上调Smad7表达对腹膜纤维化大鼠腹膜炎症细胞浸润及促炎症因子表达的影响

目的 研究基因转染上调Smad7表达对大鼠腹膜纤维化模型腹膜炎症细胞浸润及促炎症因子表达的影响。方法 48只SD大鼠随机分为（1）正常对照组（n=12）；（2）模型组（n=12）：每日给予腹腔注射4．25％葡萄糖腹膜透析液（100ml／kg），同时于第8、10、12、22、24、26天腹腔注射脂多糖（LPS，0．6mg／kg）；（3）空白载体对照组（n=12）：仅转入不含Smad7的Tet-on／vector空白载体；（4）Smad7基因转染组（n=12）：在造模后第0、14天分别转染Smad7。第28天时杀检，分别应用免疫荧光染色及RT-PCR检测脏层腹膜泛白细胞标志性抗原（OX-1）、单核巨噬细胞抗原（ED-1）、白介素1（IL-1）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）蛋白和mRNA的表达水平。Smad7基因转染采用超声介导的微泡基因转染技术。结果 与模型组及空白载体转染组比较．Smad7转基因组脏层腹膜OX-1、ED-1阳性细胞以及IL-1、TNF-α表达水平有明显的减少，但均高于正常对照组。结论 高糖腹膜透析液联合LPS可刺激腹膜炎症细胞的浸润及腹膜间皮细胞IL-1、TNF-α表达上调。基因转染上调Smad7表达可明显抑制大鼠腹膜纤维化模型腹膜炎症细胞浸润及促炎症因子的表达上调。     

MG132对TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞Smad泛素化调节因子2和Smad7的影响

近来发现在肾纤维化模型（UUO）中Smad泛素化调节因子2（Smad ubiquitin regulatory factor2，Smurf2）表达增强，Smad7蛋白表达明显降低，Smurf2能通过泛素蛋白酶体途径增加Smad7降解。Smad7是TGF-β信号转导途径中的主要抑制性调控蛋白，因此阻断Smurf2的表达，有可能会起到抗纤维化的作用。MG132是一种有效、可逆的醛基肽类特异性蛋白酶体抑制剂，能阻断泛素蛋白酶体通路。我们主要研究MG132对TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞（HKC）表达Smurf2、Smad7及Ⅳ型胶原的影响，为肾纤维化的防治寻找新的靶点。     

增生瘢痕中转化生长因子基因的表达

目的　探讨转化生长因子 (TGF) β1和转录因子Smad 2 ,Smad 3三种基因影响增生性瘢痕形成和皮肤伤口无瘢痕愈合的调节机制。方法　 3 2份被检测标本中包括增生性瘢痕 8份 ,其自体正常皮肤组织 8份 ,胎儿和成人皮肤组织各 8份。用逆转录 多聚酶链反应方法 (RT PCR)检测上述基因在不同的组织细胞内的表达变化规律。结果　TGF β1、Smad 2和Smad 3基因在增生性瘢痕、胎儿和成人皮肤组织细胞内都有表达。在所检测 8对增生性瘢痕和其对应正常皮肤细胞中 ,这 3种不同基因在增生性瘢痕细胞中的表达量高于正常皮肤细胞的组数分别为 :TGF β1基因有 5对 ,Smad 2基因有8对 ,Smad 3基因有 5对。在胎儿皮肤细胞内 ,TGF β1的mRNA含量明显低于成人皮肤细胞 (t =2 2 0 4 ,P <0 0 5 ) ,差异有显著意义 ;Smad 3基因表达也呈相似的变化规律 ,mRNA含量显著低于成人皮肤细胞 (t=4 2 69,P <0 0 1) ,差异有非常显著意义 ;而Smad 2基因的mRNA含量却明显高于成人皮肤细胞 (t=6 685 ,P <0 0 1) ,差异亦有非常显著意义。结论　TGF β1和它的下游信号分子Smad2 ,Smad 3可能与增生性瘢痕形成密切相关。在增生性瘢痕细胞内 ,这 3种基因高表达可诱导胞外基质大量沉积 ,加速成纤维细胞增殖 ,促进组织纤维化。TGF β1和Smad 3基     

转化生长因子β及Smad7在原发性肾小球疾病中的作用

以往研究显示转化生长因子β（TGF-β）是肾脏纤维化发生、发展中的重要因子。TGF-β结合并激活其受体后，其信号传递由受体后信号分子Smad蛋白来进行。Smad7是TGF-β功能特有的内源性抑制因子，可阻抗TGF-β的信号转导，对其表达的调控可能成为阻断肾小球TGF-β效应的具有生理学基础的诱人策略。据此，我们试图从体内体外两方面进行TGF-β1及其信号转导分子Smad7转导机制的研究，为开展对肾小球疾病动物模型的基因治疗提供理论和实验依据。     

