RDP1258对大鼠脾细胞增殖功能影响的体内研究

目的：探讨一种新型HLA衍生肽（RDP1258）对大鼠脾细胞增殖的全内免疫抑制作用及其机制。方法：人工固相合成PDP1258，用^3H-TdR掺入法观察其对体内大鼠脾细胞增殖反应的影响。采用酶化学法及免疫组化染色方法，观察其对体内脾细胞血纸素氧合酶-1（heme oxygenase-1，HO-1）活性的影响。结果：^3H-TdR掺入法检测表明，RDP1258可显著抑制脾淋巴细胞转化及MLR的增殖反应：但能够明显提高体内HO-1的活性。并增强其表达。结论：RDP1258体内应用能够显著抑制大鼠脾细胞由丝裂原或同种抗原引起的增殖反应，这种作用可能是通过影响HO-1的活性而实现。     

一种新型HLA衍生肽对大鼠脾细胞免疫功能的抑制作用

目的：观察一种新型HLA衍生肽(RDP1258)的免疫抑制功能并探讨其机制。方法：人工固相合成一种HLA衍生肽(RDP1258)，^3H-TdR掺入法检测其在体外对大鼠脾细胞增殖反应的影响，并采用酶化学法观察其对脾细胞血红素氧化酶-1(heme oxygenase-1，HO-1)活性的影响。结果：RDP1258可显著抑制淋巴细胞转化及MLR的增殖反应；该肽体外降低HO-1活性呈现出剂量依赖性。结论：RDP1258能够显著抑制大鼠脾细胞经丝裂原或同种抗原刺激引起的增殖反应，这种作用可能是通过影响HO-1活性而达到的。     

新型HLA衍生肽对人外周单核细胞免疫功能的抑制作用

目的：探讨一种新型HLA衍生肽（RDP1258）对人外周血单核细胞增殖的免疫抑制作用及其机制。方法：人工固相合成RDP1258，用3H-TdR掺入法观察其在体外对人外周单核细胞增殖反应的影响，以酶化学法观察其对淋巴细胞血红素氧合酶-1（Heme oxygenase-1，HO-1）活性的影响。结果：RDP1258可显著抑制淋巴细胞转化及MLR的增殖反应；该肽体外降低HO-1活性呈现出剂量依赖性。结论：RDP1258能够显著抑制人外周单核细胞经丝裂原或同种抗原刺激引起的增殖反应，这种作用可能是通过影响HO-1活性而达到的。     

HO-1减轻吸烟大鼠血清引起的HUVEC氧化损伤

目的 探讨血红素氧化酶-1(HO-1)是否能够减轻吸烟大鼠血清引起的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的氧化损伤.方法 15只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、吸烟组、吸烟并注射锌原卟啉(ZnPP)组.建立大鼠吸烟模型.Western blot检测各组大鼠颈动脉中HO-1的表达.体外培养HUVEC,分为加入正常大鼠血清、吸烟大鼠血清和吸烟并注射ZnPP大鼠血清.Western blot检测各组HO-1的表达.将吸烟大鼠血清加入HO-1过表达及HO-1低表达的HUVEC中,应用二氢溴化乙啶检测各组活性氧的含量.结果 吸烟可以明显诱导大鼠颈动脉中HO-1的表达(P＜0.01).吸烟大鼠血清及吸烟并注射ZnPP大鼠血清均可诱导HUVEC中HO-1的表达,但后者作用更强(P＜0.01).吸烟大鼠血清能使HUVEC内活性氧含量增多(P＜0.01),HO-1能减轻此氧化损伤(P＜0.01).结论 吸烟大鼠血清可以造成HUVEC的氧化损伤,H0-1能够减轻此氧化损伤作用.     

