无创伤双后肢缺血后处理对移植胰腺缺血再灌注损伤的远隔保护

背景：缺血预处理及缺血后处理是近年来提出减轻缺血再灌注损伤有效方法。 目的：探讨无创伤双后肢缺血后处理对移植胰腺缺血再灌注损伤的影响及机制。 方法：18只糖尿病SD大鼠数字表法随机分为3组,对照组仅行开腹术;缺血再灌注组仅行胰腺移植;缺血后处理组,移植前行非创伤性双后肢缺血后处理。 结果与结论：缺血再灌注组血糖和胰腺组织中丙二醛水平均高于缺血后处理组(P < 0.01)、而超氧化物歧化酶活性低于缺血后处理组(P < 0.01);与缺血后处理组比较,缺血再灌注组胰腺组织凋亡指数明显增高(P < 0.01)。结果提示,无创伤双后肢缺血后处理对大鼠移植胰的缺血再灌注损伤具有保护作用,机制可能与可通过减少超氧化物歧化酶失活,从而清除氧自由基以及减少胰腺细胞凋亡等有关。     

缺血后处理对大鼠脑缺血—再灌注中细胞凋亡的作用及其机制研究

目的观察缺血后处理(IP)对大鼠脑缺血-再灌注(I/R)中细胞凋亡的影响,并探寻其机制。方法开颅永久性阻断大脑中动脉+临时夹闭双侧颈总动脉法制作模型。将大鼠随机分为空白对照组(Control组)12只、假手术组(Sham组)、I/R组、IP组各48只、I/R+caspase-3抑制剂组(I/R+Z-DEVD-FMK组)、I/R+溶剂组(I/R+DMSO组)各12只。通过免疫荧光及Western blot法检测细胞凋亡数、细胞色素c(cyt-c)释放及caspase-3活性。结果 IP组较I/R组TUNEL阳性细胞数减少(P<0.05)。Sham组、IP组和I/R组均有细胞呈cyt-c/TUNEL双阳性,但cyt-c阳性不全伴有TUNEL阳性。I/R组与IP组cyt-c呈双峰样释放(再灌注3 h和48 h),在48 h时IP组较I/R组降低(P<0.05)。I/R组caspase-3活性在再灌注3 h时开始升高,12 h和24 h时最高。各相应时点IP组较I/R组的caspase-3活性降低(P<0.01和P<0.05)。I/R+Z-DEVD-FMK组cyt-c后期释放量小于I/R+DMSO组(P<0.01),但完整细胞数多于I/R+DMSO组(P<0.01)。结论 IP可以抑制凋亡;cyt-c参与凋亡,并与caspase-3形成相互作用的反馈回路。IP对该反馈回路具有调节作用。     

缺血后处理对大鼠脑缺血再灌注损伤神经保护作用的研究

目的探讨大鼠脑缺血后处理对缺血再灌注损伤后神经元的保护作用。方法健康雄性SD大鼠30只,随机分为假手术组(SO组)、缺血再灌注对照组(MCAO组)、缺血后处理组(IPOC组)3组。采用线栓法制备大鼠MCAO模型及IPOC模型,分别用TTC染色法计算脑梗死体积、流式细胞术和ELISA法观察,对于大鼠缺血半暗带神经细胞凋亡率及血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)含量的影响。结果 (1)大鼠脑缺血再灌注后24h,IPOC组较MCAO组梗死体积明显减小(P<0.05);(2)MCAO组大鼠脑缺血再灌注24h细胞凋亡发生率及血清中NSE的含量较SO组显著增加(P<0.01);(3)IPOC组神经元凋亡发生率及血清NSE较MCAO组显著降低(P<0.05或0.01)。结论大鼠脑缺血后处理对缺血再灌注神经元损伤有保护作用。     

