乙酸溶解-酶消化法制备医用胶原膜

目的 :探讨 I型胶原的提取和胶原膜的制备方法。方法 :取新鲜成年牛跟腱 ,用乙酸溶解 -酶消化法提取 I型胶原 ,并进行盐析、透析、纯化得到精制的液态胶原 ,用戊二醛进行交联。结果 :提取的胶原紫外分光光谱最高吸收峰值为 2 30 nm左右 ;聚丙酰胺凝胶电泳呈现 2条相邻带 (相对分子质量 980 0 0左右 ) ,符合 I型胶原的特性。冻干交联胶原膜呈白色海绵状 ,具有一定弹性。扫描电镜观察胶原膜为孔网状结构 ,孔径 1 5～ 5 0 μm。结论 :乙酸溶解 -酶消化法提取牛腱胶原是一种简单、理想的方法 ,可得到含量及纯度较高的 Ι型胶原     

Ⅰ型骨胶原膜的制备及生物相容性研究

目的观察自创增强酶解法提取的皮质骨胶原所制胶原膜的生物相容性,为利用该胶原制备支架材料提供可行性依据。方法以新鲜猪皮质骨为原料,通过增强酶解法提取技术获得Ⅰ型胶原,再将胶原制成戊二醛交联或不交联的胶原膜。最后将胶原膜与hMSC共培养观察细胞相容性或埋植到兔肌袋里观察组织相容性和降解情况。结果胶原膜无明显细胞毒性,hMSC增殖迅速,无明显受抑制现象。埋植试验,未交联的胶原膜1周时即明显降解,可见血管长入,2周末即被完全吸收;交联后的胶原膜2周时开始明显降解,4周左右才完全被吸收。结论增强酶解法提取的骨胶原制备的胶原膜具有良好的细胞相容性、组织相容性和降解性。适当浓度戊二醛交联可提高胶原的强度而不引起明显的毒性。     

胶原包埋聚羟基乙酸构筑血管模型

目的：通过用交联胶原包埋处理聚羟基乙酸（Ｐｏｌｙｇ－ｌｙｃｏｌｉｃ ａｃｉｄ,ＰＧＡ）,形成胶原加聚羟基乙酸管形支架,并接牛血管内皮细胞于其内腔面,观察内皮细胞生长分化情况,方法：采用酶消化法从牛主动脉中分离培养牛血管内皮细胞并传代、纯化,将聚羟基乙酸无纺网用胶原溶液包埋,真空冷冻干燥,形成多孔状ＰＧＡ＋胶原管型支架：接种３代～７代牛血管内皮细胞于其内腔面,采用动态旋转培养技术体外培养１０天,行扫     

猪皮胶原的实验室制备和成膜技术

皮肤胶原作为一种细胞外间质,是真皮再造最基本的生物材料,胶原本身在临床也有直接应用价值。本文介绍用酶降解法在实验室条件下提取猪皮胶原的技术,同时介绍两种使胶原成膜的方法,即氨熏成膜法和盐析成膜法,供选择使用。作者认为在以提取皮肤胶原为目的时,酶降解法的效果优于酸溶解法。     

提取成熟骨组织总RNA的新方法

1 材料和方法 1.1 材料取三组正常成年SD大鼠股骨,以下用XHF-1型高速离散器按文献操作[1]. 1.2 方法选取三种提取总RNA的方法,即:A-按Trizol说明书进行;B-同A,其中氯仿抽提重复2次;C-同A,产物以DNA酶消化后再加Trizol重复A. 对结果进行RT-PCR验证,各取等质量RNA按Invitrogen说明书进行反转录,得到的cDNA进行I型胶原的PCR扩增.     

