb和LFA－1mAb共刺激诱导的PBMC增生和IL－2的分泌效应（P＜0．01，P＜0．01）。结论：CD3和FLA－1对狼疮肾炎PBMC具有共刺激作用，这种共刺激作用可能参与了狼疮肾炎T、B细胞的异常活化，阻断共刺激传递信号分子PI3－K则能抑制CD3和LFA－1介导的共刺激作用。