P物质对去甲肾上腺素诱发大鼠离体心脏功能变化的影响

目的 探讨P物质(SP)对去甲肾上腺素(NE)诱发大鼠离体心脏功能变化的影响.方法 健康成年雄性SD大鼠54只,体重250～280 g,随机分为9组:对照组(C组,n=6);10-6mol/L SP组(SP1组,n=6);10-7mol/L SP组(SB组,n=6);10-8mol/L SP组(SP3组,n=6);10-5mol/L NE组(NE1组,n=6);10-6mol/L NE组(NE2组,n=6);10-7mol/L NE组(NE3组,n=6);10-8mol/L SP+10-5mol/L NE组(SN组,n=6);10-7 mol/L NK-I受体拮抗剂+10-8 mol/L SP+10-5mol/L NE组(DSN组,n=6).分离大鼠心脏,采用Langendorff装置灌流离体心脏,记录给药后10 min内的左室收缩压(LVSP)、左室舒张末期压(LVEDP)、左室发展压(LVDP)和心率(HR),计算各指标变化率.结果 与C组比较,NE1组、NE2组和NE3组LVDP、LVSP和HR的变化率均升高,NE1组升高最明显,NE1组LVEDP变化率明显降低(P<0.05);与NE1组比较,SN组LVDP和LVSP变化率升高、HR变化率降低(P<0.05);与SN组比较,DSN组LCDP和LVSP的变化率降低(P<0.05);与NE1组比较,DSN组HR变化率降低(P<0.05).结论 10-7～10-5mol/L NE对心脏可产生明显正性变时变力作用,10-8～10-6mol/L SP对心脏无直接作用,但可增强NE的正性变力作用,抑制NE的正性变时作用;其机制可能与NK-1受体激活有关.     

前列腺素E2受体在前列腺素E2诱导H9c2心肌细胞肥大中的作用

目的 评价前列腺素E2受体(EP受体)在前列腺素E2(PCE2)诱导H9c2心肌细胞肥大中的作用.方法 培养H9c2心肌细胞,以4×104个/ml的密度接种于培养瓶(每瓶3ml)、24孔(每孔1 ml)或6孔(每孔2 ml)培养板.采用随机数字表法,将细胞随机分为4组(n=24):空白对照组(C组)不予任何处理,继续培养48 h;PGE2组在细胞培养液中加入PGE2(终浓度1μmol/L);AH6809组(A组)在细胞培养液中加入PGE2(终浓度1μmol/L)和AH6809(EP1及EP2受体拮抗剂,终浓度10μmol/L);GW627368X组(G组)在细胞培养液中加入PGE2(终浓度1μmol/L)和GW627368X(EP4受体拮抗剂,终浓度10 μmol/L).孵育48 h后采用免疫荧光观察心肌细胞形态,Image J医学图像分析系统测量心肌细胞直径,BCA法检测心肌细胞总蛋白含量,RT-PCR法测定胞浆ANP mRNA及BNP mRNA的表达水平.结果 与C组比较,PGE2组、A组和G组心肌细胞总蛋白含量和心肌细胞直径增加,胞浆ANPmRNA及BNPmRNA表达上调(P＜0.05).与PGE2组比较,G组心肌细胞总蛋白含量和心肌细胞直径降低,胞浆ANP mRNA及BNP mRNA表达下调(P＜0.05),A组上述各指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论 EP4受体介导了PGE2诱导的心肌细胞肥大效应,而该效应与EP1和EP2受体无关.     

舒芬太尼对去甲肾上腺素诱发自发性高血压大鼠离体胸主动脉收缩的影响

目的 探讨舒芬太尼对去甲肾上腺素(NE)诱发自发性高血压大鼠离体胸主动脉收缩的影响.方法 雄性自发性高血压大鼠8只,体重250～300 g,每只大鼠取离体胸主动脉血管环4段,采用随机区组设计,随机分为4组(n=8):生理盐水对照组(NS组)、低浓度舒芬太尼组(7×10-11mol/L,S1组)、中浓度舒芬太尼组(2×10-10 mol/L,S2组)和高浓度舒芬太尼组(1×10-9mol/L,S3组).将血管环悬挂于血管张力测量装置,张力稳定后加入60 mmol/L KCl收缩血管环,记录血管环张力.洗脱KCl后分别加入生理盐水及不同浓度的舒芬太尼各100 μl,20 min后依次加入终浓度为10-8、10-7、10-6、10-5mol/L的NE,使血管充分收缩,记录不同NE终浓度下血管环张力,计算血管环收缩幅度.结果 与NS组比较,S1组、S2组、S3组血管环收缩幅度降低(P<0.05或0.01).与S1组比较,S2组、S3组血管环收缩幅度降低(P<0.01).与S2组比较,S3组血管环收缩幅度降低(P<0.05或0.01).结论 舒芬太尼可抑制NE诱发自发性高血压大鼠离体胸主动脉收缩,且与浓度有关.