通用引物检测登革热病毒NS1基因及其酶切分型

目的：利用通用引物经逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测登革病毒RNA，并经限制性内切酶酶切鉴定病毒型别。方法：用C6／36细胞培养登革病毒，碘化钠法提取病毒RNA，利用通用引物进行RT-PCR，对PCR产物用Mav I限制性内切酶酶切鉴定。结果：应用通用引物RT-PCR方法可检测到含量为0．212ng／L的病毒RNA，扩增的产物及酶切片段与预期的靶序列长度和限制酶谱分析相一致。结论：用登革病毒NS1区通用引物通过RT-PCR并经酶切分型，是诊断登革病毒感染的一种简易快速的方法。     

四种气管上皮细胞分离培养方法的比较研究

目的：比较四种不同的方法在培养气管上皮细胞中的异同，改进其培养技术，为组织工程气管提供种子细胞。方法：用两步酶消化法（使用0.1％ Dispase 4℃消化18h后，用0．25％的胰酶37℃消化5min）、Dispase冷消化法（用0．1％Dispase 4℃消化18h）、胰酶温消化法（0．25％的胰酶37℃消化10min）和机械刮刷法四种方法分离、培养兔气管上皮细胞，测定分离细胞的数量和纯度。结果：两步酶消化法、Dispase冷消化法较其他两种方法得到的气管上皮细胞纯度高，细胞状态好；Dispase冷消化法得到细胞数量较其他方法少，其余三种方法得到的细胞数统计学上不存在差异。结论：两步酶消化法较其他方法所得细胞数量多、纯度高、细胞成活率高，是一种较好的气管上皮细胞体外分离培养方法。     

黄根对实验性猴矽肺肺内酸溶性胶原的影响

酸溶性胶原是组织中可用稀乙酸溶解并提取出来的胶原成份。肺组织胶原纤维化是矽肺发生发展的病理基础,凡能阻断或抑制胶原纤维合成和交联过程中任何一环节的药物,都有防治矽肺病变的作用。我们通过十二     

聚甲基丙烯酸羟乙酯-Ⅲ型胶原烧伤贴膜的研制(Ⅰ)

目的: 研究胶原蛋白的性质及聚甲基丙烯酸羟乙酯[poly(HEMA)]-Ⅲ型胶原烧伤贴膜的制备方法。方法: 从小牛皮中提取Ⅲ型胶原蛋白,与poly(HEMA)、乙二醇混合,用过硫酸铵和偏亚硫酸钠引发交联反应,制成烧伤用贴膜;在膜中加入药物吲哚美辛,并做体外溶出实验。 结果: poly (HEMA)-Ⅲ型胶原贴膜具有良好的弹性、柔软性、吸湿性和粘附性;吲哚美辛的体外累积释放百分量-时间曲线表明,其多孔的海绵状结构是良好的药物释放系统。结论: poly(HEMA)-Ⅲ型胶原的复合物是制备烧伤用创面敷料的良好材料。     

人体真皮胶原蛋白膜的研制

以烧伤科废弃异体真皮为原料，采用酶限制性降解和酸提取的方法，进行胶原的提取、制膜。经蛋白质含量测定和氨基酸分析结果证明，所得胶原膜系纯胶原构成，可为临床治疗烧伤等疾病提供又一新型生物材料。     

Preparation of collagen-based materials for wound dressing

Objective To describe the methods which were used to develop collagen-based materials for wound dressing. Methods Fresh frozen bovine tendon was treated with 0.05 mol/L acetic acid at pH 3.2 for 48-72 hours, homogenized, filtered, mixed with 8% chondroitin sulphate, for creating a deaerated 1.5%-2.5% collagen solution. The solution was lyophilized in either a pre-frozen or non-pre-frozen mould. The collagen sponge was then cross-linked with 0.25% glutaraldehyde for 24 hours. Three other types of wound dressings were developed using a similar method: collagen membrane with a polyurethane membrane onlay, polyurethane-coated collagen membrane and collagen membrane on gauze. Results It was demonstrated that the use of frozen bovine tendon was stable, and that the prepared collagen sponge contained pores of 50-400 μm in diameter. Conclusions Collagen could be used as wound dressing.     

