桃叶珊瑚苷对光老化皮肤成纤维细胞MMP-1和TIMP-1表达的影响

目的探讨桃叶珊瑚苷对光老化皮肤成纤维细胞(ESF-1)基质金属蛋白酶-1(MMP-1)和MMP-1抑制剂(TIMP-1)表达的影响及其对光老化ESF-1细胞的保护作用。方法以不同浓度桃叶珊瑚苷处理用20 J/cm2的UVA照射建立的光老化ESF-1细胞。MTT法检测细胞活力,分别检测细胞中SOD活性、GSH-Px活性和MDA水平。RT-PCR法检测细胞中ERK1、ERK2、MMP-1及TIMP-1 mRNA的表达水平。酶联免疫法检测细胞上清液中MMP-1和TIMP-1的水平。结果 UVA照射ESF-1细胞后,其细胞活力、SOD和GSH-Px活性降低、MDA水平升高,ERK1、ERK2、MMP-1 mRNA的表达水平升高,TIMP-1 mRNA的表达水平降低、MMP-1水平升高、TIMP-1水平降低(P<0.01);1×10-5mol/L和1×10-6mol/L桃叶珊瑚苷能够显著改善ESF-1细胞的光损伤(P<0.05或P<0.01)。结论桃叶珊瑚苷能调节光老化ESF-1细胞MMP-1和TIMP-1的表达,减轻UVA对ESF-1细胞的损伤。     

染料木素对人胚皮肤成纤维细胞胶原、基质金属蛋白酶和基质金属蛋白酶组织抑制剂mRNA表达的影响

目的：探讨染料木素对人胚皮肤成纤维细胞(CCC-ESF-1)胶原(collagen, Col)、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase, MMP)和基质金属蛋白酶组织抑制剂(tissue inhibitors of matrix metalloproteinase, TIMP)mRNA表达的影响。方法体外培养的CCC-ESF-1细胞按随机数字表法分为空白对照组、雌二醇组以及染料木素小、中、大剂量组。采用MTT法检测细胞活力,RT-PCR技术检测ColⅠ、ColⅢ、MMP-1、TIMP-1和TIMP-2 mRNA表达。结果与空白对照组比较,雌二醇组、染料木素中剂量组[(0.451±0.037)、(0.446±0.047)比(0.385±0.061)]均可促进CCC-ESF-1细胞增殖(P均＜0.05),且雌二醇组、染料木素中剂量组细胞 ColⅠ[(0.960±0.012)、(0.929±0.015)比(0.812±0.014)],Col Ⅲ[(0.892±0.009)、(0.824±0.022)比(0.768±0.025)]、TIMP-1[(0.841±0.023)、(0.838±0.053)比(0.751±0.027)]、TIMP-2[(0.456±0.017)、(0.448±0.036)比(0.381±0.029)]mRNA 水平较空白组增高(P 均＜0.01),MMP-1[(0.398±0.043)、(0.402±0.044)比(0.525±0.006)]mRNA水平较空白组降低(P均＜0.01)。结论染料木素可促进 CCC-ESF-1细胞增殖,可能与上调 ColⅠ、Col Ⅲ、MMP-1、TIMP-1、TIMP-2以及下调MMP-1有关。     

三七皂苷R1对UV辐射皮肤成纤维细胞的影响

目的 探讨三七皂苷R1对UV诱导的人皮肤成纤维细胞的保护作用及其相关分子机制.方法 采用不同剂量UV照射原代培养的人皮肤成纤维细胞,同时加入三七皂苷R1干预处理,倒置相差显微镜观察细胞损伤的形态学变化,并用MTT法检测其增殖活性,比色法检测成纤维细胞培养上清中羟脯氨酸的含量,ELISA法检测成纤维细胞MMP-1蛋白水平.结果 UVB、UVA辐射成纤维细胞后,细胞损伤程度呈剂量依赖性,加入三七皂苷R1后,体外培养成纤维细胞未出现明显的数量上和形态学改变;三七皂苷R1浓度为5,20 μg·mL-1时经UV照射的FB细胞增殖活性增加;三七皂苷R1浓度为5,20 μg· mL-1时抑制MMP-1的分泌.结论 UVB、UVA辐射对皮肤成纤维细胞具有明显的损伤作用,而三七皂苷R1对其具有一定的保护作用.     