Abstract：

Objective To investigate the effect of sufentanil on norepinephrine (NE)-induced contraction of thoracic aorta isolated from rats with spontaneous hypertension (SH) .Methods Eight male rats with SH weighing 250-300 g were used in this study. The rats were decapitated and their thoracic aortas were isolated and cut into rings 2-3 mm in length. The aorta rings were suspended for isometric tension recording. The aortic rings obtained from SH rats were divided into 4 groups ( n = 8 each) : control group and 3 sufentanil groups. The contraction of aortic rings in response to NE in the absence (control) and presence of 3 concentrations of sufentanil 7 × 10-11 ,2 × 10-10 and 1 × 10-9 mol/L was recorded. Results The amplitude of NE-induced contraction of thoracic aorta was significantly greater in 3 sufentanil groups than in control group. Sufentanil significantly inhibited the NE-induced aortic contration in proportion to concentration. Conclusion Sufentanil can inhibit NE-induced contraction of thoracic aorta isolated from rats with SH in a concentration-dependent manner.     

降钙素基因相关肽混合去甲肾上腺素对大鼠心肌细胞L-型钙电流的影响

目的 探讨降钙素基因相关肽(CGRP)混合去甲肾上腺素(NE)对大鼠心肌细胞L-型钙电流(ICa-L)的影响.方法 SD大鼠,雌雄不拘,体重260～280 g,急性分离其心肌细胞,用全细胞膜片钳方法记录ICa-L.采用随机数字表法,将心肌细胞随机分为3组(n=6):CGRP组用含CGRP 1×10-7mol/L的台氏液灌流;NE组用含NE 1×10-6mol/L的台氏液灌流;CGRP+NE组(CN组)用含NE 1×10-6mol/L+CGRP 1×10-7mol/L的台氏液灌流.各组均灌流1 min,流速2 ml/min;然后用台氏液洗脱1 min.于灌流前1 min、灌流1 min和洗脱1 min时,记录ICa-L峰值,并绘制CGRP或NE灌流后ICa-L的电流-电压曲线.结果 CGRP可抑制心肌细胞ICa-L(P<0.05).NE可促进心肌细胞ICa-L(P<0.05).与CN组比较,灌流1 min时CGRP组ICa-L降低,NE组ICa-L升高(P<0.05).CGRP使心肌细胞ICa-L的电流-电压曲线明显上移;NE使心肌细胞ICa-L的电流一电压曲线明显下移.结论 CGRP可削弱NE对大鼠心肌细胞ICa-L的促进作用.

Abstract：

Objective To investigate the effects of calcitonin gene-related peptide (CGRP) combined with norepinephrine (NE) on L-type calcium current (LCa-l) in rat ventricular myocytes. Methods Ventricular myocytes were isolated from SD rats (weighing 260-280 g) by retrograde perfusion of the heart via the aorta with an enzyme-containing solution as previously described. Whole-cell patch-clamp recording was made using Axopatch 200B amplifier. The cells were perfused for 1 min with Tyrode solution containing CGRP 1 × 10-7 mol/L (group CGRP) , NE 1 × 10-6 mol/L (group NE), or CGRP 1 × 10-7 mol/L + NE 1 × 10-6 mol/L (group CN) and again washed with Tyrode solution. ICa-L was recorded 1 min before and 1 min after the cells were perfused and 1 min after the cells were washed. I-V curve of ICa-L was made after the cells were perfused with solution containing CGRP or NE alone. Results CGRP significantly inhibited the peak of ICa-L, while NE significantly promoted the peak of ICa-L(P < 0.05) . The peak of ICa-L was significantly decreased 1 min after the cells were perfused in group CGRP,while increased 1 min after the cells were perfused in group NE compared with group CN ( P < 0.05). CGRP made the I-V curve of ICa-L move up-ward, while NE made the I-V curve of ICa-L move down-ward. Conclusion CGRP can weaken the promotion of ICa-L induced by NE in rat ventricular myocytes.     