正交试验法提取鼠尾腱胶原工艺的优化

目的: 探讨浸提时间、乙酸浓度及料液比对鼠尾腱胶原提取的影响,建立并优化鼠尾腱胶原的提取工艺,提高胶原提取效率。方法: 选取健康SD大鼠鼠尾,采取酸溶法提取鼠尾腱胶原,观察不同浸提时间(12、24、48、72和96 h)、乙酸浓度(0.10、0.25、0.50、0.75和1.00 mol·L^-1)及料液比(g:mL)(1:5、1:10、1:20、1:40和1:80)对胶原提取率的影响,利用正交试验判断浸提时间、乙酸浓度及料液比等影响因素的最佳工艺参数。通过SDS-PAGE电泳实验、单宁酸沉淀实验和傅里叶红外光谱实验等对提取的胶原进行鉴定。结果: 单因素分析,胶原提取率在一定参数范围内随浸提时间、乙酸浓度及料液比的增加而增加。正交试验,鼠尾腱胶原提取的最佳工艺参数为浸提时间72 h、乙酸浓度0.5 mol·L^-1、料液比为1:40。SDS-PAGE电泳显示,样品为Ⅰ型胶原,单宁酸沉淀实验显示胶原降解程度低,傅里叶红外光谱显示胶原结构完整。样品氨基酸含量测定符合胶原蛋白的成分特征。中性胶原溶液在37℃时能够形成固态胶原凝胶,胶原凝胶经过碳化二亚胺(EDC)交联后,扫描电镜下显示内部相互连接,构成孔径适中的蜂窝状多孔结构。结论: 成功建立并优化鼠尾腱胶原蛋白的提取工艺,得出浸提时间、乙酸浓度及料液比等因素的最佳工艺参数,有效提高了鼠尾腱胶原的提取效率。     

不同几丁糖-胶原膜物理性能的比较研究

目的以几丁糖和胶原为主要材料制作可吸收膜并对膜的物理性能进行比较。方法从牛肌腱中提取胶原。将2％几丁糖乙酸溶液风干成膜,在其上流延0．1％胶原乙酸水溶液,风干后制成复合膜;不同量的胶原乙酸水溶液与2％几丁糖乙酸溶液混合,风干后为混合膜;将混合液冷冻干燥制成冻干膜。测定膜表面结构和成分、吸水性及抗张强度。结果复合膜质地不均而混合膜和冻干膜质地均匀。随着胶原量及膜厚度的增加,膜均匀性更加。复合膜表面不平整、无孔隙、有胶原聚集,而混合膜和冻干膜表面均匀呈多孔状。与几丁糖膜比较,复合膜的红外透射光谱与几丁糖膜基本一致,但混合膜差异较大。冻干膜的吸水性较其他两种膜高。同样比例的复合膜与混合膜抗张强度无明显差异,但均大于冻干膜;随着胶原量的增加膜的强度增加。结论几丁糖与胶原有良好的成膜性。混合膜和冻干膜适用于引导骨再生膜。     

Collagen membrane alleviates peritendinous adhesion in the rat Achilles tendon injury model

Background  Tendon adhesion is one of the most common causes of disability following tendon surgery. Therefore, prevention of peritendinous adhesion after surgical repair of tendon is a major challenge. The aim of this study was to explore the possible application of a collagen membrane for the prevention or attenuation of peritendinous adhesions.

Methods  Sprague-Dawley (SD) rat Achilles tendon was cut and sutured by a modified Kessler’s technique with or without the collagen membrane wrapped. Macroscopic, morphological and biomechanical evaluations were applied to examine the recovery of the injured tendon at 4 and 8 weeks after surgery.

Results  The surgery group wrapped by collagen membranes had a better outcome than the group with surgery repair only. In the collagen membrane-treated group, less adhesion appeared, stronger tensile strength was detected, and more tendon fibers and collagen I expression were observed morphologically.

Conclusion  Wrapping the tendon with a collagen membrane may be an efficient approach for tendon repair and preventing tendon adhesion after its ruptures.

     

不同频率牵拉对兔跟腱组织学表现和Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白表达的影响

目的 观察不同频率牵拉对兔跟腱组织学表现和Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白表达的影响,探讨牵拉频率与腱病之间的关系.方法 45只雄性新西兰大白兔随机分成3组,其中一组作为对照组未施加电刺激,另两组施加电刺激腓肠肌以牵拉跟腱,电刺激频率分别为0.17和1 Hz.光镜下观察兔跟腱组织学变化,免疫组化检测Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白的表达情况.结果...     

