呼吸道合胞病毒肺炎患儿外周血单个核细胞IFITM3、IFI27表达变化及其临床意义

目的 探讨呼吸道合胞病毒（RSV）肺炎患儿外周血单个核细胞干扰素诱导跨膜蛋白3(IFITM3)、干扰素诱导蛋白27(IFI27)表达变化及其临床意义。方法 选择RSV肺炎患儿90例（观察组）,其中病情程度低危28例、中危30例、高危32例,选择同期腹股沟斜疝患儿40例（对照组）,采集所有研究对象外周静脉血,采用荧光定量PCR法检测外周血单个核细胞IFITM3、IFI27表达,采用ELISA法检测血清IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ,采用肺功能检测仪检测第1秒用力呼气容积占预计值的百分比（FEV1%pred）、FEV1/用力肺活量（FVC）。采用Pearson相关分析法分析RSV肺炎患儿外周血单个核细胞IFITM3、IFI27表达与血清IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ水平及FEV1%pred、FEV1/FVC的关系。采用受试者工作特征（ROC）曲线分析外周血单个核细胞IFITM3、IFI27表达对RSV肺炎的诊断价值。结果 观察组外周血单个核细胞IFITM3、IFI27相对表达量及血清IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ水平均显著高于对照组,FEV1%pr...     

病毒感染时IFITM3与TRIM22和Foxp3表达及关联基因的富集分析

目的病毒感染时对IFITM3、TRIM22和FOXP3及基因进行富集分析。方法利用STRING作出IFITM3、TRIM22和FOXP3及其关联的50个基因互作网络图;利用DAVID数据库和KOBAS数据库对其进行GO分析和KEGG分析。应用荧光定量PCR对3基因的mRNA相对表达量进行相关性分析。结果通过STRING数据库分析得到3基因互作网络图,关联性大小与图中代表基因节点的圆圈大小呈正比(P<0.05)。经基因功能富集分析表明基因相关的信号通路与基因有关联的可信度较高(P<0.05)。在乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒和甲型流感病毒感染患者的外周血白细胞(P<0.05)分别为(4.462±3.441)、(4.406±4.415)和(4.013±0.081)中的IFITM3的mRNA与健康对照组差异有统计学意义(t=2.987,P<0.01)。结论机体感染病毒后,IFITM3与TRIM22之间、FOXP3与TRIM22之间可能存在着一定的相互作用,并参与机体对病毒感染的应答进程。     

肝癌组织IFITM3蛋白表达水平及其与肝细胞癌患者手术切除术后肝内肿瘤复发的相关性分析*

目的 探讨肝细胞癌（HCC）组织干扰素诱导跨膜蛋白 3（IFITM3）表达水平及其临床意义。方法 在我院接受根治性手术切除治疗的43例HCC患者,术中取癌组织和癌旁肝组织,分别采用Western blot法和免疫组化法检测组织IFITM3蛋白表达情况,比较肝内肿瘤复发与未复发患者癌组织IFITM3表达的差异。结果 经Western blot法检测肝癌组织IFITM3表达水平为（1.2386±0.1901）,显著高于癌旁组织的（0.9496±0.0995,t=8.832,P=0.000）;免疫组化法检测显示肝癌组织IFITM3蛋白阳性率为72.1%（31/43）,明显高于癌旁组织的14.0%（6/43,x²=29.647,P=0.000）;中分化肝癌组织IFITM3蛋白阳性率为90.9%（10/11）,低分化肝癌组织为95.2%（20/21）,均明显高于高分化组的9.1%（1/11）（x²=14.727, P=0.000;x²=23.748,P=0.000）;术后复发组癌组织IFITM3蛋白阳性率为81.0%（17/21）,未复发组为22.7%（5/22）,两者比较差异具有统计学意义（x²=14.578,P=0.000）。结论 HCC组织IFITM3蛋白呈高表达,且肝癌分化越差,IFITM3表达也越强,并可能与术后肿瘤复发有关。     

