载脂蛋白E及其基因敲除小鼠的研究进展

载脂蛋白E是血浆脂蛋白的重要组成成分,在脂质代谢中发挥着重要的作用。它的缺失或者变异都会引起体内的代谢异常或者组织器官的功能障碍,从而导致一系列的疾病和并发症。载脂蛋白E基因敲除小鼠问世以来,它给研究载脂蛋白E的功能及其在各种相关疾病当中的作用提供了广阔的平台。近年来,载脂蛋白E基因小鼠已成为动脉粥样硬化相关研究中最受欢迎的动物模型之一。     

载脂蛋白E基因敲除小鼠不同周龄动脉粥样硬化的病理变化

目的研究载脂蛋白E基因敲除小鼠不同时间段的动脉粥样硬化的病理进展，探讨不同饮食对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化进展的影响。方法采用6周龄40只载脂蛋白E基因敲除小鼠，20只给予高脂膳食饲料，20只给予普通饮食，分别于15周龄、19周龄、24周龄、28周龄、36周龄5个时间段各取4只麻醉处死做病理检测。结果随着时间进展，载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化程度逐渐加重，经历了从脂质条纹到粥样斑块形成典型的动脉粥样硬化病理过程；高脂饮食组比普通饮食组的载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化病理改变严重。结论载脂蛋白E基因敲除小鼠是研究动脉粥样硬化的可靠模型，高脂饮食可以加速载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化的病理进程。     

LXR激动剂对和ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化的作用

目的:观察肝孤核受体(LXR)激动剂(T-0901317)对ApoE基因敲除小鼠[ApoE(-/-)]主动脉结构和血管活性的影响,探讨LXR激动剂对抑制动脉粥样硬化(AS)病变形成的作用及潜在机制.方法:12周龄ApoE基因敲除小鼠随机分为AS模型对照组(AS组)与LXR激动剂干预组(AS+LXR组),将有相同遗传背景...     

高棕榈酸饮食对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化的影响

1目的：观察高棕榈酸饮食对载脂蛋白E（ApoE）基因敲除小鼠的血脂、血浆游离脂肪酸水平、动脉粥样硬化斑块面积、斑块中胶原含量和基质金属蛋白酶2表达的影响。方法：将20只6～8周龄雄性ApoE基因敲除小鼠随机分为对照组和高棕榈酸饮食组,每组10只。分别给予普通小鼠饲料和含5％棕榈酸的饮食,连续喂养12周。用比色法检测血脂和血浆游离脂肪酸水平;主动脉根部连续石蜡切片,Masson染色检测斑块内胶原含量,免疫组化法检测主动脉基质金属蛋白酶2的表达。结果：两组血脂水平无明显差异。与对照组相比,高棕榈酸饮食组血浆游离脂肪酸水平显著升高,主动脉斑块内胶原含量显著降低,主动脉基质金属蛋白酶2表达明显增加（P均〈0．05）。结论：高棕榈酸饮食能够升高血浆游离脂肪酸水平,降低斑块内胶原含量,从而降低动脉粥样硬化斑块稳定性,其机制可能与其上调基质金属蛋白酶2的表达有关。     

血脂康对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化的影响

观察血脂康对载脂蛋白E基因敲除小鼠高脂血症及动脉粥样硬化的影响.16只6周龄载脂蛋白E基因敲除小鼠随机分为高脂血症组(n=8)和血脂康组(n=8),相同遗传背景的同龄正常C57BL/6J小鼠为正常对照组(n=8).血脂康组每只灌服血脂康4 mg/d,高脂血症组、正常对照组每只灌服生理盐水0.4 mL/d.连续灌胃14周后下腔静脉取血测血脂,再用10%福尔马林灌注后,取主动脉进行形态学观察及图像分析.结果发现,高脂血症组血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇水平明显高于正常对照组(P<0.05),但血脂康组血清总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白水平与高脂血症组相比则明显下降(P<0.05).图像分析结果发现,高脂血症组动脉粥样硬化病变显著,与正常对照组相比斑块总面积明显增加(P<0.05);光镜下多为粥样硬化期,管壁厚薄不均,可见由大量泡沫细胞形成的脂纹脂斑期病变和由大量泡沫细胞及胆固醇结晶形成的粥样斑块期病灶;血脂康组病变较高脂血症组明显减轻,血脂康组与高脂血症组相比斑块总面积明显减小(P<0.05),主要为早期粥样硬化,管壁厚薄较均匀,未见明显脂纹脂斑及粥样斑块期病灶;正常对照组为正常动脉壁,厚薄均匀,无动脉粥样硬化病灶.结果提示,血脂康有降低载脂蛋白E基因敲除小鼠血清总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇水平及减轻动脉粥样硬化的作用.     