海绵状胶原膜制备真皮支架及其生物活性研究

目的:制备海绵状胶原膜,探讨其作为真皮支架的可行性.方法:酸溶法提取猪皮胶原,冻干成膜.将胶原膜包埋于SD大鼠皮下,定期活检以检测其组织相容性、血管化能力及降解速度.结果:制备的胶原膜具有密集的相互贯通的微孔结构,且具有一定的强度与韧性,适于手术操作.SD大鼠皮下埋藏试验表明组织相容性较好,无急性炎症反应,血管化能力较强,降解速度慢,真皮构架稳定性好.结论:海绵状胶原膜可作为真皮支架移植于创面.     

鼠尾胶原蛋白提取、分离、纯化方法的建立及鉴定

目的建立一种高效提取、分离、纯化鼠尾胶原蛋白的方法。方法通过对鼠尾进行剥离获得鼠尾腱,用Tris-HCl缓冲液、胃蛋白酶处理获得鼠尾胶原蛋白原液、反复使用氯化钠溶液进行分级盐析、醋酸溶液复溶进行鼠尾胶原蛋白的纯化。超纯水透析除去无机盐类获得纯化的鼠尾胶原蛋白。通过SDS-PAGE蛋白质电泳、氨基酸含量分析等技术手段鉴定。结果本研究建立的方法可以获得高纯度的鼠尾胶原蛋白,纯度达到电泳纯。与国外进口的商业化鼠尾胶原蛋白产品相比无差异。研究了提取、分离、纯化参数对得率、纯度的影响,建立了最优的鼠尾胶原蛋白提取条件,胃蛋白酶用量:1∶500,酶解时间:72 h,盐析浓度:2 mol/L,提取所用酸溶液:0.05mol/L醋酸溶液。结论为鼠尾胶原蛋白的扩大化生产提供了合适的工艺参数,为大量获得鼠尾胶原蛋白并进行更深层次的功效方面研究提供了理论支持和实践基础。     

细胞外基质蛋白介导晶体上皮细胞粘附的作用

目的探讨纤粘连蛋白、层粘连蛋白、I型胶原3种细胞外基质蛋白促牛晶体上皮细胞（LEC）的粘附作用,以阐明后囊膜混浊（PCO）发生的组织病理学机制。方法应用3H-TDR掺入法研究纤粘连蛋白、层粘连蛋白、I型胶原和鸡卵白蛋白对体外培养的牛LEC的粘附作用。结果牛LEC能够粘附到包被有不同浓度的料粘连蛋白、层粘连蛋白、I型胶原培养板表面上,呈现出浓度和时间效应特点肥牛LEC不能够粘附到包被有不同浓度的鸡卵白蛋白培养板表面上。给哈构成晶体囊膜的层粘连蛋白和I型胶原,以及白内障摘除术后进入眼房水的纤粘连蛋白能够介导LEC粘附到后囊膜上,在PCO发生过程中起到重要的促进作用。     

转染Smad 7基因的大鼠肾小球系膜细胞对Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的改变

 [摘要] 目的 探讨Smad 7基因对大鼠肾小球系膜细胞（MsC）Ⅰ、Ⅲ型胶原（ColⅠ、Col Ⅲ）表达的影响,为试图运用Smad 7对肾纤维化进行基因治疗提供实验依据。方法 经脂质体介导将含有Smad 7重组表达质粒转染大鼠MsC，用G418筛选及Northern blot、Western blot法鉴定；又分别采用RT-PCR和Western blot法，检测转染阳性MsC克隆ColⅠ、Col Ⅲ表达改变。结果 成功建立稳定高表达Smad 7的阳性MsC克隆（S-22与S-26），并证实两阳性MsC克隆ColⅠ及Col Ⅲ mRNA及蛋白的表达均被明显抑制, 其中S-22克隆ColⅠ及Col Ⅲ mRNA表达分别降低47 %和56 ％，其蛋白表达分别降低65 %和54 ％。结论 Smad 7可能通过抑制组织内ColⅠ及Col Ⅲ的生成而起到减轻肾纤维化进展的作用。