新生鼠窒息后肾组织中钙离子的变化及意义

目的：探讨新生鼠窒息后肾组织中钙离子的变化及意义。方法：将45只7～10日龄Wistar大白鼠随机分为4组：对照组(13只)，窒息后复氧2 h组(10只)，窒息后复氧24 h组(11只)，窒息后复氧48 h组(11只)。制成常压窒息模型。在上述各时间点取左肾称重求出左肾系数(LRC)，并测定出肾组织中Ca2+含量，同时在光镜下对肾小管损伤程度进行评分。结果：窒息后复氧2 h开始肾组织中Ca2+含量［(1.75±0.39) mmol/g］及左肾系数［(7.64±0.33) g/kg］、肾小管损伤评分(28.80±7.16)均较对照组［(1.44±0.46) mmol/g、(4.88±0.90) g/kg、5.46±1.76］显著升高，P<0.05。且肾损伤指标在24 h达到高峰。同时，肾组织中Ca2+含量与左肾系数在窒息后复氧2 h，24 h和48 h均呈显著正相关关系(r分别为 0.61，0.69 和 0.63，均P<0.05)；肾组织中Ca2+含量与肾小管评分在窒息后复氧2 h，24 h和48 h也呈显著正相关关系(r分别为 0.57，0.58 和 0.75，均P<0.05)。结论：钙离子参与了窒息后肾损伤的发生。     

新生鼠坏死性小肠结肠炎肠组织一氧化氮和一氧化氮合酶变化

目的动态观察新生大鼠坏死性小肠结肠炎(NEC)发病过程中肠组织一氧化氮(NO)含量、一氧化氮合酶(NOS)活性变化及其与肠损伤关系,为进一步阐明NEC发病机制、寻找新的治疗方法提供实验依据。方法40只新生SD大鼠按简单随机法分成模型组(M)32只,对照组(C)8只。模型组大鼠出生48h开始鼠配方奶人工喂养,并予以3次缺氧和冷刺激建立NEC模型,缺氧冷刺激开始后24h(M24)、48h(M48)、72h(造模结束,M72)及最后一次缺氧和冷刺激后24h(M96)分别空腹断头处死8只;实验结束时处死对照组大鼠,分别留取肠管进行肠组织损伤评分、肠组织中NO含量和NOS活性检测。结果建模后,模型组出现腹泻、腹胀、萎靡、活动减少。M24、M48、M72、M96及对照组肠组织损伤评分分别为(1.25±0.56)、(1.46±0.31)、(2.79±0.40)、(3.33±0.59)和(0.08±0.15)分,肠组织NO含量分别为(2.07±0.38)、(2.88±0.32)、(3.09±0.40)、(3.98±1.15)和(0.94±0.44)μmol/gprot,总NOS活性分别为(2.21±0.42)、(2.77±0...     

新生鼠坏死性小肠结肠炎肠组织一氧化氮和一氧化氮合酶变化

目的 动态观察新生大鼠坏死性小肠结肠炎(NEC)发病过程中肠组织一氧化氮(NO)含量、一氧化氮合酶(NOS)活性变化及其与肠损伤关系,为进一步阐明NEC发病机制、寻找新的治疗方法提供实验依据.方法 40只新生SD大鼠按简单随机法分成模型组(M)32只,对照组(C)8只.模型组大鼠出生48 h开始鼠配方奶人工喂养,并予以3次缺氧和冷刺激建立NEC模型,缺氧冷刺激开始后24 h(M24)、48 h(M48)、72 h(造模结束,M72)及最后一次缺氧和冷刺激后24h(M96)分别空腹断头处死8只;实验结束时处死对照组大鼠,分别留取肠管进行肠组织损伤评分、肠组织中NO含量和NOS活性检测.结果 建模后,模型组出现腹泻、腹胀、萎靡、活动减少.M24、M48、M72、M96及对照组肠组织损伤评分分别为(1.25±0.56)、(1.46±0.31)、(2.79±0.40)、(3.33±0.59)和(0.08±0.15)分,肠组织NO含量分别为(2.07±0.38)、(2.88±0.32)、(3.09±0.40)、(3.98±1.15)和(0.94±0.44) μmol/gprot,总NOS活性分别为(2.21±0.42)、(2.77±0.58)、(2.95±0.32)、(3.80±1.08)和(1.49±0.25)U/mgprot,诱导型NOS活性为(1.25±0.27)、(1.94±0.46)、(2.06±0.18)、(2.86±1.07)和(0.55±0.23)U/mgprot.随缺氧和冷刺激时间延长,模型组肠组织损伤评分、肠组织中NO、总NOS、诱导型NOS的含量逐渐增加,均高于对照组(P均<0.05),肠组织NO、总NOS、诱导型NOS含量与肠组织损伤程度均呈正相关(r分别为0.865、0.743、0.807,P均<0.05).结论 NO可能是参与肠道屏障损伤过程的重要介质,在NEC肠道屏障损伤发病机制中起重要作用.     