LXR激动剂对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化的作用

观察肝孤核受体（LXR）激动剂（T-0901317）对ApoE基因敲除小鼠［ApoE（-/-）］主动脉结构和血管活性的影响,探讨LXR激动剂对抑制动脉粥样硬化（AS）病变形成的作用及潜在机制。方法： 12周龄ApoE基因敲除小鼠随机分为AS模型对照组（AS组）与LXR激动剂干预组（AS＋LXR组）,将有相同遗传背景的同龄正常C57BL/6J小鼠分为正常对照组（CON组）与单纯药物干预组（CON＋LXR组）。CON＋LXR组、AS＋LXR组LXR激动剂连续灌胃6周,剂量为10 mg/（kg·d）。AS组、CON组灌服等量生理盐水。各组小鼠在处理6周后进行外周血采集检测血脂,并分离主动脉, 透射电镜观察血管超微结构,Western blot测定主动脉壁中三磷酸腺苷结合盒转运体A1（ABCA1）蛋白的表达水平。结果： AS＋LXR组血浆总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）均显著低于AS组（P〈0.01）,高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）高于AS组（P〈0.05）。AS组主动脉内膜呈明显粥样硬化斑块形成特点,AS＋LXR组内皮变性坏死比AS组明显减低。与AS组比较,AS＋LXR组的AS病变面积显著降低,同时动脉壁中ABCA1的表达显著增强。结论： LXR激动剂T-0901317能够显著改善血脂,对主动脉内膜超微结构有良好的修复和保护作用,对高脂饲养的ApoE基因敲除小鼠的AS形成具有抑制作用,其作用机制可能与LXR激动剂上调动脉壁巨噬细胞中ABCA1蛋白的表达、增强胆固醇逆转运有关。     

培哚普利和依那普利对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化进展的影响

目的 探讨血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化病变进程的影响,特别是对斑块成分的影响,并比较培哚普利与依那普利的疗效.方法 ApoE基因敲除小鼠随机分为培哚普利组、依那普利组及对照组3组.对主动脉根部斑块进行定量分析,并评估斑块胶原含量及脂核面积.以冰冻切片进行免疫荧光检查,观察斑块内单核细胞/巨噬细胞-2(MOMA-2)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子(VCAM-1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达.结果 各实验组之间的血压、血脂差异无统计学意义.与对照组比较,培哚普利组与依那普利组的斑块面积分别少了25.33%和22.86%(P均＜0.01),但是两组ACEI的斑块面积差异无统计学意义.培哚普利组与依那普利组减小脂核面积(分别为52.98%及38.98%,P均＜0.01)及MOMA-2(分别为88.38%及52.16%,P均＜0.01)、ICAM-1(分别为80.87%及49.59%,P均＜0.01)、VCAM-1(分别为77.56%及56.44%,P均＜0.01)、MMP-9(分别为86.93%及55.56%,P均＜0.01)的表达,并增加斑块胶原含量(分别为298.36%及168.14%,P均＜0.01),而且培哚普利组在这些方面均显著优于依那普利组(P均＜0.05).结论 ACEI在不影响血脂和血压的情况下可以抑制ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块的炎症并延缓动脉粥样硬化的进展.尽管培哚普利和依那普利在减少斑块面积方面差异无统计学意义,但是培哚普利在稳定斑块方面优于依那普利.     

