高通量检测技术检测乙型肝炎病毒变异的临床意义

目的探讨基因芯片技术检测乙型肝炎病毒(HBV)6位点变异的临床意义。方法对91例乙型肝炎患者采用基因芯片技术,检测HBV 6位点的自然变异。结果91例乙型肝炎患者HBV变异率98.9%(90/91),其中BCP区1762位点变异率最高(61.5%)。重度肝炎和肝硬化中双位点变异显著高于轻中度肝炎(P<0.01)。29例进行过拉米呋啶抗病毒治疗的病例中P区552位点变异率为96.6%(28/29)。结论基因芯片技术检测HBV变异具有高通量、高灵敏等特点,对观察HBV基因突变有很高的临床应用价值。     

乙型肝炎病毒耐药基因变异位点与基因型及病毒载量的关系

目的：研究81例慢乙型肝炎患者乙型肝炎病毒（HBV）耐药基因位点变异状况及其基因型分布特征,并探讨其与HBV-DNA、乙型肝炎 E 抗原（HBeAg）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）的关系。方法采用荧光定量PCR 和基因芯片反向斑点杂交技术检测81例慢乙型肝炎患者血清 HBV-DNA 载量、基因型和6种常见耐药位点;用电化学发光法检测 HBeAg 的含量,用酶法检测患者血清中 ALT、AST 的浓度。结果81例慢乙型肝炎患者中,HBV 基因型 B 型38例占46．9％;C 型38例占46．9％;B、C 混合型5例占6．2％;未发现其他基因型。检测出的43例耐药基因位点发生变异：B 基因型26例突变率为60．5％,C 基因型17例突变率为39．5％;其中 rt204V 变异率为9．3％;rt204I 变异率为34．9％;rt180M＋rt204I／rt204V 变异率为41．9％;rt181V 变异率为9．3％;rt236T 变异率为4．7％。在43例出现基因位点变异的患者中,发生 rt204I 变异的 B 基因型占60％,HBV-DNA（U／mL）的对数值为5．73±1．77;C 基因型占40％,HBV-DNA（U／mL）的对数值为6．93±2．12;发生 rt204V 变异的 B 基因型占75％,HBV-DNA（U／mL）的对数值为6．85±2．06;C 基因型占25％,HBV-DNA（U／mL）的对数值为4．17±1．15;发生 rt180M＋rt204I／rt204V 变异的 B 基因型占22．2％,HBV-DNA（U／mL）的对数值为5．89±1．95;C 基因型占77．8％,HBV-DNA（U／mL）的对数值为5．58±1．56;发生 rt181V 变异的全部为 C 基因型。结论HBV 发生变异的位点以rt204I 位点变异和 rt180M＋rt204I／rt204V 混合位点变异为主;在 HBV 发生变异的不同位点中 C 基因型更易发生 rt181V 位点和 rt180M＋rt204I／rt204V 混合位点变异,B 基因型可能更易发生 rt204V 位点和 rt204I 位点变异;在发生 rt204V 位点和 rt236T位点的突变中,HBV-DNA 的载量 B 基因型组明显高于 C 基因型组,在发生 rt204I 位点的突变中 HBV-DNA 的载量 C 基因型组则明显高于 B 基因型组,C 基因型较 B 基因型更易发生耐药位点变异。     

乙型肝炎病毒前C区G1896A位点变异检测方法的建立及应用

[目的]建立等位基因特异性PCR（AS-PCR）法检测乙型肝炎病毒（HBV）前C区G1896A位点变异并对部分慢性乙型肝炎标本进行检测。[方法]根据HBV前C区G1896A位点设计只有3＇末端有一个碱基不同的两对等位基因特异性引物，根据PCR结果判断该位点为G或A。[结果]本文测定的两株克隆序列与AS-PCR结果一致；HBeAg阳性慢性乙肝G1896A突变率为50％（15／30），HBeAg阴性组为90％（27／30），两组变异率有显著性差异（X^2=29．382，P=0．000）。[结论]本文建立的方法可用于检测HBV前C区G1896A位点的突变。     

