EB病毒抗原单克隆抗体的特异性研究

5种EB病毒细胞系通过三步放大间接免疫过氧化物酶方法,检测抗EB病毒抗原的单克隆抗体(McAb)—病毒壳抗原(VCA)、膜抗原(MA),早期抗原(EA)、早期弥漫性抗原(EA—D)、早期限制性抗原(EA—R)、核抗原(EBNA)、核抗原第2型(EBNA—2)及潜在性膜蛋白(LMP)。结果表明McAb、EBNA、EBNA—2和EA有较高特异性,VCA和EA—R有一定特异性,MA、LMP和EA—D未得到预期的特异性反应。     

抗人肿瘤细胞核单克隆抗体的制备及鉴定

根据Epstein等报告,肿瘤坏死部分的不溶性抗原可以作为放射免疫检测与治疗的靶部位。作者制备了抗人肿瘤细胞核单克隆抗体(McAbs),并对其性质进行了鉴定。放射性同位素标记的抗核McAds的初步生物分布试验表明,抗核McAds确可到达肿瘤坏死部位。     

抗前列腺特异性膜抗原膜外区多肽单克隆抗体的研制及初步应用

目的建立前列腺特异性膜抗原（PSMA）膜外区多肽杂交瘤细胞株，并对其分泌的PSMA单克隆抗体进行初步鉴定，为PSMA的功能研究和人源化抗体的制备奠定基础，以求进一步用于前列腺癌的诊断和治疗。方法使用人工合成多肽免疫BABL／c小鼠，采用PEG融合技术建立杂交瘤细胞株，制备单克隆抗体。通过免疫荧光法、酶联免疫吸附法及斑点金标法确定单克隆抗体的交叉反应性、亲和力及免疫球蛋白的类型和亚类。结果获得两株可稳定分泌PSMA单克隆抗体的杂交瘤细胞，4F4为IsG1类，1F1为IgC3类。两株单抗均能识别LNCap细胞表达的PSMA蛋白，与不表达PSMA的PC-3、SP2／0等细胞无交叉反应。杂交瘤细胞株1F1培养上清效价为1：40。腹水效价为1：6400；而杂交瘤细胞株4F4培养上清效价为1：80。腹水效价为1：8000。结论成功地制备出两株抗PSMA单克隆抗体，均具有良好的特异性和亲和力，为进一步建立免疫分析方法。进行PSMA相关研究奠定了基础。     

抗人血浆纤维结合蛋白单克隆抗体的初步研究

本文应用人血浆纤维结合蛋白免疫BALB/c小鼠,经细胞融合制备出一组(5株)人血浆纤维结合蛋白的单克隆抗体(HIFn1-5)。经免疫酶标和免疫组化检测,这组单抗仅特异地与人血浆纤维结合蛋白结合,而与血浆中的其它大分子糖蛋白如纤维蛋白原、凝血酶敏感蛋白和胶原等均无明显的交叉反应。与多种器官、组织的间质可发生特异性反应,而与组织中的细胞则无反应。间接免疫荧光测定,这组抗体与正常人的造血细胞及某些造血细胞系和部分白血病病人的细胞均无交叉反应。竞争试验的结果表明,这组抗体(除HITn5外)识别的抗原位点十分相近。通过双抗体夹心ELISA方法,测定了17例正常人血浆纤维结合蛋白,其平均含量为557±154mg/L。     

人-鼠杂交瘤制备人单克隆抗体技术的研究

本文采用小鼠骨髓瘤细胞系(Sp2/0)与破伤风类毒素(TT)免疫的人外周血淋巴细胞(PBL)进行融合,对人—鼠杂交瘤细胞系制备人单克隆抗体的技术条件进行了探讨。按免疫时间(d)及体外刺激与否分为4组。结果表明:(1)PWM+TT体外刺激可导致B细胞总数增加,且融合率高,容易建成稳定分泌人单抗的细胞株。(2)经TT免疫的人PBL,6d就有抗TT抗体(IgG)的前体细胞出现。15d及21d时,抗TT抗体前体细胞的频率更高。(3)体内免疫7d及14d并分别经体外刺激的两组共建立5株阳性株。经双扩碓定IgG2株,IgM3株。冻存10个月后复苏、传代及适当的克隆化后仍为阳性。上清液中人Ig的分泌量为0.42～1.15μg/ml。经染色体核型鉴定,碓认为人-鼠杂种细胞。     