内毒素诱导新生大鼠肾脏损害及地塞米松的干预作用

目的：探讨新生大鼠内毒素血症时肾脏损害的部分机制及地塞米松(Dex)的干预作用。方法：取7日 Wistar大鼠150只,随机分为A组(对照组)：等体积生理盐水腹腔注射;B组(LPS组)：内毒素(LPS)5 mg/kg腹腔注射制成内毒素血症模型;C组(治疗组)：LPS 5 mg/kg+Dex 5 mg/kg共同腹腔注射。各组于注射前(0 h)及注射后2,4,6,24 h分别断头处死留取肾脏。肾组织一氧化氮(NO)采用硝酸还原酶法测定,肾组织一氧化氮合酶(NOS)采用底物催化法测定,通过电镜观察肾脏超微结构变化。结果：①B组NO于2 h高于A组同时间点NO浓度(1.69±0.44 nmol/mg vs 1.20±0.36 nmol/mg),差异有显著性(P<0.05)。于24 h为同时间点A组的 2.3倍(3.12±0.41 nmol/mg vs 1.35±0.38 nmol/mg),差异有显著性(P<0.01);C组NO也于2 h明显高于A组同时间点NO浓度(1.63±0.27 nmol/mg vs 1.20±0.36 nmol/mg),(P<0.05),但于24 h升高程度低于B组(2.10±0.27 nmol/mg vs 3.12±0.41 nmol/mg) (P<0.05);②B组肾NOS于2 h明显高于A组同时间点NOS浓度(0.47±0.15 U/ml vs 0.38±0.12 U/ml) (P<0.05),于4 h短暂下降后于24 h明显高于同时间点A组NOS浓度(0.65±0.27 U/ml vs 0.38±0.15 U/ml) (P<0.05);C组NOS浓度自6 h逐渐升高,至24 h均明显低于B组 0.51±0.07 U/ml vs 0.65±0.27 U/ml) (P<0.05);③电镜下A组肾小球基底膜(GBM)完整,上皮细胞足突清晰,肾小管上皮细胞完整,可见刷状缘。B组6 h肾小球GBM完整,部分上皮细胞足突融合,肾小管上皮细胞线粒体空泡变性;24 h肾小球GBM断裂,上皮细胞足突明显融合,系膜细胞线粒体嵴断裂,空泡变性。肾小管上皮细胞线粒体扩张成大泡。C组24 h肾小球GBM基本正常,上皮细胞足突部分轻度融合,系膜细胞内少数线粒体空泡变性,肾小管可见刷状缘。 结论：新生鼠内毒素血症时肾脏NOS产生增加,诱导合成过量的NO参与肾损伤。Dex通过调节肾脏NOS而抑制NO的大量合成,具有肾脏保护作用。     