TGF-βRⅠ、Smad2、Smad 3及Smad7在瘢痕疙瘩中的表达

目的 观察比较瘢痕疙瘩、正常瘢痕及正常皮肤中转化生长因子β1型受体（TGFβRⅠ）、Smad2、3、7的表达情况，探讨以上信号传导分子在瘢痕疙瘩形成过程中的作用。方法 运用免疫组化技术检测上述4种蛋白在3种不同组织44例标本中的表达，寻找其规律。结果 与正常瘢痕及正常皮肤相比，瘢痕疙瘩中TGF-βRⅠ表达增强，Smad7表达减弱（P〈0．05），Smad2及Smad3表达增强不显著，但在核内积聚较为明显。结论 瘢痕疙瘩中TGF-βRⅠ表达增强，Smad2、3核内持久积聚及抑制性因子Smad7表达减少，可能是瘢痕疙瘩形成的重要原因。     

Smad3和Smad7在梗阻性黄疸大鼠肝纤维化形成过程中的表达及意义

目的:研究梗阻性黄疸大鼠肝纤维化形成进程中Smad3与Smad7表达的变化及其对肝纤维化的意义。方法:Wistar大鼠60只,随机分成模型组和对照组。于术后第1天及术后7 d、14 d、28 d及35d 5个时间点模型组和对照组处死大鼠各6只。进行肝组织病理学观察,免疫组织化学法测定肝组织中Smad3、Smad7的表达情况并行半定量分析。结果:与对照组相比,模型组大鼠7、14、28、35 d肝纤维化程度逐渐增强,Smad3明显升高并有统计学意义(P0.001),Smad7明显降低并有统计学意义(P0.001);而且模型组5个时间点比较均有统计学意义(P0.001)。同时,Smad3与Smad7呈负的直线相关(r=-0.951,P001)。结论:随着胆道梗阻时间延长,肝纤维化程度逐渐加重,肝组织中Smad3表达水平显著增加,Smad7表达水平下降,Smad3与Smad7呈负的直线相关。抑制Smad3或增强Smad7的表达可能是防治肝纤维化的新途径。     

Smad锚着蛋白在糖尿病肾病肾小管上皮细胞转分化中的作用及机制研究

目的 研究Smad锚着蛋白(SARA)在高葡萄糖诱导的HK-2细胞转分化中的作用及相关机制.方法 用高浓度葡萄糖(30 mmol/L D-葡萄糖)刺激HK-2细胞,分别采用细胞免疫荧光、Western印迹及实时定量PCR等方法检测HK-2细胞波形蛋白(vimentin)、紧密连接蛋白(ZO-1)、SARA、转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad2及Smad3的表达.分别转染全长SARA质粒[SARA (WT)]及敲除SBD结构域的SARA质粒[SARA(dSBD)],检测转染后高糖诱导的HK-2细胞Vimentin、ZO-1、Smad2、Smad3、p-Smad2、p-Smad3表达的变化.结果 高糖刺激时,HK-2细胞出现转分化 ;ZO-1蛋白和mRNA表达呈时间依赖性下调 ;vimentin蛋白和mRNA表达呈时间依赖性上调,而SARA蛋白和mRNA表达呈时间依赖性下调 ;TGF-β1、Smad3蛋白和mRNA表达呈时间依赖性上调 ;Smad2 mRNA表达呈时间依赖性上调,而其蛋白表达呈时间依赖性下调 ;Smad2和Smad3磷酸化,Smad3活化时间更长.与高糖刺激组相比,转染全长SARA质粒[SARA (WT)]过表达SARA使HK-2细胞ZO-1表达上调(P＜0.05) ;vimentin表达下调(P＜0.05) ;Smad2蛋白表达上调,但mRNA表达无明显变化 ;Smad2活化时间延长.转染SARA(dSBD)质粒对高糖诱导的HK-2细胞ZO-1、vimentin、Smad2的表达无影响,对Smad2和Smad3的磷酸化亦无明显影响.结论 高糖诱导的HK-2细胞转分化过程中,TGF-β1信号通路活化,SARA的表达下调.过表达SARA可能通过上调Smad2的蛋白表达,延长Smad2活化时间,从而抑制TGF-β1信号传导,进而抑制高糖诱导的HK-2细胞转分化进程.     