HO-1对糖尿病大鼠早期肾损伤的影响

目的探讨血红素加氧酶-1(HO-1)水平的变化对糖尿病肾损伤时肾脏内皮功能及肾损伤的影响。方法链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠模型,分成4组:对照组、糖尿病(DM)组、Hemin(HO-1诱导剂)+DM组、ZnPP(HO-1抑制剂)+DM组。在5、10、15周时收集标本;IHC及RT-PCR法观察肾组织HO-1的表达,检测MDA含量、SOD活性、NO及iNOS、eNOS水平的变化。同时收集各组大鼠24 h尿液测尿白蛋白排泄率(UAER)指标。结果与对照组比较,DM时大鼠肾脏局部MDA增加,HO-1的表达在5周时即增强,10周时有显著性差异(P<0.05)。在对照组肾组织中iNOS高于eNOS、DM时,iNOS下降而eNOS明显升高;与DM5周组比较,Hemin+DM组HO-1表达明显增强(P<0.05),MDA含量下降,eNOS升高受抑制,UAER减少(P<0.05);ZnPP+DM组HO-1表达减弱,MDA含量升高(P<0.01),eNOS增加,NO、UAER明显增加(P<0.05)。结论提高肾脏HO-1表达水平可减缓DM早期肾脏损伤。     

RDP1258对淋巴细胞功能及移植物存活的影响

目的 探讨RDP1258对T细胞功能及大鼠移植心脏存活时间的影响。方法 人工合成RDP1258，用MTT法分别进行淋巴细胞增殖试验、单向混合淋巴细胞反应(Mixed lymphocyte reaction，MLR)和淋巴细胞毒(Cytotoxic T lymphocyte，CTL)试验。建立大鼠心脏移植模型，观察不同组大鼠移植心脏存活时间。结果 RDP1258显著抑制ConA刺激的淋巴细胞增殖，抑制单向MLR反应体系中应答细胞对刺激细胞的反应能力和CTL的细胞毒功能。RDP1258组大鼠移植心脏存活时间长于对照组。结论 RDP1258体外能抑制由丝裂原或同种异体抗原引起的淋巴细胞增殖反应和CTL的杀伤功能，体内明显延长大鼠移植心脏的存活时间。     

人工合成HLA肽对淋巴细胞增殖反应的影响

人工固相合成两种ＨＬＡ肽（Ｐ１：ＨＬＡ－Ｂ０７０１．７５－８４；Ｐ２：ＨＬＡ－Ｂ２７０２．７５－８４），用ＭＴＴ法观察其在体外对具有不同ＨＬＡ表型淋巴细胞增殖反应的影响及其等位基因特异性。结果显示：Ｐ１和Ｐ２均可显著抑制淋巴结胞的增殖反应；且这种抑制作用无等位基因特异性。     

诱导HO-1表达延长大鼠心脏移植物存活时间

目的了解血红素加氧酶-1(HO-1)在延长异基因大鼠心脏移植物存活中的作用及其机制。方法雄性LEW(RT11)和LEW.1W(RT1u)大鼠分别作为供体和受体,受体鼠分别应用CoPPIX 5 mg/(kg.d),SnPPIX5 mg/(kg.d)。对照组及实验组均6只鼠。由移植手术前1日开始至发生排斥,比较心脏移植物存活时间,分别在移植后第5天取心脏进行HE染色及CD3、CD25、ED1和K i-67染色;并测定HO-1活性和用W estern b lot定量HO-1蛋白;进行受体脾细胞接受供体脾细胞刺激的混合淋巴细胞培养。结果对照组心脏移植物平均7 d出现排斥;应用CoPPIX诱导HO-1表达后存活时间为13.5 d,显著长于对照组(P<0.05)。而应用SnPPIX治疗后存活时间为6.5 d。对照组与SnPPIX治疗组的心脏移植物中有中等量的细胞浸润,CoPPIX治疗组移植物组织中的CD3 T细胞、CD25 细胞、巨噬细胞和增殖细胞都明显少于SnPPIX及对照组。同对照组相比,CoPPIX诱导HO-1表达明显抑制体内脾细胞增生(P<0.05),而SnPPIX无抑制。结论诱导HO-1表达能够抑制大鼠淋巴细胞的免疫活性并延长异基因心脏移植物的存活。     

HO-1修饰的大鼠骨髓间充质干细胞在体外对淋巴细胞的影响北大核心CSCD

目的：探讨血红素加氧酶1（HO-1）修饰的大鼠骨髓间充质干细胞（BM MSCs）在体外对淋巴细胞的免疫调节作用。方法体外分离培养和鉴定BM MSCs ,用载有HO-1基因的重组腺病毒载体进行感染,形成HO-1/BM MSCs,与大鼠脾淋巴细胞共培养。 MTT法检测淋巴细胞的增殖活性,碘化丙啶染色流式细胞术分析细胞周期的分布情况,ELISA法检测细胞因子含量,流式细胞仪分析T淋巴细胞CD25、CD71的表达。结果 HO-1/BM MSCs参与共培养的淋巴细胞的增殖活性和细胞周期进程均被抑制、促炎因子（ IL-2、TNF-α和IFN-γ）的分泌量降低、抗炎因子（ IL-10）的分泌量升高、T淋巴细胞CD25和CD71的表达降低,与BM MSCs组相比差异有统计学意义。结论 HO-1/BM MSCs较BM MSCs能够更好地发挥对淋巴细胞的免疫调节作用。     