Pokemon、miR-451、IFITM1在非小细胞肺癌组织中的表达及与病理特征的相关性

目的 研究POK红系髓性致癌因子(Pokemon)、微小RNA(miR)-451、人干扰素诱导跨膜蛋白(IFITM)1在非小细胞肺癌组织中表达及与病理特征相关性。方法 选取非小细胞肺癌病理组织标本56例为非小细胞肺癌组;同时期正常组织标本32例为正常组。免疫组化染色观察Pokemon、IFITM1阳性表达,采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测miR-451表达。受试者工作特征(ROC)曲线分析Pokemon、miR-451、IFITM1对非小细胞肺癌的诊断价值。结果 非小细胞肺癌Pokemon阳性表达率为69.64%(39/56),IFITM1阳性表达为64.29%(36/56)。非小细胞肺癌组腺癌与鳞癌Pokemon、IFITM1阳性表达率均高于正常组,miR-451表达低于正常组,差异有统计学意义(P<0.05)。低分化、淋巴转移、Ⅲ～Ⅳ期Pokemon、IFITM1阳性表达高于中～高分化、无淋巴转移、Ⅰ～Ⅱ期;miR-451表达低于中～高分化、无淋巴转移、Ⅰ～Ⅱ期,差异有统计学意义(P<0.05)。Pokemon、miR-451、IFITM1三者联合对非小细胞肺...     

选择性环氧酶-2抑制剂NS-398对肝癌细胞周期和增殖的影响

非甾类抗炎药在肿瘤防治中的作用已经得到肯定。作为非甾类抗炎药之一的选择性环氧酶2(COX2)抑制剂因其不良反应较少而显示了比非选择性制剂更优越的应用前景。本实验以肝癌细胞HepG2为靶细胞观察了选择性COX2抑制剂NS-398对肝癌细胞增殖和细胞周期的影响。     

miR-645靶向EDN3调控肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的 探究微小RNA-645(miR-645)是否通过靶向调控内皮素(EDN)3影响肝癌细胞增殖、迁移及侵袭.方法 qRT-PCR法与Western印迹法分别检测miR-645及EDN3 mRNA在不同肝癌细胞及正常肝细胞中的表达;双荧光素酶报告基因系统检测miR-645对EDN3转录活性的影响;噻唑蓝(MTT)实验检...     

NSCLC患者血清AGR2水平在预后判断中的应用价值

目的：观察非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者化疗前后血清前梯度蛋白2(anterior gradient-2,AGR2)水平的变化及其对预后的影响。方法选取60例 NSCLC患者,给予吉西他滨联合顺铂化疗方案,并以20名健康体检者作为正常对照组,采用酶联免疫吸附测定法分别检测肺癌组化疗前后及正常对照组血清 AGR2含量,分析 AGR2水平与临床病理特征及预后的关系。结果肺癌组化疗前血清AGR2水平高于正常对照组[(14.41±4.12)μg/L vs (3.65±1.38)μg/L, t=7.657,P=0.000]。肺癌组化疗后血清 AGR2含量为(7.58±2.52)μg/L,显著低于化疗前水平(t=4.052,P=0.003)。NSCLC患者化疗前后血清 AGR2水平与肿瘤直径、临床分期、有无淋巴结转移有密切关系(P <0.05或P <0.01);COX 比例风险回归模型分析显示,化疗前血清 AGR2水平、淋巴结转移状态是影响患者生存时间的独立危险因素。结论血清 AGR2水平在评估 NSCLC 患者的化疗疗效及预后方面有着潜在的临床价值。     

麦冬皂苷D通过调控miR-519d-3p/EIF4E表达对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭的实验研究