DNA芯片检测肝组织及血清中乙型肝炎病毒DNA的临床研究

目的：研究DNA芯片检测乙型肝炎和肝硬化患者肝组织及血清中乙型肝炎病毒（HBV）DNA的应用价值。方法：用点样仪将聚合酶链反应（PCR）扩增的HBV DNA探针制成基因芯片。对15例慢性乙型肝炎病人的血清和肝活检组织，99例乙型肝炎后肝硬化肝组织，分别用基因芯片、原位分子杂交、免疫组织化学和雅培试剂检测HBV DNA、乙型肝炎核心抗原(HBcAg)、乙型肝炎表面抗原（HBsAg)和乙型肝炎e抗原（HBeAg)。结果：用基因芯片对15份HBsAg,HBeAg阳性的乙型肝炎患者血清进行检测，HBV DNA均阳性，阳性率符合率为100％；15份肝活检组织标本，免疫组化法检测HBcAg阳性15例，原位分子杂交法和基因芯片检测HBV DNA均阳性14例，阳性率93％。99份肝炎后肝硬化患者肝组织标本，HBcAg阳性67份，HBV DNA阳性53份，基因芯片检测HBV DNA阳性46份，阳性率分别为69％、88％。32例HBcAg、HBV DNA阳性的肝组织中，基因芯片检测HBV DNA均为阴性。结论：肝炎基因诊断芯片可检测肝组织及血清中HBV DNA，诊断准确率高，假阳性率低。     

乙型肝炎患者YMDD变异的检测及意义

目的了解拉米夫啶治疗慢性乙型肝炎患者乙型肝炎病毒（HBV）DNA YMDD变异的存在情况及意义。方法采用聚合酶链反应结合Taqman荧光技术检测昆明市第三人民医院201例拉米夫啶治疗慢性乙型肝炎患者HBV DNA YMDD变异，对发生HBV DNA YMDD变异的99例患者的HBV DNA、丙氨酸氨基转移酶（ALT）及HBV DNA YMDD变异情况进行分析。结果201例拉米夫啶治疗慢性乙型肝炎患者中检出HBV DNA YMDD变异共99例（阳性率49．25％），野生株49例，占24．3％（49／201），53例未检出病毒株，占26．3％（53／201），发生YMDD变异株患者有60．3％ALT异常。结论拉米夫啶在HBV YMDD变异中起主导作用，并且该变异的发生率随着拉米夫啶用药时间的延长而增加；HBV YMDD变异的发生同血清HBV DNA水平相关。     

乙型肝炎病毒感染者C基因启动因子变异分析

目的 了解乙型肝炎病毒C基因启动因子(BCP)在不同乙型肝炎患者中的变异情况及其与HBeAg的关系。方法采用芯片微流阵列技术，对100例乙型肝炎病毒感染者BCP区核酸1762碱基A→T进行检测。结果HBeAg阳性的乙型肝炎患者血清中BCP区T1762变异率10．9％(6／55)，HBeAg阴性的乙型肝炎患者血清中BCP区T1762变异率68．9％(31／45)。其中，急性乙型肝炎患者T1762位点均无突变(0／12)，慢性乙型肝炎患者T1762位点突变率34．4％(20／58)，乙肝肝硬化患者T1762位点突变率66．7％(16／24)，乙肝肝癌患者T1762位点突变率100％(6／6)。结论乙型肝炎病毒BCP区T1762变异随乙型肝炎病毒感染者病情加重而升高，且HBeAg阴性感染者高于HBeAg阳性感染者。     

