单纯疱疹病毒Ⅰ型感染培养细胞CV-1后微丝形态变化的观察

应用光镜和电镜技术,对疱疹病毒Ⅰ型感染后的培养细胞CV-1中微丝结构与功能的变化进行动态观察,探讨病毒感染造成的微丝形态及分布变化。观察结果,或染细胞微丝分布不均、结构不清。     

用免疫荧光细胞化学法观察肿瘤细胞内的微丝分布

文章介绍了从鸡砂囊平滑肌中提取肌动蛋白抗原及抗肌动蛋白血清的制备,并用自制抗血清应用于间接免疫荧光染色技术,观察体外培养的5种正常细胞和3种肿瘤细胞株内的微丝结构。观察结果提示正常细胞中微丝的数量、分布,形态与细胞的不同时相、运动和形态变化有关。含肌动蛋白的微丝可呈现直纤维状的线型荧光或呈弥散的颗粒状荧光。肿瘤细胞内微丝的数量略有减少,排列稀疏,在细胞浆内分布不均匀。与正常细胞间存在一定差异。     

纤维连接蛋白和层粘连蛋白对瘤细胞移动性的影响

用琼脂糖滴扩散法分别观察在培养基内加入不同浓度的纤维连接蛋白（ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ，Ｆｎ）和层粘连蛋白（Ｌａｍｉｎｉｎ，Ｌｎ）及地塞米松后，培养的人肺巨细胞癌细胞和肺腺癌细胞体外移动性的改变；同时用考马斯蓝Ｒ－２５０染色显示瘤细胞内微丝结构的变化。结果显示加入外源性Ｆｎ和Ｌｎ后，两株瘤细胞的移动性均增强，胞浆内近胞膜周围的微丝增多；地塞米松处理后，瘤细胞内Ｆｎ合成增加，细胞移动性降低，胞浆内微丝增多，杂乱弥漫分布。结果表明瘤细胞移动性的变化与细胞内微丝结构的变化有关。实验还观察到内源性Ｌｎ阳性的肺巨细胞瘤细胞的体外移动能力大于Ｌｎ阴性的肺腺癌细胞。     

浸润中的胃癌细胞及其邻近组织的超微结构变化

用电子显微镜观察浸润中的胃腺癌细胞及其邻组织-间质及靶器官组织的超微结构变化,发现癌细胞内微丝主要集中在足样突起内,而无突起形成或未浸润的癌细胞胞质内极少或未见微丝。说明微丝的出现与癌细胞的运动有关,系动态性合成与分解。由此也可圆满地解释文献中有关癌细胞内微丝增多或减少的争论。此外,癌细胞浸润到肌层时,未见到癌细胞对平滑肌细胞的直接破坏,提示平滑肌细胞的变性、坏死可能是间接作用所致。     

大鼠睾丸支持细胞的微丝分布特征

采用TRITC—Phalloidin(鬼笔环肽)特异性染色和透射电镜方法,研究在体和离体培养的SD大鼠睾丸支持细胞的微丝分布规律。结果表明:在体支持细胞内微丝呈束状沿细胞膜下分布。在生精上皮基底部,微丝束聚集呈带状围绕于细胞基底部周缘,各束微丝相互平行;相邻支持细胞两侧膜下的微丝束排列走行基本对称一致。离体培养的支持细胞内微丝排布与细胞生活状态及铺展情况密切相关,在充分铺展细胞中微丝仍呈束状沿细胞膜下排列。证实沿细胞膜下成束排列是支持细胞内微丝分布的基本特征,这一特征对细胞整体形态及血一睾屏障的维持具有重要意义。     

卡介菌多糖核酸对肺癌细胞粘附及骨架结构的影响

目的　研究卡介苗多糖核酸 (BCG PSN)对肺癌细胞上粘附分子配体 (slex)表达及肺癌细胞质内骨架的表现特征的影响。方法　采用流式细胞仪及透射电镜观察BCG PSN对高转移人肺巨细胞癌 (PG)细胞和低转移人肺腺癌 (PAa)细胞上slex 表达的影响及胞质内骨架结构的变化。结果　①流式细胞仪分析提示PAa细胞slex 表达高 ( 66.8% ) ,PG细胞表达低 ( 5 .72 % )。经BCG PSN处理后 ,PAa细胞slex 表达呈浓度依赖下降。②超微结构观察 :PAa细胞微丝稀疏 ,PG细胞微管微丝减缺。BCG PSN处理后 ,PG细胞微丝较前丰富、完整 ,树样分布 ,PAa细胞仅见少量的微丝。结论　细胞内微管、微丝等细胞骨架成分的改变与癌细胞运动迁徙能力有关 ,BCG PSN对肺癌细胞粘附性的抑制环节不是细胞骨架介导的粘附强化 ,可能是粘附分子表达下降所致的粘附强化启动过程。     