背景麦冬皂苷D(ophiopogonin D, OPD)是中药麦冬提取物中重要的单体成分且具有抗癌作用,但是否具有抗肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)作用还未知.本研究假设OPD能够通过上调miR-519d-3p表达进而下调真核细胞翻译起始因子4E(eukaryotic translation initiation factor 4E, EIF4E)表达发挥抗HCC作用.目的探讨OPD对HCC细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能的作用机制.方法培养HCC细胞Hep G2和MHCC97,不同浓度(2.5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L)的OPD作用48h后,四甲基噻唑蓝染色法(methylthiazoletrazolium, MTT)检测细胞增殖, Transwell检测细胞迁移和侵袭,实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR, RT-q PCR)检测细胞中miR-519d-3p和EIF4E m RNA表达, Western blot检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、p21、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2, MMP-2)、MMP-9和EIF4E蛋白表达.双荧光素酶报告基因实验验证miR-519d-3p和EIF4E之间关系.转染miR-519d-3p mimics、si-EIF4E构建miR-519d-3p过表达或EIF4E表达抑制的Hep G2和MHCC97细胞, RT-q PCR检测细胞中miR-519d-3p表达或Western blot检测EIF4E蛋白表达验证转染效率. MTT、Transwell、Western b l o t分别检测过表达m i R-519d-3p或抑制E I F4E表达对Hep G2和MHCC97细胞增殖、迁移和侵袭,及Cyclin D1、p21、MMP-2和MMP-9蛋白表达的影响.结果与对照组比,OPD组Hep G2细胞抑制率显著升高(P 0.05),迁移和侵袭数显著降低(P 0.05),Hep G2细胞中Cyclin D1、MMP-2和MMP-9蛋白表达显著降低(P 0.05),p21蛋白表达显著升高(P 0.05),miR-519d-3p表达显著升高(P 0.05),EIF4Em RNA和蛋白表达显著降低(P0.05),且呈浓度依赖性. miR-519d-3p在Hep G2细胞中靶向负调控EIF4E表达.miR-519d-3p过表达或抑制EIF4E表达均可抑制Hep G2细胞增殖、迁移和侵袭.抑制miR-519d-3p表达部分逆转了OPD对Hep G2细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用.结论OPD可能通过调控miR-519d-3p/EIF4E表达抑制HCC细胞的增殖、迁移和侵袭.     

microRNA-21靶向调控Wnt2基因对肝癌细胞HepG2增殖与迁移的影响

目的探讨分析microRNA-21(miR-21)靶向调控Wnt2基因对肝癌细胞HepG2增殖与迁移的影响。方法采用实时荧光定量PCR法检测肝癌细胞HepG2及正常肝细胞株LO2 miR-21的表达情况。对HepG2细胞转染miR-21抑制剂,分析转染后抑制剂组与对照组miR-21的表达情况、细胞增殖、迁移及凋亡情况,检测两组细胞Wnt2蛋白表达水平,并采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-21与Wnt2基因的关系。计量资料两组间比较采用t检验。结果 HepG2细胞miR-21相对表达水平明显高于LO2细胞(1. 978±0. 035 vs 1. 586±0. 022,t=16. 424,P 0. 05)。转染miR-21抑制剂后,抑制剂组miR-21相对表达水平较对照组显著降低(0. 857±0. 017 vs 1. 684±0. 039,t=33. 669,P 0. 05)。转染miR-21抑制剂24、48、72 h后,抑制剂组HepG2细胞增殖能力均较对照组显著降低(P值均0. 05);抑制剂组穿过Tranwell小室的细胞数显著低于对照组(83. 72±15. 06 vs 147. 85±20. 64,t=4. 347,P 0. 05);抑制剂组细胞凋亡率明显高于对照组(25. 67%±3. 95%vs 10. 27%±2. 14%,t=5. 937,P 0. 05)。抑制剂组HepG2细胞的Wnt2相对表达水平明显低于对照组(0. 862±0. 127 vs 1. 306±0. 218,t=3. 048,P 0. 05)。TargetScan软件显示,miR-21抑制剂可显著抑制野生型Wnt2-3'UTR质粒转染细胞的荧光素酶活性(0. 972±0. 102 vs 0. 612±0. 092,t=4. 219,P 0. 05),而对突变型Wnt2-3'UTR质粒转染细胞的荧光素酶活性并无明显影响(0. 982±0. 093 vs 0. 911±0. 128,t=0. 972,P 0. 05)。结论抑制miR-21表达可有效抑制HepG2细胞增殖和迁移,促进HepG2细胞凋亡,并抑制Wnt信号通路的过度激活,可能成为肝癌治疗的潜在靶基因之一。     