缺血预处理抑制大鼠胰腺移植缺血再灌注胰腺细胞凋亡：活性氧与线粒体DNA修复酶的作用

背景：在胰腺移植过程中冷、热缺血均可导致移植胰腺缺血再灌注损伤,所导致的腺泡上皮细胞凋亡是造成移植胰功能不全的重要因素之一,缺血预处理是一种有效的内源性保护方式,其机制研究一直是器官移植的热点。 目的：观察缺血预处理（IPC）对大鼠胰腺缺血再灌注损伤时的细胞凋亡的影响,探讨线粒体DNA修复酶OGG1和氧化应激在其中的变化规律及可能机制。 设计、时间及地点：随机对照动物实验,于2008-9/2009-4在武警医学院生理学与病理生理学教研室完成。 材料：健康雄性SD大鼠50只,其中20只为供体,10只为假手术组,另20只糖尿病造模后分为缺血再灌注组和缺血预处理组,每组10只。 方法：假手术组（Sham）只行开、关腹手术。缺血再灌注组（IR组）和缺血预处理组（IPC）行异位全胰十二指肠移植术。I/R组对应供体大鼠于获取供胰前以4℃ UW液灌洗20 min;IPC组对应供体大鼠于获取供胰前阻断腹主动脉5 min,再灌注5 min,共2次。供胰均控制热缺血时间为15 min,冷缺血（4℃ UW液中保存）时间为180 min。 主要观察指标：再灌注后12 h检测血浆淀粉酶、血糖浓度及Caspase-3,-9活化水平,流式细胞法检测腺泡细胞凋亡率,罗丹明123法检测线粒体膜电位,二氯荧光素法检测线粒体过氧化氢产生速率,高效液相色谱法检测线粒体DNA中8-oxodG含量,荧光定量PCR法检测OGG1 mRNA的表达,Western-blotting法检测细胞色素C释放、磷酸化Akt及线粒体OGG1蛋白表达水平。 结果：与IR组比较,IPC组线粒体膜电位、OGG1 mRNA、线粒体OGG1蛋白及磷酸化Akt蛋白表达均显著升高（18.75±2.09 vs 23.79±2.52,143.7±18.4 vs 268.1±20.3,35.29±7.86 vs66.81±8.90,58.5±6.1 vs189.4±19.5,均P<0.05）。血浆淀粉酶、血糖、线粒体过氧化氢产生速率、线粒体DNA8-oxodG含量、Caspase-3,-9活化水平、腺泡凋亡率及细胞色素C释放均显著降低（3972.40±275.43 vs 2546.95±214.78,12.3±1.6 vs 8.7±1.8,6.94±1.03 vs 4.40±0.72,0.0283±0.0057 vs 0.0190±0.0034,5.59±0.41 vs 2.65±0.37,4.80±0.15 vs 2.19±0.31,36.8±5.7 vs 22.3±3.2,100±0.0 vs 43.5±5.9,均P<0.05）。 结论：缺血预处理可降低线粒体氧化应激,提高Akt磷酸化水平,从而上调OGG1表达,减少线粒体DNA氧化损伤,抑制腺泡细胞凋亡,减轻移植胰缺血再灌注损伤。     

缺血后处理对脑缺血再灌注损伤大鼠的脑保护作用及其最佳时间窗的探讨

目的探讨缺血后处理(IP)对大鼠局灶性脑缺血再灌注(I/R)神经保护作用的最佳时间窗。方法 80只雄性SD大鼠,随机分为5组(假手术组、对照组、IP 15s组、IP 30s组和IP 1min组)。假手术组和对照组行单纯I/R;IP 15s组、IP 30s组和IP 1min组,反复3次缺血再灌注。除假手术组外的大鼠均采用线栓法闭塞大鼠大脑中动脉(MACO)建立脑缺血SD大鼠模型。所有大鼠行神经功能障碍评分(NDS),并应用组织原位标记凋亡细胞检测、免疫组织化学等技术观察IP后海马CA1区细胞凋亡及肿瘤坏死因子(TNF-α)表达的变化。结果再灌注24 h后,IP各组NDS明显低于对照组(P<0.05),其中IP 15s组、IP 30s组NDS低于IP 1min组(P<0.05)。对照组海马CA1区TNF-α、凋亡细胞表达量明显增加,IP 15s组、IP 30s组海马CA1区TNF-α、凋亡细胞的表达量较IP 1min组明显下降(P<0.05)。结论 IP可改善局灶性脑缺血大鼠的神经功能、减少海马CA1区炎性因子TNF-α及细胞凋亡的表达。大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤保护作用的最佳时间窗为15s、30s。     