模拟微重力对人脐静脉内皮细胞微丝骨架的影响

目的研究模拟微重力对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVEC）形态及微丝骨架的影响。方法利用回转器模拟微重力，将原代培养的HUVEC分为回转组和静止对照组，培养72h，相差显微镜观察两组细胞的形态；电镜观察微丝（microfilament，MF）的形态分布。结果静止培养的细胞贴壁良好，形态规则，微丝在细胞核及细胞膜的周围多呈束状分布，回转组的细胞贴壁不好且微丝排列紊乱、微丝变短，微丝松散、稀少而且不成束排列。结论模拟微重力情况下细胞形态有所改变，微丝骨架分布的有序性降低。     

微丝在体外培养四种不同细胞表达的形态观察

【目的】探讨微丝在4种不同细胞内的形态分布。【方法】体外培养人胃低分化粘液腺癌(MGC80 3)细胞系、人肝癌(SMMC772 1)细胞系、原代培养人皮肤成纤维细胞(HSF)和大鼠骨髓间充质干细胞(MSC) ;用考马斯亮蓝显示四种细胞内的微丝,通过光学显微镜观察微丝分布的状态。【结果】MGC80 3细胞系和人肝癌SMMC772 1细胞系内,微丝较细且均匀分布,原代培养的HSF和MSC细胞内微丝较为粗大,分布不均匀。【结论】微丝分布与细胞的粘附状态和细胞形态有密切关系。     

苦参素对胃癌SGC-7901细胞凋亡及细胞骨架改变的研究

目的 探讨苦参素对胃癌细胞株SGC-7901的抑制增殖效应及凋亡诱导作用。方法 用苦参素处理SGC-7901细胞,采用MTT法检测苦参素对细胞的抑制作用,透射电镜观察微丝的变化,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期。结果 苦参素使SGC-7901细胞呈凋亡改变,细胞的活力下降,微丝几近消失,不同浓度的苦参素均可导致细胞凋亡和细胞周期阻抑。结论 苦参素能抑制胃癌细胞增殖,能诱导胃癌细胞凋亡。     

苦参素诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡的研究

目的 探讨苦参素对胃癌细胞株SGC-7901的抑制增殖效应及凋亡诱导作用.方法 用苦参素处理SGC-7901细胞,采用MTT法检测苦参素对细胞的抑制作用,透射电镜观察微丝的变化,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期.结果 在苦参素作用下,SGC-7901细胞呈凋亡改变.细胞凋亡的同时,细胞的活力下降,微丝几近消失,不同浓度的苦参素均可导致细胞凋亡和细胞周期阻抑.结论 苦参素能抑制胃癌细胞增殖,能诱导胃癌细胞凋亡.     

恶性瘤细胞侵袭平滑肌细胞的电镜观察

在电镜下观察恶性瘤细胞侵袭平滑肌细胞,看到恶性瘤细胞以微绒毛及伪足贴附并透过平滑肌细胞。微绒毛及伪足内的微丝是瘤细胞的运动骨架。为了探讨肿瘤转移,进一步研究微丝的结构及活动是非常重要的。     

RNAi介导的IBP表达抑制对人乳腺癌MDA-MB-231细胞细胞骨架的影响

目的研究干扰素调节因子4结合蛋白(IBP)的表达抑制对人乳腺癌MDA-MB-231细胞中微丝、微管的影响。方法设计并合成针对人IBP mRNA的RNA干扰(RNAi)序列,构建RNAi慢病毒表达载体,与包装质粒共转染人胚肾293FT细胞获得病毒颗粒,以病毒感染MDA-MB-231细胞。采用免疫印迹及实时聚合酶链反应(RT-PCR)确定能有效抑制IBP的RNAi序列,筛选出获得稳定感染的细胞株并进行微丝、微管染色。结果成功构建了IBP特异性的RNAi慢病毒表达载体和对照载体,对MDA-MB-231细胞IBP的沉默效率为69.9%;通过微丝、微管染色证实IBP表达下调后,细胞形态出现明显变化,细胞体增大,丝状伪足减少,片状伪足增多,微管排列紊乱。结论 IBP蛋白通过影响微管、微丝的排列而改变MDA-MB-231细胞生物学行为。     