孤啡肽对大鼠离体心脏功能的调节作用及其对去甲肾上腺素诱发心脏功能变化的影响

目的 观察孤啡肽(OFQ)对健康大鼠离体心脏功能的调节作用及其对去甲肾上腺素(NE)诱发心脏功能变化的影响.方法 健康成年雄性SD大鼠60只,月龄3-4月,体重250～280g,随机分为10组(n=6):对照组(C组)、NE组(NE 10-3 mol/L)、OFQ1组、OFQ2组和OFQ3组(OFQ 10-6、10-7和10-8mol/L)、OFQ+OFQ受体拮抗剂(UFP)组(OFQ 10-6mol/L和UFP-101 10-6mol/L)、NE+OFQ1组、NE+OFQ2组和NE+OFQ3组(NE 10-5 mol/L和OFQ 10-4、10-7和10-8 mol/L)、NE+OFQ+UFP组(NE 10-5mol/L、OFQ 10-6mol/L和UFP-101 10-6mol/L).麻醉后分离大鼠心脏,采用Langendorff装置灌流离体心脏,记录给药10 min时左室收缩压(LVSP)、左室舒张末期压(LVEDP)、左室发展压(LVDP=LVSP-LVEDP)、HR、左室最大收缩速率(+dp/dtmax)和左室最大舒张速率(-dp/dtmax).结果 与C组比较,OFQ1组、OFQ2组和OFQ3组LVSP、LVDP和±dp/dtmax升高,LVEDP和HR降低(P<0.05或0.01).与OFQ1组比较,OFQ2组、OFQ3组和OFQ+UFP组LVSP、LVDP和±dp/dtmax降低,LVEDP和HR升高(P<0.05或0.01).与OFQ2组比较,OFQ3组LVSP、LVDP、±dp/dtmax降低,LVEDP和HR升高(P<0.05或0.01).与NE组比较,NE+OFQ1组、NE+OFQ2组、NE+OFQ3组LVSP、LVDP、±dp/dtmax和HR增高,LVEDP降低(P<0.05或0.01).与NE+OFQ1组比较,NE+OFQ2组、NE+OFQ3组和NE+OFQ+UFP组LVSP、LVDP、4-dp/dtmax和HR明显降低,LVEDP升高(P<0.01).与NE+OFQ2组比较,NE+OFQ3组LVSP、LVDP、±dp/dtmax和HR降低,LVEDP升高(P<0.01).结论 OFQ对健康大鼠离体心脏具有正性变力作用,负性变时作用;OFQ可以增强NE诱发心脏的正性变力变时作用.     

吗啡预先给药对去甲肾上腺素诱导大鼠心肌细胞NF-κB活化的影响

目的观察吗啡预先给药对去甲肾上腺素(NE)诱导大鼠心肌细胞NF-κB活化的影响,探讨吗啡在细胞水平对缺血心肌的保护作用机制。方法出生1～3 d的SD大鼠,分离、培养心肌细胞,将培养4～5 d呈亚融合状态下的细胞随机分为5组(n=4):对照组(C组)、10-6 mol·L-1 NE组(NE1组)、10-7 mol·L-1 NE组(NE2组)、10-8 mol·L-1 NE组(NE3组)、10-5 mol·L-1吗啡 10-8 mol·L-1 NE组(M NE组)。NE1组、NE2组、NE3组细胞培养基内分别加入相应浓度的NE,M NE组在加入NE前30 min加入10-5 mol·L-1吗啡。加入NE后24 h,进行下述指标的测定,采用流式细胞术测定心肌细胞胞浆NF-κB表达水平;采用免疫细胞化学染色技术测定NF-κB、TNF-α表达,采用酶免疫试验测定TNF-α含量,采用反转录PCR技术测定TNF-αmRNA表达。结果与C组相比,NE1组、NE2组、NE3组细胞浆NF-κB水平降低,其中NE3组NF-κB表达水平最低。NE2组、NE3组TNF-α含量及TNF-αmRNA表达升高,NE3组NF-κB、TNF-α表达升高(P<0.05);与NE3组比较,M NE组细胞浆NF-κB水平升高,TNF-α含量及TNF-αmRNA表达降低(P<0.05)。结论10-5 mol·L-1吗啡预先给药可在一定程度上抑制NE诱导大鼠心肌细胞NF-κB的活化,从而减少了TNF-α的释放。     

P2X受体在大鼠海马氧糖缺失时IL-1β合成和释放中的作用

目的 探讨P2X受体在大鼠海马氧糖缺失时IL-1β合成和释放中的作用.方法 成年雄性SD大鼠,体重150～200 g,制备海马脑片,取160张,随机分为4组(n=40),C组:用95%O2-5%CO2饱和aCSF孵育;OGD组:脑片移至经95%N2-5%CO2饱和的无糖aCSF中,并置于持续通入95%N2-5%CO2的容器内进行氧糖缺失处理;BBG组:脑片移至含P2X7受体特异性拮抗剂亮蓝G(BBG,终浓度1μmol/L)的经95%O2-5%CO2饱和的aCSF中,孵育20 min,随后进行氧糖缺失处理,无糖aCSF中加入终浓度1 μmol/L的BBG;OP组:脑片移至加入P2X4受体单克隆抗体(终浓度1.5μg/ml)的经95%O2-5%CO2饱和的aCSF中孵育60 min,随后进行氧糖缺失处理,无糖aCSF中加入终浓度1.5 μg/ml的P2X4受体单克隆抗体.于氧糖缺失前及氧糖缺失20、40和60 min时测定LDH和IL-1β的释放量,并观察病理学结果.于氧糖缺失60 min时测定细胞内IL-1β前体蛋白(pro-IL-1β)的表达水平.结果 与C组比较,其余各组LDH和IL-1β释放量升高,细胞内pro-IL-1β表达上调(P＜0.05);与OGD组比较,BBG组LDH和IL-1β释放量降低,细胞内pro-IL-1β表达上调(P＜0.05),OP组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论 P2X7受体介导了大鼠海马氧糖缺失时IL-1β的合成和释放,而P2X4受体没有介导IL-1β的合成和释放.     

