肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导前列腺癌细胞凋亡的研究

目的 研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对前列腺癌细胞的凋亡诱导作用。方法 10μg/L-100μg/L的TRAIL处理培养的PC-3M细胞4～24h后，采用Annexin-V荧光染色、透射电镜、原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测肿瘤细胞凋亡；流式细胞术和MTT比色检测凋亡率、细胞生长抑制率与TRAIL的时间、浓度依赖关系。结果10μg/L～100μg/L TRAIL作用4～24h，肿瘤细胞出现典型的凋亡形态学改变，随着TRAIL浓度的增加或药物作用时间的延长，肿瘤细胞凋亡率也增加，为13．8％～79．6％，同时细胞生长抑制率出现明显增加，药物作用8h为7．5％～37．9％，12h为16．7％～87．9％，24h为39．7％～97．6％。结论 TRAIL能够迅速和显著地诱导PC-3M细胞凋亡，可能成为晚期前列腺癌治疗的新方法。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体联合化疗药物杀伤胰腺癌细胞的研究

目的研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体以及联合应用亚毒性剂量的化疗药物对胰腺癌的治疗作用。方法半定量 RT-PCR 检测 TRAILR mRNA 在胰腺癌细胞株 Canpan-2中的表达。DNA 琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡情况。应用不同浓度的 TRAIL 及联合亚毒性剂量的氟尿嘧啶(5-fluorouracil)、吉西他滨(gemcitabin)处理胰腺癌细胞,通过 MTT 法检测细胞毒性作用,流式细胞仪分析细胞凋亡率。结果死亡受体 DR4、DR5及诱骗受体 DcR1、DcR2在胰腺癌细胞株 Canpan-2中均有表达。DNA 琼脂糖凝胶电泳可见到典型的凋亡梯形带。TRAIL100 ng/ml 作用胰腺癌细胞24h 后,细胞杀伤率为(29.5±1.2)%,且其作用存在浓度依赖性;联合应用亚毒性剂量的氟尿嘧啶、吉西化滨能够大大提高TRAIL 的细胞毒活性,杀伤率分别为 TRAIL+氟尿嘧啶(43.7±1.4)%,TRAIL+吉西化滨(49.8±1.2)%,联合用药前后差异有显著性(P<0.01)。结论 TRAIL 受体在胰腺癌细胞普遍表达,并存在受体类型的表达差异;TRAIL 与化疗药物氟尿嘧啶、吉西他滨有协同杀伤胰腺癌细胞的作用。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体对肝细胞肝癌的抑制作用

目的 研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体(TRAIL)对肝细胞肝癌的抑制作用。方法 构建绿色荧光蛋白融合TRAIL质粒,转染肝癌细胞株HepG2、SMMC7721细胞后,分别采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot检测 TRAIL的表达,采用流式细胞仪检测细胞周期、凋亡,噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率;体内实验建立裸鼠肝癌皮下模型,pIRES-EGFP-TRAIL直接瘤体注射,并观察TRAIL的抑癌作用。结果 真核表达质粒TRAIL体外转染肝癌细胞后,RT-PCR和 Western blot证实了肝癌细胞中有 TRAIL的表达,但对肝癌细胞的生长无显著性的抑制作用。体内直接瘤体注射 pIRES-EGFP-TRAIL 2周,RT-PCR证实瘤体有 TRAIL mRNA强表达,癌旁组织 TRAIL mRNA呈弱表达,正常肝无 TRAIL mRNA表达,但两组间肿瘤大小差异无显著性(P>0.05)。结论 肝细胞肝癌对TRAIL诱导的凋亡有耐药现象,提示HCC中存在抑制TRAIL诱导凋亡的因素,单一的TRAIL治疗HCC疗效有限。     

肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体联合丁酸纳诱导肝癌HepG-2细胞凋亡研究

目的 观察肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体(TRAIL)与丁酸纳(NaB)联合应用对肝癌细胞HepG-2的抑制作用.方法 将HepG-2细胞悬液接种于96孔培养板后,分别或联合加入不同浓度的NaB(1.0、2.5、5.0 mmol/L)和TRAIL(10、100、500、1000μg/L),应用噻唑蓝(MTT)比色法检测其对HepG-2细胞生长抑制作用;流式细胞术检测细胞凋亡;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞内DR4和DR5 mRNA的表达水平.结果经不同浓度的TRAIL处理后,HepG-2细胞生长抑制率和凋亡率分别为(4.5±1.3)%和3.2±0.7)%,与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05).NaB对HepG-2细胞生长有明显抑制作用,且随着NaB浓度从1.0mmol/L升高到5.0mmol/L时,抑制率从(37.6±2.6)%升高到(58.4±3.0)%,各浓度组间差异有统计学意义(P<0.05),NaB浓度为2.5 mmol/L时的凋亡率为(26.7 5.2)%.联合应用NaB和TRAIL能够明显的提高HepG-2细胞的生长抑制率和凋亡率,与同等浓度的NaB或TRAIL单独应用比较,差异有统计学意义(P<0.05).HepG-2细胞经过NaB作用后,其DR5 mRNA的表达水平明显的高于对照组.结论 HepG-2细胞对单独应用TRAIL诱导的凋亡不敏感,NaB可通过上调HepG-2细胞内DR5 mRNA的表达而增强HepG-2对TRAIL的敏感性.     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体在肾癌中的分布及其意义

目的：研究肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体（TRAIL）受体在肾癌组织中的分布及其意义。方法：采用RT－PCR及NorthernBlot的方法检测TRAIL受体在肾癌组织及正常肾组织,肾癌细胞系GRC－I和正常肾小管细胞系HK－2中的表达。结果：死亡受体DR4、DT4在肾癌组织及正常肾组织、肾癌细胞系GRC－I和正常肾小管细胞系HK－2中强表达;假受体DcR-1在正常肾组织和正常肾小管细胞系HK－2中强表达;假受体DcR-2未见表达。结论TRAIL基因在肾癌肿瘤细胞的凋亡机制中可能发挥重要的作用。     

大肠癌中肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体及其影响因子表达的研究

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）具有选择性诱导肿瘤细胞发生凋亡的作用。但随着研究深入，人们发现许多肿瘤对TRAIL并不敏感。我们通过研究TRAIL诱导细胞凋亡通路中3个关键性影响因子Survivin、NF-κB和Caspase-3在大肠癌中的表达来探寻提高TRAIL对肿瘤细胞敏感性的可能途径。     

蛋白酶体抑制剂和肿瘤相关坏死因子凋亡诱导配体协同诱导肝癌细胞凋亡的机制

肿瘤相关坏死因子凋亡诱导配体（TRAIL）是高选择性的化疗药物，然而并非所有肿瘤细胞对TRAIL均表现出显著敏感性。本研究旨在探讨TRAIL诱导肝癌细胞凋亡中存在的抵抗机制，及其与蛋白酶体抑制剂的协同作用。     

肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体在前列腺癌治疗中的研究进展

肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)是近年来研究发现的肿瘤坏死因子超家族新成员,其广泛存在于人体组织中,参与机体免疫调节、免疫自稳和免疫监视。TRAIL受体表达于多种细胞表面。研究表明,TRAIL能够诱导肿瘤细胞凋亡,对正常细胞无明显不不良反应,TRAIL良好的抗肿瘤活性和安全性得到了广泛的认识。前列腺癌的发生发展受细胞凋亡机制调控,TRAIL能诱导前列腺癌细胞凋亡,在前列腺癌的治疗中具有广阔前景。     

肿瘤坏死因子凋亡诱导配体诱导膀胱癌EJ细胞凋亡的研究

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)是能够较特异性诱导肿瘤细胞凋亡的肿瘤坏死因子超家族成员 ,由于对正常组织不表现毒性[1] ,在肿瘤治疗方面得到广泛研究。我们对TRAIL诱导膀胱癌细胞EJ凋亡的作用进行了研究 ,现报告如下。材料与方法　重组人TRAIL(rhTRAIL)由KamiyaBiomedical公司制备和纯化 ,浓度设置为 10 0、5 0、2 0和 10ng/ml。Annexin V FluosStainingKit试剂盒购自罗氏公司。人膀胱癌EJ细胞用含 10 %小牛血清 ,10 0U/ml青霉素和10 0 μg/ml链霉素的RPMI 16 4 0 37℃、5 0ml/LCO2 、饱和湿度下培养。细胞按 5× …     

