外周血游离肿瘤DNA测定在非小细胞肺癌患者中的应用价值

目的：探讨Ion Torrent测定外周血DNA在非小细胞肺癌中的临床价值。方法选择患者80例,通过Ion Torrent测序测定其EGFR浓度,观察EGFR浓度与EGFR基因型及与吉非替尼治疗敏感情况的关系,并分析EGFR突变与否者的1年生存率。结果突变型EGFR 32例,野生型EGFR 48例,吉非替尼敏感者30例,吉非替尼不敏感者50例,突变型EGFR浓度明显高于野生型EGFR (P<0.05),对吉非替尼治疗敏感者的血清EGFR浓度显著高于吉非替尼治疗不敏感者(P<0.05)。结论采用Ion Torrent测定外周血DNA技术了解患者基因型,有针对性的使用靶向治疗药物,其准确性更高,且能有效延长患者生存时间。     

资讯

吉非替尼对恶性间皮瘤无效，EGFR激酶结构域的再突变与肺癌对吉非替尼或埃罗替尼的继发耐药有关，小细胞肺癌表达EGFR且其酪氨酸磷酸化可被吉非替尼抑制，中国大陆肺腺癌患者可能会从吉非替尼，急性肺损伤是吉非替尼的严重不良反应。     

吉非替尼对非小细胞肺癌的一线或二线治疗预后相同

在临床上吉非替尼是治疗表皮生长因子受体（EGFR）突变的非小细胞肺癌（NSCLC）的一种有效方法。外显子19的删除和外显子21的L858R是最经典的EGFR突变方法,它与有效的吉非替尼反应性有关。然而,吉非替尼对外显子19的删除或外显子21的L858R患者疗效有何不同,目前尚不清楚。中国国立台湾大学医院的Wu JY等阐明了给予外显子19的删除或外显子21的L858R患者吉非替尼治疗后的不同临床结果。     

吉非替尼联合5-氟尿嘧啶对肺癌细胞株A549的影响及机制研究

目的:研究吉非替尼联合5-氟尿嘧啶(5-Fu)对肺癌细胞株A549的影响及分子机制。方法:应用PCR扩增和基因测序明确A549细胞是否存在K-Ras基因突变。应用MTT法检测吉非替尼、5-氟尿嘧啶及吉非替尼联合5-氟尿嘧啶对肺癌细胞株A549细胞的增殖抑制,采用ChouTalalay方法判定2种药物的联合作用,计算CI指数。应用流式细胞术检测吉非替尼联合5-氟尿嘧啶对A549细胞凋亡的影响。应用流式细胞术检测吉非替尼对A549细胞细胞周期的影响。应用Western-blot方法检测吉非替尼联合5-氟尿嘧啶及对A549细胞EGFR/p-EGFR的影响。结果:A549细胞经基因测序验证为EGFR野生型,含有KRAS突变。吉非替尼和5-氟尿嘧啶联用作用A549细胞具有协同效应,CI值<1,随着药物浓度增高,CI值逐渐减小。联合吉非替尼和5-氟尿嘧啶使A549细胞凋亡率显著增高。吉非替尼作用后S期细胞比例显著增多。结论:吉非替尼联合5-氟尿嘧啶作用于肺癌细胞株A549具有协同作用,机制与凋亡增加,吉非替尼导致S期细胞比例增多和下调p-EGFR表达水平有关。     

吉非替尼治疗非小细胞肺癌的临床进展

吉非替尼作为表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂,是一类最早应用于非小细胞肺癌的分子靶向药物,特别是EGFR突变型晚期肺腺癌患者。随着研究的深入,吉非替尼的不良反应、耐药等问题也逐渐出现。因而如何更合理地使用吉非替尼,提高疗效、防止耐药性已成为当前临床工作者需要注意的问题。本文就吉非替尼单药或结合化疗、单抗以及中医药治疗等的最新研究进展进行综述。     