绞股蓝总皂苷对光老化HSF细胞MMP-3、TIMP-2mRNA及蛋白表达影响的实验研究

目的:观察绞股蓝总皂苷(gypenosides,GPs)含药血清对光老化人皮肤成纤维细胞株(HSF)MMP-3和TIMP-2 mRNA及蛋白表达的影响。方法:采用长波紫外线(UVA)照射方法建立老化HSF细胞模型,并给予含不同浓度GPs大鼠血清进行干预,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹(Western-blot)法,分别对各组细胞MMP-3与TIMP-2 mRNA和蛋白表达进行检测。结果:与空白对照组比较,UV模型组细胞内MMP-3基因和蛋白表达显著增加,同时TIMP-2基因和蛋白表达显著减少。与UV模型组比较,低、中、高剂量含药血清组细胞内MMP-3基因和蛋白表达显著下降,TIMP-2基因和蛋白表达显著上升。结论:GPs通过抑制HSF细胞MMP-3表达,同时促进TIMP-2表达,恢复MMP-3与TIMP-2表达平衡状态,抑制基质金属蛋白酶对细胞外基质(胶原蛋白、蛋白多糖)的降解,为GPs抗皮肤光老化作用机制之一。     

海带多糖对光老化皮肤基质金属蛋白酶活性影响的实验研究

目的: 探索海带多糖(laminaria polysaccharide,LP)对光老化皮肤基质金属蛋白酶活性的影响。 方法: SPF级昆明小鼠背部剃毛,随机分为对照组、模型组、海带多糖低剂量组(LP-L,1 mg·kg^-1)、海带多糖高剂量组(LP-H,5 mg·kg^-1)、 Vit E 组(100 mg·kg^-1),每日腹腔注射给药2次。除对照组外,每日紫外线照射1 h,每周照射5次,UVB累积照射剂量为21.60 J·cm^-2,UVA累积照射剂量为84.02 J·cm^-2。8周后,取背部暴露皮肤,行HE染色测量真皮层厚度,化学比色法检测皮肤羟脯氨酸(Hyp)含量,ELISA法检测血清基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、金属蛋白酶组织抑制物(TIMP-1)的含量,Real-time PCR法分析皮肤MMP-1,TIMP-1 mRNA的相对含量。 结果: 与模型组比较,LP-H组可以显著增加真皮层厚度、皮肤Hyp含量及血清TIMP-1的水平,显著降低血清MMP-1水平及皮肤MMP-1 mRNA相对含量。 结论: 海带多糖可以通过调节基质金属蛋白酶活性来调节光老化皮肤胶原蛋白的代谢。     

人参皂苷可下调滑膜成纤维细胞／的表达

目的：探讨人参皂苷 Rg1对 RA 滑膜成纤维细胞 RANKL/OPG 表达的影响。方法：通过Real-time PCR 及 Western Blot 方法检测 RNAKL/OPG mRNA 及 RANKL 蛋白表达水平。结果：Rg1可促进 RASFs 细胞 OPG mRNA 的表达,下调 RANKL mRNA 的表达;Rg1可抑制 RANKL 蛋白的表达。结论：Rg1可下调 RA 滑膜成纤维细胞 RANKL/OPG的表达,从而发挥骨保护作用。     

三七超微粉与细粉中三七皂苷R1及人参皂苷Rg1、Rb1的含量比较研究

目的测定三七超微粉中三七皂苷R1及人参皂苷Rg1、Rb1的含量,为三七超微粉质量评价提供依据。方法采用高效液相法,Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-水二元梯度洗脱;流速:1 mL.min-1;检测波长:203 nm;柱温:25℃。结果三七超微粉中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的平均含量均高于三七细粉,两者间的含量有显著性差异。结论超微粉质量优于细粉。本实验的含量测定方法简便、准确,可为三七超微粉的质量控制提供一定的参考依据。     

