曲古菌素A诱导急性髓系白血病细胞表达共刺激分子CD80和CD86的研究(英文)

目的:研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A(TSA)诱导急性髓系白血病细胞表达共刺激分子CD80和CD86。方法:应用流式细胞仪检测TSA诱导急性髓系白血病患者单核细胞、HL-60细胞和K562细胞表达共刺激分子CD80、CD86及细胞活力;应用RT-PCR分析CD80和CD86 mRNA表达情况;在75 Gy照射TSA诱导的HL-60细胞和K562细胞后,应用CCK-8检测共刺激分子表达提高后HL-60细胞和K562细胞对健康人单核细胞的增殖作用。结果:TSA上调HL-60细胞表达CD86,也可上调急性髓系白血病患者单核细胞表达CD86,但TSA不能上调K562细胞表达CD86,TSA诱导HL-60细胞和K562细胞后,提高表达CD86的HL-60细胞对健康人单核细胞有增殖作用,而K562细胞无此作用。结论:TSA诱导HL-60细胞和急性髓系白血病患者单核细胞表达共刺激分子CD86,促进健康人单核细胞的增殖作用。     

下调miR-125b逆转白血病细胞对多柔比星的耐药作用

目的:探讨下调miR-125b是否能逆转人白血病多柔比星耐药细胞株的耐药性,为白血病耐药患者寻找新的治疗方法。方法:应用实时荧光定量PCR方法检测白血病非耐药细胞株HL-60和K562及对应多柔比星耐药细胞株HL-60/DOX和K562/DOX中miR-125b的表达情况;采用电穿孔转染法上调或者抑制HL-60/DOX细胞中miR-125b的表达水平,随后采用CCK-8法检测不同浓度多柔比星处理后细胞的存活情况,绘制细胞增殖抑制率曲线并计算半数抑制浓度(IC50)。结果:与非耐药细胞株HL-60和K562相比,耐药细胞株HL-60/DOX和K562/DOX中miR-125b的表达水平明显升高。miR-125b在HL-60/DOX细胞中的表达水平比HL-60细胞中高15倍,其在K562/DOX细胞中的表达水平比K562细胞中高5倍。在耐药细胞系HL-60/DOX中过表达或抑制miR-125b的表达发现,转染miR-125b模拟物的细胞较对照组细胞的增殖抑制率显著降低(P 0. 01),而转染miR-125b抑制剂的细胞较对照组细胞的增殖抑制率显著升高(P 0. 01)。结论:miR-125b在白血病多柔比星耐药细胞株HL-60/DOX和K562/DOX中高表达。下调miR-125b的表达可逆转HL-60/DOX细胞对多柔比星的耐药性。     

MiR-181a在急性髓系白血病中的表达及其对细胞增殖的影响

目的:研究microRNA181a(miR-181a)在急性髓系白血病(AML)细胞系中的表达及功能。方法:采用定量PCR检测AML细胞株(NB4、HL-60、K562及MV-4-11)中miR-181a的表达水平;采用CCK-8计数法检测miR-181a对人AML细胞系NB4、HL-60及K562增殖的影响;采用流式细胞术分析细胞周期的改变。结果:miR-181a在大部分AML细胞系(NB4、HL-60及MV-4-11)中表达明显增高,在少数AML细胞系(K562)中降低,与对照组相比差异有统计学意义(P0.05)。CCK-8检测结果显示,高表达的miR-181a可以促进白血病细胞增殖,且miR-181a可以促进白血病细胞细胞周期转变,促进G0/G1期细胞向S及G2期细胞转变。结论:高表达的miR-181a可以促进AML细胞增殖,在AML中可能起"癌基因"作用,研究miR-181a可能为AML治疗提供新的方法。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA阻断MAPK信号通路并诱导HL-60细胞凋亡

本研究旨在探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂-SAHA（suberoylanilide hydroxamicacid）诱导人急性髓性白血病细胞株HL-60凋亡的分子机制。采用MTT法,瑞氏-姬姆萨染色和Hoechst33342/PI荧光染色方法,检测SAHA对HL-60细胞生长的抑制作用及细胞的形态变化;通过流式细胞术、Western-blot方法测定HL-60细胞的周期变化以及多种信号蛋白的表达。结果表明：SAHA可以呈剂量时间依赖性抑制HL-60细胞的生长;经2μmol/L SAHA处理12-48小时,HL-60细胞显示细胞周期被阻滞于G0/G1期;经Hoechst33342荧光染色后细胞核出现明显的凋亡小体结构;Western blot检测证实,SAHA作用HL-60细胞后caspase3被激活,其底物蛋白聚ADP核糖聚合酶[po-ly（ADP-ribose）polymerase,PARP]发生剪切,细胞发生凋亡;对细胞凋亡相关信号转导通路P44/42 MAPK及PI3K/Akt检测结果表明,涉及MAPK信号通路的Raf及ERK激酶磷酸化受到明显抑制,而Akt及其下游mTOR激酶的活性没有明显改变。结论：SAHA对HL-60细胞的杀伤作用主要是通过诱导细胞凋亡实现,与细胞增殖相关的P44/42 MAPK信号通路被阻断是细胞凋亡发生的机制之一。     