非小细胞肺癌患者外周血表皮生长因子受体基因突变的检测及临床意义

目的探讨外周血表皮生长因子受体(EGFR)基因突变在非小细胞肺癌(NSCLC)吉非替尼治疗适宜患者筛选中的价值。方法对2005年12月至2007年12月在广州医学院第一附属医院肿瘤血液中心治疗的170例NSCLC患者,应用EGFR基因突变酶切富集PCR法分析血浆游离核酸EGFR基因外显子19缺失和外显子21L858R突变。分析血浆EGFR基因突变与性别、吸烟史、病理类型、TNM分期、吉非替尼治疗客观缓解率和疾病无进展生存期间的关系。结果 170例血浆标本共检出血浆EGFR基因突变77例,突变率为45.3%。血浆EGFR基因突变主要见于肺腺癌患者(P<0.001)及非吸烟者(P=0.001)。在33例接受吉非替尼治疗的患者中,血浆EGFR基因突变阳性患者的客观有效率和中位疾病无进展生存期均显著优于血浆EGFR基因突变阴性患者(P=0.001)。结论血浆游离核酸酶切富集PCR法能够灵敏而特异地检测NSCLC的EGFR基因突变。突变检测阳性者对吉非替尼的反应率明显高于野生型患者。     

112例老年晚期非小细胞肺癌病人一线应用EGFR-TKIs的疗效及安全性观察

目的：观察在晚期老年非小细胞肺癌患者中一线应用EGFR－TKIs靶向治疗药物的疗效及安全性。方法选取70岁以上晚期非小细胞肺癌患者共112例,应用吉非替尼（250 mg 1次／d口服）68例,应用厄洛替尼（150 mg 1次／d口服）15例,应用埃可替尼（125 mg 3次／d口服）29例。观察患者接受EGFR－TKIs治疗的疗效、不良反应及无进展生存期（ PFS）。结果112例患者接受EGFR－TKIs治疗,共109例完成治疗,本组无CR病例,26例患者获得PR,42例患者疗效为SD,41例患者PD,有效率（ORR）23．8％,疾病控制率（DCR）62．4％。3例不能耐受而中止用药。全组患者中位无进展生存期（ mPFS）为6．0个月。吉非替尼、厄洛替尼、埃可替尼各组间疗效无明显差异,P＞0．05。结论晚期老年非小细胞肺癌患者应用EGFR－TKIs靶向治疗药物安全有效,不良反应轻微,可耐受。吉非替尼、厄洛替尼、埃可替尼疗效无明显差异。     

BIM在EGFR突变非小细胞肺癌中的表达及其意义

目的 检测非小细胞肺癌(NSCLC)细胞株的凋亡以及促凋亡蛋白(BIM)的表达,探讨吉非替尼对其的影响.方法 采用Annexin PI单染法检测吉非替尼作用下各细胞株的凋亡,免疫印迹法检测BIM的表达.结果 吉非替尼诱导NSCLC细胞株凋亡,其中对H1650、H1975突变株的诱导凋亡率高于A549细胞株(P＜0.01),H1650的BIM表达随吉非替尼浓度的增加而增强,H1975的BIM表达较高,但受吉非替尼浓度变化的影响不明显,而A549的BIM表达需要更高浓度的吉非替尼作用.结论 吉非替尼可以使NSCLC细胞表皮生长因子受体(EGFR)突变株细胞内的BIM表达增高,并且可能通过上调BIM的表达来诱导肿瘤细胞凋亡.     

联合应用三苯氧胺和吉非替尼对ＮＳＣＬＣ细胞的抗增殖效应

目的:探讨雌激素受体拮抗剂三苯氧胺联合表皮生长因子受体抑制剂吉非替尼对人小细胞肺癌(NSCLC)细胞株增殖和凋亡的影响及相关的分子机制,为联合分子靶向和激素治疗NSCLC提供理论依据.方法:以吉非替尼及三苯氧胺单独或联合处理NSCLC细胞株,MTF法比较细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡.应用荧光定量PCR及Western blot检测三种肺癌细胞株中表皮生长因子受体(EGFR)及雌激素受体β(Erβ)的表达情况,并分别检测雌二醇.三苯氧胺(TAM)对细胞中EGFR,以及表皮生长因子(EGF)和吉非替尼对Erβ表达的影响,同时还检测了雌二醇对EGFR的磷酸化作用.结果:联合吉非替尼和三苯氧胺增强对EGFR,Erβ阳性的A549,H1650细胞的抑制作用,促进凋亡,但对EGFR,Erβ阴性的H520细胞无明显改变.雌二醇可促进细胞EGFR磷酸化,却也抑制其表达,而三苯氧胺则上调EGFR的表达.同时,EGF及吉非替尼对Erβ的表达也有类似的相反的调控作用.结论:联合吉非替尼和三苯氧胺能够增强对EGFR,Erβ均阳性的肺癌细胞的抗增殖作用,这可能与细胞内EGFR信号转导途径和雌激素信号通路的交叉有关.因此,结合针对EGFR的分子靶向治疗与激素治疗可能为肺癌的治疗提供新的途径.     