人参皂苷Rb1干预长春新碱抑制骨髓基质细胞增殖的研究

目的:探讨人参皂苷Rb1(GS Rb1)促进小鼠骨髓基质细胞(BMSCs)生长及干预长春新碱(VCR)抑制小鼠BMSCs增殖的作用。方法:正常对照组,GS Rb1(1.0、5.0、10.0、15.0μg/ml)诱导BMSCs增殖组,VCR(2.5、5.0、10.0、15.0μg/ml)抑制BM-SCs增殖组,GS Rb1干预VCR抑制BMSCs增殖组,应用MTT法测定BMSCs增殖。结果:①与正常对照组比较,GS Rb1 1.0～10.0μg/ml随浓度升高其促进BMSCs增殖也增加,GS Rb1为10.0μg/ml时差异具有显著性(P<0.05);VCR 2.5～15.0μg/ml随浓度的升高抑制BMSCs增殖也增强,VCR 5.0～15.0μg/ml时差异具有显著性(P<0.05);GS Rb1 1.0～15μg/ml各组与VCR 5.0～15.0μg/ml各组比较,以及GS Rb1 10.0μg/ml组与VCR 2.5μg/ml组比较其BMSCs增殖显著增加(P均<0.05)。②GS Rb1 5.0μg/ml、10.0μg/ml1、5.0μg/ml分别与VCR 5.0μg/ml培养,其能显著干预VCR对BMSCs增殖的抑制(P均<0.05)。结论:长春新碱明显抑制骨髓基质细胞生长;人参皂苷Rb1可促进骨髓基质细胞生长且具有干预长春新碱对骨髓基质细胞增殖的抑制作用。     

人参皂苷Rg_1可下调RA滑膜成纤维细胞RANKL/OPG的表达

目的:探讨人参皂苷Rg1对RA滑膜成纤维细胞RANKL/OPG表达的影响。方法:通过Real-time PCR及Western Blot方法检测RNAKL/OPG mRNA及RANKL蛋白表达水平。结果:Rg1可促进RASFs细胞OPG mRNA的表达,下调RANKL mRNA的表达;Rg1可抑制RANKL蛋白的表达。结论:Rg1可下调RA滑膜成纤维细胞RANKL/OPG的表达,从而发挥骨保护作用。     

人参皂苷对糖尿病大鼠肾组织基质金属蛋白酶9及Ⅳ型胶原表达的影响

目的研究人参皂苷对糖尿病大鼠肾组织基质金属蛋白酶9（MMP-9）及Ⅳ型胶原（Col-Ⅳ）表达的影响,从而探讨人参皂苷防治糖尿病肾脏病变的可能机制。方法糖尿病大鼠用人参皂苷治疗,肾标本用MMP-9、Col-Ⅳ单克隆抗体行免疫组化染色后经图像分析仪分析。结果糖尿病大鼠肾小球MMP-9表达较正常对照组明显下降,而肾间质MMP-9与正常对照组比较,有增高趋势。而应用人参皂苷治疗后可逆转上述改变。Col-Ⅳ的表达在肾小球和肾间质均较正常对照组上升,经人参皂苷治疗后下降。结论人参皂苷对糖尿病大鼠肾脏病变有部分保护作用,其机制可能与提高肾组织MMP-9,降低Col-Ⅳ的表达有关。     

人参皂苷Rb1对缺血大鼠海马神经元持续性钠电流的影响

目的:探讨人参皂甙Rb1对培养的大鼠海马神经元缺血损伤的保护作用。方法:采用全细胞膜片钳技术,观察不同浓度Rb1对大鼠海马神经元缺血后持续性钠电流变化率的影响,并与未用药时持续性钠电流缺血前后电流变化率进行比较。结果:在模拟缺血5min后,持续性钠电流幅度由缺血前的(87.8±10.1)pA变为(169.9±18.4)pA,升高(94.5±4.4)%(P<0.01)。在模拟缺血液中分别加入3种不同浓度(20,60,100μmol.L-1)Rb1,5min后电流变为(147.2±12.9),(140.2±8.9),(110.6±4.6)pA,与缺血前比较分别增加(70.8±4.5)%,(44.6±3.9)%,(49.5±4.2)%(P<0.01),与缺血对照组比较具有显著性差异。结论:人参皂甙Rb1在缺血时可抑制神经元持续性钠电流的增大幅度。     