新生大鼠窒息后肾组织Omi／HtrA2表达及Ucf-101干预效果

目的：探讨Omi／HtrA2在新生鼠窒息后肾组织的变化及Ucf-101的干预作用。方法：将72只7~10 d Wistar大鼠随机分为对照组、窒息组和Ucf-101组。窒息组和Ucf-101组大鼠制成常压窒息模型。在窒息30 min后复氧2、24、48 h时采用免疫组化法检测各组肾组织中Omi／HtrA2的表达。采用TUNEL法检测肾凋亡细胞的形态及数量变化。结果：窒息复氧后2 h Omi／HtrA2表达开始增强,于24 h达最高峰,随后有所下降。与窒息组相比,Ucf-101组各个时相点Omi／HtrA2的表达阳性率明显降低(P<0.01)。窒息复氧后2 h,肾组织开始出现肾小管上皮细胞凋亡,24 h凋亡细胞数达到高峰,而Ucf-101组各个时相点凋亡指数较窒息组均有明显减少。结论：新生大鼠窒息后肾组织Omi/HtrA2表达增强,参与肾损伤;Ucf-101可使Omi／HtrA2的表达下降,从而抑制肾小管上皮细胞凋亡。［中国当代儿科杂志,2010,12（8）：658-661］     

Ucf-101对窒息新生大鼠肾小管上皮细胞凋亡的影响

目的研究Omi/HtrA2丝氨酸蛋白酶特异性抑制剂Ucf-101对窒息新生大鼠肾小管上皮细胞凋亡的影响。方法选择7～10日龄Wistar大鼠45只,其中30只置于容积为55mL缺氧瓶中(内装0.005kg钠石灰),待动物安静后,塞紧瓶塞,制作新生大鼠常压窒息模型。对照组模拟该过程,不塞瓶塞。造模后的大鼠随机分为窒息组(15只)、Ucf-101组(15只)、对照组(15只)。Ucf-101用量为1.5μmol.kg-1,在窒息前10min腹腔注射。窒息组及对照组在相同时间点注射等量9g.L-1盐水。窒息组及Ucf-101组密闭30min后复氧,在复氧2h、24h、48h时断颈处死后取左肾,制作石蜡切片,采用原位细胞凋亡TUNEL法检测窒息后2h、24h、48h新生大鼠左肾凋亡细胞的形态及数量变化。结果新生大鼠窒息后不同时间点肾脏皮质、髓质均有凋亡细胞分布,多数为肾小管上皮细胞,细胞核呈棕褐色,形态不一;窒息组复氧后2h,肾皮质开始出现大量的TUNEL染色阳性细胞,24h凋亡细胞数达高峰,48h凋亡细胞数有所下降;窒息组各时间点凋亡细胞数与对照组比较均显著增加(Pa<0.05)。对照组凋亡细胞数未见明显增加,各时...     

促红细胞生成素对缺氧缺血新生鼠脑匀浆一氧化氮及血浆内皮素的影响

目的探讨体外注射重组人促红细胞生成素(rhEPO)对新生鼠缺氧缺血后脑组织一氧化氮(NO)和NO合成酶(NOS)及血浆内皮素(ET)水平的影响,阐明其对缺氧缺血(HI)新生动物神经保护作用的机制。方法将7日龄SD大鼠制备缺氧缺血脑损伤(HIBD)模型及rhEPO治疗模型,将假手术组作对照。测定各组新生鼠HI后6 h脑组织匀浆NO和NOS含量以及血浆ET水平。结果HIBD组在HI后6 h脑组织NO、NOS及血浆ET均升高(P<0.05),rhEPO组脑组织NO、NOS显著降低水平(P<0.05),而血浆ET含量无明显改变。结论外源性rhEPO可通过减少NO的过量生成而对HIBD后的脑组织起到保护作用。     