EGFR抑制剂吉非替尼对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)抑制剂吉非替尼对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖和凋亡的影响,为原发性肝癌的分子靶向治疗提供实验依据.方法应用免疫组化法检测SMMC-7721细胞中EGFR的表达,不同浓度吉非替尼处理SMMC-7721细胞48 h后,MTT法检测细胞对该药物敏感性,流式细胞仪检测细胞凋亡变化.结果SMMC-7721细胞中EGFR呈强阳性表达,吉非替尼明显下调EGFR表达,抑制SMMC-7721细胞生长,呈剂量时间依赖性,8 mmol/L吉非替尼组细胞凋亡率为(58.58±2.95)%,显著高于对照组(0.11±0.04)%,(P＜0.01).结论吉非替尼能够通过诱导细胞凋亡抑制SMMC-7721细胞生长,因而有望为肝癌的分子靶向治疗提供新的有效途径.     

非小细胞肺癌表皮生长因子受体P848L突变及其功能研究

目的:检测一组中国非小细胞肺癌(non-small-cell lung cancer,NSCLC)患者的表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)突变情况,探讨检出的1例EGFR突变类型P848L的功能特征。方法:收集55例手术或活检确诊的NSCLC标本,抽提细胞DNA,对EGFR的1~27号外显子进行筛查以检出突变情况;利用EGFR野生型全长基因载体,通过定点诱变技术构建出P848L突变型,进一步构建出P848L突变与T790M突变的双重突变体,分别转入293T细胞,观察细胞EGFR磷酸化活性及EGFR靶向抑制剂吉非替尼对其磷酸化的抑制作用。结果:共发现8例NSCLC携带EGFR突变,均为腺癌患者,占非吸烟腺癌患者的34.78%(8/23);其中1例NSCLC患者携带P848L突变体的细胞对吉非替尼的抑制反应与野生型相近,低于经典型突变体;当引入T790M形成双重突变后,对吉非替尼的反应性显著下降。结论: EGFR激活突变在非吸烟的肺腺癌患者具有较高的发生率,而在鳞状细胞癌等类型未发现;P848L突变不能增强吉非替尼对EGFR受体酪氨酸磷酸化的抑制效应,在携带P848L突变的EGFR基因上,引进耐药的T790M突变,能完全抑制其对吉非替尼的敏感性。     

TaqMan PCR反应在EGFR基因突变检测中的应用

目的 研究一种快速、敏感、高通量的方法来检测非小细胞肺癌患者是否存在EGFR基因突变,以指导吉非替尼的分子靶向治疗.方法 收集94例非小细胞肺癌标本,先做EGFR基因测序,序列比对,然后用TaqMan PCR反应检测EGFR基因突变.比较两种检测结果的一致性.结果 94例患者中93例应用TaqMan PCR反应的检测结果和直接基因测序的结果完全一致,1例患者经直接测序,没有探测到EGFR基因突变,而利用TaqMan PCR反应却检测到了一种突变.该患者对吉非替尼化疗敏感.结论 应用TaqMan PCR反应检测EGFR基因突变是一种快速、敏感、高效的方法,对于判断非小细胞肺癌的患者是否要用吉非替尼有重要的指导价值.     