人参二醇组皂苷及人参皂苷Rb1对体外培养黑色素细胞的影响

目的探讨人参二醇组皂苷、人参皂苷Rb1对体外培养的黑色素细胞及黑色素合成的调节作用及机制。方法①将黑色素细胞进行体外培养、传代;用人参二醇组皂苷、人参皂苷Rb1进行干扰,观察细胞的生长情况,测量细胞OD值;②免疫组织化学技术显示黑色素细胞的一氧化氮合酶的表达的改变。结果对照组与人参二醇组皂苷实验组、人参皂苷Rb1实验组的细胞生长OD值无显著性差异(P>0.05),对照组与人参二醇组皂苷实验组、人参皂苷Rb1实验组的一氧化氮合酶表达有显著性差异(P<0.05)。结论人参二醇组皂苷、人参皂苷Rb1对黑色素细胞的生长、增殖无影响,但对培养黑色素细胞一氧化氮合酶的表达具有抑制作用。     

反相高效液相色谱梯度洗脱法同时测定三七不同饮片中人参皂苷Rg1，Rb1含量

目的建立三七中人参皂苷Rg1,Rb1的含量测定方法,并比较加工炮制对三七不同饮片中人参皂苷Rg1,Rb1含量的影响。方法Zorbax SB-C18分析柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-0.05%磷酸溶液梯度洗脱:0~7 m in,25∶75;7~10 m in,35∶65,流速为1.1 m l/m in,柱温为室温,检测波长为205 nm。结果人参皂苷Rg1,Rb1回收率分别为99.46%,98.79%,RSD分别为1.87%,2.13%。各样品中,以三七生药粉中人参皂苷Rg1,Rb1含量为高。结论该方法稳定、准确、简便、快速,为三七质量评价提供参考。三七临床以生品打粉入药为宜。     

HPLC法同时测定高冠平胶囊中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re和人参皂苷Rb1的含量

目的:建立高效液相色谱法同时测定高冠平胶囊中三七、红参所含皂苷类成分含量的方法。方法:采用高效液相色谱法,色谱柱为HibarC18(250mm×4.6mm,5μm);流动相A为乙腈,B为水;流速为1.0mL.min-1;检测波长为203nm;洗脱程序:0～35min,A相为19%,B相为81%;35～85min,A相为19%→35%,B相为81%→65%;85～100min,A相为35%→19%,B相为65%→81%。结果:三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re和人参皂苷Rb1分别在0.4104～3.2832μg、2.0884～16.7072μg、1.222～9.776μg、2.0072～16.0576μg范围内呈良好的线性关系,其回收率分别为98.92%、98.97%、99.01%、99.25%,RSD分别为1.08%、1.06%、0.85%、1.15%。结论:本方法简便、准确、重现性好,可用于高冠平胶囊的质量控制。     

HPLC测定止鼾胶囊中三七皂苷R1与人参皂苷Rg1、Rb1含量

目的:测定止鼾胶囊中三七皂苷R1与人参皂苷Rg1、Rb1的含量。方法:采用HPLC,phenomenexC18柱(4.6mm×150mm,5μm),流动相:乙腈-水(20∶80)保持15min,15min后乙腈-水(40∶60)。流速:1.0mL.min-1,检测波长为203nm。结果:三七皂苷R1对照品在0.42～2.09μg线性关系良好,平均回收率为97.63%,RSD=1.16%(n=6);人参皂苷Rg1对照品在1.64～8.21μg线性关系良好,平均回收率为97.69%,RSD=1.49%(n=6);人参皂苷Rb1对照品在1.62～8.11μg线性关系良好,回收率为98.50%,RSD=1.70%(n=6)。结论:本实验三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的含量测定方法简单,结果稳定可靠,可作为止鼾胶囊中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的定量分析方法。     

