失神经固定制动不同时间大鼠降钙素基因相关肽水平变化对骨密度的影响*

背景：大量研究认为降钙素基因相关肽具有刺激成骨、增加骨量,促进神经再生等诸多功能,然而不同制动后降钙素基因相关肽的变化规律及对骨质疏松形成过程中的作用和机制至今仍不十分清楚。 目的：观察失神经固定后神经肽物质对大鼠骨密度的影响及其可能机制。 设计、时间及地点：随机对照动物实验,于2006-09/11在湘南学院附属医院完成。 材料：10周龄SD雄性大鼠96只,体质量220~250 g,用于制备失神经支配模型。 方法：96只SD大鼠按数字表法随机分为3批,每批4组,每组8只。失神经支配组：大鼠麻醉后,先于俯卧位行两侧后肢股外侧切口,于股骨转子水平切断双侧坐骨神经;再置大鼠于仰卧位,行两侧股正中纵切口,于腹股沟韧带水平切断大鼠两侧股神经,远端游离5 mm,缝合切口。固定组：大鼠固定与失神经支配手术同时进行,麻醉后应用管型石膏分别固定1,10,30,60 d。对照组行假手术,即在造模过程中仅暴露神经,然后缝合伤口。 主要观察指标：实验期间大鼠的一般情况;造模后1,10,30,60 d各组大鼠胫骨骨密度和降钙素基因相关肽的变化及降钙素基因相关肽水平与骨密度水平相关性。 结果：96只SD大鼠均进入结果分析。①大鼠失神经造模后两后肢无主动屈伸功能,前进时以臀部肌群帮助行走,后退时靠腰腹部肌群收缩代偿,活动量显著减少。固定组大鼠精神好,活动时后肢拖地。对照组大鼠无明显异常。②造模后10,30,60 d失神经支配组大鼠胫骨降钙素基因相关肽的表达低于对照组(P < 0.05~0.01);而固定组仅造模后30 d时与对照组之间存在显著性差异(P < 0.05)。造模后10,60 d固定组高于失神经支配组(P < 0.05~0.01)。③与对照组相比,失神经支配组、固定组造模后30,60 d骨密度降低(P < 0.05~0.01);失神经支配组和固定组造模30 d时骨密度开始下降,60 d后下降明显,组内比较差异有显著性意义(P < 0.05~0.01)。④失神经后降钙素基因相关肽与骨密度水平变化高度相关(P < 0.05);而固定后降钙素基因相关肽与骨密度水平变化相关程度不高。 结论：神经的完整性是降钙素基因相关肽水平维持正常的关键,动态观察降钙素基因相关肽水平变化,可在一定程度上预测失神经性骨质疏松形成、发展。     

骨折愈合过程中降钙素基因相关肽表达与脑损伤的影响

背景：临床观察及实验研究发现合并中枢神经损伤的骨折愈合加速,但其具体机制尚未明确。 目的：观察股骨骨折合并脑损伤大鼠骨痂中降钙素基因相关肽及其mRNA的表达变化,探讨脑损伤对骨折愈合的影响及作用机制。 设计、时间及地点：随机对照动物实验,于2007-01/10在华北煤炭医学院骨科实验室完成。 材料：健康12周龄雌性SD大鼠64只,建立大鼠开放骨折模型。 方法：骨折造模后64只SD大鼠随机数字法分为骨折合并脑损伤组和单纯骨折组,每组32只,骨折合并脑损伤组接着制备脑损伤模型。造模后7,14,21,28 d分批麻醉并处死动物,苏木精-伊红染色观察骨折愈合情况,免疫组织化学染色及原位杂交检测降钙素基因相关肽及其mRNA的表达变化。 主要观察指标：①造模后28 d大鼠右侧股骨X射线平片表现。②造模后不同时间点两组大鼠骨痂苏木精-伊红染色、免疫组织化学染色及原位杂交结果。 结果：64只SD大鼠均进入结果分析。①X射线平片显示与单纯骨折组相比,骨折合并脑损伤组骨折端骨痂形成早,骨痂量多。②苏木精-伊红染色示单纯骨折组呈典型骨折愈合过程,而骨折合并脑损伤组骨痂形成及改造提前,骨折愈合加速。免疫组织化学染色显示骨折愈合过程中内皮细胞、骨祖细胞、软骨细胞及成骨细胞表达降钙素基因相关肽。骨折合并脑损伤组造模后各时间点阳性细胞数均高于单纯骨折组,差异有显著性意义(P < 0.05)。原位杂交检测示骨折合并脑损伤组造模后7,14,21 d表达降钙素基因相关肽mRNA的成骨细胞数均高于单纯骨折组,差异有显著性意义(P < 0.05)。 结论：脑损伤对骨折愈合有促进作用,可能与合并脑损伤后降钙素基因相关肽及其mRNA表达水平升高有关。     