鸢尾素对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化的影响

目的研究鸢尾素对载脂蛋白E基因敲除(ApoE~(-/-))小鼠动脉粥样硬化的影响。方法将ApoE~(-/-)小鼠随机分为正常对照组、动脉粥样硬化模型组、鸢尾素组,每组10只,分别给予普通饮食+生理盐水、高脂饮食+生理盐水、高脂饮食+鸢尾素,饲养至12周后处死,处死前测体重,用化学法测定总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)、血清超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量。采用HE染色和整体油红O染色分析主动脉粥样斑块面积大小,实时荧光定量(qRT-PCR)检测主动脉CD36、NF-κB p65的mRNA表达,Western blot检测主动脉CD36、NF-κB p65、SOD的蛋白表达。结果动脉粥样硬化模型组主动脉斑块面积明显高于正常对照组,内膜明显增厚,而鸢尾素组较动脉粥样硬化模型组斑块面积减少,内膜增厚程度下降。与正常对照组比较,动脉粥样硬化模型组小鼠体重、TC、TG、LDLC、MDA水平升高,NF-κB p65、CD36mRNA和蛋白表达增加,而血清SOD活性、HDLC水平减低(P0.05)。与动脉粥样硬化模型组比较,鸢尾素组小鼠体重、TC、TG、LDLC、MDA水平降低,NF-κB p65、CD36 mRNA和蛋白表达下调,而血清SOD活性、HDLC水平升高(P0.05)。结论鸢尾素能减轻ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化的发生发展,这可能与其降低小鼠体重和血脂、抑制炎症反应、抗氧化应激有关。     

老龄载脂蛋白E基因敲除小鼠血脂及病理组织学观察

目的:观察用普食喂养而非以往研究中的高脂饮食喂养的载脂蛋白E基因敲除小鼠(Apo E-/-)的血脂及病理组织学变化特点。方法:各选取20只8周龄雄性小鼠和同龄同性C57BL/6J小鼠为对照,普食喂养6~8个月,测定血清中总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)的含量。常规制备主动脉的病理切片,进行HE染色,观察病理学变化。结果:Apo E-/-小鼠血清中TC、TG、LDL含量明显高于对照组(P0.05),且Apo E-/-小鼠主动脉根部病理切片明显脂质斑块形成。结论:普食喂养8月龄Apo E-/-小鼠是研究动脉粥样硬化(AS)的理想动物模型,为AS性心血管疾病研究者提供了参考资料。     

老龄ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块的病理观察

目的：观察西方饮食喂养的老龄（≥48周）ApoE基因敲除小鼠血管动脉粥样硬化斑块的病理组织学状况。方法：选取6周龄雄性纯合子ApoE基因敲除小鼠30只，均予以西方饮食喂养，分别在喂养42周（48周龄）、54周（60周龄）、66周（72周龄）时，随机各取10只，取无名动脉做病理检测。酶法检测血脂情况，冰冻切片光镜下观察无名动脉粥样硬化斑块病理情况，图像分析管腔及斑块面积，免疫组化染色观察斑块中骨桥蛋白、α肌动蛋白的表达。von Kossa染色观察斑块钙化情况。结果：西方饮食喂养48周龄后，ApoE基因敲除小鼠主动脉弓内形成广泛而且典型的动脉粥样硬化成熟斑块，60周龄时，无名动脉内斑块面积、其与血管面积比率和自发破裂率最高，不稳定斑块比例最大（P〈0．05～〈0．01）。结论：长期西方饮食喂养ApoE基因敲除小鼠，是研究动脉粥样硬化成熟斑块很好的动物模型。     