过表达BIRC5基因对氧糖剥夺/复氧诱导的脑微血管内皮细胞活性及VEGF表达的影响

目的 探讨过表达BIRC5基因对氧糖剥夺/复氧(OGD/R)诱导的小鼠脑微血管内皮细胞损伤的保护作用,并分析其可能的机制。方法 将小鼠源性脑微血管内皮细胞,根据不同干预方式分为正常对照组(细胞正常培养)、细胞损伤组(细胞正常培养24 h,随后OGD3h/R3h损伤细胞)、BIRC5干预组(细胞预先转染腺病毒-BIRC5质粒并培养24 h,随后OGD3h/R3h处理)和阴性对照组(细胞预先转染腺病毒空质粒并培养24 h,随后OGD3h/R3h处理)。采用激光共聚焦显微镜观察各组细胞形态学变化;用MTT法和流式细胞仪分别检测各组细胞存活率和凋亡率;用RT-PCR和免疫印迹法分别检测各组细胞BIRC5和VEGF mRNA及蛋白表达。结果 正常对照组的细胞骨架微丝彼此连接,分布规则,丝网状有序排列;细胞损伤组和阴性对照组的细胞微丝断裂,收缩变短或移向周边,微丝网状排列紊乱,可见细胞外形皱缩,间隙加大,少部分微丝缺失出现空隙;BIRC5干预组的细胞微丝连接,形态成长梭形,排列较规则,可见细胞间隙缩小,显示过表达BIRC5基因能够减轻损伤细胞的骨架微丝紊乱。与正常对照组相比,细胞损伤组、BIRC5...     

模拟微重力诱导成骨细胞微丝变化对一氧化氮/一氧化氮合酶系统的影响

目的 研究模拟微重力诱导细胞微丝结构变化对一氧化氮/一氧化氮合酶(NO/NOS)系统的调控作用,探讨失重导致骨质疏松的机制.方法 本研究以小鼠成骨样细胞株(MC3T3-E1)作对象,以回转器模拟微重力效应.实验将细胞分为4组:模拟微重力组、5 μg/ml细胞松弛素B组、模拟微重力+0.μg/ml细胞松弛素B组及对照组正常重力组.培养48 h后,利用FITC-Phallacidin进行免疫荧光染色,在激光共聚焦显微镜下观察各组细胞微丝的变化:同时使用NOS分型试剂盒测定各组细胞NOS的酶活性,通过硝酸还原酶法检测各组细胞培养液中NO浓度.结果 除了正常重力组外,其余各组呈现不同程度的细胞微丝结构解聚,张力纤维减少,且排列紊乱,以模拟微重力+0.5μg/ml细胞松弛素B组改变最为明显.与正常重力组相比,其余各组诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的酶活性和NO的浓度均提高,内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的酶活性则有所下降,均以模拟微重力+0.5μg/ml细胞松弛素B组变化最为明显.结论 我们推测微重力诱导细胞骨架微丝解聚,可以调控NO/NOS系统而影响信号传导.     

胃泌素其受体拮抗剂L—365260对BGC—823细胞系细胞微丝作用的…

细胞表面微绒毛和细胞微丝状态与细胞运动密切相关。在人胃癌ＢＧＣ－８２３细胞系体外培养液中加用胃泌素及其受体拮抗眼现经胃泌素作用后的ＢＧＣ－８２３细胞微丝紊乱，细胞表面微绒毛多而密集，经Ｌ－３６５２６０作用后则微丝长而粗，排列规则，表面微绒毛少。     

中间丝系列单克隆抗体的研制与特性鉴定

中间丝(Intermediate Filaments,IF)是真核细胞内的蛋白性丝状结构,在电镜下其直径为8～10mm,介于微丝与微管之间而得名。它们广泛地分布于各种细胞内,特别是在核周与细胞连接点上,与微丝微管—起构成细胞骨架。中间丝是细胞骨架及细胞成分中最为稳定的部分,当用高、低离了强度溶液或非离子去垢剂溶解细胞蛋白、离心去除后,中间丝仍为不溶部分,易于分离。它由多肽所组成,但各种中间丝多肽的分子量差别极大,从40～200KD不等。近年在细胞生物学中的一项重大成就是阐明了中间丝可分成五大类,一种细胞类型主要含有一种中间丝,如(1)上皮型细胞含有细胞角蛋白(分子量4D～65KD);(2)肌肉型细胞含有结蛋白(51KD);(3)间质型细胞含有波形蛋白(55KD);(4)神经胶质细胞含有胶质纤维酸性蛋白(50KD);(5)神经细胞含有神经微丝蛋白(70、140、210KD)。可见它们在细胞内的分布具有一定的型特异性。进一步研究发现,细胞内的中间丝在细胞恶变时,仍保留其表达能力,因而可用于低分化肿瘤的组织起源的判断,成为组织肿瘤标志物之一,在肿瘤病理学中具有很大的实用价值。     