雌激素对去卵巢大鼠缺血再灌注脑损伤的保护作用

目的探讨雌激素对去卵巢大鼠缺血再灌注脑损伤的保护作用。方法将大鼠切除双侧卵巢后30d给予肌肉注射苯甲酸雌二醇100μg/(kg·d)连续14d,然后制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型;制模12h后取脑组织行免疫组化染色,检测细胞间黏附分子(CD54)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达;TUNEL法检测脑组织凋亡细胞数;电镜观察脑细胞膜超微结构的变化。结果与缺血再灌注组及去卵巢组比较,雌激素组脑组织CD54、TNF-α表达明显降低,凋亡细胞数明显减少(均P<0.05);脑细胞膜结构非特异性损伤减轻。结论雌激素通过减少缺血再灌注大鼠脑组织炎性细胞因子表达、减轻炎症反应、降低脑组织细胞凋亡而发挥脑保护作用。     

缺血后处理通过水通道蛋白-4对大鼠缺血再灌注损伤的脑保护作用及其机制

目的研究缺血后处理(IP)对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用,探讨各组大鼠水通道蛋白-4(AQP4)的表达。方法实验分组:48只雄性SD大鼠,随机分为3组(n=16)。假手术组;对照组:行单纯缺血再灌注;缺血后处理组:IP组。采用线栓法阻断大脑中动脉制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型。大鼠脑缺血再灌注后24 h进行神经行为学评分和脑梗死体积测定,干湿重法测定脑水含量。并行免疫组织化学方法检测海马CA_1区细胞凋亡及AQP4表达的变化并行统计学分析。结果与对照组比较,IP组神经行为学评分明显降低,脑梗死体积、脑组织中的水分含量明显减少(P 0. 05)。再灌注24 h后,对照组海马CA_1区AQP4、凋亡细胞24 h表达量明显增加,IP组与对照组之间比较有差异(P 0. 05)。结论 IP组脑神经行为学评分、脑含水量、脑梗死体积均明显降低,提示缺血后处理可通过抑制AQP4的表达减轻缺血再灌注损伤后的脑水肿,起到脑保护作用。     

观察肢体缺血后处理对急性脑梗死大鼠血脑屏障的保护效应及其机制的探讨

目的探讨肢体缺血后处理对大鼠急性脑梗死后血脑屏障的保护效应及其机制。方法按实验计划建立大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)模型2 h后,再灌注组和肢体缺血后处理组连续5 d进行肢体缺血后处理。比较脑梗死侧的含水量、伊文思蓝(EB)的含量,应用免疫组化方法检测Eph A2、β-淀粉样蛋白(beta amyloid protein,Aβ)的表达。结果再灌注72 h、5 d右侧脑组织含水量均明显高于同时间肢体缺血后处理组;肢体缺血后处理72 h、5 d组比再灌注组同一时间Eph A2及Aβ的阳性细胞数均较低。结论肢体缺血后处理能减轻大鼠急性脑梗死血脑屏障损伤的作用,脑梗死周围区Eph A2和Aβ表达水平的降低可能为保护血脑屏障的机制。     

