红曲霉代谢产物的研究进展

红曲霉能产生令人瞩目的许多聚酮类次级代谢产物,主要包括红曲色素、莫纳克林类化合物、桔霉素及其他聚酮类化合物,其中最主要的生物活性代谢产物是HMG-CoA还原酶抑制剂红曲可林K（monacolin K）。综述了近年来有关红曲酶代谢产物的研究进展,重点阐述了红曲色素、monacolins类代谢产物及萜类代谢产物的分离、化学结构及其生物活性等方面的研究概况,以及真菌毒素——桔霉素的安全性问题。     

HPLC测定人血清中阿米替林及去甲阿米替林的浓度

目的：建立测定血清中阿米替林( AM)及其产物N-去甲阿米替林( N-AM)浓度HPLC法。方法：血清样品碱化后采用乙醚萃取,其有机相吹干检测。以甲醇：乙腈：水：正丁胺：冰乙酸(55：90：45：2：1.5)为流动相,检测波长为254nm,VP-ODS柱。结果：血清中阿米替林(AM)及其产物N-去甲阿米替林(N-AM)线性范围均为25~400μg/L,方法回收率分别为92.3%~125.7%及109.9%~121.8%,日内 RSD 分别为5.52%~7.70%及1.76%~9.46%,日间RSD分别为4.59%~7.70%及1.96%~9.59%。结论：本方法在阿米替林血药浓度监测应用上具有可操作性强,重现性好,临床监测周期短等优点,适合人体药动学研究。     

红曲降低肾血管型高血压大鼠血压的生化机制

目的:初探红曲降低肾血管型高血压大鼠(Renovascular Hypertensive Rats,RHR)血压的生化机制.方法:通过试剂盒测定灌胃红曲4周后RHR肺组织ACE活性和主动脉NOS活性,以及灌胃红曲前后血浆ET和CGRP的变化.结果:灌胃4周后.红曲高剂量组和低剂量组肺ACE与阴性对照组相比显著下降(P＜0.01);红曲高和低剂量组血浆ET均比阴性对照组低20个单位(P＜0.01);红曲高剂量组血浆CGRP比灌胃前增高9个单位(P＜0.01),比阴性时照组高7个单位(P＜0.05).结论:红曲的降压途径可能是多方面的:在RHR上可能主要通过抑制肺ACE起到降压作用,同时也能降低血浆ET和升高血浆CGKP.     

LC-MS/MS测定人血浆中盐酸舍曲林的浓度

目的 建立LC-MS/MS测定人血浆中盐酸舍曲林浓度的方法.方法 以盐酸帕罗西汀为内标,采用乙腈-0.1%甲酸溶液(50∶50)为流动相,以Discovery C18色谱柱为分析柱,通过电喷雾电离源(ESI),以选择离子反应监测(SRM)方式进行检测.用于定量分析的离子反应分别为m/z 306.0→274.9(盐酸舍曲林)和m/z 330.1→191.9(盐酸帕罗西汀).结果 盐酸舍曲林线性范围0.332～66.400 μg·L-1,定量下限为(0.334±0.002)μg·L-1(n=5).日内、日间精密度(RSD)小于9%,平均回收率大于95%.结论 本法专属性强,样品处理方便,灵敏度高,适用于盐酸舍曲林临床药动学研究.     

HPLC法测定抗感解毒颗粒中黄芩苷和大豆苷元

目的 建立以高效液相色谱法同时测定抗感解毒颗粒中黄芩苷和大豆苷元的方法。方法 Kromasil C 18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相：乙腈-0.08 %磷酸溶液(23∶77);体积流量：1.0 mL/min;检测波长：248 nm;柱温：25 ℃;进样量：20 μL。结果 黄芩苷和大豆苷元分别在5.01~40.08 mg/L,0.101~0.806 mg/L线性关系良好,r分别为0.999 9、0.999 7,平均加样回收率分别为98.4%、97.8%,RSD分别为1.3%、1.5%。结论 所建立的方法快速简便,灵敏,重现性良好,可用于抗感解毒颗粒的质量控制。     