鼻咽癌细胞株中EGFR的表达及吉非替尼联合放射照射的生物效应评估

目的本研究旨在探讨表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)的表达对鼻咽癌(nasopharyngealcarcinoma,NPC)综合治疗的影响。方法免疫荧光检测鼻咽癌CNE1和HONEl中表皮生长因子受体(EGFR)表达水平。取对数生长期细胞接种于96孔板中并随机分组,对照组不行特殊处理,吉非替尼组,单纯照射组及药物照射组给予不同浓度的吉非替尼及剂量的放射线照射。以CCk-8测量细胞活性;细胞集落实验检测吉非替尼对鼻咽癌细胞株放射敏感性的影响按单击多靶模型和线性二次模型拟合细胞存活曲线。结果免疫荧光检测显示CNE1细胞和HONE1细胞内均有较高EGFR表达,药物照射组较单纯照射组在低放射量组时既有显著差异,吉非替尼能增强鼻咽癌细胞株的放射敏感性。结论吉非替尼联合放射照射较单纯照射能提高鼻咽癌的治疗效果。     

miR-200c启动子区甲基化与肺癌细胞对EGFR-TKI耐药相关

目的:初步探讨miR-200c启动子区甲基化与非小细胞肺癌细胞株对表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(epidermal growth factor receptor-tyrosine kinase inhibitor,EGFR-TKI)敏感性变化的关系。方法:选用表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)19外显子区缺失突变(E746-A750)的细胞株(H1650、HCC827)及EGFR野生型细胞株(H358、H1299),应用MSP法检测各细胞株miR-200c启动子区的甲基化状态,CCK-8法检测各细胞株对EGFR-TKI吉非替尼的药物敏感性,荧光定量PCR法检测各细胞株miR-200c的相对表达量;去甲基化药物5-aza-CdR处理各细胞株后,观察其对吉非替尼敏感性及miR-200c表达量的变化。结果:吉非替尼敏感细胞株HCC827及H358高表达miR-200c,其启动子区为非甲基化状态;吉非替尼耐药细胞株H1650及H1299的miR-200c表达较低,其启动子区为甲基化状态;经5-aza-CdR处理后,吉非替尼耐药细胞株H1650及H1299的miR-200c及对吉非替尼的敏感性较前显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05);而吉非替尼敏感株HCC827及H358的miR-200c及对吉非替尼的敏感性未见有明显改变(P>0.05)。结论:miR-200c启动子区的甲基化抑制了miR-200c的表达,从而使H1650及H1299细胞对吉非替尼耐药。     

吉非替尼治疗非小细胞肺癌药物经济学评价

目的 从医疗保险管理方并兼顾全社会的角度,对湖北省城乡居民非小细胞肺癌靶向药物吉非替尼与卡铂+紫杉醇两种治疗方式进行药物经济学评价。方法 以IPASS试验结果为药物效用评价依据,以武汉市5所医院平均治疗成本为成本评价依据,对两种治疗方式进行增量成本效用评价并进行预算影响分析。结果 表皮生长因子受体(EGFR)阳性吉非替尼治疗组相对于卡铂+紫杉醇治疗其总生存期增量成本为0.98倍人均GDP,生命质量调整后总生存期增量成本为0.61倍人均GDP;EGFR阴性组总体生存期低于对照组。结论 对于EGFR阳性患者,吉非替尼符合药物经济学评价推荐标准,建议将吉非替尼纳入医疗保险支付范围,并严格将EGFR检测阳性作为医保支付前置条件。     

吉非替尼在丙烯醛诱导气道黏液高分泌中的作用

目的研究表皮生长因子酪氨酸受体抑制剂(EGFR-TKI)——吉非替尼(gefitinib)在丙烯醛诱导气道黏液高分泌中的作用。方法采用丙烯醛诱导气道黏液高分泌建立大鼠模型,将大鼠分为正常对照组(A组,不予以任何干预),模型组(B组,丙烯醛雾化吸入),药物干预组(C、D、E组,在丙烯醛雾化前30 min,分别以10 mg/kg、20 mg/kg、30 mg/kg的吉非替尼灌胃),药物对照组(F组,生理盐水雾化前30 min,以30 mg/kg吉非替尼灌胃),每组6只大鼠。上述处理持续3周后处死实验动物并取其肺组织,分别进行RT-PCR检测黏蛋白MUC5ACmRNA的表达,免疫组化检测气道MUC5AC和EGFR的蛋白表达,阿尔辛蓝-过碘酸雪夫氏染色(AB-PAS)检测杯状细胞数目。结果模型组大鼠肺组织MUC5AC、EGFR表达增强,杯状细胞数增加;吉非替尼对丙烯醛引起的MUC5AC表达、杯状细胞数增加均具有抑制作用,随着浓度的增加,抑制作用加强;吉非替尼对EGFR信号通路中EGFR蛋白表达具有抑制作用。结论丙烯醛活化EGFR使MUC5AC过度表达,吉非替尼通过对EGFR信号通路的调节,在气道黏液高分泌中具有保护作用。     