愈伤灵胶囊中人参皂苷Rg1和Rb1的HPLC-ELSD法测定

目的建立愈伤灵胶囊中人参皂苷Rg1和Rb1的含量测定方法。方法采用HPLC-ELSD法,色谱柱为HypersilODS2(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相为乙腈-水梯度洗脱;蒸发光散射(ELSD)参数:漂移管温度为110℃,气体流量为3.02~3.05 SLPM。结果人参皂苷Rg1在2.272~11.360μg范围内线性关系良好,r=0.9991;人参皂苷Rb1在2.232~11.160μg范围内线性关系良好,r=0.9994;两者的平均回收率分别为96.6%,98.6%;RSD分别为1.7%,2.3%。结论该法简便、准确、可靠,可用于愈伤灵胶囊的质量控制。     

高效液相色谱法测定三七中三七皂苷R1及人参皂苷Rg1,Rb1的含量

目的测定三七药材中三七皂苷的含量.方法采用高效液相色谱法C18色谱柱,乙腈∶水(15∶85-12 min30∶70-45 min15∶85 v/v)梯度洗脱,检测波长203 nm.结果三七R1在72.8～109 μg*ml-1的范围内(r＝0.999 1),人参Rg1在68.8～860 μg*ml-1的范围内(r＝0.999 2),Rb1在62.8～785 μg*ml-1的范围内(r＝0.999 8),线性关系良好.平均回收率大于98%,方法的变异系数小于3.0%.结论方法简便,快速,准确,重现性好,可用于三七药材中三七皂苷的含量测定.     

HPLC法测定复方消脂胶囊中人参皂苷Rg_1、Re、Rb_1及三七皂苷R_1的含量

目的:建立复方消脂胶囊中人参皂苷Rg1、Re、Rb1及三七皂苷R1含量的分析方法。方法:采用高效液相色谱法,色谱柱:Phenomenex Luna C18(2)(4.6mm×250mm,5μm);流动相:以乙腈为流动相A,以水为流动相B;柱温:27℃(70min时降为20℃);检测波长:203nm;流速:1.0mL.min-1。结果:三七中人参皂苷Rg1线性范围为1.88～11.28μg/mL,回收率为100.26%,RSD为1.56%;人参皂苷Re线性范围为0.294～1.764μg/mL,回收率为100.68%,RSD为0.64%;人参皂苷Rb1线性范围为1.76～10.56μg/mL,回收率为100.53%,RSD为0.58%;三七皂苷R1线性范围为0.376～2.256μg/mL,回收率为99.21%,RSD为1.38%。人参皂苷Rg1、Re、Rb1及三七皂苷R1四种成分均达到良好分离,在测定范围内线性良好,回收率均在99%～101%之间。结论:所建立的含量测定方法简便可行、重复性好,可用于复方消脂胶囊的质量监控。     

高效液相色谱法测定脑得生胶囊中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1及人参皂苷Rb1的含量

目的建立高效液相色谱梯度洗脱法测定脑得生胶囊中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1及人参皂苷Rb1含量的方法。方法采用色谱柱KromasilC18;以流动相A(乙腈)与流动相B(水)进行梯度洗脱;柱温:25℃。结果三七皂苷R1在0.495～1.782μg(r=0.9999)、人参皂苷Rg1在2.65～9.54μg(r=0.9995)、人参皂苷Rb1在1.85～6.66μg(r=0.9999)范围内呈良好线性关系。加样回收率三七皂苷R1为100.60%(RSD=1.99%),人参皂苷Rg1为100.86%(RSD=2.19%),人参皂苷Rb1为98.83%(RSD=1.95%)。结论本法简便、准确、灵敏度高、重现性好,可用于该制剂的含量测定。     

脑得生软胶囊中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1含量的HPLC-ELSD法测定

目的建立脑得生软胶囊中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的含量测定方法。方法采用高效液相色谱-蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD),色谱柱Hypersil ODS-C18(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相乙腈-水,梯度洗脱(0→20 min,乙腈20%→40%);流速1.0 ml.min-1;柱温25℃;检测器参数:漂移管温度40℃,载气压力3.5 kPa。结果三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的线性范围分别为0.150～3.00μg(r=0.999 1)、0.753～15.06μg(r=0.999 6)和0.755～15.10μg(r=0.999 5),其回收率分别为98.41%(RSD=1.4%)、98.91%(RSD=1.2%)和99.34%(RSD=1.5%)。结论该方法简便、灵敏、重现性好,可作为脑得生软胶囊的质量控制方法。