持续高氧对新生鼠肺组织一氧化氮、一氧化氮合酶及病理学的动态影响

目的探讨持续吸入高氧后新生大鼠肺组织一氧化氮(NO)含量、一氧化氮合酶(NOS)活力的动态变化及病理学改变。方法足月新生鼠生后12h内分别持续吸入90%±5%的高氧和空气,于1、3、7、14、21d,分别检测肺组织NO含量、NOS活性以及动态观察病理改变。结果(1)NO含量:在7、14和21d,高氧组水平高于空气组,数值分别为(99.38±7.80)vs(88.78±8.00),P<0.05;(128.18±33.78)vs(93.30±16.73),P<0.05;(170.66±34.00)vs(106.37±25.11),P<0.01。(2)NOS活力:在高氧暴露3d时高于空气组,(20.56±2.56)vs(18.25±0.71),P<0.05;并持续至21d,数值分别为(24.09±2.48)vs(21.10±2.38),P<0.05;(25.07±2.06)vs(20.27±4.15),P<0.05;(27.06±4.79)vs(20.45±2.53),P<0.01。(3)病理学:吸高氧3d时炎症反应为主,7d时炎症反应更明显,开始出现肺间隔增宽,肺泡发育受阻,14d和21d间质增生、肺泡化降低越来越明显。结论持续吸入高氧可致新生鼠发生与人类BPD有类似的病理改变;肺组织病理损伤逐渐加重时,肺组织NO含量和NOS活性增加,提示NO可能在BPD中有重要作用。     

癫痫和热性惊厥病儿一氧化氮一氧化氮合酶的研究

目的　探讨癫痫 (EP)和热性惊厥 (FC)病儿血清和脑脊液 (CSF)一氧化氮 (NO)和一氧化氮合酶(NOS)的含量及其与EP和FC的发病机制的关系。方法　分别采用硝酸还原酶法、酶测定法测定EP和FC病儿惊厥发作后 2 4h内血清和CSFNO和NOS的含量。结果　EP组和FC组CSFNO水平均明显低于对照组 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;而EP组和FC组血清NO水平均明显高于对照组 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。FC组CSFNOS活性也明显低于对照组 (P <0 .0 5 )。结论　EP和FC病儿CSFNO水平明显低于对照组 ,提示NO可能与阻止惊厥发作有关 ,并可能有抗惊厥作用。FC病儿CSFNOS活性明显低于对照组 ,与FC病儿CSFNO水平下降一致 ,进一步支持NO在FC中可能有抗惊厥作用 ,这一结果可为EP的临床药物治疗和研制开发提供新的思路。     

机械通气并吸入高浓度氧新生儿支气管肺泡灌洗液中一氧化氮的表达及临床意义

目的　探讨机械通气并吸入高浓度氧对新生儿肺一氧化氮 (NO)合成的影响。方法　对机械通气并吸入≥ 4 0 %氧气 37例新生儿行支气管肺泡灌洗 ,吸氧时间≤ 72h为A组 ,≥ 72h为B组 ,并设对照为 10名非肺部疾病接受空气和机械通气的患儿 (空气组 )。用免疫组化法检测灌洗液 (BALF)细胞一氧化氮合酶 (NOS)表达 ,并测定BALF中NO、总蛋白、丙二醛 (MDA)含量。结果　A、B组BALF细胞 ;NOS均高于空气组 ,P分别<0 .0 1,0 .0 0 1;B组BALF细胞 ;NOS高于A组 ,P <0 .0 5 ;A组BALF中NO、MDA、总蛋白浓度均高于空气组 ,P分别 <0 .0 1,0 .0 0 1,0 .0 5 ;B组BALF中NO、MDA、总蛋白浓度均显著高于A组 ,P分别 <0 .0 0 1,0 .0 1,0 .0 5。结论　肺部炎症细胞中诱导型NOS大量表达是高氧吸入肺NO的重要来源 ,过量产生NO在新生儿高氧肺损伤中可能发挥重要作用     