IncRNA LINC02418通过调控miR-940表达对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响

背景 lncRNALINC02418在非小细胞肺癌、肺腺癌和结直肠癌等肿瘤中表达上调,促进肿瘤的发展进程.但是,LINC02418对肝癌发生发展的影响和机制还未知.LncBase Predicted v.2靶基因预测显示,LINC02418可能靶向结合miR-940.本研究假设LINC02418可靶向调控miR-940...     

miR-409-3p通过调控SLBP影响肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的 探讨miR-409-3p对茎环结合蛋白(SLBP)表达的调控作用及其对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响.方法 采用qRT-PCR、Western blotting分别检测肝癌组织、癌旁组织及细胞系中miR-409-3p、SLBP的表达水平;以表达量最低的肝癌细胞Hep3B为研究对象,分别将miR-NC、miR-40...     

RNA介导survivin基因沉默对肝癌细胞HepG2细胞株凋亡及增殖的影响

目的观察靶向封闭survivin基因对肝癌细胞株HepG2增殖和凋亡的影响,探讨survivin基因在肝癌的发生、发展中的作用。方法设计1对survivin-siRNA,体外转录制备siRNA。应用脂质体转染技术将survivin-siRNA转染肝癌细胞株HepG2,应用有荧光标记的非特异性小分子siRNA检测转染效率;RT-PCR检测survivin-mRNA水平;SABC免疫组化染色技术检测survivin蛋白表达情况;MTT法检测细胞生长情况;流式细胞仪分析细胞凋亡。结果转染survivin-siRNA可使HepG2细胞survivin-mRNA水平下降53.8%,并可使survivin蛋白表达明显减少;转染survivin-siRNA对细胞增殖及细胞凋亡无明显影响(P>0.05)。结论抑制survivin表达对肝癌细胞株HePG2凋亡及增殖无明显影响。提示survivin在肝癌细胞增殖与调亡调控中所起的作用可能并非是关键性的。     

买麻藤下调LINC00673表达对肝癌细胞增殖、迁移和细胞周期的影响

目的 探讨买麻藤是否通过下调LINC00673表达影响肝癌细胞增殖、迁移和细胞周期.方法 取肝癌细胞Huh-7,分别使用低、中、高剂量(20、40、60 ng/mL)的买麻藤处理;或在Huh-7细胞中转染LINC00673过表达质粒pcDNA-LINC00673、过表达空载质粒pcDNA,并使用高剂量的买麻藤处理.采用...     

四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化肝组织中SHP2表达与在体肝星状细胞活化及增殖的关系

目的 探讨四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化肝组织及在体肝星状细胞(HSC)的含SH2结构域的蛋白酪氨酸磷酸酶2(SHP2)表达变化与在体HSC活化及增殖的关系。方法 随机将50只健康雄性SD大鼠分为对照组(10只)、模型组(40只),采用腹腔注射四氯化碳法构建大鼠肝纤维化模型,Masson三色及HE染色检测大鼠肝组织的病理组织学变化,免疫组织化学染色检测大鼠肝组织的α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及SHP2表达,SHP2与α-SMA免疫荧光双标记检测大鼠肝组织中活化HSC的SHP2表达。结果 与对照组大鼠肝组织的α-SMA阳性表达积分光密度值(IOD)(0.09±0.01)相比,造模不同时间(2周、4周、6周、8周)大鼠纤维化肝组织的α-SMA阳性表达IOD (0.13±0.01、0.18±0.01、0.24±0.02、0.28±0.02)显著增加(P<0.05),并随着造模时间延长逐渐升高(P<0.05),即在体HSC的活化及增殖逐渐加快(α-SMA是HSC的活化标志)。造模不同时间(2周、4周、6周、8周)大鼠纤维化肝组织的SHP2阳性表达IOD (0.23±0.01、0.2...     