orexin-1受体抑制剂通过Wnt通路促进骨髓间充质干 细胞的成骨分化

目的研究Wnt/β-catenin信号通路对orexin-1受体抑制剂介导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化的影响。方法(1)分离提取SD大鼠股骨、胫骨的BMSCs,用流式细胞仪进行细胞表型鉴定;(2)实验分组:对照组、10-5mol/L、10-6mol/L质量浓度的orexin-1受体抑制剂溶液,于成骨诱导第5天免疫印迹法和实时荧光定量PCR法观察Wnt/β-catenin信号通路关键靶点蛋白Dickkopf-1、Gsk3β、β-catenin以及基因Gsk3β、β-catenin mRNA表达,以观察Wnt信号通路对orexin-1受体抑制剂诱导大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响。结果 10~(-5)mol/L、10~(-6)mol/L的orexin-1受体抑制剂处理BMSCs5天后,Dickkopf-1、β-catenin和GSK3β蛋白表达升高,β-catenin和GSK3βmRNA表达升高。结论 orexin-1受体抑制剂促进大鼠骨髓基质干细胞向成骨细胞方向分化的作用可能与调控Wnt/β-catenin信号通路有关。     

孤啡肽对大鼠离体心脏功能的调节作用及其对去甲肾上腺素诱发心脏功能变化的影响

Objective To investigate the effects of orphanin FQ (OFQ) on simple and norepinephrineactivated cardiac function in isolated rat heart.Methods Male SD rats aged 3-4 months weighing 250-280 g were anesthetized with intraperitoneal 25% urethane 1.4-1.8 ml.Their hearts were excised and passively perfused with K-H solutionin a Lanngendorff apparatus.A fluid-filled latex balloon was inserted into left ventricle for measurement of developed pressure.Left ventricular systolic pressure(LVSP),left ventricular end-diastofic pressure(LVEDP),left ventricular developed pressure(LVDP=LVSP-LVEDP),HR and±dp/dtmax were measured.Sixty isolated rat hearts were randomly divided into 10 groups(n=6 each):Ⅰ control group (group C);Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ OFQ1,OFQ2,OFQ3 group--OFQ 10-6,10-7,10-8 mol/L were administered via perfusion system respectively;Ⅴ OFQ+UFP group--OFQ 10-6 mol/L+UFP-101 (all OFQ antagonist) 10-6 mol/L were administered;Ⅵ NE group--norepinephrine 10-5 mol/L;Ⅶ,Ⅷ,Ⅸ NE+OFQ groups--NE 10-5 mol/L+OFQ 10-6,10-7,10-8 mol/L were administered respectively;Ⅹ NE+OFQ+UFP group--NE 10-5 mol/L+OFQ 10-6mol/L+UFP-101 10-6mol/L.Results LVSP,LVDP and±dp/dtmax were significantly increased while HR was significantly decreased in the 3 OFQ groups as compared with control group.LVSP,LVDP±dp/dt max and HR were significantly increased in the 3 NE+OFQ groups as compared with NE group.Conclusion OFQ has positive inotropic action and negative chronotropic effect on the isolated rat heart.OFQ Can enhance the positive inotropic and chronotropic effect of NE on the heart.     

孤啡肽对大鼠离体心脏功能的调节作用及其对去甲肾上腺素诱发心脏功能变化的影响

Objective To investigate the effects of orphanin FQ (OFQ) on simple and norepinephrineactivated cardiac function in isolated rat heart.Methods Male SD rats aged 3-4 months weighing 250-280 g were anesthetized with intraperitoneal 25% urethane 1.4-1.8 ml.Their hearts were excised and passively perfused with K-H solutionin a Lanngendorff apparatus.A fluid-filled latex balloon was inserted into left ventricle for measurement of developed pressure.Left ventricular systolic pressure(LVSP),left ventricular end-diastofic pressure(LVEDP),left ventricular developed pressure(LVDP=LVSP-LVEDP),HR and±dp/dtmax were measured.Sixty isolated rat hearts were randomly divided into 10 groups(n=6 each):Ⅰ control group (group C);Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ OFQ1,OFQ2,OFQ3 group--OFQ 10-6,10-7,10-8 mol/L were administered via perfusion system respectively;Ⅴ OFQ+UFP group--OFQ 10-6 mol/L+UFP-101 (all OFQ antagonist) 10-6 mol/L were administered;Ⅵ NE group--norepinephrine 10-5 mol/L;Ⅶ,Ⅷ,Ⅸ NE+OFQ groups--NE 10-5 mol/L+OFQ 10-6,10-7,10-8 mol/L were administered respectively;Ⅹ NE+OFQ+UFP group--NE 10-5 mol/L+OFQ 10-6mol/L+UFP-101 10-6mol/L.Results LVSP,LVDP and±dp/dtmax were significantly increased while HR was significantly decreased in the 3 OFQ groups as compared with control group.LVSP,LVDP±dp/dt max and HR were significantly increased in the 3 NE+OFQ groups as compared with NE group.Conclusion OFQ has positive inotropic action and negative chronotropic effect on the isolated rat heart.OFQ Can enhance the positive inotropic and chronotropic effect of NE on the heart.     