降钙素基因相关肽与骨修复及骨重建

骨折的愈合过程是通过一系列复杂的因子来调节完成的，其中，降钙素基因相关肽已经被证实在骨代谢中发挥合成作用。有人发现在骨折局部含降钙素基因相关肽的神经纤维明显增加。降钙素基因相关肽是表达于骨组织的一种重要的感觉神经肽，虽然最初发现其主要作用是扩张血管，增加血流量，但是大量的动物实验结果表明，成骨细胞定向表达降钙素基因相关肽可以增加骨密度，刺激松质骨形成。尤其是降钙素基因相关肽受体在大鼠成骨细胞上的发现，为降钙素基因相关肽具有直接调节骨生长的作用提供了更有力的证据。降钙素基因相关肽也被证明是一种与炎症反应相关的神经肽，有文献报道，骨折时它可以诱发损伤局部炎症细胞浸润。虽然已经认识到降钙素基因相关肽在骨修复及骨重建中的重要作用，但其具体作用机制仍不明了。     

仙灵骨葆治疗骨质疏松大鼠：血清学及骨组织形态计量学评价

背景：目前对于骨质疏松的治疗多为抑制骨吸收,有研究报道仙灵骨葆可促进骨形成,但具体机制不清。 目的：通过干预去卵巢大鼠骨质疏松动物模型,探讨仙灵骨葆对骨质疏松大鼠骨量、生物力学性能及骨代谢的影响。 方法：将24只大鼠随机分为正常对照组、模型组和仙灵骨葆组。除正常对照组外,其他2组行卵巢切除。6周后仙灵骨葆组给予仙灵骨葆干预,模型组给予等量双蒸水。4周后各组留取尿液、血清检测血Ⅰ型原胶原氨基端延长肽、尿脱氧吡啶诺啉排泄率和Ⅰ型胶原氨基末端肽排泄率。取各组左侧股骨行骨密度测定,取左侧胫骨制备硬组织不脱钙切片,行骨组织形态计量学检测。 结果与结论：与模型组比较,仙灵骨葆组血Ⅰ型原胶原氨基端延长肽、尿脱氧吡啶诺啉排泄率、尿Ⅰ型胶原氨基末端肽排泄率,破骨细胞数、骨吸收周长百分数显著降低(P < 0.05),而远端骨密度和骨小梁体积均显著增高(P < 0.05),结果证实,仙灵骨葆可抑制骨吸收,促进骨形成,降低去卵巢大鼠骨转换水平,进而部分阻止其骨量丢失。     

