第一极体不能精确定位人卵母细胞纺锤体

目的 观测人卵母细胞纺锤体的确切位置，从而指导今后的生殖医学临床工作。方法 应用纺锤体成像系统观测体外成熟及体内成熟组人卵母细胞纺锤体，测量卵子中心、纺锤体与第一极体之间形成的角度。比较两组结果的差异。结果 体外成熟组纺锤体与第一极体形成角度和体内成熟组存在显著差异(P=0．006)。结论 人卵母细胞的位置并不能准确定位卵母细胞纺锤体的位置。体外成熟组纺锤体与第一极体形成的角度要明显小于体内成熟组。应用纺锤体成像系统可以安全、有效地观察人卵母细胞纺锤体。     

第一极体不能精确定位人卵母细胞纺锤体

目的 观测人卵母细胞纺锤体的确切位置,从而指导今后的生殖医学临床工作。方法 应用纺锤体成像系统观测体外成熟及体内成熟组人卵母细胞纺锤体,测量卵子中心、纺锤体与第一极体之间形成的角度。比较两组结果的差异。结果 体外成熟组纺锤体与第一极体形成角度和体内成熟组存在显著差异(P=0.006)。结论 人卵母细胞的位置并不能准确定位卵母细胞纺锤体的位置。体外成熟组纺锤体与第一极体形成的角度要明显小于体内成熟组。应用纺锤体成像系统可以安全、有效地观察人卵母细胞纺锤体。     

Presence of Meiotic Spindles Indicates Early Cleavage of Embryos

Objective To assess whether the detection of the meiotic spindle could anticipate the appear- ance of early cleavage. Methods Oocytes were obtained from stimulated ovaries of consenting patients undergoing oocytes retrieval for ICSI. Spindles were imaged with the Polscope. After ICSI, oocytes with or without spindles were cultured for examination of early cleavage and embryo development. A total of 328 oocytes from 50 cycles were examined with the Polscope and inseminated by ICSI. Results Spindles were imaged in 81.7% of oocytes. After ICSI, more oocytes with spindles (78.4%) fertilized normally than oocytes without spindles (53.3%) (P<0.001). At 25-27 h post ICSI, more fertilized oocytes developed from oocytes with spindles (81.9%) were detected early cleavage than those from oocytes without spindles (28.1%) (P<0.001). Significantly more embryos with early cleavage (82.2%) developed to high quality embryos at d 3 compared with the embryos without early cleavage (48.3%) (P=0.001). The value of rs related to the relation- ship between spindles and early cleavage was 0.420 (P<0.001). Conclusion The existing of the early cleavage may have a predictive value on the opportunity of high quality embryos and the existing of the spindle may have a predictive value in the appearance of early cleavage.     

不同浓度CB对小鼠纺锤体移植后重构卵细胞骨架及囊胚发育影响的研究

目的 探讨不同浓度细胞松弛素B(cytochalasin B,CB)对小鼠纺锤体移植后重构卵细胞骨架及胚胎发育的影响，筛选出更优的CB浓度。方法 8周的C57BL/6雌鼠卵，使用常规剂量、低剂量、中剂量和高剂量的CB做小鼠纺锤体移植，统计小鼠纺锤体移植效率；统计重构小鼠卵体外受精的(in vitro fertilization, IVF)受精率、卵裂率、囊胚率、孵化率；对各组囊胚行免疫荧光染色，荧光显微镜观察计数；重构小鼠卵行免疫荧光染色，共聚焦显微镜观察细胞骨架并分析。结果 (1)低剂量组、中剂量组、高剂量组与常规组相比，小鼠纺锤体移植效率差异无统计学意义(P>0.05)。(2)高剂量组的受精率低于常规组(P<0.05);高剂量组的囊胚率、孵化率低于常规组、中剂量组(P<0.05)。(3)高剂量组的囊胚细胞总数少于常规组(P<0.05),中剂量组的囊胚细胞总数多于常规组(P<0.05)。(4)低剂量组、中剂量组、高剂量组和常规组相比，不同时间重构小鼠卵微丝阳性比率差异无统计学意义(P>0.05);不同时间各组微丝的平均光密度值，组间比较差异有统计学...     