吉非替尼治疗非小细胞肺癌的疗效及对血清中表皮生长因子受体的影响

目的探讨吉非替尼佐治非小细胞肺癌的临床疗效,并观察治疗后血清中表皮生长因子受体（EGFR）的表达,以期为临床工作提供支持。方法收集我院确诊的112例非小细胞肺癌患者,依患者的人院顺序分为观察组与对照组,观察组共56例,应用吉非替尼治疗;对照组共56例,应用常规化疗,观察治疗的效果及治疗后血清中~EGFR的差别。结果观察组的疗效明显优于对照组,治疗后观察组患者血清中EGFR的表达明显低于对照组。结论吉非替尼治疗非小细胞肺癌效果较好,并能有效下调血清中EGFR的表达,临床中可以积极应用。     

TaqMan PCR反应在非小细胞肺癌EGFR基因突变检测中的应用

目的 研究一种快速,敏感,高通量的方法来检测非小细胞肺癌患者是否存在EGFR基因突变,以指导吉非替尼的分子靶向治疗。方法 收集94例非小细胞肺癌标本,先做EGFR基因测序,序列比对,然后用TaqMan PCR反应检测EGFR基因突变。比较两种检测结果的一致性。结果 94例患者中,除1例以外,应用TaqMan PCR反应的检测结果和直接基因测序的结果完全一致。这一例外的患者经直接测序,没有探测到EGFR基因突变,而利用TaqMan PCR反应却检测到了一种突变。该患者对吉非替尼化疗敏感。结论 应用TaqMan PCR反应检测EGFR基因突变是一种快速,敏感,高效的方法,对于判断非小细胞肺癌的患者是否要用吉非替尼有重要的指导价值。     

Gefitinib联合化疗药物用药次序对肺癌细胞系GLC-82的不同作用

目的：探讨吉非替尼（gefitinib.，商品名IRESSA）以不同次序联合化疗药（奈达铂、多西他赛、酒石酸长春瑞滨）对EGFR免疫组化染色呈阴性的肺癌细胞系GLC-82的作用。方法：检验不同次序联合吉非替尼时化疗药奈达铂、多西他赛、酒石酸长春瑞滨的IC50，用流式细胞仪检测吉非替尼与化疗药联合的不同次序对GLC-82细胞的细胞周期、凋亡率、Bcl-2表达的影响，用Western blot检测COX2蛋白的表达。结果：在化疗药之前或与化疗药同时使用吉非替尼将使化疗药的抑制率一药物浓度曲线不同程度右移，半数抑制浓度（IC50）升高，晚用吉非替尼比早用吉非替尼有较高的凋亡率、GO-G1期细胞比例，较低的S期细胞比例、较低的Bcl-2表达率和较低的COX2蛋白表达。结论：吉非替尼和化疗药联合需探寻最佳方案，晚于化疗药用吉非替尼效果优于早于化疗药用吉非替尼。     

吉非替尼一线治疗EGFR突变晚期非小细胞肺癌老年患者的临床研究

目的 探讨吉非替尼一线治疗EGFR突变晚期非小细胞肺癌(NSCLC)老年患者的疗效和安全性.方法 采用吉非替尼(250mg/d)对25例65岁以上的ⅢB-Ⅳ期EGFR突变NSCLC患者进行一线治疗,直至病变进展或出现不可耐受的不良反应,观察其疗效及安全性.结果 治疗有效率为72.0％(18例),疾病控制率84.0％(21例).中位PFS为12.5个月(95％CI:11.3～13.7),1年生存率为76.0％.最常见的不良反应为皮疹(48.0％)、腹泻(32.0％)和转氨酶升高(28.0％),多为轻度.结论 对于EGFR突变晚期非小细胞肺癌老年患者,吉非替尼治疗有效且安全,值得临床推广.