脊髓完全横断损伤大鼠的骨转换：超早期高压氧干预之效应

背景：有文献表明高压氧治疗对不完全脊髓损伤功能恢复有促进作用，且越早效果越好。 目的：进一步探讨超早期高压氧治疗对脊髓完全横断损伤大鼠骨转换的影响。 方法：SD大鼠随机分为假手术组、模型组和高压氧组，假手术组仅行椎板切除术，其余2组均行T10椎板水平脊髓完全横向切断术。高压氧组于术后第3小时置于动物舱内开始高压氧治疗，舱内达到222.92 kPa个绝对大气压，吸氧浓度97%~99%，10 d 1疗程，共3疗程，其中第1疗程2次/d，第2，3疗程1次/d，每疗程间休息6 d。模型组不做高压氧治疗。分别于建立模型后第6周处理，用ELISA法测骨形成指标血清骨特异性碱性磷酸酶及血清骨钙素，骨吸收指标血清Ⅰ型胶原氨基末端肽及尿脱氧吡啶啉的浓度。 结果与结论：高压氧组大鼠血清骨特异性碱性磷酸酶，血清骨钙素值显著高于模型组(P < 0.05)，模型组显著高于假手术组 (P < 0.05)。高压氧组血清Ⅰ型胶原氨基末端肽，尿清脱氧吡啶的值显著低于模型组(P < 0.05)，模型组显著高于假手术组(P < 0.05)。结果表明超早期高压氧治疗可影响脊髓完全横断损伤大鼠骨转换的改变，对骨形成有促进作用，对骨吸收有抑制作用。     

降钙素基因相关肽诱导脂肪干细胞向成骨细胞的分化

背景：已证实降钙素基因相关肽可促进成骨细胞的增殖与分化，并加速骨折的愈合、促进异位骨化的形成，但其是否具有促使脂肪干细胞向成骨细胞定向分化的作用作者未查到相关报道。 目的：探讨降钙素基因相关肽在体外定向诱导脂肪干细胞向成骨细胞增殖分化的可行性。 设计、时间及地点：细胞学体外观察，基因及蛋白质学检测，于2006-10/2007-08在武汉大学医学院中心实验室和三峡大学医学院病理实验室完成。 材料：清洁级4月龄健康新西兰大耳白兔2只。 方法：密度梯度离心+贴壁法体外分离培养兔脂肪干细胞，传至第3代分为2组：对照组加入含10 mmol/Lβ-甘油磷酸钠、50 mg/L抗坏血酸、1×10-8 mol/L地塞米松、体积分数为0.15的胎牛血清的RPMI 1640骨诱导培养基，实验组在此基础上加入1 μg/L降钙素基因相关肽进行诱导培养。 主要观察指标：细胞形态学变化，免疫组织化学染色测定细胞碱性磷酸酶活性，四环素标记法检测矿化结节的形成，RT-PCR和Western blot法检测成骨细胞标志性蛋白I型胶原、骨钙素的表达。 结果：实验组脂肪干细胞经成骨诱导培养后，形态规则、多角型细胞增多，细胞倍增时间明显短于对照组。随诱导时间的延长，实验组细胞碱性磷酸酶活性呈增加趋势，诱导7，10，14 d细胞碱性磷酸酶活性均显著高于对照组(t=13.26，P < 0.01)。诱导21 d与对照组比较，实验组形成的金黄色圆形矿化结节数量增多，结节增大。诱导7 d，14 d实验组I型胶原及骨钙素mRNA、蛋白水平的表达均强于对照组。 结论：在体外降钙素基因相关肽能诱导并促进兔脂肪干细胞向成骨细胞方向分化。     