培养环境的温度变化与人MII期卵母细胞纺锤体形态学变化的关系

目的：观察环境温度的改变对MII期人卵纺锤体结构的影响，方法：40例非男性因素的不孕妇女，将常规体外授精后未受精的MII期卵子置于室温（23-250c）直至纺锤体消失，于纺锤体消失后，将卵子分成3个实验组：1组纺锤体消失后立即复温（n=8）；2组纺锤体消失后室温下静置5min再复温（n=6）；3组纺锤体消失后室温下静置10min再复温（n=6），卵子复温后5min，10min，2h分别观察纺锤体的复现情况。结果：20个未受精的MII期卵子置于室温下5min内纺锤体均消失，1组中的8个卵子，2组中的6个卵子复温后再次观测到了MII期纺锤体，3组中的6个卵子只有3个卵子再次出现了MII期纺锤体，对照组的18个卵子放置于37℃恒温板上观察30min，纺锤体均未见消失。结论：MII期卵子纺锤体对环境温度的改变非常敏感．温度降低将导致纺锤体消失，随着时间的延长，纺锤体复现几率明显减少。     

培养环境的温度变化与人MⅡ期卵母细胞纺锤体形态学变化的关系

目的:观察环境温度的改变对MⅡ期人卵纺锤体结构的影响.方法:40例非男性因素的不孕妇女,将常规体外授精后未受精的MⅡ期卵子置于室温(23～25℃)直至纺锤体消失.于纺锤体消失后,将卵子分成3个实验组:1组纺锤体消失后立即复温(n=8);2组纺锤体消失后室温下静置5 min再复温(n=6);3组纺锤体消失后室温下静置10 min再复温(n=6).卵子复温后5 min,10 min,2 h分别观察纺锤体的复现情况.结果:20个未受精的MⅡ期卵子置于室温下5 min内纺锤体均消失.1组中的8个卵子,2组中的6个卵子复温后再次观测到了MⅡ期纺锤体.3组中的6个卵子只有3个卵子再次出现了MⅡ期纺锤体.对照组的18个卵子放置于37℃恒温板上观察30 min,纺锤体均未见消失.结论:MⅡ期卵子纺锤体对环境温度的改变非常敏感.温度降低将导致纺锤体消失,随着时间的延长,纺锤体复现几率明显减少.     

TTK蛋白在卵巢上皮性肿瘤组织中的表达及其意义

[目的]探讨TTK蛋白在卵巢上皮性肿瘤组织中的表达及其意义.[方法]采取免疫组化法检测卵巢癌、卵巢良性肿瘤及正常卵巢组织中的TTK蛋白表达水平,并对结果进行分析.同时在卵巢癌患者中,不同的临床分期和病理分级的检测结果也进行对比.[结果]TTK蛋白在卵巢癌组织中的阳性表达率比卵巢良性肿瘤和正常卵巢组织中明显升高,且卵巢癌...     