TLR4参与缺血后处理对缺血再灌注损伤致细胞凋亡的保护作用

目的探讨TLR4是否参与缺血后处理对PC12细胞缺血再灌注损伤致细胞凋亡的保护作用及其作用机制。方法将PC12细胞分为4组：正常组、缺血再灌注组、缺血后处理组及缺血后处理＋脂多糖组,通过流式细胞术Annexin-FITC和PI双染法检测各组PC12细胞凋亡率,Western blotting检测各组细胞TLR4及Caspase-3表达水平,通过RT-PCR测定各组TLR4mRNA水平。结果缺血后处理可以降低缺血再灌注组细胞TLR4蛋白表达、mRNA水平及凋亡率,脂多糖可以逆转其下降趋势。结论TLR4可能参与了缺血后处理对PC12细胞缺血再灌注损伤致细胞凋亡的保护作用。     

缺血后处理对SH-SY5Y细胞缺血再灌注模型的保护作用

目的研究缺血后处理对SH-SY5Y细胞缺血再灌注损伤模型的保护作用,并初步探讨其作用机制。方法将SH-SY5Y细胞分为三组：正常组、缺血再灌注组、缺血后处理组,缺血再灌注组予以糖氧剥夺12 h后正常培养,缺血后处理组经糖氧剥夺12 h后予以3个循环的正常培养10 min/糖氧剥夺10 min,正常培养12 h后通过光镜、荧光显微镜以及细胞计数法、流式细胞术、SOD活力检测SH-SY5Y细胞的改变。结果缺血后处理组的SH-SY5Y细胞存活率较缺血再灌注组明显增加而凋亡率明显下降（P〈0.01）,经缺血后处理的SH-SY5Y细胞内SOD的活力较缺血再灌注组增加32.53%（P〈0.05）。结论缺血后处理在细胞离体状态下可以发挥保护作用,能够降低SH-SY5Y细胞缺血再灌注损伤引起的细胞凋亡,提高细胞内SOD的活力。     

高氧液对大鼠胰腺移植的保护作用

背景：目前可供移植的器官日益短缺,但因灌注冷保存所至的原发性移植物无功能仍然有一定的发生率,减少灌注保存所至的器官损伤有较大的临床意义。目的：探讨高氧液对大鼠胰腺移植的保护作用。方法：40只SPF级Wistar 大鼠,随机分成2组(n=20),高氧液组灌注高氧液,对照组灌注普通林格液,比较两组灌注后胰尾组织电镜结果、移植后第1天、3天血血糖浓度,以及两组移植后胰腺组织病理急性排斥评分。结果与结论：移植前两组差异无显著性意义,灌注后高氧液组胰腺组织超微结构基本正常,细胞核形态完整,大量线粒体存在;对照组胰腺组织细胞大部分排列仍有序整齐,胞浆内线粒体水肿明显,部分线粒体空泡变性。移植后第1,3天血血糖高氧液组低于对照组(P < 0.05);高氧液组评分低于对照组(P < 0.05)。可见高氧液可减轻缺血再灌注损伤,对大鼠胰腺移植有一定的保护作用。关键词：高氧液;器官移植;胰腺移植;急性排斥反应;保护     

肢体缺血后处理对糖尿病大鼠脑缺血再灌注损伤线粒体结构和功能的影响

目的探讨肢体缺血后处理(I-PostC)诱导的远隔器官I-PostC(RPostC)对糖尿病大鼠局灶性脑缺血再灌注(I/R)损伤线粒体结构和功能的影响。方法链脲佐菌素空腹腹腔注射制作糖尿病大鼠模型,线栓法闭塞大脑中动脉(MCAO)制作局灶性I/R大鼠模型。造模成功的40只雄性SD大鼠分为4组:空白对照组、假手术组、I/R组,RPostC组,每组10只。I/R6h后取脑组织行HE染色观察,测定线粒体丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)、Na+/K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,观察线粒体超微结构的改变。结果I/R组线粒体MDA含量[(4.99±1.25)nmol/mgprot]较空白对照组和假手术组明显升高(均P<0.01),SOD[(72.52±13.07)U/mg]、Na+/K+-ATP酶[(3.17±0.34)μmolPi/(mg.h)]、Ca2+-ATP酶[(1.56±0.23)μmolPi/(mg.h)]和GSH-Px活性[(22.66±5.29)U/mg)]明显降低(均P<0.01);与I/R组比较,RPostC组MDA含量[(3.58±0.91)...     