Smad4、Smad7在大鼠慢性前列腺炎前列腺组织中的表达及意义

目的 研究慢性前列腺炎SD大鼠前列腺组织Smad4和Smad7的表达,并初步探讨它对慢性前列腺炎发病机制的意义.方法 将40只6月龄SD大鼠随机分为正常对照组和CP实验组,每组20只.实验组采用去势+高剂量苯甲酸雌二醇肌注方法建模,并以免疫组化和蛋白免疫印迹实验方法检测Smad4、Smad7在前列腺组织中的表达变化.结果 与正常对照组相比,Smad7表达显著下调(P<0.01),Smad4表达亦显著下调(P<0.01);Smad4与Smad7在慢性前列腺炎大鼠前列腺组织中表达无相关性.结论 Smad4、Smad7在慢性前列腺炎前列腺组织中表达异常,提示可能参与CP的病理过程.     

TGF-β1/Smad3信号转导通路与创伤后瘢痕形成

目的对近年TGF-β1/Smad3信号转导通路与创伤后瘢痕形成的相关研究作一综述。方法广泛查阅国内外近年有关TGF-β1/Smad3信号转导通路及与创伤后瘢痕形成的文献,并进行综述。结果 TGF-β1是纤维化疾病的重要影响因子,通过TGF-β1/Smad3信号通路转导产生其生物学效应。该途径受多种因子调控并在细胞及分子水平与其他信号通路串话。该途径参与创伤后早期炎性反应、创面愈合及后期病理性瘢痕的形成。在分子水平干预转导途径的各个环节,可以影响纤维化及细胞外基质沉着的进程。结论 TGF-β1/Smad3信号转导途径是影响创伤后瘢痕形成及细胞外基质沉着的重要途径。对该途径进行深入研究,可为临床促进创面的愈合及病理性瘢痕的防治奠定理论基础。     

TGF-β信号转导中Smad2、Smad3的调控

转化生长因子-β(TGF-β)是一种多功能的细胞因子,调节不同的生理和病理过程,如胚胎发生、伤口愈合、纤维化、血管化和免疫调节,在发育调控、肿瘤生成和遗传疾病中发挥作用,是目前已知的与病理性瘢痕(增生性瘢痕、瘢痕疙瘩)形成关系最密切的细胞因子[1-2].TGF-β是TGF-β超家族成员之一,其通过细胞表面膜受体丝氨酸/苏氨酸激酶和胞浆内效应分子Smad蛋白等将信号转导到核内[3].现已发现9个Smad蛋白(Smad1-Smad9),3种类型:①受体调节型(R-Smad).包括Smad1、Smad2、Smad3、Smad5、Smad8、Smad9.②共同介质型(Co-Smad).哺乳动物中仅有Smad4.③抑制型(I-Smad).包括Smad6、Smad7[3].其中,TGF-β信号激活的R-Smad只有Smad2和Smad3[2],而且Smad2和Smad3的同源性高达92%[4],但他们在胞内的调控、核内的转录机制却完全不同,而两者之间差异的研究有助于将瘢痕增生、纤维化等机制的研究深入到Smad下游分子的水平.笔者就Smad2和Smad3在TGF-β信号转导中的不同之处作一综述.     

Smad1、Smad5在肾阳虚不育大鼠睾丸中表达的研究

目的: 观察Smad1、Smad5在腺嘌呤诱导的肾阳虚不育大鼠睾丸中的表达,探讨肾阳虚不育的病理机制,为防治男性不育提供可靠的实验依据。　方法: 60d雄性SD大鼠 48只,随机分为 6组(肾阳虚 7、14、21d组;正常对照7、14、21d组),每组 8只。以腺嘌呤 300mg/kg给大鼠灌胃,诱导肾阳虚不育大鼠模型,于灌胃第 7、14、21d,用免疫组化SABC法测定Smad1、Smad5在其睾丸中的表达。　结果: Smad1表达见于所有正常对照组及模型组大鼠睾丸各级生精细胞的胞质内,支持细胞及间质细胞未见表达;灌胃第 7、14d与正常对照组相比差异无显著性(P>0. 05),第 21d的表达较正常对照组及第 7、14d明显减弱(P<0. 05)。Smad5表达见于正常对照组及腺嘌呤灌胃第 7d大鼠睾丸的初级精母细胞及精原细胞的胞核内,两组比较差异无显著性(P>0. 05),其余各级生精细胞、支持细胞及间质细胞均未见表达;灌胃第 14、21d大鼠睾丸中未见Smad5表达。　结论: 肾阳虚大鼠睾丸中Smad1表达的减弱及Smad5的无表达,可能是导致其不育的病理机制之一。     