人心肌肌钙蛋白T单克隆抗体的研制及鉴定

以人心肌肌钙蛋白Ｔ（ｃＴｎＴ）为抗原，采用脾内免疫法，免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取其脾淋巴细胞与小鼠Ｓｐ２／０细胞融合，经间接ＥＬＩＳＡ法筛选，三次克隆化后获得５株能稳定分泌抗ｃＴｎＴ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞Ｇ３、Ｇ８、Ｇ１０、Ａ５和Ａ７。免疫球蛋白亚类鉴定其中１株为ＩｇＧ２ａ，４株为ＩｇＭ。染色体数目９２～１１０条。将Ｇ３、Ｇ８、Ｇ１０、Ａ５的单克隆抗体腹水做１：１００稀释与ＬＤＨ、ＣＫ、ＣＫＭＢ和ＧＯＴ等心肌酶均无交叉反应。５株ＭｃＡｂ的腹水效价为３．２×１０－６～１．６×１０－７。ＭｃＡｂ相加试验表明，Ａ５和Ｇ３可识别不同的抗原表位。     

口腔颌面部肿瘤单克隆抗体研究的初步报告

作者用人牙龈癌细胞系Ca9-22免疫的BALB/c小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤Sp2/0细胞融合,制备出2株单克隆抗体(McAbs)C-D11和C-E9。2株McAbs的类型均为IgG2b型。杂交瘤培养上清液和腹水的效价分别为1:128～256和1:10~4～10~6。C-D11与13种培养的瘤细胞中的7种反应;C-E9与其中的10种瘤细胞反应;但2株McAbs与13种正常细胞几乎不反应。C-D11和C-E9相应抗原能耐受蛋白水解酶和一些有机试剂的处理,但不耐受过碘酸的氧化作用。     

MG单抗相应抗原的理化特性分析

首先制备胃癌组织可溶性抗原提取液,经耐热试验,外源性凝集素结合试验,高碘酸氧化试验,甲醇—氯仿抽提试验等理化处理后,检测MG5,MG7,MG9,MGb1,MGe1,MGd1,6株单抗相应抗原的活性变化,进行初步定性分折。结果表明:MG单抗相应抗原均能被外源性凝集素ConA所识别,并可耐热(80℃30min,100℃20 mim),但高碘酸氧化后抗原活性则丢失。MG7,NGdl相应抗原可被甲醇-氯仿抽提,MG5,NG9,MGb1,MGe1相应抗原则不能被其抽提,故认为MG单抗相应抗原是一组碳水化合物抗原,其抗原决定族存在于糖链上,为抗原的进一步纯化和鉴定打下了基础。     

分泌高效价抗催产素单抗杂交瘤细胞系的建立

为进一步研究催产素分子的生理功能及空间结构 ,制备识别其特有表位的单抗。用改良的碳二亚胺二步法交联催产素和牛甲状腺球蛋白 ,用常规方法制备针对催产素分子的单抗 ,测定了抗体的亚类、亚型和相对亲和力 ,并采用竞争ELISA法 ,检测各株细胞分泌的单抗和几种催产素的拟似物的交叉反应程度。结果制备出了 3株分泌高效价抗体的杂交瘤细胞 4G11、 2B11和 3F1,其亚类均为IgG1,亚型均为κ型 ,相对亲和力均较高。 3株中 4G11和 2B11可以特异性地和催产素反应 ,而 3F1与AVP、VAS及ASU有较强的交叉反应。催产素单抗可用于阻断催产素的生物学功能等研究     

Immunohistochemical Examination of Novel Rat Monoclonal Antibodies against Mouse and Human Podoplanin

This study aims to develop new monoclonal antibodies (mAbs) against mouse and human podoplanin. Rats were immunized with synthetic peptides, corresponding to amino acids 38–51 of mouse podoplanin or human podoplanin which is 100% homologous to the same site of monkey podoplanin; anti-mouse podoplanin mAb PMab-1 (IgG_2a) and anti-human mAb NZ-1.2 (IgG_2a) were established. In immunocytochemistry, the mouse melanoma B16-F10 and mouse podoplanin (mPDPN)-expressed CHO transfectant were stained by PMab-1; human lymphatic endothelial cells (LEC) and human podoplanin (hPDPN)-expressed squamous cell carcinoma HSC3 transfectant, were stained by NZ-1.2. Western-blot analysis detected an about 40-kDa protein in CHO-mPDPN and B16-F10 by PMab-1, and in HSC3-hPDPN and LEC by NZ-1.2. In frozen sections, PMab-1 reacted with mouse kidney, pulmonary alveoli, pulmonary pleura, and salivary gland myoepithelial cells while NZ-1.2 reacted to the human salivary gland myoepithelial cells. The immunostaining of paraffin-embedded sections also showed the reaction of PMab-1 or NZ-1.2 to the mouse or monkey kidney glomerulus, pulmonary alveoli, and lung lymphatic vessels. These results indicate that the two novel rat mAbs to the mouse and human/monkey podoplanin are useful for Western-blot and immunostaining of somatic tissues on paraffin-embedded sections as well as frozen sections.     