脑损伤并胫骨骨折大鼠骨痂中神经肽的分布及意义*☆

目的: 研究证明，含有P物质、降钙素基因相关肽、血管活性肠肽、神经肽Y和酪氨酸羟化酶等神经肽的肽能神经共同存在于骨组织中，主要分布于骨代谢活跃的区域，表明这些肽能神经与骨的生长、发育密切相关。观察脑损伤后大鼠胫骨骨痂中神经肽的表达。 方法：实验于2007-02/05在广西医科大学实验动物中心完成。①实验分组：雄性Wistar大鼠130只，体质量450~550 g，随机数字表法分为单纯骨折组（n =60），脑损伤合并骨折组（n =60），正常对照组（n =10）。②实验方法：麻醉后显露大鼠右颅顶骨，中线旁2 mm 处开直径5 mm 骨窗，液压打击致中度脑损伤，并制备大鼠胫骨骨折模型，其中单纯骨折组头部只做颅骨开窗，正常对照组不做任何处理。③实验评估：术后3，7，14，21，28，35 d 苏木精-伊红染色和神经肽免疫组织化学染色观察神经肽在大鼠胫骨中的分布及胫骨骨折骨痂的连续性及骨折愈合情况。计算机X射线摄像仪（CR）摄片测定术后14，21，28 d 脑损伤合并骨折组及单纯骨折组骨痂面积大小。 结果：纳入大鼠130只，均进入结果分析。①脑损伤合并骨折组早期形成大量纤维骨痂和软骨骨痂，骨痂中神经肽免疫阳性神经纤维较多，明显增厚的骨膜内层骨祖细胞、幼稚的软骨细胞胞质内降钙素基因相关肽、P物质、血管活性肠肽、酪氨酸羟化酶、神经肽Y强阳性表达。②脑损伤合并骨折组14 d 纤维骨痂中的软骨细胞团增大，骨膜下软骨细胞层增厚；21 d 小梁骨明显增厚，软骨岛增大；28 d 仍可见大量的纤维骨痂和软骨骨痂，软骨细胞团周边有少量结构稀疏的编织骨形成。单纯骨折组骨膜反应轻，纤维骨痂量少，骨内成骨和软骨内成骨并存，以前者为主，骨折愈合过程明显晚于脑损伤合并骨折组。③14，21 d 脑损伤合并骨折组骨痂面积较单纯骨折组大（P < 0.01）；21，28 d 脑损伤合并骨折组骨痂面积变化明显快于单纯骨折组，提示骨痂塑性快（P < 0.01）。CR摄片发现，各骨折组大鼠骨折端均未发现不愈合现象，单纯骨折组骨折线清晰，骨痂量较少；脑损伤合并骨折组骨性愈合较好，骨痂量较多，骨折线模糊。 结论：正常大鼠骨生长活跃区有丰富的肽能神经支配。脑损伤后骨痂中神经肽有显著改变，并引起骨痂量和质的改变，骨折愈合加速。     

降钙素基因相关肽神经生长因子与失神经支配兔骨折愈合

背景：骨折不愈合严重影响患者生活质量,神经生长因子用于骨不连的防治是重建外科领域研究的重点和方向。 目的：观察神经生长因子降钙素基因相关肽对失神经支配兔骨折愈合的影响。 方法：构建大白兔失神经支配腓骨骨折模型后,实验组骨折端局部注射降钙素基因相关肽10 μg,每2 d一次;对照组骨折端局部注射等量生理盐水。术后2,4,6周分别测定静脉血中肾上腺素和去甲肾上腺素的水平,并进行生物力学和组织学分析。 结果与结论：术后两组血清肾上腺素和去甲肾上腺素水平均有显著增高,在术后第4周达到最高峰,比术前高出1倍以上,第6周时出现下降,但仍然显著高于术前;术后2,4,6周,实验组肾上腺素和去甲肾上腺素血清水平较对照组显著增高,差异具有显著性意义(P < 0.05~0.01)。在三点弯曲实验中,实验组骨痂的抗弯强度明显高于对照组(P < 0.05~0.001);术后第6周时苏木精-伊红染色可见实验组骨痂中的透明软骨细胞已被成骨细胞替代,对照组骨痂中的软骨细胞仍没有完全成骨细胞化。提示神经生长因子降钙素基因相关肽对失神经支配兔骨折愈合具有明显的促进作用。 关键词：神经生长因子;降钙素基因相关肽;骨折愈合;生物力学;生物化学     