基因芯片在检测慢性乙型肝炎前C区、C启动子区和P区基因变异中的临床应用研究

目的应用基因芯片检测慢性乙肝患者HBV变异类型及其与乙肝标志物和HBVDNA载量的关系，为合理指导临床对慢性乙肝患者进行抗病毒治疗提供科学依据。方法149倒慢性乙肝患者采用酶联免疫法检测乙肝标志物，采用荧光定量PcR法检测RBVDNA载量，采用基因芯片法检测HBV变异。结果在libV感染的不同模式中，HBV—DNA阳性共检出128例。检出阳性率85．90％（128／149），其中大三阳98．82％（84／85）、小三阳75．75％（28／33）、表面抗原与核心抗体阳性51．61％（16／31）。在三组中前c区突变率分别为14．12％、27．27％和33．33％，1组与2、3组比差别有显著性意义（P〈0．01）；BCP区突变率分剐为47．06％、48．48％和58．06％，1组与3组比剐差别有显著性意义（P〈0．05）；P区突变率分别为82．35％、30．30％和51．61％。1组与其他两组比较差别有显著性意义（P〈0．01）；HBVDNA载量≥106组前C区、BCP区和P区突变率分别为48．68％、58．67％和81．33％。与HBV DNA载量104组比，差别均有显著性意义（P〈0．01）。前C区和P区突变率与HBVDNA载量105组比差别有显著性意义（P〈0．05）。结论基因芯片检测HBV基因变异方法简便，特异性高，变异模式判读直观，结果可靠。在治疗前和治疗过程中检测YMDD变异情况。对指导争调整抗病毒治疗的方案有重要的临床应用价值。     

乙肝病毒前C基因区1896位点变异的实验研究

目的探讨慢性乙肝病人血清HBV DNA前c基因区nt1896的变异情况及其与HBV DNA水平及转氨酶（ALT）关系。方法将172例慢性乙肝患者分为两组：大三阳组（106例）和小三组（66例）。检测ALT、HBV DNA及前C区nt1896的变异情况。结果大三阳组与小三阳组HBV DNA阳性率有显著差异（P〈0．05）,nt1896变异率无显著差异（P〉0．05）。小三阳患者中ALT升高组（〉40U／L）HBV DNA（＋）患者nt1896变异率100％,而ALT正常组HBV DNA（＋）患者nt1896变异率30％（3／10）（P〈0．05）。结论大三阳和小三阳慢性乙型肝炎病人都存在较高的前C区nt1896变异率（P〉0．05）。前C区nt1896变异可能是影响HBV DNA复制的一个因素。     

芯片检测HBV DNA聚合酶区基因突变及其临床应用

目的：基因芯片方法检测HBVDNA聚合酶区基因突变，并初步探讨其临床应用价值。方法PCR扩增HBV DNA P区nt455-796片断。与预制的基因芯片杂交，运用激光共聚焦荧光检测系统扫描芯片分析基因突变类型。结果：芯片检测HBV DNA P区变异具有较好的特异性和准确性，初步应用显示：慢性乙肝组aa528／552突变率分别为8．6％和9、6％，而无症状肝炎组和重症肝炎组突变率均为0；拉米夫定治疗组与非拉米夫定治疗组比较，aa528突变率分别为10．5％和8．1％，aa552突变率分别为15．8％和8．1％。结论：研究显示HBV DNA聚合酶区基因多态性分布与病情轻重无关，而与病程慢性迁延有关；拉米夫定在耐药突变中发挥了重要作用；基因芯片检测乙肝患者耐药基因有着十分重要的应用价值。     

芯片显色法检测HBV基因多态性临床应用

目的用芯片显色法检测HBVDNA在前C／C区、BCP区、P区基因突变来探讨拉米夫丁使用与HBV基因多态性关系。方法用含有HBV DNA前C区1896、1814和BCP区1762、1764以及P区552位点突变信息的探针芯片与HBV DNA杂交，采用显色方法判断结果，检测184例乙型肝炎患者HBV基因多态性．并将拉米夫丁治疗组和非拉米夫丁治疗组HBV基因多态性进行比较。结果184例乙肝患者中。前C区1896、1814和BCP区1762、1764以及P区552位点的突变率分别为28．8％、22．2％、25．5％、29．8％和7．0％：拉米夫丁治疗组和非拉米夫丁治疗组P区552位突变率分别为44．4％和8．7％。结论乙肝患者HBV DNA前C区和BCP区的突变与肝炎慢性化、肝硬化以及HBeAg表达有关；拉米夫丁的使用在HBV DNA P区基因突变中起重要作用。