抗人心肌肌凝蛋白轻链单克隆抗体的制备和鉴定

从人心脏中提取心肌肌凝蛋白轻链（ＣＭＬＣ１），免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取其脾细胞与Ｓｐ２／０骨髓瘤细胞做常规融合，获得了２２株分泌抗ＣＭＬＣ１单克隆抗体的杂交瘤细胞株。经对其中某些株作ＩｇＧ分型、核型、腹水效价、表位和亲和常数测定，表明所获单克隆抗体的质量良好，为建立分析轻链的方法奠定了基础。     

Localization in Human Term Placental Bed and Amniochorion of Cells Bearing Trophoblast Antigens Identified by Monoclonal Antibodies*

ABSTRACT: The monoclonal antibodies (mAb) H315, H317, and OKT9 have been used in immunofluorescence to investigate the expression of fetal trophoblast membrane antigens by cells within human term amniochorionic membranes and the marginal area of term placental bed tissue. OKT9 reacted only with trophoblast of placental chorionic villi and did not react with any nonvillous cytotrophoblast population: this mAb is known to identify the cell surface receptor for transferrin. H315 identifies a trophoblast-specific cell-surface antigen and strongly stained both placental villous trophoblast and the cytotrophoblastic layer of amniochorion. This mAb also stained some extravillous cytotrophoblast in the term placental bed, notable interstitial cytotrophoblast within maternal decidua. H317, which identifies placental-type alkaline phosphatase, gave the same distribution pattern as H315.     

抗人重组IL－1单克隆抗体的制备及初步鉴定

以重组人ＩＬ－１免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞６５３融合，得到一组分泌抗人重组ＩＬ－１单克隆抗体的杂交瘤细胞。对其中的３株ＹＡ１３３、ＹＡ１４０和ＹＡ１６３进行了初步鉴定；抗体类别为ＩｇＧ，亚类均为ｌｇＧｌ；免疫转印显示，３株抗体均能特异性地识别分子量为１７．５ｋＤ的ＩＬ－１蛋白条带；ＥＬＩＳＡ法证明与其它细胞因子如：ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＴＮＤ－α、ＩＦＮ－γ和ＧＭ－ＣＳＦ均无交又反应；放射免疫测定结果证实，３株抗体分别识别ＩＬ－１分子上两个不同的抗原决定簇。     

抗人红细胞NADH－细胞色素b5还原酶单克隆抗体的建立

以重组人红细胞ＮＡＤＨ－细胞色素ｂ５还原酶为抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠；通过常规方法将小鼠脾细胞与Ｓｐ２／０骨髓瘤细胞融合，经ＥＬＩＳＡ筛选及有限稀释法克隆化，选出６株阳性克隆。其中两株分泌ＩｇＧ，其余均分泌ＩｇＭ。免疫印迹分析表明，两株ＩｇＧ单克隆抗体对人红细胞ＮＡＤＨ－细胞色素ｂ５还原酶有较高的特异性和亲和力。这一研究为开展对人红细胞ＮＡＤＨ－细胞色素ｂ５还原酶的研究和遗传性高铁血红蛋白血症的免疫诊断奠定了基础。     

人乳头瘤病毒16 E6蛋白单克隆抗体的研制

运用杂交瘤技术，我们成功地建立了两株能稳定分泌小鼠抗人乳头瘤病毒１６Ｅ６蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞。经鉴定单克隆抗体均属ＩｇＧ１ｋ。试验结果表明，所得单克隆抗体仅与ＨＰＶ１６Ｅ６融合蛋白反应，不与ＨＰＶ１６Ｅ７、Ｌ１、Ｌ２融合蛋白以及Ｌ１－Ｌ２真核表达蛋白反应，也只与Ｃａｓｋｉ细胞反应，不与Ｈｅｌａ细胞反应。初步结果说明，该抗体是ＨＰＶ１６Ｅ１６蛋白特异性的ＭｃＡｂ。     