分散液-液微萃取结合气相色谱质谱测定尿液中的尼古丁和可替尼

目的 探讨建立溶剂去乳化分散液-液微萃取（dispersive liquid-liquid microextraction,DLLME）结合气相色谱-质谱法（gas chromatography-mass,GC/MS）测定尿液中尼古丁和可替尼的方法。方法 考察GC/MS检测和DLLME条件。取5 mL尿样,用NaOH调节pH至9.0,加入氯化钠振荡溶解后,取100 μL三氯甲烷（含内标物喹啉）和1 000 μL甲醇分别作为萃取剂和分散剂并混合,注入样液中使乳化分散,4 000 r/min离心5 min,弃上清,取1 μL下层有机相进GC/MS分析。以DB-5毛细管色谱柱为分离柱,程序升温分离样液中的尼古丁和可替尼,离子监测(SIM)模式质谱检测和内标工作曲线法进行定量。结果 尼古丁和可替尼在0.2~100 ng/mL范围内线性良好,方法检出限分别为0.010 ng/mL和0.022 ng/mL,方法精密度(相对标准偏差)分别为8.2%和9.6%,加标回收率分别为92.0%~108.0%和83.0%~110.0%。结论 本方法简单快速、灵敏准确,适用于尿液中尼古丁和可替尼的测定,能满足人群烟草暴露评价的需要。     

红曲复方制剂治疗痰浊血瘀型原发性血脂异常的回顾性分析

目的探讨红曲复方制剂治疗痰浊血瘀型原发性血脂异常的临床疗效,为血脂异常的诊治提供依据。方法回顾性分析2013年12月至2015年12月于北京大学第一医院中医、中西医结合科就诊的140例痰浊血瘀型原发性血脂异常患者的病例资料,根据其血脂异常程度进行分层,统计分析服用中药1个月后中医证候积分及血脂水平变化。结果治疗后中医证候积分较前改善;总胆固醇(TC)边缘升高组以及升高组下降幅度分别为(11.59±12.26)%、(22.44±11.05)%,低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)边缘升高组以及升高组下降幅度分别为(18.78±15.26)%、(27.12±15.73)%;甘油三酯(TG)升高组下降幅度为(22.63±27.91)%;高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)降低组治疗后较前上升。结论红曲复方制剂可改善中医证候,降低TC、LDL-C、TG,升高HDL-C。     

荞麦红曲对实验性高脂血症小鼠血脂水平的影响

[目的]探讨荞麦红曲对实验性高脂血症小鼠血脂水平的影响.[方法]通过高脂高胆固醇饲料喂养2周,建立实验性高脂血症小鼠模型,同时灌胃给予小、中、大剂量荞麦红曲,测定各组小鼠血清三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平.[结果]与高脂模型组比较,荞麦红曲中、大剂量组小鼠血清TG,TC和LDL-C水平均显著降低,HDL-C水平显著升高,荞麦红曲小剂量组小鼠血清TG和LDL-C水平显著降低.[结论]荞麦红曲具有降低实验性高脂血症小鼠血脂的作用,对高脂血症具有一定的预防作用.     

亲水作用液相色谱串联质谱法测定头发中尼古丁和可替宁

目的 建立亲水作用色谱串联质谱法测定头发中的尼古丁和可替宁的方法。 方法 样品在氢氧化钠溶液中水解,二氯甲烷萃取,氮气吹干,流动相复融后注入色谱-质谱系统分析。采用亲水作用色谱柱分离,甲醇-0.1%氨水为流动相,电子喷雾电离-三重四极杆质谱完成定量检测。采用建立的方法测定602例孕妇头发样品、31例志愿者头发和尿样中尼古丁和可替宁含量。 结果 采用本实验建立的亲水作用液相色谱串联质谱法检测样品,尼古丁和可替宁在0.030~100.000 μg/L范围内线性良好,方法检出限分别为0.007 6 μg/g和0.004 4 μg/g。日间和日内精密度小于10%。样品加标回收率为81.0%~102.0%。602例孕妇头发样品中非暴露二手烟孕妇头发中的尼古丁和可替宁质量浓度为0.020~0.260 μg/g和0.004 8~0.069 0 μg/g,二手烟暴露孕妇头发中的尼古丁和可替宁质量浓度为0.029~0.350 μg/g和0.005 6~0.085 0 μg/g。志愿者报告的吸烟状态与样品中的尼古丁和可替宁含量均具有相关性(P < 0.05);暴露的吸烟支数与头发中尼古丁含量关系密切,两者具有线性关系。 结论 本研究建立的方法准确灵敏,适用于头发中尼古丁和可替宁检测。头发中的尼古丁水平可能是评估烟草暴露剂量的特定生物标志物。     