实验性糖尿病大鼠肾组织一氧化氮与肾小球高滤过的关系

目的　探讨一氧化氮 (NO)在糖尿病大鼠肾组织中的动态变化及其与肾小球高滤过的关系。方法　用链脲佐菌素(STZ)制造大鼠糖尿病模型 ,在模型成功后 4、8、1 2周分别采用硝酸还原酶间接法和吸光度比较法测定肾组织NO含量、一氧化氮合酶 (NOS)活性。同时取肾组织在光镜下镜检 ,并利用计算机图像分析仪测定肾小球截面积。以内生肌酐清除率 (Ccr) ,代表肾小球滤过率 (GFR)。结果　糖尿病大鼠肾组织NO含量、NOS活性 4周时升高 ,8、1 2周时渐下降 ,与对照组比较有显著差异 (P <0 .0 5)。与同期正常对照组比较 ,糖尿病组肾重 /体质量、2 4h尿蛋白排泄量、GFR和肾小球平均截面积均明显升高 (P<0 .0 5) ,且随病程延长 2 4h尿蛋白排泄量渐升高 ,GFR渐下降 ,但仍高于正常。经相关分析表明 ,肾组织中NO与GFR呈正相关 ,与尿蛋白排泄量呈负相关。结论　糖尿病大鼠存在血管内皮分泌功能紊乱 ,早期内皮舒张因子分泌增多 ,后期减少 ,内皮源性舒张因子NO水平变化与NOS活性变化一致 ,并与糖尿病早期肾小球高滤过相关。     

缺氧缺血性脑病新生鼠胃壁内一氧化氮的改变

目的探讨缺氧缺血性脑病新生鼠胃壁局部一氧化氮（ＮＯ）的改变及窒息对消化系统的影响。方法采用二氢硫辛酰胺脱氢酶ＮＡＤＰＨ组织化学方法，检测２４只正常或缺氧新生鼠胃壁各层一氧化氮合成酶（ＮＯＳ）的分布变化。结果急性缺氧组与正常对照组相比，ＮＯＳ阳性产物无论在分布、染色深浅、纤维密度及ＮＯＳ阳性胞体数目上，差异均无显著意义（Ｐ＞０．０５）。但在缺氧缺血性脑病组，其肌层的ＮＯＳ阳性纤维无论是密度还是染色深浅，均明显强于正常对照组，ＮＯＳ阳性胞体亦明显多于正常对照组，其差异有非常显著意义（Ｐ＜０．０１）；而粘膜和粘膜下层的ＮＯＳ分布与正常对照组相比，差异无显著意义（Ｐ＞０．０５）。结论窒息时胃动力降低及胃粘膜病变与一氧化氮在胃壁内的改变有关     

一氧化氮、一氧化氮合成酶在免疫性血管炎致动脉粥样硬化中的作用

目的探讨一氧化氮(NO)、一氧化氮合成酶(NOS)在免疫性血管炎致动脉粥样硬化(AS)中的作用。方法4周龄雄性大耳兔24只分为3组。A组:基础饲料喂养对照组8只;B组:胆固醇喂饲组8只;C组:10%牛血清清蛋白注射并喂饲胆固醇饲料8只。实验满4周,A、B、C3组分别取心脏做主动脉组织病理学检查,主动脉血管弹力纤维染色及NOS组织化学染色,测血清NO和血浆血管内皮素(ET)含量。结果B组出现轻度AS,内弹力膜不完整;C组出现严重AS,内弹力膜断裂。3组NOS均呈阳性着色反应,C组阳性着色区域较A、B组明显扩大。C组与B组比较,其脂质斑块面积(PA)增大、小动脉粥样硬化发生率(IA)增高、NOS平均光密度(A)增高,血浆ET含量升高,血清NO含量降低,均有显著差异(P<0.01)。结论免疫性血管炎为AS发病的危险因素,NO/ET平衡失调,NOS活性异常可能参与免疫性血管炎致AS形成的病理过程。     