瑞舒伐他汀对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化的影响

目的 探讨瑞舒伐他汀对载脂蛋白E基因敲除(apoE-/-)小鼠主动脉粥样硬化的影响.方法 取apoE-/-小鼠18只建立动脉粥样硬化模型,C57BL/6小鼠12只为对照组.apoE-/-小鼠予高脂饲料,C57BL/6小鼠予普通饲料.12周后,随机抽取C57BL/6小鼠和apoE-/-小鼠各6只,判断是否成模.将成模后余下的12只apoE-/-小鼠随机分为模型组和瑞舒伐他汀治疗组(瑞舒伐他汀10 mg·kg-1·d-1灌胃),每组6只.余下的6只C57BL/6小鼠作为对照组.再过12周后处死小鼠,行血脂及主动脉HE、Masson、油红O染色观察动脉斑块,免疫组织化学方法检测主动脉组织平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子β1(TGF-β1)、巨噬细胞表面分子-3(Mac-3)表达.结果 模型组小鼠胆固醇、低密度脂蛋白水平均高于对照组(P均＜0.01),甘油三酯水平与对照组比较差异无统计学意义.模型组小鼠主动脉组织内可见明显动脉粥样硬化斑块形成,α-SMA、TGF-β1和Mac-3表达均较高于对照组(P均＜0.01).瑞舒伐他汀治疗组小鼠胆固醇、低密度脂蛋白、甘油三酯水平与模型组比较差异无统计学意义,但斑块内脂肪含量少于模型组,胶原含量多于模型组.治疗组α-SMA表达与模型组比较差异无统计学意义,治疗组TGF-β1、Mac-3表达均低于较模型组(P均＜0.01).结论 瑞舒伐他汀可以减轻apoE-/-小鼠动脉粥样硬化模型中的脂质沉积和炎症反应,可以增加其胶原含量,利于斑块的稳定,具有抗动脉粥样硬化的作用,对血脂无影响.

Abstract：

Objective To investigate the effect of rosuvastatin on atherosclerosis in apoE-knockout ( apoE - / - ) mice. Methods Eighteen 6-week-old apoE - / - mice fed with high fat diet were used as atherosclerosis models, twelve 6-week-old C57BL/6 mice fed with normal diet were used as control. After twelve weeks, six apoE -/ - mice were used to observe the formation of atherosclerosis. Another 12 apoE -/- mice were divided into placebo treated group (n =6) and rosuvastatin group (n =6,10 mg· kg-1 ·d -1 per gavage) and treated for 12 weeks. Then, blood was collected for measuring lipid, aorta was prepared for morphologic study (HE, Oil red O, Masson) and immunohistochemical analysis (α-smooth activor protein, transforming growth factor β1, macrophage surface molecule-3 ). Results Serum cholesterol and low density lipoprotein levels were significantly higher in apoE -/- mice fed with high fat diet than in C57/ BL6 mice( all P ＜0. 01 )while triglyceride level was similar between the two groups, these were not affected by rosuvastatin. Similarly, atherosclerotic lesion area in apoE -/ - mice fed with high fat diet was also not significantly reduced by rosuvastatin, while lipid deposition could be significantly reduced and collagen deposition could be significantly increased in the aortic atherosclerotic lesions by treatment with rosuvastatin.Upregulated TGF-β1 and Mac-3 expression in the aortic atherosclerotic lesions in apoE -/- mice fed with high fat diet could also be significantly reduced by rosuvastatin (all P ＜ 0. 01 ), suggesting reduce inflammatory responses in the atherosclerotic lesion and stable atherosclerotic plaque post rosuvastatin treatment. Conclusion Reducing inflammatory responses and stabilizing plaque properties might contribute to the anti-atherosclerosis effects of rosuvastatin in mice high fat diet fed apoE -/- mice.     

基因多态性与骨密度的相关性

骨密度受遗传因素影响,骨密度测定是诊断骨质疏松的主要依据.维生素D受体、Ⅰ型胶原、雌激素受体、降钙素受体参与骨形成和骨代谢,其基因多态性决定骨密度.研究发现Wnt蛋白、人类白细胞抗原等基因多态性也与骨密度有关.本文就基因多态性与骨密度的相关性进行论述.     