维生素K3对人膀胱癌细胞株T24凋亡的诱导作用

目的 观察不同浓度的维生素K3(VK3)对人膀胱癌细胞株T24凋亡的诱导作用.方法 采用噻唑蓝(MTT)法观察不同浓度VK3(0,2,5,10,20 μmol/L)对T24细胞增殖的影响,采用流式细胞术检测不同浓度的VK3对细胞凋亡率的影响.结果 0,2,5,10,20 μmol/L VK3作用T24细胞48 h后,生长抑制率分别为(5.80±0.038)%,(13.30±0.036)%,(26.55±0.032)%,(42.58±0.028)%和(65.35±0.034)%,细胞凋亡率分别为(2.86±0.4)%,(5.16±0.7)%,(10.85±1.1)%,(23.01±0.8)%和(75.80±1.2)%,其中10 μmol/L,20 μmol/L VK3对T24细胞生长有明显抑制作用(P<0.05). 结论 10-20 μmol/L VK3在体外作用48 h后可明显地诱导膀胱癌T24细胞株发生凋亡.     

MAPK在弗司可林诱发的脊髓背角LTP中的作用

目的  探讨丝裂霉素活化蛋白（MAPK）在弗司可林（Forskolin）诱发的脊髓背角长时程增强（LTP）中的作用。 方法  采用SD 大鼠, 常规细胞外记录技术记录脊髓背角腰膨大部位浅层C-纤维诱发电位。 结果  ①弗司可林（100μmol/L）诱发的脊髓背角LTP为PKA的抑制剂H89 (200μmol/L) 所阻断;②MAPK的选择性抑制剂PD98059 (100μmol/L) 阻断弗司可林诱导的脊髓 LTP; ③NMDA受体抑制剂阻断弗司可林诱导的脊髓 LTP。结论  MAPK参与弗司可林诱导的脊髓背角C-纤维诱发的LTP;弗司可林诱导的LTP可能是通过cAMP-PKA-MAPK信号途径起作用的。     

HPLC法测定穿心莲叶中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量

目的:测定不同产地的穿心莲药材中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量。方法:采用高效液相色谱(HPLC)法,Merck-Lichrospher RP-C18柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相为甲醇-水(60∶40);检测波长:226nm(用于检测穿心莲内酯),254nm(用于检测脱水穿心莲内酯);流速:0.8ml/min;柱温:35℃。结果:实验表明测定方法在4h内是稳定的,穿心莲内酯线性范围0.050~1.500μg,脱水穿心莲内酯线性范围0.048~1.440μg,平均加样回收率分别为100.9%和98.2%,RSD分别为3.4%(n=6)和3.2%(n=6)。结论:用HPLC法测定穿心莲药材中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量方法准确、灵敏、稳定,可作为控制穿心莲质量的方法。     

降脂红曲微粉治疗高脂血症临床研究

目的:观察不同剂量降脂红曲微粉治疗高脂血症的降脂疗效和安全性,为降脂红曲的临床应用和开发提供科学依据。方法:80例高脂血症患者随机分为4组,A组(降脂红曲微粉1/2剂量组),B组(降脂红曲微粉组),C组(降脂红曲粗粉组)和D组(血脂康组)。观察治疗前后总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、脂蛋白(a)[Lp(a)]、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)、载脂蛋白A-I(ApoA-I)、载脂蛋白B100(ApoB100)等指标的变化。结果:用药50 d后,各组患者TC、Lp(a)水平、LDL-C/HDL-C比值、ApoB100/ApoA-I比值显著降低,ApoA-I水平显著升高,P<0.01或P<0.05;降脂红曲微粉1/2剂量组还显著降低TG,降脂红曲微粉1/2剂量组、粗粉组与血脂康组还能显著降低LDL-C,P<0.01。各组对血脂异常均有较好疗效,降脂红曲微粉1/2剂量组、血脂康组总有效率优于降脂红曲粗粉组,P<0.05。结论:降脂红曲微粉降脂疗效肯定,安全,剂量可以较常规粉碎者减半,有推广价值。     

尼麦角林缓释片质量标准研究

目的 建立尼麦角林缓释片质量标准.方法 运用高效液相色谱法测定尼麦角林缓释片中尼麦角林的含量,色谱柱为C18柱（150 nm×4.6 nm,5 μm）,流动相为：乙腈-磷酸盐溶液（580：420）,检测波长为288 nm.结果 尼麦角林检测浓度在47.94～239.68 μg·ml-1范围内线性关系好（r=0.9999）,回收率为 99.91%,RSD=0.46%（n=3）,重复性为 99.43%,RSD=0.34%（n=6）.结论 本方法简便、准确,可用于尼麦角林缓释片质量标准研究.     