槟榔碱对口腔黏膜成纤维细胞病变的影响

目的分析槟榔碱对口腔粘膜成纤维细胞(OMFb)微丝骨架及胶原吞噬的影响。方法取正常人口腔黏膜,行组织块法培养,取第6代细胞行不同浓度槟榔碱(0μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、30μg/mL、40μg/mL)干预,检测12h、24h、48h后细胞增殖情况;分析24h后胶原吞噬率变化情况;观察24h后细胞微丝骨架变化情况。结果槟榔碱干预12h后,不同槟榔碱浓度OMFb增殖情况差异无统计学意义(P0.05);24h后,10μg/mL、20μg/mL浓度组OMFb增殖率上升,且20μg/mL浓度组增殖率10μg/mL浓度组;30μg/mL、40μg/mL浓度组OMFb无增殖;48h后,各浓度槟榔碱均对OMFb增殖存在抑制效用。10μg/mL、20μg/mL浓度组OMFb胶原吞噬能力存在明显改善,而30μg/mL、40μg/mL浓度组胶原吞噬能力被抑制。此外,10μg/mL、20μg/mL浓度组其OMFb细胞微丝骨架表现为粗大束状排列,出现张力纤维,细胞极性增强,且10μg/mL浓度组变化情况高于20μg/mL浓度组;而40μg/mL浓度组其OMFb细胞微丝骨架明显减少,30μg/mL浓度组次之,细胞皮层出现大量染色聚集物质。结论低浓度槟榔碱在增强OMFb活性、胶原吞噬能力等方面具有显著促进作用,但高浓度则具有抑制作用。此外,低浓度的槟榔碱还可增强OMFb细胞微丝骨架聚合,而高浓度槟榔碱则可以抑制OMFb细胞微丝骨架聚合,这可能是口腔黏膜下纤维性变的主要发病机制之一。     

星形胶质细胞和星形胶质瘤细胞骨架的光镜和电镜观察

目的观察正常星形胶质细胞和星形胶质瘤细胞系ＳＷＯ－３８的细胞骨架的区别。方法分别用光镜和电镜观察正常 星形胶质细胞和ＳＷＯ－３８的细胞骨架。结果和结论两种方法都很清晰地显示出微管和微丝。正常星形胶质细胞微管和 微丝发达,属丰满型;粗大的张力纤维贯穿细胞全长,接近平行分布,偶见交叉呈“Ｚ”形状。而ＳＷＯ－３８细胞的微管则明显 减少,属稀疏型;细胞中仅见少量纤细的张力纤维,多数微丝束形成点状或树根状肌动蛋白小体,微管和微丝呈收缩趋势。     

巨细胞病毒感染细胞内微丝骨架重组异常

目的:探讨巨细胞病毒(CMV)感染对人胚成纤维细胞(HF)微丝骨架影响及与病毒复制状态的可能关系。方法:显微镜观察细胞形态;W estern-b lot法分别检测细胞内β型肌动蛋白(β-actin)、球状肌动蛋白(G-actin)和纤维形肌动蛋白(F-actin)的含量;间接免疫荧光标记病毒即刻早期抗原(IE);微丝骨架探针观察HF细胞内感染状况及微丝骨架变化。结果:HF细胞CMV感染率大于95%,IE抗原主要位于细胞核。受染细胞变粗、变圆,甚至脱壁,呈时间依赖性。与未感染组相比,CMV感染后细胞内β-actin蛋白质含量有所下降,但无显著性差异(P>0.05);G-actin水平在感染24 h后增加(0.941±0.061 vs 0.714±0.119,P<0.05),但在感染后72 h、96 h却下降(0.218±0.035、0.230±0.055 vs 0.714±0.119,P<0.05);F-actin水平在感染后24 h、72 h、96 h呈渐进性下降(0.256±0.021、0.127±0.032、0.026±0.008 vs 0.373±0.050,P<0.05)。受染细胞内微丝排列紊乱,极性消失;细胞融合,荧光强度明显减弱。结论:CMV引起HF细胞内肌动蛋白质、微丝骨架形态及重组异常,可能有助于其侵袭宿主细胞并进一步活化及复制。     

星形胶质细胞和星形胶质瘤细胞骨架的光镜和电镜观察

目的：观察正常星形胶质细胞和星形胶质瘤细胞系SWO-38的细胞骨架的区别。方法：分别用光镜和电镜观察正常星形胶质细胞和SWO-38的细胞骨架。结果和结论：两种方法都很清晰地显示出微管和微丝。正常星形胶质细胞微管和微丝发达,属丰满型;粗大的张力纤维贯穿细胞全长,接近平行分布,偶见交叉呈“Z”形状。而SWO-38细胞的微管则明显减少,属稀疏型;细胞中仅见少量纤细的张力纤维,多数微丝束形成点状或树根状肌动蛋白小体,微管和微丝呈收缩趋势。