异丙酚对β-淀粉样蛋白诱导大鼠皮层神经元损伤的影响

目的 探讨异丙酚对β-淀粉样蛋白(β-AP)诱导大鼠皮层神经元损伤的影响.方法 孕18 dSD大鼠,体外分离皮层神经元,5×104个/孔,每孔200μl接种于96孔培养板上,培养7 d.实验一:取15孔神经元随机分为5组(n=3):对照组;损伤组;异丙酚预防给药Ⅰ组加入β-AP 25μmol/L前24 h加入异丙酚50μmol/L,再孵育24h;异丙酚预防给药Ⅱ组同时加入异丙酚50 μmol/L和β-AP 25μmol/L,孵育24 h;异丙酚治疗给药组加入β-AP 25μmol/L后6 h,加入异丙酚50μmol/L,再孵育18 h.实验二:取18孔神经元随机分为6组(n=3):对照组;损伤组;脂肪乳剂组加入β-AP 25μmol/L后6 h,加入等容量10%脂肪乳剂,再孵育18 h;不同浓度异丙酚组加入β-AP 25μmol/L后6 h,分别加入异丙酚1、10、50 βmol/L,再孵育18 h.测定神经元乳酸脱氢酶(LDH)释放量和神经元活力.采用TUNEL法、Hoechst33342染色观察细胞凋亡情况,计算细胞凋亡率.结果 实验一:与损伤组比较,异丙酚预防给药组LDH释放量差异无统计学意义(P＞0.05),异丙酚治疗给药组神经元LDH释放量减少(P＜0.05).实验二:与损伤组比较,异丙酚50μmol/L组神经元LDH释放量减少,神经元活力升高,细胞凋亡率降低(P＜0.05).结论 异丙酚50 μmol/L治疗性给药可减轻β-淀粉样蛋白诱导大鼠皮层神经元损伤,预防性给药对其无影响.     

O-GlcNAc修饰在谷氨酰胺诱导LPS干预的大鼠心肌细胞HSP70表达中的作用

目的 探讨O位-N-乙酰葡萄糖胺(O-GlcNAc)修饰在谷氨酰胺(Gln)诱导LPS干预的大鼠心肌细胞热休克蛋白70(HSP70)表达中的作用.方法 出生48 h的SD大鼠,原代培养心肌细胞,随机分为6组,每组11瓶(1×106个,瓶):对照组(C组)加入双蒸水25 μl;Gln组加入Gln,终浓度5 mmol/L;LPS组加入LPS,终浓度4 μg/ml;Gin+LPS组依次加入Gln和LPS,Gin终浓度5 mmol/L,LPS 终浓度4 μg/ml;Gln+LPS+Alloxan组依次加入Gln、LPS和O位-N-乙酰氨基葡萄糖转移酶抑制剂Alloxan,Gln和LPS终浓度与Gln+LPS组相同,Alloxan终浓度1 mmol/L;Gln+LPS+PUGNAc组依次加入Gln、LPS和O位-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶抑制剂PUGNAc,Gln和LPS终浓度与Gln+LPS组相同,PUGNAc终浓度100 μmol/L.各组孵育6 h后测定心肌细胞存活率、O-GlcNAc和HSP70的表达水平.结果 各组大鼠心肌细胞存活率比较差异无统计学意义(P>0.05);与C组比较,其余组心肌细胞0.GlcNAc和HSP70的表达上调(P<0.05);与LPS组比较,Gln+LPS组和Gln+LPS+PUGNAc组心肌细胞O-GlcNAc和HSP70的表达上调(P<0.05);与Gln+LPS组比较,Gin+LPS+Alloxan组心肌细胞0-GlcNAc和HSP70的表达下调,Gln+LPS+PUGNAc组心肌细胞O-GlcNAc和HSP70的表达上调(P<0.05).结论 Gln诱导LPS干预大鼠心肌细胞HSPT0表达上调的机制可能与O-GlcNAc修饰有关.     