Bub1和Mad2蛋白在子宫内膜癌中的表达及意义

目的探讨苯并咪唑出芽抑制解除同源物蛋白-1(Bub1)和有丝分裂阻滞缺陷蛋白-2(Mad2)在人子宫内膜癌中的表达情况。方法采用免疫组织化学SP法分别检测72例子宫内膜癌组织(A组)、40例子宫内膜不典型增生组织(B组)和40例人正常子宫内膜组织(C组)中Bub1和Mad2蛋白的表达情况,并分析其与子宫内膜癌患者的临床分期、病理分级和淋巴结转移的关系。结果 (1)Bub1蛋白在A,B,C组的阳性表达率分别为27.78%,57.50%,85.00%,3组间比较差别有统计学意义(P<0.05);A组中,不同临床分期或病理分级患者的Bub1蛋白阳性表达率差别有统计学意义(P<0.05),有、无淋巴结转移患者的阳性表达率差别无统计学意义(P>0.05)。(2)Mad2蛋白在A,B,C组的阳性表达率分别为86.11%,57.50%,22.50%,3组间比较差别有统计学意义(P<0.05);A组中,不同病理分级患者的Mad2蛋白阳性表达率差别有统计学意义(P<0.05),不同临床分期及有、无淋巴结转移患者的Mad2蛋白阳性表达率差别无统计学意义(P>0.05)。(3)Bub1和Mad2蛋白在子宫内膜癌组织中的表达呈负相关(r=-0.448,P<0.01)。结论 Bub1和Mad2蛋白相互作用,在子宫内膜癌的发生、发展过程中可能起重要作用。     

胃癌中PCMT1表达的预后价值及其对纺锤体组装检查点的调控作用

目的 探讨蛋白质-L-异天冬氨酸（D-天冬氨酸）-甲基转移酶（PCMT1）在胃癌中的表达及对预后的影响,并分析其潜在的作用机制。方法 UALCAN数据库在线分析PCMT1在胃癌组织的表达情况,通过DAVID数据库进行基因本体注释（GO）及京都基因和基因组百科全书（KEGG）信号通路富集分析其可能的功能与信号通路。纳入2014年1月–2017年12月于我院接受胃癌根治术的120例患者,免疫组织化学染色检测PCMT1、Ki67在胃癌组织中的表达;Cox回归、Kaplan-Meier曲线和受试者工作特征（ROC）曲线用于胃癌患者术后5年生存率的预后分析。采用慢病毒构建干扰或过表达PCMT1载体,转染人胃癌细胞系MGC-803与HGC-27细胞,设置干扰空载体（sh-NC）组与干扰PCMT1载体（sh-PCMT1）组,过表达空载体（LV-Vec）组与过表达PCMT1载体（LV-PCMT1）组;Western blot检测各组细胞中PCMT1、CyclinB1、CDC20蛋白表达,CCK-8法检测胃癌细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期。注射4组MGC-803细胞构建裸鼠皮下移植瘤模型,每组3只...     

Synaptotagmin1影响小鼠卵母细胞纺锤体组装和稳定

目的:确定Synaptotagmin1(Syt1)对小鼠卵细胞纺锤体组装和稳定的影响。方法:免疫荧光法检测Syt1在小鼠卵母细胞发育不同时期的亚细胞定位。用紫杉醇处理小鼠MⅠ期卵母细胞,明确Syt1与微管动力的关系。注射Syt1特定的寡聚核苷酸降调卵母细胞中Syt1的表达,免疫荧光法检测Syt1降调后卵母细胞纺锤体的形态变化、染色体异常以及中心体蛋白γ-tubulin定位变化。结果:Syt1在卵母细胞减数分裂成熟的不同发育阶段都有表达,主要集中分布皮质区和MⅠ和MⅡ期纺锤体的两极。Syt1在MⅠ和MⅡ期与中心体相关蛋白γ-tubulin共定位。紫杉醇实验发现Syt1集中定位于星体和高度集中的微管两极。降调Syt1表达后,染色体排列紊乱,纺锤体组装异常比例升高,且大多数为无极、单极或者多级纺锤体,其次有拉长纺锤体和形态各异纺锤体。并影响微管组织中心相关蛋白γ-tubulin的正确定位。结论:Syt1可能作为一种微管组织中心相关蛋白调节纺锤体的组装稳定。     