抗人胎胰相关抗原单克隆抗体C1免疫组化研究

用人胎胰提取物免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，获得能稳定分泌ＩｇＧ２ａ单抗的杂交瘤细胞Ｃ１。免疫组化染色表明，Ｃ１与胎胰、胰腺癌、胃癌和大肠癌等组织有较强结合反应，与正常胰腺、十二指肠、胃、大肠等处的消化腺上皮细胞有轻度结合反应。初步表明，通过定量分析单抗，Ｃ１对消化道癌肿的诊断有一定参考价值。     

胃癌单抗检测活检粘膜组织833例结果分析

应用胃癌单抗ID1-2对833例内窥镜活检组织进行了免疫学荧光检查,胃癌阳性检出率为81.6％:胃溃疡为32.7％;肠化生性蒌缩性胃炎为40.0％;食管和结肠腺癌分别为60.0％和62.5％,与单纯性萎缩性胃炎和浅表性胃炎的阳性检出率相比有非常显著的差异(P<0.01)。表明ID1-2单抗可用于检测活检粘膜组织中的癌细胞以及具有癌细胞相关抗原的癌前病变组织,如果与内窥镜及常规病理学检查联合应用,将可进一步提高早癌的阳性检出率。     

单克隆的抗-HBs在同系鼠体内诱导抗-HBs的观察

作者采用BALB/c鼠的抗-HBs单克隆抗体(Ab_1)作为抗原,免疫同系BALB/c小鼠,使其在自身体内产生Ab_2,观察了由Ab_2诱导的Ab_3的消长情况。经测定其血清,免疫小鼠在第7天出现Ab_2,随后第9天、第19天出现Ab_2的显著增高。Ab_3的出现是在第9天,随后在第11天,第17天和第21天出现增高现象。Ab_2与Ab_3的量的变化,呈周期性消长。一般说来,当Ab_2增高时,Ab_3减低;若Ab_2降低,则Ab_3增高。实验过程中,还发现Ab_3能与外界进入体内的HBsAg结合。上述实验中出现的Ab_2和Ab_3之间的相互刺激和相互中和的现象,表明是小鼠体内自身的抗个体型抗体的调节作用的结果,因而出现了上述周期性的动态变化,支持体内存在着一个个体型——抗个体型免疫网络的理论,本文依据实验事实,认为传统的被动免疫方法,在一定条件下,也能诱导出主动免疫。     

抗精脒单克隆抗体的制备及其特性鉴定

本文用鼠×鼠细胞杂交瘤技术首次建立了抗多胺（精脒）单克隆抗体的杂交瘤细胞系。以此杂交瘤经体外组织培养扩大，并注入同系小鼠腹腔，产生的腹水中抗体滴度达１：１０６。单抗的类别是ＩｇＧ１。单价抗体是由分子量５２ｋＤ和２７ｋＤ组成的复合体。这个单克隆抗体可用于癌症的快速诊断和预后随访。     

人巨细胞病毒单克隆抗体的研制检定和应用

采用人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）ＡＤ１６９株作为免疫原，制备出１３株鼠－鼠杂交瘤细胞系。对其中的６株进行了检定．免疫印迹试验结果表明：单克隆抗体（ＭｃＡｂ）７Ｂ４、７Ｄ７、７Ｅ１１、８Ｅ８和８Ｄ６相对应的ＨＣＭＶ多肽分子量分别为４６、１５０、３８、５１７２和６５ｋＤ．ＨＣＭＶ感染人胚肺二倍体细胞（２ＢＳ）后不同时间制成抗原片，与ＭｃＡｂ作间接免疫荧光试验。结果表明：ＭｃＡｂ８Ｂ８相应的病毒多肽为即刻早期抗原，其它５株ＭｃＡｂ相应的病毒多肽均为晚期抗原，６株ＭｃＡｂ等量混合后，标上辣根过氧化物酶，用于ＩｇＭ抗体捕获法ＥＬＩＳＡ（ＭａｃＥＬＩＳＡ）中，并与间接ＥＬＩＳＡ（ＩＥＬＩＳＡ）同时检测ＨＣＭＶ－ＩｇＭ．在未经选择的１００份脐带血中，两法均为阳性的３份，两法均为阴性的９４份；ＭａｃＥＬＩＳＡ阳性而ＩＥＬＩＳＡ阴性的２份血清的特异性试验证明，ＨＣＭＶ－ＩｇＭ确为阳性．ＩＥＬＩＳＡ阳性而ＭａｃＥＬＩＳＡ阴性的１份血清的特异性试验证明，它是由ＲＦ引起的假阳性。