肿瘤坏死因子凋亡诱导配体诱导膀胱癌EJ细胞凋亡的研究

目的 探讨肿瘤坏死因子凋亡诱导配体(TRAIL)诱导膀胱癌细胞凋亡的效应。方法 10～100μg／L梯度浓度的TRAIL与培养的EJ细胞共孵育4～24h。采用Annexin V染色，DNA云梯实验和流式细胞技术检测诱导后EJ细胞凋亡发生的时期和程度。结果 TRAIL诱导4h即后可观察到早期细胞凋亡发生，8h后即可检测DNA片段化，24h后凋亡细胞最多达到66．29％。结论 TRAIL能够迅速诱导EJ细胞凋亡，可能成为膀胱癌治疗的新方法。     

TRAIL及其受体在肝癌耐药株治疗中的作用

目的比较肝癌耐药株HepG2/ADM与其亲代HepG2的TRAIL受体的表达。及TRAIL对肝癌耐药株HepG2/ADM的治疗作用。方法通过浓度递增法用阿霉素处理人肝癌细胞株HepG2获得肝癌耐药株HepG2/ADM。RT-PCR、Western Blot和免疫组化比较肝癌耐药株HepG2/ADM与其亲代HepG2的TRAIL受体及bcl-2、MDR的mRNA和蛋白表达。采用AnnexinV-FITC-PI双染色流式细胞仪测TRAIL对肝癌耐药株HepG2/ADM的调亡诱导作用。结果肝癌耐药株HepG2/ADM与其亲代HepG2比较都存在DR4、DR5受体且mRNA和蛋白表达上无差异。DcR1、DcR2在蛋白表达上无差异,但mRNA水平有轻度变化,未达到统计显著性。免疫组化示肝癌耐药株HepG2/ADM与其亲代HepG2都存在DR4、DR5受体和DcR1、DcR2受体,分析未见差异。TRAIL对HepG2/ADM及其亲代均有诱导调亡的作用,同样存在一定的耐受现象。但调亡作用两者无显著性差异。结论肝癌耐药株HepG2/ADM与其亲代HepG2都存在DR4、DR5受体和DcR1、DcR2受体。表达无显著性差异。单纯TRAIL治疗对耐药株作用与亲代细胞作用相仿,虽同样存在一定的耐受现象,但受HepG2/ADM耐药性的影响小。TRAIL治疗肝癌耐药株有优势。     

非增殖型和靶向增殖型腺病毒携带TRAIL基因治疗肝癌的实验研究

目的比较携带人TRAIL基因的增殖型腺病毒（CNHK500-hTRAIL）和非增殖型腺病毒（Ad-hTRAIL）对TRAIL基因的表达以及对SMMC-7721肝癌细胞的杀伤能力。方法通过病毒增殖实验评估增殖型腺病毒CNHK500-hTRAIL的选择性增殖能力。通过MTT实验,评估增殖型腺病毒CNHK500-hTRAIL以及非增殖型腺病毒Ad-hTRAIL对人正常肝细胞株L02、人肝癌细胞株SMMC-7721的杀伤能力。采用ELISA法检测CNHK500-hTRAIL和Ad-hTRAIL感染SMMC-7721肝癌细胞后TRAIL基因的表达情况。以及通过流式细胞术（FCM）检测其对细胞早期凋亡的影响。结果CNHK500-hTRAIL能选择性地在SMMC-7721细胞内大量增殖,感染96 h后增殖达225137倍,在极低的MOI值（MOI=0.1）即可大量杀伤SMMC-7721细胞,明显强于Ad-hTRAIL,而对L02细胞无明显杀伤。CNHK500-hTRAIL和Ad-hTRAIL感染SMMC-7721细胞后,其TRAIL基因表达量,前者是后者的近10倍;CNHK500-hTRAIL可选择性地诱导SMMC-7721细胞早期凋亡,其能力显著高于Ad-hTRAIL。结论靶向增殖型腺病毒载体携带TRAIL基因对肿瘤细胞的杀伤能力和目的基因的表达,明显优于传统的非增殖型腺病毒载体,应用前景广阔。     