IVF受精失败卵子纺锤体、染色体的立体结构分析

目的：探索受精失败卵子纺锤体、染色体的立体结构变化及其相关因素。方法：选自本所受精卵子的材料分两组实验组：卵子来源于IVF取卵后24～40h受精失败的MⅡ期卵子。对照组：为未授精卵子。两组卵子通过免疫荧光染片后,用Nikon激光共聚焦显微镜观察染色体、纺锤体的立体结构,根据年龄段、促排卵药的差别进行分组,用t和χ^2检验进行统计学分析。结果：年龄小于30岁组的纺锤体、染色体正常率分别为：13．3％、13．3％,与对照组相比差异均无显著性,（P〉0．05）。30～35岁组的纺锤体、染色体正常率分别为：16％,12％,纺锤体正常率与对照组差异相比,无显著性,（P〉0．05）,染色体正常率与对照组相比,差异有显著性,（P〈0．05）。年龄大于35岁组的纺锤体、染色体正常率分别为：0％、0％,与对照组相比均差异有显著性,（P〈0．05）。合计年龄小于35岁患者受精失败卵子的纺锤体、染色体正常率分别为：15％、12．5％,与对照纽比,无显著性差异。果纳芬组的纺锤体及染色体的正常率均为12．5％,与对照相比,无显著性差异,（P〉0．05）。丽申宝组纺锤体及染色体的正常率分别为11．1％,5．6％,纺锤体正常率与对照组相比,差异无显著性,（P〉0．05）,染色体正常率与对照组相比,差异有显著性,（P〈0．05）。实验组的总的纺锤体和染色体正常率为12％、10％,与对照组相比均差异有显著性,（P〈0．05）。结论：高龄妇女受精失败卵子的纺锤体和染色体的正常率下降;用丽申宝进行超促排卵的受精失败卵子染色体正常率下降;染色体非整体倍增加的一个相关因素,可能对纺锤体正常梭形结构的破坏。     

蔗糖浓度对GV和MⅡ期冻融卵母细胞纺锤体结构的影响

目的 探讨蔗糖浓度对GV期和MⅡ期冻融卵母细胞纺锤体质量的影响.方法 运用纺锤丝观测仪(PolScope)、免疫荧光标记技术和激光共聚焦显微镜.对不同蔗糖浓度(0.1-0.6 mol/L)下GV期和MⅡ期冻融卵母细胞体外成熟后的纺锤体分别进行检测,以未冷冻处理的卵母细胞作为对照组.结果 与对照组比较,冻融组卵母细胞纺锤体的排列明显受到影响.蔗糖浓度为0.3 mol/L时,GV期冻融组卵母细胞纺锤体的正常率最高(P＜0.05);蔗糖浓度为0.5 moL/L时,MⅡ期冻融组卵母细胞纺锤体的正常率最高(P＜0.05);当蔗糖浓度继续升高时,冻融组GV期和MⅡ期卵母细胞纺锤体的正常率则显著下降(P＜0.05).冻融组卵母细胞纺锤体的正常率,MⅡ期显著高于GV期(P＜0.05).结论 一定浓度范围的蔗糖可提高冻融卵母细胞纺锤体正常率;MⅡ期冻融卵母细胞的渗透耐受性及其在渗透耐受范围内的冷冻效率均高于GV期卵母细胞.     

叶酸缺乏对L02细胞增殖、凋亡及纺锤体组装检查点相关蛋白表达的影响

目的:探讨叶酸缺乏对L02细胞增殖、凋亡以及纺锤体组装检查点相关蛋白基因表达的影响及其机制.方法:用不同浓度的叶酸(200 nmol/L、20 nmol/L、0 nmol/L)培养L02细胞2周后,用倒置显微镜观察L02细胞形态;流式细胞术检测细胞周期与凋亡;CCK8测定细胞增殖情况;qRT-PCR检测Mad2、Bub...     

