丹参干叶片的DNA提取

目的以丹参干叶片为材料,优选一种有效去除多酚类杂质的DNA提取方法.方法先用PVP-40T与材料共研碎,加预冷的提取缓冲液冰置,弃去上清液,沉淀用加Vit C粉末(调pH＝6～6.5)的2×CTAB抽提缓冲液提取.结果得到的DNA可以很好地用于PCR扩增.结论该方法适用于提取含多酚材料的DNA.     

连翘中连翘苷的提取方法研究

目的 :探讨中成药生产中不同提取方法对连翘中连翘苷提取率的影响。方法 :以连翘苷为指标 ,采用中国药典收载的HPLC法进行分析测定 ,分别考察不同提取方法、提取次数等因素对连翘苷提取率的影响。结果 :以水煎煮3次 (每次1h)的提取方法可使连翘苷的提取率达到最高 ,原药煎煮与粉碎煎煮对连翘苷的提取率无影响。结论 :实际生产中应以水煎煮法作为连翘苷的提取方法。     

忍冬干叶基因组DNA提取方法的研究

目的：从变色硅胶干燥的忍冬叶片中提取高质量的基因组DNA。方法：分别采用常规CTAB法与改良CTAB法提取干叶的DNA，通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度法、酶切检测其质量，并与鲜叶的提取效果比较。结果：改良CTAB法所得DNA优于常规CTAB法，电泳条带清晰，完整性好，纯度高，能被EcoRⅠ完全酶切。从变色硅胶干燥的忍冬叶片中提取的DNA质量与鲜叶无明显差异，且产率更高。结论：改良CTAB法适合忍冬干叶基因组DNA的提取。     

柴胡药材干根DNA提取及RAPD分析

目的 探索一种适用于柴胡药材干根DNA提取的方法,为实现以分子标记方法辨别柴胡药材奠定基础.方法 比较研究了分别用CTAB法、SDS法和高盐低pH法等3种方法提取柴胡样品基因组DNA.柴胡药材干根经过PVP以及TNE缓冲液进行不同的预处理,以CTAB法抽提DNA.以EcoR I/Mse I双酶切琼脂糖凝胶电泳及RAPD扩增检测提取DNA的质量.采用NTSYS-pc软件计算Jaccard遗传相似系数,以非加权配对算术平均数法(UPGMA)建立聚类图.结果 常规DNA提取方法提取药材干根DNA溶液经4℃放置后,黏稠并褐变,严重影响酶切和RAPD扩增.样品预处理优化条件是研磨时加入3%PVP,TNE缓冲液于0℃浸提2次,每次30min.以该优化的预处理方法处理6个柴胡药材干根样品,提取DNA条带清晰,酶切完全,RAPD扩增图谱清晰稳定,共获得有效扩增条带28条,其中多态性条带为20条,占71.43%.聚类分析表明,6个栽培品中,原产地为山西灵丘外地引种(LQWY)和甘肃陇西(LX)、山西灵丘(LQ)和山西方山(FSH)的亲缘关系较近,陕西商洛(SHL)和其他5个栽培品的亲缘关系较远.结论 柴胡药材干根经过预处理后,可采用常规的DNA提取方法抽提DNA,所提DNA适合于酶切、RAPD等分子标记分析.     

燕窝DNA提取方法研究

燕窝为宜药宜膳的珍贵药材,其质量与产地和出产环境密切相关。现有的燕窝鉴别方法可在一定程度上鉴别燕窝与其伪品,但无法确定燕窝的基原和产地等质量问题。DNA分子标记技术可以有效地解决这个难题,即从燕窝中得到高质量的DNA以用于后序的PCR和测序。由于燕窝中存在较多内源及外源性污染,其DNA提取技术的难点主要在于摆脱燕窝中的唾液酸糖蛋白干扰和外源性DNA的污染。本文针对燕窝DNA提取方法的优化进行了研究,采用高盐的SDS裂解燕窝样品,氯仿和CTAB去蛋白,低温异丙醇沉淀DNA技术。成功建立了一种简便、高效、稳定的燕窝DNA提取方法。采用本法得到的燕窝DNA可以成功用于燕窝遗传树的建立,而相关燕窝的基原也从而得到了确定。     

市售鹿茸片基因组DNA提取方法的比较

目的建立一种稳定高效获得鹿茸片DNA基因组的提取方法,为相似形态中药总DNA提取奠定基础,便于应用分子生物学进行药材鉴定。方法将乌鲁木齐市售鹿茸饮片选取3份为材料,通过两种试剂盒和CTAB三种不同方法提取,提取的DNA再进行琼脂糖凝胶电泳法、紫外分光光度法进行浓度和纯度检测。结果 3种方法均可以从市售鹿茸饮片中提取到基因组DNA,但天根组织提取试剂盒得到的基因组DNA的纯度和浓度最高,提取效果最佳;CTAB法提取效果相对最差。结论天根组织提取试剂盒基因组DNA提取方法操作简便、稳定、高效,提取的DNA效果较好,纯度和浓度检查均合格。     