p38MAPK信号转导通路在七氟烷后处理减轻乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用

目的 评价p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号转导通路在七氟烷后处理减轻乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用.方法 健康新生SD大鼠,日龄1～3 d,处死后取心室肌组织,培养心肌细胞,随机分为7组:对照组(C组)于CO2培养箱中持续培养3 h;缺氧复氧组(AR组)细胞缺氧2 h,复氧1 h;七氟烷后处理组(SP组)细胞缺氧2 h,复氧开始即刻更换为3%七氟烷饱和的DMEM培养液,孵育20 min,再更换为无血清DMEM培养液,继续复氧40 min;七氟烷后处理+SB203580组(SP+SB组)于七氟烷后处理同时加入SB203580(p38MAPK特异性抑制剂)至5 μmol/L,孵育20 min;七氟烷后处理+二甲亚砜组(SP+DMSO组)于七氟烷后处理同时加入0.1%DMSO,孵育20 min;SB203580组(SB组)于复氧开始时加入SB203580至5 μmol/L,孵育20 min;二甲亚砜组(DMSO组)于复氧开始即刻加入0.1%DMSO,孵育20 min.各组细胞分别接种于24孔培养板(1 ml/孔)、35 mm培养皿(5 mlnd/皿)和50 ml培养瓶(8 ml/瓶)中,每组12孔、6皿和6瓶.于复氧结束后,采用比色法测定细胞培养液乳酸脱氢酶(LDH)活性;采用台盼蓝排斥实验测定细胞存活率;采用流式细胞仪测定细胞凋亡率;采用Western blot法测定磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)表达水平.结果 与C组比较,其余各组LDH活性升高,细胞存活率降低,细胞凋亡率升高,AR组、SP组、SP+SB组、SP+DMSO组和DMSO组p-p38MAPK表达上调(P<0.05);与AR组比较,SP组、SP+SB组和SP+DMSO组LDH活性降低,细胞存活率升高,细胞凋亡率降低,p-p38MAPK表达上调(P<0.05);与SP组比较,SP+SB组、SB组和DMSO组LDH活性升高,细胞存活率降低,细胞凋亡率升高,p-p38MAPK表达下调(P<0.05).结论 七氟烷后处理可通过激活p38MAPK信号转导通路减轻乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤.     

慢性前列腺炎大鼠行为学及L5～S2脊段P物质和神经激肽-1受体表达的研究

目的:研究慢性前列腺炎(CP)大鼠模型行为学表现及其L5～S2脊段P物质(SP)和神经激肽-1受体(NK-1R)的表达。方法:成年雄性SD大鼠40只,随机分成对照组、45 d模型组、60 d模型组和90 d模型组,每组10只。采用开野试验和糖水消耗试验观察各组大鼠的行为学表现,测量各组大鼠前列腺指数,ELISA法测定大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-2和IL-10含量,光镜观察前列腺组织形态学变化,免疫组化检测L5～S2脊髓SP及NK-1R的表达。结果:与对照组相比,45、60 d模型组大鼠水平运动评分、垂直运动评分和糖水消耗量呈下降趋势,但无显著性差异;而90 d模型组显著下降(P0.05)。与对照组相比,45、60、90 d模型组大鼠前列腺指数显著下降(P均0.05);与45 d和60 d模型组相比,90 d模型组前列腺指数显著下降(P均0.05)。光镜观察,对照组前列腺组织未见炎细胞浸润,随着造模时间的延长,前列腺组织出现明显水肿,淋巴细胞增加显著。与对照组比较,45、60、90 d模型组大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-2和IL-10水平显著增加(P均0.05)。免疫组化结果显示,SP和NK-1R主要表达于脊髓背角,各模型组SP和NK-1R的表达水平显著高于对照组(P均0.05)。与45 d和60 d模型组相比,90 d模型组SP和NK-1R的表达水平显著升高(P均0.05)。结论:CP模型大鼠出现抑郁行为学表现,血清TNF-α、IL-1β、IL-2和IL-10水平显著升高,L5～S2脊髓背角SP及NK-1R表达上调,且不同时段变化趋势一致,提示不同时段CP模型大鼠的行为学表现与L5～S2脊段SP及其受体表达水平存在相关性。     

异丙酚对乳鼠心肌细胞氧化损伤时线粒体功能的影响

目的 评价异丙酚对乳鼠心肌细胞氧化损伤时线粒体功能的影响.方法 SD乳鼠20只,分离乳鼠心肌细胞,接种于96孔培养板原代培养48 h,随机分为5组,每组32孔,对照组(C组):继续培养4 h;氧化损伤组(OI组):加入叔丁基过氧化氢,终浓度为100 μmol/L,孵育4 h;异丙酚1 μmol/L组、10 μmol/L组和30 μmol/L组(P1-3组):加入叔丁基过氧化氢,终浓度为100 μmol/L,同时加入异丙酚,终浓度分别为1、10、30,μmol/L,孵育4 h.于细胞培养或孵育4 h时,测定上清液乳酸脱氢酶(LDH)活性,细胞谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量和超氧化物岐化酶(SOD)活性、心肌细胞线粒体活力、线粒体膜电位和心肌细胞凋亡率.结果 与C组比较,其余4组上清液LDH活性、心肌细胞MDA含量、凋亡率升高,心肌细胞线粒体活力、膜电位降低、心肌细胞GSH含量、SOD活性降低(P<0.05);与OI组比较,P2,3组上清液LDH活性、心肌细胞MDA含量、凋亡率降低,心肌细胞线粒体活力、膜电位升高,P3组心肌细胞GSH含量、SOD活性升高(P<0.05),P1组上述指标差异无统计学意义(P>0.05);P2组与P3组上述指标比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 异丙酚减轻心肌细胞氧化损伤的机制与改善线粒体功能、抑制细胞凋亡有关.     