Smad4在肾盂、输尿管移性细胞癌中的表达及在细胞凋亡中的作用

目的 探讨细胞凋亡及Smad4在肾盂、输尿管移行细胞癌中的表达及其作用。方法 凋亡的检测采用未端脱氧核苷酸转移酶介导生长素标记法（TUNEL法），Smad4检测采用免疫组织化学方法。结果 在肾盂、输尿管移行细胞癌中，细胞凋亡指数为1.10%－3.75%，平均为2.50%，细胞凋亡指数与肿瘤组织学分级有关，但与肿瘤病理分期无关。Smad4阳性表达占17.6%(6/34),Smad4阳性表达位于肿瘤胞浆、胞核内，Smad4表达与肿瘤的分期、分级无关。细胞凋亡指数和Smad4表达之间无明显相关。结论 细胞凋亡指数与肾盂、输尿管移行细胞癌分级有密切关素；Smad4与肾盂、输尿管癌分期分级无关；细胞凋亡指数与Smad4表达无关。     

Expression and localization of Smad1, Smad2 and Smad4 proteins in rat testis during postnatal development

Aim：To study the expression and regulation of Smad1,Smad2 and Smad4 proteins(intracellular signaling molecules of transforming growth factor-β family)in rat testis during postnatal development.Methods:The whole testes were collected from SD rats aged 3,7,14,28 and 90(adults)days.The cellular localization and developmental changes were examined by immunohistochemistry ABC method with the glucose oxidase-DAB-nickel enhancement technique.Quantitative analysis of the immunostaining was made by the image analysis system.The Smads proteins coexistence in the adult rat testis was tested by the double immune staining for CD14-Smad4 and Smad2-Smad4.The protein expression of Smad during rat testicular development was examined by means of Western blots.Results: Smadl,Smad2 and Smad4 were present throughout testicular development.The immunostaining of Smad1 and Smad2 were present in spermatogenic cells.A positive immunoreactivity was located at the cytoplasm,but the nucleus was negative,Smadl was immunolocalized at the d14,d28 and adult testes,while Smad2,at the d7,d14,d28 and adult testis.There was positive immunoreaction in the Sertoli cells and Leydig cells as well.The immunolocalization of Smad4 was exclusively at the cytoplasm of Leydig cells and the nuclei were negative throughout the testicular development.No expression was detected in the germ cells.The results of image and statistical analysis showed that generally the expression of Smad1,Smad2 and Smad4 in the testis tended to increase gradually with the growth of the rat.Conclusion;The present data provide direct evidences for the molecular mechanism of TGF-β action in rat testes during postnatal development and spermatogenesis.     

TGF-β1 、Smad2及Smad3在脊柱结核诊疗中的价值

目的:研究转化生长因子β1 (transforming growth factor-β1,TGF-β1)、Smad2 (drosophila mothers against decapentaplegic 2)及Smad3在脊柱结核诊断及疗效评价中的价值.方法:纳入2018年9月～2019年6月在宁夏医科大学总医院治疗...     

前列腺癌中TGF-β/Smad信号的研究进展

转移生长因子β(TGF-β)超家族的成员及其下游的Smad信号转导分子与肿瘤的发生与发展有密切关系。在前列腺癌中,TGF-β/Smad信号通路被激活,在细胞水平调节细胞粘附性、肌丝系统、细胞周期等方面,并在分子水平调节特异基因的表达。同时其他的信号通路如MAPK和PI3K/Akt/mTOR通路以及一些基因和蛋白分子对于TGF-β/Smad信号通路的表达也具有调控作用。本文对近年来前列腺癌中关于TGF-β及Smad信号的表达、作用及调控方面的研究进展作一综述,并对其在前列腺癌基础研究与靶点治疗中的意义作一展望。     

肝细胞癌中Smad7和TGFβRⅠ的表达及与其临床病理的关系

目的　研究Smad7、TGFβRⅠ蛋白在肝细胞癌 (hepatocellularcarcinoma ,HCC)中的表达及与其临床病理的关系 ,探讨Smad7在HCC发生、发展中的作用。方法　应用SP免疫组化染色法 ,检测 62例HCC中Smad7、TGFβRⅠ蛋白表达情况 ,并分析它们与HCC临床病理的关系。 结果　 62例HCC组织中Smad7、TGFβRⅠ蛋白的阳性表达率分别为 85 .48%、2 9.0 3 % ,Smad7表达明显高于正常肝组织 ,而TGFβRⅠ表达明显低于正常肝组织 (P <0 .0 5 ) ,两者在HCC中表达呈负性相关。且Smad7蛋白表达与肿瘤的临床分期及有无瘤栓、包膜完整性、复发时间长短、血AFP、肿瘤结节数及有无转移有相关性。结论　Smad7与HCC发生、发展密切相关。     