贯叶连翘中金丝桃甙提取方法的研究

本文探讨了贯叶连翘中金丝桃甙提取的方法。研究表明,溶剂的极性、介质的酸碱性、产品的干燥方式等工艺参数对金丝桃甙的提取率和纯度有很大的影响,从而为金丝桃甙的工业生产提供了理论和实验依据。     

野山参微量DNA提取方法的研究

目的：为了从珍贵药材野山参的少量根须提取ＤＮＡ,同时尽量保持野山参形态的完整,特研究本方法。方法：我们改进了ＣＴＡＢ提取法,设计了一种简捷的ＤＮＡ制备方案。结果：从０．００１ｇ人参根须提取ＤＮＡ,得率达２２５０μｇ／ｇ。结论：ＲＡＰＤ扩增效果良好,可作其他药材微量组织提取ＤＮＡ的参考方法。     

板蓝根基因组DNA提取方法的比较

目的:建立并优化板蓝根基因组DNA的提取方法。方法:以板蓝根为实验材料,分别采用CTAB法、改进的CTAB法和试剂盒法(硅胶膜技术)对其基因组DNA进行提取和纯化,然后对其提取产物做光密度、琼脂糖凝胶电泳检测。结果:紫外光谱检测表明,常规的CTAB法的A 260/A 280比较低,不在理想值之间,而改进的CTAB法和试剂盒法均在理想值之间。琼脂糖电泳检测证实,常规的CTAB法提取的DNA条带最弱,其它两种方法的DNA条带很清晰,DNA没有降解,无拖尾现象。     

适合中药材DNA条形码分析的DNA提取方法的研究

目的 建立适合中药材DNA条形码分析的DNA提取方法.方法 以6种富含次生代谢物质的药用顽拗植物为材料,对7种DNA提取方法进行比较.结果 CTAB法3对中药材具有通用性,操作简便、快速,提取的DNA浓度和合格率比其他对照方法高,能满足DNA条形码PCR扩增的要求.该方法主要特点:(1)用3%的CTAB浓度代替常用的2%CTAB;(2)采用1%的PVP与0.2%β-巯基乙醇共同去除杂质和防止DNA降解;(3)采用10000 r/min离心15 min去除蛋白质等杂质.结论 CTAB法3是适合中药材DNA条形码研究的DNA提取方法.     

中草药干品和鲜品基因组总DNA提取及质量比较研究

目的 探讨中草药干品和鲜品总DNA的提取方法,并比较干、鲜品总DNA质量之间的差别,为后续研究奠定基础.方法 分别采用SDS法和改良的CTAB法提取6种中草药干品和鲜品总DNA,并对其进行核酸含量测定、电泳检测和酶切反应检测. 结果改良CTAB法提取的DNA质量要高于SDS法,在干品和鲜品样品间,干品提取的DNA质量要高于鲜品.利用CTAB法提取鲜品和干品的各6种DNA样品,进行酶切反应得到了清晰的酶切条带.结论 改良的CTAB法能够获得高质量的中草药总DNA,且该方法得到的干品DNA比鲜品DNA质量更高,酶切验证二者都可以用于进一步的实验分析.     

山茱萸药材鲜品与干品总DNA提取方法比较

目的:探讨山茱萸药材鲜品与干品总DNA的提取方法,比较鲜、干品总DNA质量,为以后的研究奠定基础。方法:采用改良CTAB法A,B和经典SDS法,提取山茱萸药材鲜品和干品总DNA,对其进行DNA含量测定和电泳检测。结果:改良CTAB法A提取山茱萸药材鲜品与干品总DNA的OD260/OD280比值在1.7~1.9之间,电泳条带清晰,无拖尾,对山茱萸药材鲜品与干品DNA进行综合比较,结果显示鲜品获得的DNA质量高于干品。结论:改良的CTAB法A是分离高质量完整DNA的方法简便、快速,该方法得到的DNA适合下一步分子生物学研究。     

连翘化学成分的研究

目的：研究连翘的化学成分。方法：硅胶柱层析法分离,薄层层析和光谱鉴定结构。结果：从乙醇提取物中分离得到６个化合物,分别鉴定为硬脂酸、棕榈酸、β-谷甾醇、熊果酸、齐墩果酸和连翘脂素。结论：硬脂酸、棕榈酸、β-谷甾醇系首次从该植物中分离得到。     

数字化色谱指纹图谱用于连翘的质量控制

目的:建立连翘液相色谱指纹图谱,为连翘在中药以及中药制剂的合理利用提供依据.方法:优选萃取条件,采用液相色谱法对不同产地的连翘进行指纹图谱研究.液相色谱条件:Inertsil ODS柱,5%的乙腈水溶液与2%的醋酸水溶液作梯度洗脱,检测波长为270 nm.结果:实验方法的重现性、样品的稳定性和仪器的精密度均获得良好的结果.结论:指纹图谱法简便,可靠、准确,可用于区分不同产地的连翘.     