人可溶性血管内皮生长因子受体1抑制白血病细胞增殖的研究

本研究通过体外实验探讨人可溶性血管内皮生长因子受体1（sFLT-1）对白血病细胞增殖的抑制作用。用RT—PCR检测白血病细胞株K562、HL-60、U937和骨髓LTC—IC VEGF mRNA、VEGF—R1（FLT-1）mRNA的表达，用流式细胞术检测上述细胞VEGF和VEGF—R1（FLT-1）的表达，ELISA法检测细胞培养上清中VEGF的含量，将sFLT-1加入K562、HL-60白血病细胞株和骨髓LTC—IC培养体系中，应用MTT法计算细胞生长的抑制率。结果显示：白血病细胞株K562、HL-60、U937和骨髓LTC—IC均表达VEGF，以K562表达VEGF量最高。K562和HL-60细胞株还表达FLT-1，U937细胞和骨髓LTC—IC表达的FLT-1表达量很低。sFLT-1明显抑制白血病细胞株K562及HL-60的生长，并且随着sFLT-1浓度的增加，其抑制率增加，以用药后48小时抑制作用最明显。结论：sFLT-1能够抑制某些白血病细胞株的生长，其抑制效应随用药浓度的增加而增加，而sFLT-1对正常骨髓细胞增殖无影响。     

利多卡因通过调控STAT3对小儿急性髓系白血病细胞增殖、凋亡的分子机制

目的:探讨利多卡因对小儿急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法:用终浓度分别为0.2 mmol/L,0.5 mmol/L,0.75 mmol/L的利多卡因处理AML细胞HL-60和K562,以未经任何处理的正常细胞作为对照组(Con组);将si-NC,si-STAT3转染至HL-60细胞,记为si-NC组、si-STAT3组;将pc DNA3.1,pc DNA3.1-STAT3转染至HL-60细胞后用0.5mmol/L的利多卡因处理,分别记为LID0.5mmol/L+pc DNA3.1组、LID0.5mmol/L+pc DNA3.1-STAT3组,转染均采用脂质体法。蛋白质印迹法检测蛋白质表达;MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡。结果:利多卡因抑制Cyclin D1和Bcl-2的表达,促进p21和Bax的表达;抑制细胞HL-60和K562的增殖,促进细胞凋亡。利多卡因还抑制STAT3的表达,抑制STAT3表达可抑制细胞HL-60增殖,促进细胞凋亡。STAT3过表达逆转了利多卡因对细胞HL-60的增殖抑制和凋亡促进作用。结论:利多卡因可抑制细胞HL-60的增殖,促进细胞凋亡,其机制可能与调控STAT3有关,或可为AML的治疗提供新思路和新靶点。     

长柱重楼皂苷抑制急性髓系白血病细胞增殖的机制研究

目的:探讨长柱重楼皂苷抑制急性髓系白血病(AML)细胞株HL-60、K562、KG-1、HT-93增殖的作用原理。方法:HL-60、K562、KG-1、HT-93细胞与长柱重楼皂苷共同培养24、48和72 h,应用MTT法测定细胞增殖抑制率,流式细胞术检测HL-60、K562、KG-1、HT-93细胞株的凋亡率,Western blot检测凋亡蛋白PARP,Caspase3,Mcl-1, BCL-2, BAX,P53,P27的表达变化,GAPDH为内参对照。结果:与对照组相比,长柱重楼皂苷可以抑制HL-60、K562、KG-1、HT-93细胞的增殖,且呈现明显的浓度依赖性和时间依赖性(r=0.9436;r=0.8623;r=0.9922;r=0.8918)。不同浓度的长柱重楼皂苷(4和8μg/ml)分别作用于HL-60、K562、KG-1、HT-93细胞24 h后,与表达对照组比较,凋亡细胞的比例均明显增加。随着药物浓度的增加,PARP与Caspase3的剪切带也逐渐增加(r=0.9945;r=0.965),同时BCL-2家族的促凋亡蛋白BAX表达逐渐增加(r=0.9916),而抗凋亡蛋白MCL-1与BCL-2表达逐渐减少(r=0.9959;r=0.9927)。抑癌基因p53蛋白及其下游p27蛋白的表达也随着药物浓度的增加而逐渐升高(r=0.9959;r=0.9778)。结论:长柱重楼皂苷通过活化内源性凋亡通路有效抑制白血病细胞增殖,这为临床上治疗AML白血病提供潜在新药物选择。     