硫化氢后处理对大鼠心肌缺血再灌注时左心室收缩功能的影响

目的 探讨硫化氢后处理对大鼠心肌缺血再灌注时左心室收缩功能的影响.方法 实验一成年雄性SD大鼠,体重200～250 g,采用Langendorff装置建立离体心脏灌注模型.取离体灌注模型制备成功的心脏40个,随机分为5组(n=8):对照组(C组)、缺血再灌注组(IR组)和硫氢化钠1、10、100 μmol/L后处理组(SP1组、SP10组、SP100组).平衡灌注20 min后,C组继续灌注K-H液100 min;IR组灌注ST.Thomas停跳液10 ml/kg后停灌40 min,恢复K-H液灌注60 min;SP1组、SP10组、SP100组全心缺血40 min,于再灌注前灌注含1、10、100 μmol/L硫氢化钠的K-H液2 min,然后恢复K-H液灌注60 min.于平衡灌注末和再灌注60 min时,记录左室发展压(LVDP)、左心室发展压最大上升速率(+dp/dtmax)和左心室发展压最大下降速率(-dp/dtmax).实验二成年雄性SD大鼠,体重200～250 g,分离心肌细胞,加入培养皿中,放入95%O2-5%CO2培养箱中培养4 h.取64皿细胞,随机分为4组(n=16):对照组(C组)、缺氧复氧组(HR组)、硫化氢后处理组(SP组)和缺氧后处理组(HP组).C组继续于95%O2-5%CO2培养箱中培养2 h;HR组于95%N3-5%CO2培养箱中缺氧1 h,然后于95%O2-5%CO2培养箱中复氧1 h;SP组于95%N2-5%CO2培养箱中缺氧1 h,加入硫氢化钠10μmol/L孵育2 min,然后于95%O2-5%CO2培养箱中复氧1 h;HP组于95%N2-5%CO2培养箱中缺氧1 h,然后复氧3 min,缺氧3 min,重复3次,再于95%O2-5%CO2培养箱中复氧1 h.测定线粒体膜电位和F-肌动蛋白的表达.结果 实验一与C组比较,再灌注60 min时IR组LVDP和±dp/dp/dtmax降低(P＜0.05),SP1组、SP10组和SP100组LVDP和±dp/dtmax差异无统计学意义(P＞0.05);与IR组比较,SP1组、SP10组和SP100组LVDP和±dp/dtmax升高(P＜0.05);SP1组、SP10组和SP100组间LVDP和±dp/dtmax比较差异无统计学意义(P＞0.05).实验二与C组比较,HR组和HP组线粒体膜电位降低,HR组、SP组和HP组F-肌动蛋白表达上调(P＜0.05);与HR组比较,SP组和HP组线粒体膜电位升高,F-肌动蛋白表达上调(P＜0.05);SP组和HP组间线粒体膜电位和F-肌动蛋白表达比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论硫化氢后处理可改善大鼠心肌缺血再灌注时左心室收缩功能,与其稳定心肌细胞线粒体膜电位和促进F-肌动蛋白聚集有关.     

异丙酚对兔离体气管平滑肌细胞内游离钙离子浓度的影响

目的 评价异丙酚对兔离体气管平滑肌细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)的影响.方法 采用急性酶分离方法分离兔气管平滑肌细胞,采用随机数字表法,将细胞随机分为3组(n=5):异丙酚组(Ⅰ组,终浓度300 μmol/L)、异丙酚(终浓度300 μmol/L)+2-氨乙基硼酸二苯酯(终浓度40μmol/L)(Ⅱ组)和异丙酚(300 μmol/L)+斯里兰卡肉桂碱(终浓度10 μmol/L)(Ⅲ组).Ⅰ组加入终浓度300 μmol/L的异丙酚,孵育15 min后,用无钙的Hank平衡盐溶液冲洗3次,加入1μmol/L乙酰胆碱,记录[Ca2+]i.Ⅱ组加入终浓度40μmol/L的2-氨乙基硼酸二苯酯孵育15 min后,再加入终浓度为300μmol/L的异丙酚,与2-氨乙基硼酸二苯酯共同孵育15 min后,用无钙的Hank平衡盐溶液冲洗3次,加入1 μmol/L的乙酰胆碱.Ⅲ组加入终浓度10 μmol/L的斯里兰卡肉桂碱孵育15 min后,再加入终浓度为300μmol/L的异丙酚,与斯里兰卡肉桂碱共同孵育15 min后,用无钙的Hank平衡盐溶液冲洗3次,再加入1 μmol/L的乙酰胆碱.通过负荷钙离子荧光指示剂Fluo-3/AM测定气管平滑肌细胞内[Ca2+]i.结果 与Ⅰ组比较,Ⅱ组气管平滑肌细胞内[Ca2+]i差异无统计学意义(P＞0.05),Ⅲ组[Ca2+]i明显降低(P＜0.05).结论 异丙酚可降低兔离体气管平滑肌细胞内[Ca2+]i,其机制可能与抑制内质网1,4,5-三磷酸肌醇通路有关,而与内质网兰诺定通路无关.     