HO-1对DXR免疫反应影响的实验研究

目的 探讨HO-1对延迟性异种心脏移植免疫反应的影响。方法 应用NIH小鼠-Wistar大鼠颈部异位心脏移植模型,用CoPP（cobalt protoporphyrin,CoPP）诱导HO-1并结合免疫抑制剂Cyclosporine A（CSA）及Cyclophosphamid（CYP）处理受体。比较移植心脏存活时间并分别用免疫组化、Westem- blot蛋白印迹杂交等检测移植心脏HO-1、IL-1β、INF-γ、TNF-α和STAT-3表达,免疫组化检测并计数分析CD68细胞,比较不同处理因素之间的差异。结果 单用CoPP诱导HO-1后移植心脏存活时间较CSA组及空白对照组长（t=2．6936,P〈0．05）,CSA＋CoPP组移植心脏存活时间和CYP＋CoPP组均长于单用CSA组和CYP组（t=2．8511,P〈0．05）,CoPP＋CSA＋CYP组移植心脏存活时间优于其余任何组（t=3．8644,P〈0．001）。CoPP组TNF-α、LI-1β低于在空白对照组的表达（t=2．6364,P〈0．05）,但INF-γ除外。三者在CoPP＋CSA＋CYP组表达均低于其余各组。CoPP及CSA、CYP组间STAT-3表达无差异（t=1．0854,P〉0．05）,但均高于空白对照组（t=10．1254,P〈0．001）。CoPP与CSA及CYP联合应用时STAT-3表达高于单用CoPP组（t=2．8164,P〈0．05）,三者联合使用时高于任何组（t=2．5605,P〈0．05）。CoPP组移植心肌组织中CD68阳性细胞数低于空白对照组（t=3．1837,P〈0．01）,CoPP＋CSA＋CYP组最低（t=2．5099,P〈0．05）。结论 HO-1并联合免疫抑制剂CSA、CYP可能通过上调STAT-3蛋白表达,减少CD68细胞对移植心脏的浸润,降低心脏移植后炎症细胞因子IL-1β、TNF-α和IFN-γ的产生,并可能由此推迟了DXR的发生。     

血红素加氧酶-1的抗肿瘤细胞凋亡作用研究进展

血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)是血红素分解的关键酶,其促进血红素分解释放胆绿素、CO和亚铁离子。HO-1在机体内发挥多种生物学功能,主要有减轻炎症反应、降低氧化损伤、抑制细胞凋亡以及调节细胞增殖。随着研究的不断深入,HO-1与肿瘤的相关性研究逐渐增多,表明其与肿瘤关系密切,参与调控肿瘤细胞凋亡、增殖等过程。本文主要就HO-1蛋白与肿瘤细胞凋亡的相关性作一综述。     

高浓度氧增加未成年大鼠肺血红素加氧酶-1表达

目的 探讨高浓度氧对未成年大鼠肺血红素加氧酶-1(HO-1)表达的影响.方法 将生后21 d SD大鼠40只随机分为空气组和12、24、48及72 h高氧组,分别置于空气和常压高氧箱(92%~94% O<,2>)中.检测左肺湿/干重比及肺组织病理学改变,用RT-PCR和Western blot法分别检测肺HO-1 mRNA及HO-1蛋白表达情况.结果 高氧12 h组肺HO-1 mRNA吸光度积分相对值和高氧24 h组HO-1蛋白表达水平分别为0.350±0.043和0.455±0.046,较对照组0.263±0.037和0.280±0.044明显升高,且均随高氧暴露时间延长而表达进一步增加(P<0.05,P<0.01).与空气组比较,高氧48 h组和高氧72 h组左肺湿重/干重及肺损伤评分显著增高(P<0.05,P<0.01).结论 高浓度氧可引起未成年大鼠肺组织HO-1表达增多.     