甲异靛对K562和HL-60细胞Wnt信号通路的影响

本研究探讨甲异靛对K562细胞和HL-60细胞Wnt信号通路的影响。采用RT-PCR和Western blot方法分别检测甲异靛处理的K562和HL-60细胞中GSK-3β及其下游相关基因及蛋白的表达水平。结果表明:甲异靛可使HL-60细胞中β-catenin和c-myc基因表达下降,但对K562细胞的这两种基因表达无明显影响;甲异靛略能增加HL-60细胞中GSK-3β蛋白表达,但明显降低K562细胞和HL-60细胞中p-GSK-3β和c-MYC蛋白表达水平;甲异靛对K562细胞中β-catenin表达没有明显影响,但能使HL-60细胞中β-catenin表达下降。结论甲异靛可抑制K562细胞和HL-60细胞中Wnt信号通路的传导,降低癌基因和相关蛋白的表达,从而发挥治疗白血病的作用。     

靶向沉默Eps8基因对人慢性髓系白血病K562细胞生物学活性的影响及其分子机制的探讨

目的:探索靶向沉默Eps8(表皮生长因子受体通路底物8)基因对人慢性髓系白血病K562细胞生物学活性的影响及其可能的分子机制。方法:采用慢病毒介导RNA干扰技术靶向沉默K562细胞中Eps8基因。实验分组为:空白对照(blank control)组、Eps8-shRNA靶向沉默(K562-shRNA)组和阴性对照(K562-NC)组。在荧光显微镜下观察转染效率;应用RT-PCR法和Western blot法分别从mRNA转录水平和蛋白水平验证Eps8基因沉默效率;台盼蓝拒染法和MTT法检测细胞体外增殖能力变化;流式细胞术检测细胞凋亡率变化;甲基纤维素克隆形成实验验证细胞集落形成能力;Western blot法检测沉默Eps8基因后AKT/mTOR及其下游信号通路磷酸化蛋白的表达情况。结果:成功建立稳定低表达Eps8的K562细胞株(K562-shRNA)和阴性对照细胞株(K562-NC)。与空白对照组和K562-NC组相比,沉默Eps8基因后K562-shRNA组细胞Eps8转录和蛋白表达水平均显著降低(P0.01);体外培养48 h后,K562-shRNA组细胞增殖能力明显下降(P0.05);K562-shRNA组细胞凋亡率为(5.81±0.39)%,空白对照组和K562-NC组细胞凋亡率分别为(1.02±0.70)%和(1.19±0.15)%,提示K562-shRNA组细胞凋亡率与空白对照组和K562-NC组之间有显著性差异(P0.05),而空白对照组和K562-NC组之间没有显著性差异(P0.05);体外甲基纤维素半固体培养10 d后,K562-shRNA组细胞集落形成能力与空白对照组和K562-NC组相比有显著性差异(P0.05)。沉默Eps8基因可下调K562细胞p-AKT(308)和p-AKT(473)的表达(P0.05),而t-AKT表达水平没有明显变化。另外,沉默Eps8基因可下调AKT下游的pmTOR和p-PRAS40蛋白的表达(P0.05),而总mTOR和总PRAS40的表达水平没有明显变化。结论:利用慢病毒介导的RNA干扰技术靶向沉默Eps8基因能够抑制K562细胞增殖,促进其凋亡,其作用机制可能与AKT/mTOR及其下游信号通路下调有关。     

蝎毒多肽提取物对K562细胞PI3K和p-Akt信号蛋白表达及细胞增殖的影响

本研究旨在探讨蝎毒多肽提取物(PESV)对人慢性髓系白血病细胞系K562细胞凋亡调控的PI3K和p-Akt信号蛋白的影响及作用机制。将体外培养的K562细胞,经PESV处理不同时间后,通过MTT法检测细胞增殖曲线,Western blot法检测PI3K及p-Akt蛋白水平变化。结果表明,与对照组相比,PESV处理后K562细胞凋亡率增加,PI3K及p-Akt蛋白表达降低。结论:PESV可能通过抑制凋亡调控的PI3K、p-Akt信号蛋白,抑制K562细胞增殖,促进细胞凋亡。