连翘的量效关系及其临床应用探讨

通过搜集古医书及现代医家临证经验,总结出连翘具有以下量效特点:1)临床用量多为6～30 g。2)结合病种、证型、症状选择其最佳剂量,如发挥其清热解毒、疏散风热功效,治疗表证、痈肿疮毒、呼吸系统疾病等,用量一般为6～30 g;祛风散邪、利湿退黄,治疗肝病、内分泌系统及代谢系统疾病,用量一般为6～10 g;清肝散结、化痰消肿,治疗外科疾病、瘰疬痰核,用量一般为6～15 g。3)为发挥其最佳功效,常根据病种、证型及症状,配伍相应中药,如清热解毒、疏散风热常配伍生甘草、桔梗、牛蒡子;祛风散邪、利湿退黄常配伍栀子、车前子、白茅根;清肝散结、化痰消肿常配伍夏枯草、浙贝母、玄参等。     

青连翘抗菌活性成分的研究

本文从连翘的末成熟果实(青连翘)中分离出四种化合物,根据它们的理化分析及光谱数据,鉴定为连翘甙(Ⅰ),(+)-松脂素-β-D-葡萄糖甙(Ⅱ),forsythiaside(Ⅲ)及芦丁(Ⅳ)。抗菌实验证明,化合物Ⅱ及Ⅲ具有抗菌作用,其中化合物Ⅲ的活性最强。     

高效液相色谱法测定连翘中连翘苷、芦丁和槲皮素的含量

 目的 建立HPLC同时测定连翘中连翘苷、芦丁和槲皮素的含量。方法 采用ZORBAX SB C₁₈ (4.6 nm×250 mm, 5 μm) 色谱柱;以甲醇-0.2%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱 (0～40 min,40%～50%甲醇);连翘苷检测波长为280 nm,芦丁和槲皮素检测波长为370 nm;流速为1.0 mL · min-1;柱温为25 ℃。结果 3个成分均达到良好分离,连翘苷、芦丁和槲皮素平均加样回收率分别为98.2%,99.7%,100.9%。结论 本检测方法简便,准确性和重现性良好,可以作为同时测定连翘中连翘苷、芦丁和槲皮素含量的方法。     

双黄连粉针中连翘用大孔树脂精制的工艺研究

目的：采用大孔树脂对双黄连粉针中君药连翘进行精制,优选出最佳的树脂以及洗脱条件。方法：采用吸附、洗脱试验确定精制连翘的最佳树脂,绘制泄漏曲线确定树脂的上样量。结果：双黄连粉针中君药连翘精制的最佳树脂为NKA-9,上样量在5∶4~5∶6（树脂：原药材）的范围内,4BV蒸馏水去杂质,3BV 40%乙醇解吸附。结论：为精制双黄连粉针中君药连翘优选了一套合理稳定的工艺,并为该药二次开发打基础。     

连翘舒张大鼠离体胸主动脉环作用的研究

目的:观察连翘对大鼠离体胸主动脉环的作用,并探讨其作用机制.方法:取雄性Wistar大鼠,制备胸主动脉环置于浴槽内恒温灌流并记录收缩活动.结果:连翘浓度依赖性舒张去甲肾上腺素(NE)引起的血管收缩,IC50为8.60g/L,其作用是非.内皮依赖性的;连翘浓度依赖性舒张KCI引起的血管收缩,IC50为8.92g/L,其作用是内皮依赖性的.连翘的舒张大鼠离体胸主动脉环作用可被L-NAME部分阻断,但是不被心得安或格列苯脲阻断.连翘显著抑制NE诱发的细胞内钙收缩幅度和细胞外钙收缩幅度.结论:连翘显著舒张大鼠离体胸主动脉,作用机制可能是:阻断细胞膜上的受体调控性钙通道和电压门控钙通道或作用于其相关途径,增加NO浓度;抑制肌浆网释放Ca2+和抑制细胞外的Ca2+通过细胞膜进入细胞内.     

连翘体外抑菌作用的研究

目的：探讨连翘的体外抑菌作用。方法；用K－B纸片扩散法。100％连翘浸出液滤纸片对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、甲型链球菌、乙型链球菌抑菌作用进行了研究。结果：连翘对以上细菌均有明显抑菌作用。结论：连翘体外有明显的抑菌作用。