感觉神经肽P物质激活Wnt/β-catenin信号通路促进间充质干细胞增殖的实验研究

目的探讨感觉神经肽P物质(substance P,SP)对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖的影响并初步揭示其中可能的机制。方法体外培养SD(Sprague-Dawley)大鼠BMSCs。细胞增殖-毒性检测试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)法检测不同浓度SP刺激下的BMSCs增殖活性;在10-8 mol/L的SP刺激下,采用实时荧光定量PCR(real-time qPCR,RT-qPCR)检测第1、3、5和7天时Wnt/β-catenin信号通路相关基因(β-catenin、c-myc、cyclin D)的表达情况。SP组单纯添加10-8 mol/L的SP,SP+LiCl(糖原合成激酶-3的抑制剂LiCl)组在SP组基础上添加6×10-3 mol/L的LiCl,SP+Dkk-1(Dickkopf-1)组在SP组基础上添加10-9 mol/L的Dkk-1,以添加等量聚丁烯琥珀酸酯(poly butylenes succinate,PBS)为空白对照组。结果 CCK-8法显示SP明显促进BMSCs增殖,以10-8 mol/L的SP作用最为显著。RT-qPCR结果显示SP刺激下,β-catenin、c-myc、cyclin D的mRNA表达有显著差异,10-8 mol/L的浓度差异最为显著,并且呈明显的时间依赖,第5天mRNA表达出现顶峰。并且SP+LiCl组β-catenin、c-myc、cyclin D的mRNA和蛋白水平显著增强,而SP+Dkk-1组明显抑制。结论 SP通过激活Wnt/β-catenin通路而显著促进BMSCs增殖。     

线粒体ATP敏感性钾通道在降钙素基因相关肽减轻新生大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用

目的评价线粒体ATP敏感性钾通道(mitoK_(ATP)通道)在降钙素基因相关肽(CGRP)减轻新生大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用。方法取原代培养的新生1～3 d SD大鼠心肌细胞,在含有10%胎牛血清培养基中培养,细胞接种于6孔细胞培养板,采用随机数字表法分为5组(n=10):正常对照组(C组)、缺氧复氧组(AR组)、CGRP+缺氧复氧组(CGRP组)、CGRP+mitoK_(ATP)通道阻滞剂(5-HD)+缺氧复氧组(5-HD组)、CGRP+CGRP受体阻滞剂CGRP_(8-37)+缺氧复氧组(CGRP_(8-37)组)。除C组,其余4组均缺氧3 h,复氧2 h;CGRP组缺氧前2 h加入终浓度为0.1 nmol/L CGRP;5-HD组于缺氧前2.5 h加入终浓度为500μmol/L 5-HD,30 min后加入终浓度为0.1 nmol/L CGRP;CGRP_(8-37)组于缺氧前2.5 h加入终浓度为1 nmol/L CGRP_(8-37),30 min后加入终浓度为0.1 nmol/L CGRP。于缺氧复氧后检测心肌细胞凋亡情况,计算凋亡指数(AI)、乳酸脱氢酶(LDH)活性,JC-1荧光法测定线粒体膜电位(Δψm)的变化,即JC-1多聚体/单聚体的比值。结果 AR组AI明显高于C组(P0.01)LDH活性明显强于C组(P0.01),JC-1多聚体/单聚体的比值明显低于C组(P0.01)。CGRP组和5-HD组AI明显低于AR组(P0.05),LDH活性明显弱于AR组(P0.01),JC-1多聚体/单聚体的比值明显高于AR组(P0.01)。5-HD组和CGRP_(8-37)组AI明显高于CGRP组(P0.01),LDH活性明显强于CGRP组(P0.01),JC-1多聚体/单聚体的比值明显低于CGRP组(P0.01)。结论 CGRP可以激活新生大鼠心肌细胞膜CGRP受体,通过激活mitoK_(ATP)通道,减少心肌细胞缺氧复氧损伤。     

TRESK基因重组腺病毒载体转染大鼠背根神经节神经元的效果

目的 评价TRESK基因重组腺病毒载体(pAD/CMV/V5- DEST-TRESK)转染大鼠背根神经节(DRG)神经元的效果.方法 原代培养大鼠DRG神经元,调整细胞密度为6× 104个/ml.采用随机数字表法,将细胞随机分为3组,每组6孔,每孔1ml细胞悬液,TRESK基因重组腺病毒载体组(T组)每孔加入3×107 TU的pAD/C MV/V5-DEST- TRESK;腺病毒对照组(A组)每孔加入3× 107TU的阴性对照腺病毒( pAD/CMV/V5- DEST);对照组(C组)不加入腺病毒.于72 h后采用RT-PCR法检测TRESKmRNA表达,Western blot法检测TRESK表达.结果 与C组和A组比较,T组DRG神经元IRESK及其mRNA表达上调(P＜0.05),C组和A组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论 pAD/CMV/V5-DEST-TRESK可有效转染大鼠DRG神经元,上调其TRESK表达.