阿司匹林对沙土鼠脑缺血-再灌注损伤后细胞间黏附分子及降钙素基因相关肽表达的影响

目的 探讨阿司匹林对沙土鼠全前脑缺血-再灌注损伤后的脑保护作用及其对细胞间黏附分子及降钙素基因相关肽表达的影响。方法 采用夹闭双侧颈总动脉的方法，制备沙土鼠短暂性全前脑缺血-再灌注模型。63只沙土鼠随机分为假手术组、脑缺血-再灌注组（脑缺血组）和阿司匹林干预组（阿司匹林组）。应用免疫组化SABC法检测脑缺血-再灌注后细胞间黏附分子及降钙素基因相关肽表达水平的变化，以及阿司匹林干预对二者表达的影响。结果 （1）细胞间黏附分子表达的变化：脑缺血-再灌注24h，脑缺血组动物脑组织细胞间黏附分子的表达水平开始增加，3d后明显增强，至7d后仍维持在较高水平，与假手术组相比差异有显著性意义（P〈0．05）。而阿司匹林组动物细胞间黏附分子的表达水平在所有观察时限均明显低于脑缺血组，差异有显著性意义（P〈0．05）。（2）降钙素基因相关肽表达的变化：在脑缺血-再灌注后各时限，脑缺血组动物降钙素基因相关肽的表达均呈弱阳性；而阿司匹林组表达则呈强阳性。结论 脑缺血-再灌注可诱导细胞间黏附分子的表达上调，并抑制降钙素基因相关肽的表达。阿司匹林通过抑制细胞间黏附分子的表达水平和增强降钙素基因相关肽表达而获得较好的脑保护作用。     

移植嗅鞘细胞可通过减弱纤维性瘢痕的产生而促进大鼠脊髓损伤后神经纤维的再生

背景：多项研究已证实嗅鞘细胞移植能促进脊髓损伤大鼠神经再生和功能的恢复,但嗅鞘细胞移植促进再生的分子机制还未完全阐明。 目的：观察嗅鞘细胞移植是否可以消除纤维性瘢痕的产生。 设计、时间及地点：对照随机动物实验,于2007年4月至2009年5月在日本东京都神经科学研究所发生形态部门和中国医科大学基础医学院解剖教研室完成。 材料：动物由日本东京都神经科学研究所动物管理及使用委员会提供 方法：选取体重为300-350克的SD大鼠23只,行胸椎9-10脊髓全横断,分为假手术对照组（n=3）、手术组（n=9）和嗅鞘细胞移植组（n=11）。嗅鞘细胞来源于未成熟的嗅球,并经过培养2-3周。 主要观察指标：分别应用GFAP和胶原IV蛋白免疫组化染色观察损伤部位胶质瘢痕和纤维性瘢痕的形成。脊髓内下行和上行的神经纤维束分别应用5-羟色胺和降钙素基因相关肽组化染色来观察。血管可用RECA-1染色来标识。同一切片上用RECA-1和胶原IV染色来比较血管的着色和胶原沉着的部位。 结果：在单纯的脊髓损伤组,损伤后一周的下行的5-羟色胺阳性纤维和上行的降钙素基因相关肽神经纤维均停止在纤维性瘢痕两端,在损伤部位周边有大量胶质细胞增生,损伤中心部位有大量胶原IV蛋白沉积而形成纤维性瘢痕。在损伤后同时移植嗅鞘细胞一周,5-羟色胺和降钙素基因相关肽阳性纤维均可见通过损伤部位。在损伤的脊髓节段,嗅鞘细胞移植组的阳性纤维均高于单纯损伤组。虽然移植组的损伤周边仍有大量的胶质细胞存在,但纤维性瘢痕却被显著的抑制。 结论：脊髓损伤过程中切断的神经纤维停止在纤维性瘢痕之前,移植嗅鞘细胞可以减弱纤维性瘢痕的产生而促进5-羟色胺阳性纤维越过脊髓损伤部位。     

