聚合酶链反应检测金黄色葡萄球菌肠毒素基因型的研究

金黄色葡萄球菌（简称金葡菌）广泛分布于自然界中，据日本的调查结果表明：各种食品中有32.5％食品存在金葡菌。金葡菌能分泌20余种毒性蛋白质，其中最主要的是葡萄球菌肠毒索（Staphylococcal Enterotoxin，SE），它可引起严重的食物中毒。在我国发生的食物中毒事件中，由金黄色葡萄球菌肠毒索引起的食物中毒占细菌性的第二位。同样，在加拿大也占三分之二，台湾为85.3％。为对食品安全性进行确切的评价，必须检查分离到的金黄色葡萄球菌是否产生肠毒素。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的多重聚合酶链反应检测方法

目的 建立多重聚合酶链反应9multiplex poly-merase chain reaction,mt-PCR)快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）。方法 对临床分离的63株金黄色葡萄球菌，采用mt-PCR快速检测MRSA的决定基因mec和辅助基因femA,用16SrRNA基因作内参照。结果 mt-PCR的预期扩增结果为耐药株出现3条扩增区带，敏感株只有femA基因和16SrRNA基因出现2条扩增区带。在63株金黄色葡萄球菌中，药敏法34.9%（22/63）耐药；mt-PCR增增mecA基因34.5%(23/63)阳性，femA基因和16SrRNA基因100%阳性；单引物PCR与mt-PCR两者阳性扩增符合率为100%。结论 采用多重聚合酶链反应，可在同一扩增体系内同时检出mecA基因，femA基因，对MRSA临床株的快速，及时检出，有效控制MRSA造成的感染，限制其传播等具有重要的现实意义。     

微滴式数字聚合酶链反应检测金黄色葡萄球菌和蜡样芽孢杆菌

目的 采用微滴式数字聚合酶链式反应(ddPCR)技术快速检测饲料中金黄色葡萄球菌和蜡样芽孢杆菌,以满足对猪饲料中病原体精准检测需求.方法 通过已建立的荧光定量PCR方法中引物和探针,建立优化ddPCR条件,梯度稀释质粒,进行特异性、敏感性、重复性实验以及市售10种样品的本底检测.结果ddPCR法检测金黄色葡萄球菌和蜡样...     

聚合酶链反应检测金黄色葡萄球菌与常规方法的比较

对金黄色葡萄球菌(金葡)感染的常规诊断方法是培养分离后,用凝固酶和/或耐热核酸酶(TNase)试验加以鉴定,但这些方法并非完全可靠。有三种葡萄球菌凝固酶阳性～[1],而TNase广泛存在于葡萄菌属～[1],需补充一组三项试验～[2]才能准确鉴定,但这又得多费时日。本文参照Brakstad～[3]报道,合成一对寡核苷酸引物,用各种临床标本直接作聚合酶链反应(PCR)检测金葡,同时做细菌培养。结果表明PCR检测金葡快速、敏感、特异,检出阳性率明显高于培养法。     

多重聚合酶链反应用于检测、鉴定耐甲氧西林葡萄球菌的研究

目的 建立一种快速的多重聚合酶链反应(PCR)方法，用于检测葡萄球菌对甲氧西林的耐药性，同时对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌的种进行鉴定。方法 对临床分离的武汉地区金黄色葡萄球菌80株。表皮葡萄球菌70株，其余凝固酶阴性葡萄球菌60株，提取其基因组DNA，针对金黄色葡萄球菌独有的femA基因，表皮葡萄球菌的种特异性序列，决定葡萄球菌对甲氧西林耐药性的mecA基因，和细菌共有的16srRNA基因的保守序列设计四对引物。同时加入PCR体系中对相应片段进行扩增。结果 在210株葡萄球菌中，mecA基因检测结果与苯唑西林敏感试验结果的一致率为96．2％。mecA基因阳性但苯唑西林敏感的5个菌株，通过由低到高浓度的苯唑西林筛选培养后。均表现出耐药性。mecA基因阴性但苯唑西林耐药的3个菌株，经过对阿莫西林-克拉维酸敏感性试验后，被证明是β-内酰胺酶的高产株。结论 此多重PCR方法不仅可以对临床分离葡萄球菌菌株的甲氧西林耐药性作出判断。同时还可以对金黄色葡萄球菌及表皮葡萄球菌做出种的鉴定，是一种高效、敏感、特异性高的检测技术。     

伤寒杆菌聚合酶链反应检测方法

目的 探讨聚合酶链反应快速检出血培养物中的伤寒杆菌。用于伤寒杆菌菌血症的诊断．方法 根据伤寒杆菌鞭毛抗原基因ＤＮＡ核苷序列设计特异性革酸引物,应用聚合酶链反应技术快速检出血培养物中的伤寒杆菌。结果 对伤寒杆菌和７株非伤寒要直菌,同时进行ＰＣＲ增,结果只有伤寒杆菌出现４５８ｂｐ的牧场划性扩增区带,其他７株非伤寒 杆菌均未出现４５８ｂｐ的扩增菌悬液进行扩增,结果表明,在１００个菌细胞时即可扩增出明显的     

聚合酶链反应对耐甲氧西林葡萄球菌的监测

为了解同济医院临床各科室分离的金黄色葡萄球菌对甲氧西林类抗生素耐药性的状况，收集同济医院临床各科室1999年分离的金黄色葡萄球菌84株，通过设计的引物，利用扩增耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的mecA基因，用地高辛标记的特异性探针与PCR扩增产物杂交。84株金黄色葡萄球菌中获得8株扩增产物为阳性的菌株，用这些阳性产物与地高辛标记的探针进行Southern blot分析，杂交结果与PCR结果一致，故同济医院1999年金黄色葡萄球菌对甲氧西林耐药率为8．8％。将聚合酶链反应技术用于检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）其敏感性、特异性较高且重复性好，准确率比实验室常用纸片法更高，为指导临床应用抗生素提供了一个切实可行的方法。     