HPLC测定炒苍耳子配方颗粒中绿原酸及咖啡酸的含量

目的 建立同时测定炒苍耳子配方颗粒中绿原酸和咖啡酸的高效液相色谱法。方法 采用Shim-pack VP-ODS柱(250 mm×4.6 mm,5 µm);流动相为乙腈-0.1 %磷酸水溶液(10∶90);检测波长为327 nm;柱温为35 ℃。结果 绿原酸在0.215 2~1.721 6 μg内线性关系良好(r=0.999 9),咖啡酸在0.022 96~0.114 8 μg内线性关系良好(r=0.999 9);绿原酸、咖啡酸平均加样回收率分别为96.39%(RSD=1.48%)、100.02%(RSD=1.81%)。结论 所建立的方法简便、准确,可同时测定炒苍耳子配方颗粒中绿原酸和咖啡酸的含量。     

HPLC 测定人血清中阿米替林及去甲阿米替林的浓度

目的:建立测定血清中阿米替林( AM) 及其产物N－去甲阿米替林( N－AM) 浓度HPLC 法。方法: 血
清样品碱化后采用乙醚萃取，其有机相吹干检测。以甲醇∶ 乙腈∶ 水∶ 正丁胺∶ 冰乙酸( 55 ∶90 ∶45 ∶2 ∶1． 5) 为流
动相，检测波长为254nm，VP－ODS 柱。结果:血清中阿米替林( AM) 及其产物N－去甲阿米替林( N－AM) 线性范
围均为25 ～ 400μg /L，方法回收率分别为92． 3% ～ 125． 7% 及109． 9% ～ 121． 8%，日内ＲSD 分别为5． 52%
～ 7． 70%及1． 76% ～ 9． 46%，日间ＲSD 分别为4． 59% ～ 7． 70%及1． 96% ～ 9． 59%。结论:本方法在阿米替林血
药浓度监测应用上具有可操作性强，重现性好，临床监测周期短等优点，适合人体药动学研究。     

STI571 诱导K562细胞耐药机制的实验研究

目的体外建立对STI571耐药的K562细胞系(简写为K562-R),并对其耐药机制进行初步分析。方法用药物浓度逐步递增的方法培养野生型K562细胞(简写为K562-W)。绘制K562-R生长曲线,MTT法检测STI571、阿霉素(adriamycin,ADR)和三尖杉酯碱(harringtonine,HT)对K562-R的细胞毒作用,Ho-echst33342染色检测STI571对K562-R诱导凋亡作用。流式细胞术检测K562-R的MDR-1表达情况;基因测序检测K562-R的Abl激酶ATP结合区点突变情况;间期荧光原位杂交(interphasal fluorescence in situ hybridization,I-FISH)检测Bcr/Abl融合基因扩增情况。结果生长曲线绘制结果表明K562-R在0.5μmol/L的STI571环境中可呈指数增长;MTT法检测STI571对K562-W和K562-R的半数抑制浓度(50% inhibiting concentration,IC50)分别为(1.64±0.13)μmol/L和(3.32±0.05)μmol/L,K562-R的耐药倍数为(2.04±0.16)倍,而ADR和HT对两种细胞毒性作用均呈剂量依赖性反应,耐药前后差异无显著性(P值分别为0.472和0.108);Hoechst33342细胞凋亡试验表明STI571对K562-W诱导凋亡作用呈剂量依赖性,对K562-R作用减弱。流式细胞术检测K562-R和K562-W的MDR-1表达率分别为2.68%和1.39%(P<0.001),基因测序表明两种细胞Abl激酶ATP结合区序列完全一致;I-FISH检测初步观察K562-R的Bcr/Abl融合信号拷贝数增多(P<0.001)。结论体外成功建立STI571耐药的K562细胞系,其耐药机制可能与Bcr/Abl融合基因扩增有关。     