小鼠窦前卵泡培养成熟后卵母细胞纺锤体的变化

目的小鼠窦前卵泡体外培养得到成熟卵母细胞,观察卵母细胞的染色体和纺锤体形态,分析其变化及原因。方法完整小鼠窦前卵泡培养12 d,得到的卵母细胞进行免疫荧光染色,共聚焦显微镜观察纺锤体和染色体的形态和分布。结果经过体外培养,得到GV、M I、MⅡ期卵母细胞分别占总数27.9%、37.2%、34.9%;GV期卵母细胞存在完整的染色质圆环,11.8%的M I期卵母细胞显示正常纺锤体和染色体;38.5%的MⅡ期卵母细胞显示正常的纺锤体和染色体。结论小鼠窦前卵泡经体外培养后能够得到成熟的MⅡ期卵母细胞,但是其效率较低。原因可能是卵母细胞骨架结构的异常使染色体分离障碍,部分卵母细胞停留于M I期;同时成熟卵母细胞的受精率低也与纺锤体异常有关。     

骨肉瘤细胞中KDM5C与有丝分裂期纺锤体组装检查点关系的研究

目的：探讨赖氨酸特异性去甲基化酶5C（lysine-specific demethylase 5C,KDM5C）在骨肉瘤细胞有丝分裂期的变化及其对有丝分裂期纺锤体组装检查点（spindle assembly checkpoint,SAC）的调控。方法：利用细胞周期同步化方法,收集不同骨肉瘤细胞系有丝分裂期各时间节点的细胞样品,利用Western blot检测各时间点KDM5C蛋白质含量的变化及其翻译后修饰与有丝分裂期进程的关系;并用特异性抑制剂CPI-455抑制KDM5C的去甲基化转移酶活性,利用Western blot检测有丝分裂期进程中抑制KDM5C的去甲基化酶活性对SAC相关标志蛋白细胞分裂周期蛋白-27（cell division cycle protein 27,cdc27）、周期蛋白B1（Cyclin B1）的影响。结果：在有丝分裂进程中,与SAC相关的标志蛋白cdc27的磷酸化滞后条带的位移变化和Cyclin B1的蛋白降解均与文献报道相似,但KDM5C蛋白含量无明显变化;KDM5C截短体表达未观察到明显的位移减慢或泛素化降解条带;抑制其去甲基化酶活性后,相较对照组,标志蛋白cdc27的去磷酸化曲线和Cyclin B1降解曲线未见明显变化。结论：在骨肉瘤细胞系有丝分裂期中,KDM5C的蛋白质含量不随有丝分裂期进程而改变,抑制其去甲基化酶活性不影响对SAC的灭活。     

核抑制剂(Roscovitine)对促排周期人未成熟卵母细胞体外成熟安全性的初步研究

目的 观察核抑制剂(Roscovitine)对人未成熟卵母细胞体外成熟(in vitro maturation,IVM)安全性的影响.方法 获取促排周期的GV期未成熟卵随机分为两组,实验组(经二步法):未成熟卵母细胞先用含有200 vmol/LRoseovitine的培养液培养6 h,然后转入IVM成熟培养液培养24～36 h;对照组:直接用IVM成熟培养液培养24~36h.观察两组卵母细胞成熟情况并应用激光扫描共聚焦显微镜观察培养成熟后MⅡ期卵母细胞纺锤体和染色体的形态.结果 实验组共获未成熟卵母细胞61个,经体外成熟培养后50个卵成熟,其中39个卵可观察到纺锤体与染色体,纺锤体的形态异常者为15个,染色体异常者11个;对照组共获未成熟卵母细胞60个,经体外成熟培养后43个卵成熟,其中32个卵可观察到染色体与纺锤体,纺锤体形态异常者14个,染色体异常者11个.结论 Roscovitine能可逆性抑制体外培养的人卵母细胞的核成熟,但未对纺锤体及染色体形态产生不良影响.     