三重聚合酶链反应快速诊断耐甲氧西林葡萄球菌感染

目的建立一种能快速有效地对葡萄球菌感染进行病原体诊断的方法.方法利用三重聚合酶链反应技术(Triplex PCR)同时检测葡萄球菌特异性16S rRNA 基因、金黄色葡萄球菌特异性Sa442基因和编码青霉素结合蛋白(PBP2a)的mecA基因.结果 84株葡萄球菌的16S rRNA 基因100%阳性,其中33株金黄色葡萄球菌的Sa442基因100%阳性,mecA基因阳性率为78.8%.51株凝固酶阴性葡萄球菌的Sa442基因100%阴性,mecA基因阳性率为76.5%.30株其他临床常见菌16S rRNA、Sa442、mecA基因100%阴性.结论该技术具有简便、快速、特异性强等特点,是一种非常有效的耐甲氧西林葡萄球菌感染快速诊断方法.     

PCR扩增nuc基因快速检测金黄色葡萄球菌

为快速检测标本中金黄色葡萄球菌，应用聚合酶链反应（ＰＣＲ），扩增金葡萄ｎｕｃ基因，并与培养法进行比较分析。结果只有金葡菌扩增出一条特异的ＤＮＡ条带，平行对照的其它菌株均为阴性，说明用ＰＣＲ检测金葡菌的方法简便、快速、特异、敏感。     

聚合酶链反应与传统方法检测淋病的比较分析

通过具有高度特异性与敏感性的聚合酶链反应 (简称 :PCR )与传统方法同时检测 5 0例淋病患者分泌物 ,结果聚合酶链反应 (PCR)检出率 ( 88% )明显高于涂片法检出率 ( 64 % )和培养法检出率 ( 5 8% )经统计学配对计数资料X2检验有显著性差异 ,(P <0 0 0 5 )。     

低频限制性位点聚合酶链反应研究耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的暴发流行

目的：探讨院内感染耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）流行状况,了解流行株耐药状况。方法：用K-B纸片法检测21株院内感染金黄色葡萄球菌耐药状况,建立本实验室低频限制性位点聚合酶链反应（IRS-PCR）分型方法。应用IRS-PCR对21株金黄色葡萄球菌进行基因分型。结果：21株菌经药敏实验分出6个耐药表型a～f,其中a型12株,均为多重耐药的MRSA。21株菌经IRS-PCR分为6个基因型A～F,其中A型12株来自烧伤病房,B、C、D、E、F型来源于重症监护室。结论：MRSA多为多重耐药,交叉感染是MRSA流行的主要原因。IRS-PCR能对金黄色葡萄球菌简易快速可靠分型。     

食品中金黄色葡萄球菌的PCR检测

目的：建立检测食品中金黄色葡萄球菌的PCR方法并将PCR方法与传统方法进行比较,评价PCR方法的检测效果。方法：采用PCR方法特异性扩增金黄色葡萄球菌的耐热核酸酶编码基因（nuc基因）,分别采用PCR方法和国家标准规定的方法检测180份吉林省各地区的抽检食品样品。结果：所检金黄色葡萄球菌在422 bp处出现nuc基因目的片段;食品样品传统方法检出阳性42份,PCR方法检出45份,PCR检测方法与国标法检出阳性率比较,差异无显著性(P>0.05)。结论：PCR方法检测食品中金黄色葡萄球菌较传统方法更快速和简便,且具有较高的特异性和敏感性,可作为食品中金黄色葡萄球菌快速检测的手段。     

PCR和RPLA法检测金黄色葡萄球菌肠毒素型别比较

目的比较PCR和反相被动乳胶凝集（RPLA）法检测金黄色葡萄球菌肠毒素A～D型的效果。方法对9株金黄色葡萄球菌分别用PCR和RPLA法检测金黄色葡萄球菌肠毒素A～D型，并以标准株作对照质控。结果两种方法的检测结果一致，9株金黄色葡萄球菌中有4株检出肠毒素A型，均未检出肠毒素B、C和D型。结论PCR法较适合基层实验室应用于检测金黄色葡萄球菌肠毒素。     

应用荧光定量聚合酶链反应技术快速筛查重症监护室耐甲氧西林金黄色葡萄球菌定植者

目的建立耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin resistant Staphylococcus aureus,MRSA)荧光定量PCR快速检测方法,筛查重症监护室(intensive care unit,ICU)MRSA定植者。方法采集患者感染部位标本或鼻咽拭子标本,快速提取总DNA后应用荧光定量PCR方法检测标本中nuc和mecA基因,对于双阳性结果报MRSA阳性,采取早期干预措施。结果建立的荧光定量PCR方法灵敏度高(4 CFU/反应)、快速、准确率100%。采取筛查和干预降低了ICU的MRSA感染率。结论应用荧光定量PCR对MRSA早期筛查及干预,有助于早发现、早诊断、早隔离、早治疗,可有效防止或终止MRSA导致的医院感染暴发流行。     

聚合酶链反应检测无菌性体液中真菌

目的：评价聚合酶链反应（PCR）直接检测无菌性体液中真菌结果可靠性。方法：采用真菌通用引物，通过PCR对96份临床无菌性体液扩增菌DNA，同时对这些标本进行细菌、真菌培养。结果：PCR诊断无菌性体液真菌感染与培养法完全一致，培养出细菌的标本PCR检测真菌PCR检测真菌DNA均阴性。结论：PCR直接检测无菌性体液中真菌敏感、特异、快速、准确，但不能代替培养法。