老年男性骨质疏松症患者骨密度和生化指标的变化

目的：了解老年男性骨质疏松症患者骨密度和骨代谢生化指标变化的特点。方法：对30例老年男性骨质疏松症患者进行腰椎（L2－4）骨密度（BMD）、骨矿含量（BMC）、血和尿骨代谢生化指标的测定,并与对照组进行比较。结果：骨质疏松（OP）组的BMD和BMC均显著小于对照组,分别比对照组下降21．6％和25％;OP组骨形成指标血清碱性磷酸酸（ALP）和C端骨钙素（BGP）明显高于对照组,分别上升25．4％和222％;骨吸收指标尿羟脯氨酸与肌酐的比值（HOP／Cr)和Ⅰ型胶原N－末端肽与肌酐的比值（INTX／Cr)明显高于对照组,分别上升22．6％和223％。OP组血清T水平明显低于对照组,两组血清25－羟维生素D3（25－OH－D3）均在正常低限或低于正常水平。结论：腰椎（L2－4）BMD和BMC是诊断男性骨质疏松症的主要依据;老年男性骨质疏松症患者一部分人属于骨代谢高转换型;雄激素对老年男性骨量的维持起重要作用;老年男性维生素D缺乏质疏松症发生的重要基础。     

强直性脊柱炎患者骨密度随年龄的变化

目的 采用双能X线吸收法测量强直性脊柱炎患者(AS)不同部位的骨密度(BMD),探讨其与年龄变化的关系,为临床防治AS患者BMD降低提供参考.方法 选取门诊50例符合纽约诊断标准的AS患者,按年龄≤40岁、年龄＞ 40岁分为两组,分别检测其侧位腰椎(L1-L4)、股骨颈、髋关节BMD,以T值≤-1.0定义为BMD降低,包括骨量减少(-2.5＜T＜-1.0)与骨质疏松(T≤-2.5).结果 两组AS患者出现BMD降低的比例均高于正常人,且年龄＞ 40岁组其腰椎BMD减少的比例高于年龄≤40岁组(P＜0.05),而其腰椎平均T值低于年龄≤40岁组(P＜0.05),在股骨颈测得的BMD、骨质疏松比例两组无明显差异(P＞0.05).结论 AS患者早期即可出现骨量减少甚至骨质疏松,随着年龄的增长其侧位腰椎BMD降低明显,骨折风险增大.临床上应当提高对AS合并骨质疏松的警惕,及时予补钙等治疗,提高患者的生活质量.     

老年男性骨代谢相关性激素与年龄和骨密度的相关性

目的探讨老年男性的性激素水平,包括血清睾酮（TTT）、雌二醇（E2）、脱氢表雄酮硫酸酯（DHEAS）随年龄的变化及与多部位骨密度（BMD）之间的关系。方法采用化学发光法测定108例55～92岁男性血清TTT、E2,ELISA法测定血清DHEAS、DEXA测定腰椎正位、股骨颈、大转子、大转子内侧、髋部和Ward＇s三角（Ward＇s）的BMD。根据年龄和BMD诊断标准技血清E2水平的四分位间距分组,年龄分组按每10岁年龄段分为5组,按BMI分为正常组、超重组和肥胖组3组,按T值＞-1．0 s、-2．5 s～-1．0s及≤-2．5 s分为正常骨量组、低骨量组及骨质疏松组,比较各组性激素的差异和BMD的关系。结果（1）各年龄组血清DHEAS水平随增龄而降低（P＜0．05）,与年龄呈负相关（r=-0．596,P＜0．01）,血清E2!、TTT水平与增龄无相关性。（2）正常骨量组、低骨量组、骨质疏松组血清E_1水平逐渐降低（P＜0．05）;股骨上端和腰椎BMD与E2呈正相关（r分别为0．247～0．366,P＜0．05）,与血清TTT和DHEAS水平无相关性,经校正年龄。体质量和BMI后,偏相关分析仍示与血清E1水平相关（r=0．256～0．322,P＜20．05）。各部位的BMD在E2的第1和第2分位间距差异有统计学意义（P＜0．05）,第3和第4分位间距差异无统计学意义。结论（1）老年男性血清DHEAS水平与年龄呈负相关,随增龄而降低;（2）血清E2水平是影响老年男性骨量的一个独立危险因素,动态监测可用于预测老年男性的骨量丢失。     