不同剂量巴曲酶对脑缺血沙土鼠的脑保护作用

目的　探讨巴曲酶对脑缺血沙土鼠脑保护作用的最佳剂量。方法　80只沙土鼠随机分为假手术组、对照组、巴曲酶治疗组(又分为1BU/kg、2BU/kg、4BU/kg、8BU/kg、16BU/kg、32BU/kg组),每组10只。制作完全性前脑缺血再灌注沙土鼠模型,制作模型前3h给予对照组沙土鼠腹腔注射生理盐水;巴曲酶组腹腔注射相应剂量的巴曲酶。用原位末端标记(TUNEL)法染色检测沙土鼠海马CA1 区凋亡细胞,光镜下计算海马CA1 区的神经元凋亡率。结果　巴曲酶8BU/kg、16BU/kg、32BU/kg组海马CA1 区细胞凋亡率明显减少,与对照组及巴曲酶1BU/kg、2BU/kg、4BU/kg组比较差异有显著性(均P<0. 01), 8BU/kg、16BU/kg、32BU/kg组之间差异无显著性(均P>0 .05)。结论　巴曲酶具有抗脑缺血后的细胞凋亡作用;巴曲酶8BU/kg为对脑缺血沙土鼠脑保护作用的最佳剂量。     

Protective effect of delayed remote limb ischemic postconditioning: role of mitochondrial K(ATP) channels in a rat model of focal cerebral ischemic reperfusion injury

Delayed remote ischemic postconditioning (DRIPost) has been shown to protect the rat brain from ischemic injury. However, extremely short therapeutic time windows hinder its translational use and the mechanism of action remains elusive. Because opening of the mitochondria K(ATP) channel is crucial for cell apoptosis, we hypothesized that the neuroprotective effect of DRIPost may be associated with K(ATP) channels. In the present study, the neuroprotective effects of DRIPost were investigated using adult male Sprague-Dawley rats. Rats were exposed to 90 minutes of middle cerebral artery occlusion followed by 72 hours of reperfusion. Delayed remote ischemic postconditioning was performed with three cycles of bilateral femoral artery occlusion/reperfusion for 5 minutes at 3 or 6 hours after reperfusion. Neurologic deficit scores and infarct volumes were assessed, and cellular apoptosis was monitored by terminal deoxynucleotidyl transferase nick-end labeling. Our results showed that DRIPost applied at 6 hours after reperfusion exerted neuroprotective effects. The K(ATP) opener, diazoxide, protected rat brains from ischemic injury, while the K(ATP) blocker, 5-hydroxydecanote, reversed the neuroprotective effects of DRIPost. These findings indicate that DRIPost reduces focal cerebral ischemic injury and that the neuroprotective effects of DRIPost may be achieved through opening of K(ATP) channels.     

大鼠局灶脑缺血再灌注后GM1的保护作用及其对FGFR1表达的影响

目的 探讨大鼠局灶脑缺血再灌注后神经节苷脂（ＧＭ１）的保护作用及其对碱性纤维母细胞生长因子的特异性受体（ＦＧＦＲ１）表达的影响。方法 采用检线法备大脑中动脉缺血再灌注模型。通过腹腔注射给予ＧＭ１,利用免疫组化方法检测ＦＧＦＲ１表达情况,并对病理学改变进行观察研究。结果 与对照组相比,缺血再灌组ＦＧＦＲ１表达明显增多（Ｐ〈０．０１）,而ＧＭ１用药组与缺血再灌组相比,ＦＧＦＲ１表达也明显增长（Ｐ〈０．     