Effects of dexmedetomidine pretreatment on heme oxygenase-1 expression and oxidative stress during one-lung ventilation

Purpose: This study aimed to explore effects of dexmedetomidine pretreatment on heme oxygenase-1 (HO-1) expression and oxidative stress during one-lung ventilation (OLV) in lung cancer patients. Methods: Fifty patients with lung carcinoma (ASA I-II, 40-65 years old, body mass index [BMI] < 30 kg/m²) undergoing pulmonary lobectomy were enrolled. They were divided randomly into two equal groups before anaesthesia induction to receive either intravenous injection of 1 μg/kg dexmedetomidine for 20 min (Dexmedetomidine) or not (Control). Results: The results showed no difference in heart rate (HR), mean arterial pressure (MAP) and bispectral index (BIS) between the two groups, as well as liquid intake and output volume (LIO), duration of OLV and time from surgery beginning to excision of pathological tissues (P > 0.05). Levels of tumor necrosis factor (TNF-α) and malondialdehyde (MDA) in Dexmedetomidine group were lower than that of Control at OLV 60 and 90 (P < 0.05). Superoxide dismutase (SOD) activity and the expression level of HO-1 were higher in Dexmedetomidine group than in Control (P < 0.05). Conclusions: Dexmedetomidine pretreatment could upregulated expression of HO-1 in lung tissue and reduce oxidative stress and inflammation during OLV. Thus dexmedetomidine played a role in protecting lung injury by promoting HO-1 expression.     

类叶升麻苷通过诱导血红素加氧酶-1的表达抑制MPP+诱导的PC12细胞损伤

目的 探讨类叶升麻苷(AS)是否在PC12细胞中诱导血红素加氧酶-1(HO-1)的表达进而抑制1-甲基-4-苯基吡啶(MPP+)诱导的神经毒性损伤.方法 类叶升麻苷(1、20和30 μmol/L)处理PC12细胞12 h,利用反转录PCR(RT-PCR)检测HO-1 mRNA表达、Western blot方法和免疫荧光方法检测HO-1蛋白的表达.1mmol/L MPP+单独或与AS处理细胞,或HO-1抑制剂锌原卟啉(ZnPP)预处理细胞1h,MTT法检测细胞活力.结果 与正常对照组相比,AS可在PC12细胞中诱导HO-1 mRNA和蛋白的表达,AS诱导的HO-1表达主要集中在胞浆内.HO-1抑制剂ZnPP减弱AS对MPP+诱导损伤的抑制作用.结论 AS可在PC12细胞中诱导HO-1的表达,可能参与AS对MPP+诱导损伤的抑制作用.     

Heme-induced heme oxygenase-1 (HO-1) in human monocytes inhibits apoptosis despite caspase-3 up-regulation

Monocyte activation, apoptosis and differentiation are hallmarks of most inflammatory vascular disorders. We studied the effects of heme oxygenase-1 (HO-1) induced by its substrate hemin on apoptosis, caspase-3 expression and the differentiation of freshly isolated human monocytes. Hemin induced HO-1 in a dose- and time-dependent fashion as measured by semi-quantitative RT-PCR and flow cytometry. Apoptosis was markedly suppressed by hemin in cells rendered apoptotic by serum deprivation or dexamethasone as determined by flow cytometric detection of annexin V binding or transmission electron microscopy (TEM). The specific HO-1 inhibitor zinc protoporphyrin (ZnPP) reversed the effects of hemin on monocyte apoptosis and diminished cell lifespan. Surprisingly, the cytoprotective effects of hemin were positively correlated with caspase-3 up-regulation. Hemin-induced apoptosis suppression was enhanced by the caspase-3 inhibitor DEVD-CHO, indicating that caspase-3 was active in a pro-apoptotic fashion. Hemin inhibited CD95 as a putative cytoprotective mechanism. Morphological studies and detection of CD86 showed that monocytes differentiated into macrophages in response to hemin after relatively long incubation times, a phenomenon that might be provoked by caspase-3-regulated pathways. Our results confirm a similar cytoprotective effect of hemin/HO-1 for monocytes as has been shown for other cells, despite caspase-3 up-regulation. The fact that HO-1 may adversely affect monocyte survival and differentiation could be of particular significance in future therapies for occlusive vascular diseases or transplant rejection.