原发性肝细胞癌组织中CD40分子表达的研究

目的探讨原发性肝细胞癌组织中CD 40分子的表达情况。方法用SABC免疫组化法对60例原发性肝细胞癌组织中CD 40分子的表达情况进行回顾性研究,并用25例非肝癌组织作为对照。结果51.4%的原发性肝细胞癌组织检测到CD 40抗原;与非肝癌组织相比,具有显著性差异(P<0.05)。结论原发性肝细胞癌组织中有CD 40分子的表达,为进一步研究肝癌的肿瘤生物学及基因治疗打下基础。     

人肝细胞性肝癌性激素受体的表达

目的：研究人肝细胞性肝癌组织、癌旁组织和正常肝组织中雄激素受体（AR）和雌激素受体（ER）的表达水平及分布规律。方法：应用单克隆抗体免疫组化法检测50例肝细胞性肝癌标本的肿瘤组织、癌旁组织和10例肝内胆管结石的肝组织中AR和ER的表达情况。结果：在肝癌组织、癌旁组织和肝内胆管结石的肝组织中，AR的阳性表达率分别为30％、8％和0％，除癌组织显著高于癌旁组织外（P＜0．01），其它各组无显著性差异（P＞0．05）；ER的阳性表达率分别为12％、10％和20％，在三组中均无显著性差异（P＞0．05），在所有阳性片中，AR和ER的标记指数（LI）均＜25。结论：AR和ER在肝细胞性肝癌组织中的表达率很低。     

表阿霉素诱导肝癌细胞凋亡的研究

目的 研究表阿霉素对肝癌细胞凋亡的影响.方法 在体外培养的肝癌细胞中加入不同浓度的表阿霉素,应用光镜、电镜、DNA凝胶电泳及流式细胞术检测肝癌细胞凋亡的形态学特征、生化学特征.细胞凋亡百分率及细胞周期的变化.结果 在表阿霉素作用下,凋亡的肝癌细胞出现膜小泡、凋亡小体等特征性改变;DNA电泳呈现典型的“梯状”条带;流式细胞术测定,出现典型的凋亡峰,其凋亡百分率随着药物浓度的提高和作用时间的延长而明显升高;同时,G_(1/0)期和S期细胞含量下降,而G_2/M期细胞含量上升.非凋亡细胞则无此表现.结论 表阿霉素可诱导肝癌细胞发生凋亡,并可使肝癌细胞生长受阻于G_2/M期,这可能是其杀伤肿瘤的一种重要机制.     

生长抑素对肝癌细胞血管内皮生长因子表达的影响

目的　探讨生长抑素对肝癌细胞血管内皮生长因子 (VEGF)表达的影响。方法　将 2 0只小鼠随机分为 2组 ,每组各10只。每只小鼠于左腋窝皮下注射小鼠肝癌细胞株细胞。A组为实验组 ,皮下接种肿瘤 2 4h后予奥曲肽 (10 0 ug·kg- 1·d- 1 )腹腔注射 ,连用 14d;B组为对照组 ,予以相同容积的无菌生理盐水腹腔注射 ,连用 14d。 14d后处死小白鼠 ,检测肿瘤大小、血管内皮生长因子 (VEGF)。结果　皮下接种 7d天及 14d天后 A组皮下肿瘤的体积均明显小于 B组 (P<0 .0 5 ,P<0 .0 1) .A组 VEGF表达明显低于 B组 ,并统计学差异有显著性 (Ridit检验 ,P<0 .0 5 ) ;A组 MVD亦较 B组为低 ,但统计学差异无显著性 (P=0 .0 75 )。结论　生长抑素对小白鼠肝癌移植瘤具有抑制作用 ,对肿瘤 VEGF的抑制作可能为其机理之一 ,对肿瘤组织血管形成的抑制作用亦可能为其原因。     