天生饮对肾血管性高血压大鼠肾Smad3和Smad7表达的影响

目的：研究天生饮对肾血管性高血压大鼠肾Smad3和Smad7表达的影响。方法：将清洁级SD大鼠随机分成正常组、假手术组、手术组。实验大鼠适应性喂养1周,采用二肾-夹法复制肾血管性高血压大鼠模型,手术组均在无菌条件下进行左侧肾动脉夹窄术,假手术组只分离左侧肾动脉不夹,正常组不作任何处理。术后第4周,将造模成功的手术组大鼠随机分为模型组和天生饮组。天生饮组每天给予天生饮灌胃,模型组、假手术组和正常组以蒸馏水灌胃,连续灌胃4周后处死所有动物。用HE方法观察左肾组织形态学改变,用免疫组化法分别检测大鼠左肾组织中Smad3和Smad7的表达。结果：模型组大鼠与正常组、假手术组比较：血压、BUN及Scr升高,肾纤维化程度增加,Smad3的表达量上调,Smad7的表达量下调,以上组间的差异均具有统计学意义（P〈0.01）;经天生饮治疗4周后,天生饮组大鼠与模型组比较：肾纤维化程度减轻,Smad3的表达量下调,Smad7的表达量上调,组间差异具有统计学意义（P〈0.01）。结论：天生饮能够减轻两肾-夹肾血管性高血压大鼠肾纤维化程度,且其疗效机制可能是通过降低Smad3的表达和促进Smad7的表达。     

Smad4促进成骨分化的机制研究

目的 探讨Smad4基因促进成骨分化的作用机制。方法 采用条件性基因敲除技术Cre/loxp,制备骨细胞特异性敲除Smad4小鼠(Smad4otcko),小鼠胚胎骨骼透明染色分析胚胎期小鼠长骨生长状况;待小鼠成长至1月龄,X-ray检测突变小鼠与对照组小鼠的骨密度差异;静态骨组织形态学分析检测突变鼠及对照鼠的骨量变化、成骨细胞数量变化等差异;实时荧光定量PCR检测Smad4突变鼠股骨成骨细胞相关因子Runx2、ALP、OSX及OCN;破骨细胞TRAP染色分析Smad4突变鼠破骨细胞形态及数量变化;qPCR检测突变鼠股骨破骨吸收标志基因RANKL、OPG,并计算RANKL/OPG比率。结果 Smad4基因敲除小鼠在胚胎期未出现长骨生长异常。X线结果显示,1月龄时,与对照组小鼠相比,Smad4突变鼠的骨密度降低（P＜0.05）,静态骨组织形态学分析表明突变鼠松质骨减少,皮质骨变薄,骨小梁数量减少（P＜0.05）;Smad4突变鼠成骨细胞标志基因表达量显著降低,成骨细胞的数量明显减少（P＜0.05）;RANKL作为破骨吸收标志物表达上调、作为其拮抗剂的OPG表达量下调,RANKL/OPG比率增高（P＜0.05）。结论 Smad4基因通过促进成骨分化,降低破骨吸收从而来维持骨稳态。     

肾纤康对肾间质纤维化大鼠Smad信号通路的影响

目的：研究肾纤康对单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠肾组织转化生长因子β1（TGF-β1）、Smad2、Smad3、Smad7表达的影响,探讨肾纤康防治肾间质纤维化的作用机制。方法：将40只大鼠随机分为4组,即假手术组、模型组、肾纤康组、苯那普利组,采用左侧输尿管梗阻方法造模,用免疫组织化学方法作肾间质TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7检测,并观察肾脏病理学变化。结果：模型组和各治疗组肾间质TGF-β1、Smad2、Smad3面积比增加,Smad7面积比减少,与假手术组相比差异有统计学意义（P〈0.05）。与模型组相比,药物治疗组肾间质TGF-β1、Smad2、Smad3面积比减少,Smad7面积比增加,差异有统计学意义（P〈0.05）。肾纤康组与苯那普利组肾间质TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7面积比差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：肾纤康通过下调TGF-β1、Smad2、Smad3在肾间质的表达及增加Smad7的表达而抑制单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠肾间质纤维化,与肾纤康可调节TGF-β1/Smad信号转导通路有关,其作用与苯那普利差异无统计学意义。