胰岛素、胰岛素原对胰岛素抵抗状态下HepG2细胞PAI-1分泌的影响

目的研究胰岛素、胰岛素原对胰岛素抵抗状态下ＨｅｐＧ２细胞ＰＡＩ１分泌的影响。方法选择在合成ＰＡＩ１方面与肝细胞相似的ＨｅｐＧ２细胞，以高浓度胰岛素诱导胰岛素抵抗后，分别用生理浓度的胰岛素、胰岛素原刺激２４小时，以观察胰岛素抵抗状态下ＰＡＩ１活性的变化。结果基础状态下胰岛素抵抗ＨｅｐＧ２细胞与非胰岛素抵抗ＨｅｐＧ２细胞相比，ＰＡＩ１活性差异不明显；胰岛素、胰岛素原刺激后，胰岛素抵抗ＨｅｐＧ２细胞ＰＡＩ１活性明显高于非胰岛素抵抗ＨｅｐＧ２细胞。当培液中同时加入１０－４Ｍ二甲双胍后，胰岛素、胰岛素原介导的ＰＡＩ１过量分泌得到明显抑制。结论在胰岛素抵抗状态下，胰岛素、胰岛素原刺激后ＨｅｐＧ２细胞ＰＡＩ１活性明显增加，而二甲双胍可明显抑制此现象。     

Bone mineral density and bone turnover in patients with psoriatic arthritis

Psoriasis is a common inflammatory skin disease, and conflicting data have been published about osteoporosis and bone turnover markers in patients with psoriatic arthritis. The aim of this study was to assess bone mineral density (BMD) and bone turnover markers in psoriatic patients with and without peripheral arthritis and to investigate the relationship between clinical parameters and markers of bone turnover. Forty-seven patients (24 women, 23 men) with psoriasis were included to the study. Demographic data and clinical characteristics were recorded. Erythrocyte sedimentation rate and C-reactive protein were assessed as disease activity parameters. BMD was determined for lumbar spine and total hip by dual X-ray absorptiometry (DXA). Serum Ca, P, alkalen phosphatase (ALP), and serum type I collagen cross-linked C telopeptide (CTX) were measured as bone turnover markers in all patients. The patients were divided into two groups according to their peripheral arthritis status. The clinical and laboratory variables, as well as bone mass status of the groups, were compared with each other. Eighteen patients had peripheral arthritis. All the female patients were premenopausal. None of the patients had radiologically assessed axial involvement. There was no significant difference between the BMD levels of psoriatic patients with and without arthropathy. One patient (5%) had osteoporosis, and nine (50%) patients had osteopenia in arthritic group, while eight (27.5%) patients had osteopenia in patients without arthritis. Serum CTX, ALP, Ca, and P levels were not significantly different in arthritic than in non-arthritic patients (p > 0.05). In patients with psoriatic arthritis, the duration of arthritis was negatively correlated with BMD values of lumbar spine and total femur and serum CTX levels, suggesting an association of increased demineralization with the duration of joint disease. In conclusion, psoriatic patients with peripheral arthritis with longer duration of joint disease may be at a risk for osteoporosis, which can require preventative treatment efforts.     

甲亢患者骨密度、骨代谢指标及维生素D受体的变化

本研究发现甲状腺功能亢进症 (甲亢 )患者腰椎、股骨颈、Ward三角和大转子区骨密度降低 ,血清钙、血清磷、血清碱性磷酸酶及血清骨钙素升高 ,血淋巴细胞内维生素D受体 (VDR)含量降低。FT3与FT4与骨密度呈负相关。提示甲亢导致高转换型骨丢失 ,它可引起骨密度降低 ,骨代谢指标及VDR含量异常。