TNP-470对MHCC97-H体外血管生成拟态的抑制作用

目的研究血管生成抑制剂TNP-470对人肝癌高转移细胞株MHCC97-H体外形成血管生成拟态的影响。方法TNP-470作用于MHCC97-H细胞,应用MTT试验、体外侵袭实验,检测MHCC97-H细胞增殖活性和侵袭力的变化。建立MHCC97-H细胞人工基底膜基质凝胶体外三维细胞培养模型,观察MHCC97-H细胞能否形成血管生成拟态以及TNP-470对其影响,应用扫描电镜、透射电镜观察细胞结构改变。结果TNP-470对MHCC97-H细胞增殖无显著抑制作用,可抑制其体外侵袭能力,明显抑制MHCC97-H细胞形成血管生成拟态,减少细胞表面的微绒毛和细胞间连接。结论人肝癌高转移细胞株MHCC97-H可形成血管生成拟态,TNP-470能抑制人肝癌细胞株MHCC97-H体外血管生成拟态形成。     

原发性肝癌中Clusterin异常表达与多药耐药关系的研究

目的 探讨聚集素(Clusterin)蛋白在原发性肝细胞癌(human hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达及与多药耐药的关系.方法 采用免疫组化S-P法检测41例原发性肝癌标本及10例正常肝组织、10例肝硬化组织中凋亡抑制基因Clusterin及Caspase-3、P-gp的表达.结果 Clusterin在HCC中的阳性表达率为82.93%,在肝硬化和正常肝组织中表达阴性或弱阳性(82.93% vs 10.00% χ2=28.89,P=0.00);Clusterin阳性表达与患者的年龄、性别、AFP值、HBsAg及肝硬化等无关,与Edmondson组织学分级有相关性.Caspase-3与P-gp在肝癌组织中的阳性表达率分别为34.15%和70.73%.肝癌组织中,Clusterin与Caspase-3表达呈负相关(r=-0.36,P=0.02),Clusterin与P-gp表达呈正相关(r=0.42,P=0.006).结论 Clusterin在HCC中呈过表达,与临床耐药密切相关,有望成为肝癌靶向治疗的一个新靶点;Clusterin通过直接或间接调控Caspase-3的活性从而抑制肝癌细胞凋亡,促进HCC的发生、发展及恶性增殖.     

TRAIL和TRAILR在肝癌中表达及对肝癌的治疗作用

目的探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumornecrosisfactorrelatedapoptosis-inducingligand,TRAIL)与其受体(TRAILR)在肝细胞肝癌中的表达及TRAIL联合应用化疗药对肝癌细胞的杀伤作用。方法采用免疫组化和原位杂交检测100例肝癌及癌旁组织中TRAIL及TRAILR的表达。用MTT法检测TRAIL与化疗药联合应用对肝癌细胞的杀伤作用。结果TRAIL在正常肝组织中无表达,在癌旁组织中的表达明显高于癌组织;肝癌组织中死亡受体(DR5、DR4)的表达量显著强于正常肝组织,诱捕受体为低表达,与正常肝组织相比,两者差异显著(χ2=4·68,P<0·05)。Ⅲ/Ⅳ期肿瘤死亡受体的表达显著低于Ⅰ/Ⅱ期(χ2=6·17,P<0·05)。联合使用亚细胞毒性剂量的化疗药大幅度提高了TRAIL的细胞毒活性。结论TRAIL与化疗药物联合运用具有协同杀伤肝癌细胞的作用。     

肝细胞癌人白细胞ABC和DR抗原的表达及意义

目的探讨人白细胞抗原(HLA)Ⅰ类和Ⅱ类分子在肝细胞癌(简称肝癌)的表达情况及其意义.方法采用免疫组化法分别检测HLA-ABC和HLA-DR抗原在46例人肝癌组织、10例人正常肝组织以及SMMC-7721、HHCC、HCC-9204和BEL-7402等4种人肝癌细胞系和人正常肝细胞系QZG的表达情况,并以图像分析仪进行定量分析.结果肝癌和正常肝组织及其相应细胞系的HLA-ABC和HLA-DR抗原阳性信号均主要定位于细胞浆.肝癌组织表达HLA-ABC的强度明显弱于正常肝组织(P<O.05),而对HLA-DR的表达明显强于正常肝组织(P<0.05).4种肝癌细胞系的HLA-ABC表达强度均明显低于QZG细胞(P<0.05),但对HLA-DR的表达与QZG细胞未见明显差异(P>0.05).结论肝癌组织和肝癌细胞系中HLA-ABC抗原表达有所下降.肝癌组织有HLA-DR抗原表达增强,而肝癌细胞系基本上不表达HA-DR.