γ-微管环复合体蛋白在纺锤体装配检测点中的作用

细胞分裂时保证同源染色体正确地分配到子细胞是极其关键的。直到现在，人们仍假定细胞同源染色体的平均分配仅仅是由着丝粒检测点激酶所控制。当微管与着丝粒正确连接，这些激酶就通知细胞同源染色体的精确分配可以进行。来自柏林Max Planck分子遗传学研究所的学者对这个控制机制进行了深入研究。     

NUSAP1在食管癌中与肿瘤细胞增殖和免疫细胞浸润相关性——基于数据库的研究

目的：探讨核仁纺锤体相关蛋白1(nucleolar and spindle-associated protein 1,NUSAP1)在食管癌(esophageal carcinoma,ESCA)中的表达情况、临床意义及功能机制,为ESCA的早期诊断和治疗提供新思路。方法：从GEPIA2和TIMER数据库下载ESCA样本与癌旁样本,进行NUSAP1的表达分析,STRING和Cytoscape软件进行NUSAP1相关基因的PPI网络构建,并进行GO、KEGG及GSEA富集分析。TIMER数据库被用来分析NUSAP1与免疫细胞的相关性。最后通过RT-PCR、Western blot和免疫组化验证NUSAP1在ESCA组织和细胞中的表达,使用慢病毒包被的小干扰RNA转染ESCA细胞,进行NUSAP1的表达敲减。通过CKK-8和Ki67免疫荧光评估NUSAP1对ESCA细胞增殖的影响。结果：NUSAP1在ESCA组织和细胞中高表达。NUSAP1的表达与CDK1、B细胞和巨噬细胞浸润正相关,而与CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞、中性粒细胞和树突状细胞浸润负...     

不同浓度Nocodazole对Hela细胞G2/M期同步化的调节作用

目的 观察不同浓度有丝分裂阻滞剂Nocodazole对Hela细胞株G2/M期同步化的调节作用及其对纺锤体结构的影响.方法 分别以3.0、1.0、0.3μmol/L Nocodazole处理Hela细胞(Nocodazole 3.0、1.0、0.3μmol/L处理组)18 h.于Nocodazole撤除后0(处理18 h)、3、6、9 h时间点收集细胞,流式细胞仪检测G2/M期细胞百分比;间接免疫荧光染色激光共聚焦显微镜观察细胞有丝分裂器纺锤体α-微管蛋白(α-tubulin)排列.以不添加Nocodazole处理的Hela细胞作为对照组.结果 Nocodazole处理18 h.Nocodazole 3.0、1.0、0.3μmol/L处理组Hela细胞G2/M期细胞百分比分别为55.95%、51.09%和47.8l%,均显著高于对照组的9.54%(P<0.05).在Nocodazole撤除后3、6、9 h时问点,Nocodazole 3.0μmol/L和1.0μmol/L处理组G2/M期细胞百.分比无明显变化;而Nocodazole 0.3 μmol/L处理组G2/M期细胞百分比下降明显(30.43%、12.91%、10.23%),撤除后6 h时间点的G2/M期细胞百分比与对照组比较差异已无统计学意义(P>0.05).α-tubulin荧光染色激光共聚焦显微镜观察显示,Nocodazole撤除后Nocodazole 0.3μmol/L处理组G2/M期细胞微管迅速再聚合形成两极纺锤体且纺锤丝结构清晰.结论 Nocodazole对Hela细胞G2/M期同步化具有调节作用;药物撤离后,0.3 μmol/L Nocodazole处理组细胞周期恢复迅速且对纺锤体结构影响最小.     

核仁纺锤体相关蛋白1在子宫内膜癌组织中的表达及其临床意义

目的 探讨核仁纺锤体相关蛋白1(NUSAP1)在子宫内膜癌组织中的表达及与临床病理之间的关系.方法 通过TCGA数据库,分析NUSAP1 mRNA在子宫内膜癌组织与正常子宫内膜组织中、配对的癌和癌旁组织中的表达情况;通过GEPIA数据库,进一步分析NUSAP1 mRNA在子宫内膜癌与正常子宫内膜组织中的表达情况;免疫组...