中药红曲复方制剂降脂作用的实验研究

[目的]探讨中药红曲复方制剂对降低高脂血症模型大鼠血脂水平的疗效。[方法]采用高脂饲料喂养SD大鼠建立预防性高脂血症模型,将实验大鼠分成阴性对照组、模型对照组、阳性对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组。连续灌胃给药30d,观察中药红曲复方制剂对高脂血症大鼠血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的影响。[结果]与阴性对照组比较,高脂饲料连续喂养30d后,模型对照组大鼠血清TG、TC和LDL-C显著升高(P0.01);与模型对照组比较,给药30d后,阳性对照组TG、TC和LDL-C显著降低(P0.05);低剂量组大鼠血清TG显著降低(P0.05),中剂量组和高剂量组血清TG、TC和LDL-C显著地降低(P0.01);各剂量组大鼠血清HDL-C无统计学差异(P0.05)。[结论 ]中药红曲复方制剂可有效控制并降低血脂水平。     

同位素稀释-亲水作用色谱串联质谱快速测定尿液中8-羟基脱氧鸟苷和可替宁的研究

  目的  建立尿液中8-羟基脱氧鸟苷和可替宁的同位素稀释-亲水作用色谱串联质谱的快速测定方法。  方法  离心后的尿样上清液加入15N₅-8-羟基脱氧鸟苷、D₃-可替宁两种内标,以3 mmol/L甲酸铵水溶液稀释5倍,经0.22 μm水系滤器过滤后,引入液相色谱-串联质谱法（ultra-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS）分析。以ACQUITY UPLC? BEH HILIC色谱柱（50 mm×3.0 mm, 1.7 μm）分离,3 mmol/L甲酸铵水溶液与乙腈为流动相(10∶90) 等度洗脱,柱温40 ℃,流速0.3 mL/min;质谱以电喷雾电离源（electrospray ionization, ESI）+扫描多反应监测模式检测,内标法定量。  结果  8-羟基脱氧鸟苷和可替宁在各自线性范围内线性良好,方法检出限分别为0.064 μg/L和0.035 μg/L;定量限分别为0.21 μg/L和0.12 μg/L;加标回收率分别为92.6%～102.0%和102.0%～106.0%。采用所建立的方法测定实际尿样,并通过40例样本统计分析发现,主、被动吸烟者的烟草烟气暴露量、烟草特有亚硝胺摄入量存在差异（P<0.05）,NNAL和可替宁含量在主动吸烟者尿样中含量更高;主、被动吸烟者的烟草烟气暴露与烟草特有亚硝胺暴露呈正相关（其相关系数r分别为0.487和0.786,P<0.05）。  结论  本研究成功建立同时测定尿液中8-羟基脱氧鸟苷和可替宁含量的同位素稀释-亲水作用色谱串联质谱法,该方法前处理简单、快速,通过同位素内标校正,定量灵敏准确,能够满足批量分析的需求。     

Survivin反义寡核苷酸对K562细胞耐药性的影响

目的 探讨Survivin反义寡核苷酸(antisense oligodeoxg nucleotide,ASODN)与传统化疗药物对白血病K562细胞耐药性的影响.方法 实验分为反义核苷酸组(ASODN)、无义核苷酸组(SODN)、脂质体组(Lip)、空白对照组,以脂质体转染Survivin ASODN,用RT-PCR检验SurvivinmRNA表达;用MTT法检测K562细胞对阿霉素(driacin,ADM)、柔红霉索(daunorubicin.DAM)及联合用ASODN耐药性;用流式细胞仪检测单独用ADM、DAM和联合用ASODN时K562细胞内ADM和DAM的浓度.结果 ASODN组Survivin mRNA表达较对照组降低(P<0.05);ADM和ASODN ADM对K562细胞的半数抑制细胞(IC50)分别为0.5457 mg/L和0.1933 mg/L,DAM和ASODN DAM对K562细胞的IC5.分别为0.5408 mg/L和0.2027 mg/L,联合用药组ICso低于单用药组(P<0.05);用ADM和ASODN ADM时K562细胞内药物的荧光强度分别为51.64、89.92,DAM和ASODN DAM时K562细胞内药物的荧光强度分别为63.71、88.47,联合用药组细胞内药物浓度高于单用药组(P<0.05).结论 Survivin反义寡核苷酸可下调K562细胞Survivin mRNA的表达;Survivin反义寡核苷酸与阿霉素和柔红霉索联合作用可提高K562细胞内药物浓度,降低细胞生存率,降低细胞耐药性.