人参总皂甙对大鼠脑缺血再灌注后MDA、SOD及细胞凋亡的影响

目的:观察人参总皂甙对大鼠脑缺血再灌注的保护作用,探讨其作用机制。方法:将40只大鼠随机分为4 组:假手术组、缺血再灌注组、治疗组1、治疗组2,采用线栓法制备大鼠脑缺血再灌注模型,72h断头取脑,Nissel染色光镜下观察海马CA1区病理形态变化,TUNEL法检测细胞凋亡,同时检测脑组织中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量。结果:与缺血再灌注组相比,人参总皂甙治疗组光镜下病理损伤轻,脑组织中MDA含量降低、SOD含量升高,细胞凋亡数降低。结论:人参总皂甙对大鼠脑缺血再灌注损伤具有保护作用,其机制可能与抑制自由基损伤有关。     

缺血预处理大鼠自体肝移植后剩余肝细胞的凋亡和增殖☆

背景：肝脏缺血再灌注损伤后肝细胞受到增殖和凋亡的双重调控。肝大部切除后,余肝经历缺血再灌注损伤,其肝再生受到明显抑制,缺血预处理可减轻此损伤,促进肝再生,其机制是否也与这有关,目前未见相关报道。 目的：探讨缺血预处理对大鼠自体肝移植后余肝肝细胞凋亡和增殖的影响。 设计、时间及地点：随机对照动物实验,于2006-09/2007-07在中南大学湘雅医学院实验动物中心完成。 材料：雄性SD大鼠144只,随机分为3组：单纯肝叶切除组、自体肝移植组、缺血预处理组,48只/组。 方法：单纯肝叶切除组大鼠只行肝左、中叶切除,不阻断肝右、尾叶血流。自体肝移植组大鼠结扎切断肝后与食管腹段之间的静脉交通支,游离liberate尾状叶,游离第一肝门、肝上及肝下下腔静脉后,阻断并经门静脉持续低温灌注保存液,同时进行无血肝切除(切除肝左、中叶),肝脏在体持续低温灌洗15 min。解除肝门阻断,完全恢复肝脏血流。快速复温肝脏表面,并冲洗腹腔,缝合关腹。缺血预处理组大鼠在门静脉灌注前先阻断肝右、尾叶血流10 min,然后开放血流10 min,余步骤同自体肝移植组。各组大鼠分别于肝叶切除后0,1,3,6,12,24,48,72 h时取材。 主要观察指标：生化分析仪测定血清丙氨酸氨基转移酶及天冬氨酸氨基转移酶的水平,流式细胞仪检测肝细胞凋亡指数,通过Ki-67抗原的表达检测肝细胞增殖情况。 结果：与自体肝移植组比较,除肝叶切除后0 h 外,其余各时间点单纯肝叶切除组、缺血预处理组血清丙氨酸氨基转移酶和天冬氨酸氨基转移酶水平均明显降低(P < 0.05)。各组在肝叶切除后0 h(即正常肝组织)基本不存在凋亡细胞;单纯肝叶切除组肝大部切除后余肝肝细胞凋亡指数稍有升高;自体肝移植组复灌注后肝细胞凋亡指数急剧升高,约在12 h达到高峰,而后逐渐下降;与自体肝移植组比较,缺血预处理组肝细胞凋亡指数明显降低(P < 0.05)。各组Ki-67表达率在肝叶切除后均明显升高,约在24 h达高峰,而后逐渐下降。与单纯肝叶切除组比较,自体肝移植组Ki-67表达率明显降低(P < 0.05);与自体肝移植组比较,缺血预处理组Ki-67表达率明显增高(P < 0.05)。 结论：缺血预处理可减轻自体肝移植后肝缺血再灌注损伤所致肝细胞凋亡,促进肝细胞增殖,这可能是其促进肝再生的机制之一。