Denervation study of synapses of organ of corti of old world monkeys

Fine structural characteristics of synapses in the spiral organ of Corti were examined, with reference to differences between inner and outer haircell systems, and to location of neurons of origin of efferent axons. Surgical interruption of crossed olivocochlear bundle, of vestibular nerve, of facial nerve, and excision of superior cervical ganglia were used to determine the pathways of efferent axons. Interruption of the vestibular nerve near the brainstem results in degeneration of all efferent terminals on outer hair cells. Mid-line lesions at, and caudal to, the facial colliculus result in degeneration of about half of these efferent terminals. Efferent synaptic bulbs to the inner hair-cell system are small, of the order of one micron, and form type 2 junctions with afferent dendrites. They tend to have more large dense-core vesicles (about 80 nm) than the large efferent terminals of the outer hair-cell system, and appear to be the terminals of axons in the habenula perforata, which exhibit varicosities laden with large dense core vesicles. The varicosities are unaffected by excision of the superior cervical ganglia. So far as our material can reveal, it appears that the varicosities in the habenula perforata do not survive vestibular root interruption, nor do the efferent processes in the internal spiral bundle or at the base of inner hair cells. Most interestingly, the afferent processes of the inner hair-cell system, as identified for example by their relation to pre-synaptic bodies in the inner hair cells, are subject to a trans-synaptic reaction after severance of the vestibular root. They undergo a dramatic cytological transformation, characterized by increase of volume, engorgement with microtubules, microfilaments, microvesicles of various sizes, and clusters of lysosomes. Thus, both the efferent and afferent terminals of the inner hair-cell system show marked cytological differences from the corresponding terminals of the outer hair cell system.     

Mechanism of action of tubocurarine on nicotinic cholinoreceptors of neurons of the sympathetic ganglia of rats

Tubocurarine (Tc) effect on membrane currents elicited by acetylcholine (ACh) was studied in isolated superior cervical ganglion neurons of rat using patch-clamp method in the whole-cell recording mode. The "use-dependent" block of ACh current by Tc was revealed in the experiments with ACh applications, indicating that Tc blocked the channels opened by ACh. Mean lifetime of Tc-open channel complex, tau, was found to be 9.8 +/- 0.5 s (n = 7) at -50 mV and 20-24 degrees C. tau exponentially increased with membrane hyperpolarization (e-fold change in tau corresponded to the membrane potential shift by 61 mV). Inhibition of the ACh-induced current by Tc (3-30 microM/1) was completely abolished by membrane depolarization to the level of 80-100 mV. Inhibition of ACh-induced current was augmented at increased ACh doses. It is concluded that the open channel block produced by Tc is likely to be the only mechanism for Tc action on nicotinic acetylcholine receptors in superior cervical ganglion neurons of rat.     

The effect of age of onset of PD on risk of dementia

Background Dementia occurs in the majority of patients with Parkinson’s disease (PD). Late onset of PD has been reported to be associated with a higher risk for dementia. However, age at onset (AAO) and age at baseline assessment are often correlated. The aim of this study was to explore whether AAO of PD symptoms is a risk factor for dementia independent of the general effect of age. Methods Two community-based studies of PD in New York (n = 281) and Rogaland county, Norway (n = 227) and two population-based groups of healthy elderly from New York (n = 180) and Odense, Denmark (n = 2414) were followed prospectively for 3–4 years and assessed for dementia according to DSM-IIIR. All PD and control cases underwent neurological examination and were followed with neurological and neuropsychological assessments. We used Cox proportional hazards regression based on three different time scales to explore the effect of AAO of PD on risk of dementia, adjusting for age at baseline and other demographic and clinical variables. Findings In both PD groups and in the pooled analyses, there was a significant effect of age at baseline assessment on the time to develop dementia, but there was no effect of AAO independent of age itself. Consistent with these results, there was no increased relative effect of age on the time to develop dementia in PD cases compared with controls. Interpretation This study shows that it is the general effect of age, rather than AAO that is associated with incident dementia in subjects with PD. Received in revised form: 22 December 2005     

Limits of deinstitutionalization--perspectives of relatives of psychiatric patients

After a hopeful beginning, the social process of the reintegration of those with severe mental illness has come to a standstill. I am led to wonder whether "the community" really wants to live together with people suffering from severe mental illness, and if so, how closely? As long as the medical treatment of mental illness provided by the general practitioners is fundamentally deficient, as they are not able to prescribe the necessary interventions--such as out-patient psychiatric nursing, and service providers in the out-patient sector are content with offering increasingly intensive forms of care for the less seriously ill at the cost of the Social Welfare System--the reintegration of those with serious mental illness remains an illusion--which is mainly to the benefit of providers of residential care in homes and hostels.     

Summary of legislation of 1935 of interest to the department of Mental Hygiene

Psychiatric Quarterly -