自发性高血压大鼠主动脉中一氧化氮/一氧化氮合酶体系的变化

目的 探讨自发性高血压大鼠主动脉中一氧化氮(NO)/一氧化氮合酶(NOS)体系的变化.方法 随机选取健康雄性4周龄Wistar大鼠7只和4周龄自发性高血压大鼠7只,分别作为正常对照组及高血压组.4周龄及12周龄时检测二组大鼠血压.8周龄时取2组大鼠主动脉组织,采用硝酸还原酶法测定其NO水平,Western blot法检查其内皮型NOS(eNOS)以及诱导型NOS(iNOS)蛋白水平.用SPSS 13.0软件对数据进行统计学分析.结果 12周龄时高血压组大鼠血压明显高于正常对照组[(24.1±0 5) kPa vs (15.9±0.3) kPa](P<0.05).12周龄时高血压组大鼠主动脉组织中NO水平较正常对照组主动脉中NO水平低[(7.2±1 7) μmol·(g prot)-1 vs (17.1±5.3) μmol·(g prot)-1](P<0.05).12周龄时高血压组大鼠主动脉中eNOS蛋白表达量与正常对照组大鼠比较差异无统计学意义[(0.5±0.2) vs (0.5±0.3)](P>0.05);12周龄时高血压组大鼠主动脉中iNOS蛋白表达量显著低于正常对照组大鼠[(0.9±0.3) vs (1.5±0.5)](P<0.05).结论 自发性高血压大鼠主动脉中NO/NOS体系下调参与高血压的形成过程.     

不同孕期大鼠铅暴露胎盘一氧化氮/一氧化氮合酶系统与其超微结构改变的相关性

目的探讨不同孕期大鼠血铅水平与胎盘一氧化氮(NO)及一氧化氮合酶(NOS)与胎盘绒毛超微结构的关系。方法用硝酸还原酶法、NOS测定试剂盒测定46例(分为A、B、C组)不同孕期铅暴露和17例对照组孕鼠胎盘匀浆NO、NOS水平,并对受试胎盘组织切片进行电镜检查。结果A、B组NO及NOS高于正常对照组(P均<0.01);C组NO及NOS与正常对照组比较差异无显著性(P>0.05)。阶段铅暴露组,电镜显示胎盘结构代偿增生或轻度损伤表现。全程铅暴露组血铅水平最高,胎盘结构呈现失代偿改变。结论孕期铅暴露血铅水平、胎盘局部NO/NOS水平变化与胎盘发生病理改变间关系密切,可能在围生期铅毒性发生发展中起重要作用。     

窒息新生儿肾损害及一氧化氮保护作用

为了解机械通气治疗的窒息新生儿肾损害的发生情况，比较不同窒息程度与肾损害的关系。并探讨一氧化氮（NO）吸入治疗对肾脏的影响。对机械通气治疗的41例窒息新生儿（轻度窒息19例，重度窒息22例），进行回顾性分析，其中13例同时予以NO吸入治疗。结果显示：41中17例（占41．5％），有不同程度的肾损害，重度窒息患儿肾损害发生率明显高于轻度窒息患儿（P＝0．014）。予以NO吸入治疗的窒息患儿肾损害的改善较未予以NO吸入治疗者明显，9例未用NO吸入治疗的肾损害患儿在机械通气治疗后2例肾损害好转，5例无好转，另2例未随访，8例用NO吸入治疗的肾损害患儿在NO吸入治疗后肾损害好转6例，另2例未随访，提示窒息新生儿肾损害的发生率相当高，而NO吸入治疗能较明显的改善窒息后的肾损害。     

Nitric oxide production during the early neonatal period in small-for-gestational-age infants

In a study of endogenous nitric oxide production in growth-retarded, very preterm newborns (<32 wk GA), urinary NOx/creatinine ratio and plasma guanosine 3',5'-cyclic monophosphate levels were determined during the early neonatal period. Newborns were divided into three groups: appropriate-for-gestational-age (AGA, n = 19), moderately small-for-gestational-age (SGA, n = 13) and severely SGA (n = 6) infants. Severely SGA infants showed significant higher values of nitric oxide derivatives during the first 24 h of life compared with the other groups. CONCLUSION: An increased NO production is found in SGA infants during the first 24 h after birth. This may reflect an increased intrauterine nitric oxide production in the feto-placental circulation found in cases with intrauterine growth retardation,