miR-145-3p在肝癌中的表达及其对肝癌细胞生长的调控作用

背景miR-145-3p在头颈癌、肺癌和胃癌等肿瘤可发挥抑癌的作用,而其在肝癌中的表达和作用并不清楚.目的探讨miR-145-3p在肝癌中的表达及其对肝癌细胞的增殖与凋亡的调控作用.方法用RT-q PCR法检测肝癌组织、癌旁组织、肝细胞株(Hep3B、Huh-7、Hep G2和SMMC-7721)与正常肝细胞株L-02中miR-145-3p的表达水平;将miR-145-3pmimic或miR-145-3pinhibitor转入Hep3B细胞,用CCK-8法、流式细胞术、TUNEL法和Westernblot法分别检测细胞活力、细胞周期、细胞凋亡和4型黏蛋白(mucin4, MUC4)表达.用荧光素酶报告基因实验鉴定miR-145-3p的靶基因.将pc DNA-MUC4转入已转染miR-145-3p mimic的细胞,用CCK-8法和TUNEL法分别检测细胞活力与细胞凋亡.结果miR-145-3p在肝癌组织和细胞中呈低表达.过表达miR-145-3p能抑制细胞增值和G0/G1期到S期转换,促进凋亡和降低MUC4表达;而敲减miR-145-3p则作用相反. MUC4是miR-145-3p的靶基因.过表达MUC4能逆转miR-145-3p mimic对细胞存活的抑制作用.结论miR-145-3p在肝癌低表达,且其表达与T分期呈负相关.过表达miR-145-3p可抑制肝癌细胞存活与生长,而敲减miR-145-3p能促进肝癌细胞存活与生长.     

血清AGR2、PGK1、MRP8/14表达情况与前列腺癌患者术后疗效评估及生存情况的相关性

目的:探讨血清前梯度蛋白2(AGR2)、磷酸甘油酸激酶1(PGK-1)、髓样相关蛋白8/14(MRP8/14)表达情况与前列腺癌(PCa)患者术后疗效评估及生存情况的相关性.方法:选取2016年1月至2017年1月收治的83例PCa患者为PCa组,另选取64例良性前列腺增生(BPH)患者为BPH组,50例健康男性为对照...     

IL-2基因修饰鼠肝癌细胞体内外生长特性的研究

用重组人白细胞介素-2(IL-2)含信号肽cDNA的缺陷型逆转录病毒。将人IL-2基因转导入小鼠H22肝癌细胞株。经PCR和RT—PCR检测证实了转导后的细胞DNA内确有NeoR和IL-2基因的存在和表达。用光镜和电镜观察了经IL-2基因转导的H22细胞体外形态，以MTT法检测细胞体外增殖能力和皮下接种后观察肿瘤生长能力的结果表明，经IL-2基因转导的鼠肝癌细胞体外增殖能力没有明显的变化，但体内致瘤性却显著下降，丝裂霉素处理后作为瘤苗接种能抑制其后野生型H22细胞的再次攻击。本研究为制备新型瘤苗打下了基础。     

羽扇豆醇影响肝癌细胞株SMMC-7721增殖与凋亡的机制

目的:讨论羽扇豆醇影响肝癌细胞株SMMC-7721增殖及促进其凋亡作用机制.方法:使用不同浓度(0、2、5、10、20μg/m L)的羽扇豆醇在不同处理时间(24、36、48 h)下,处理S M M C-7721细胞株后,通过MTT法检测SMMC-7721细胞增殖情况;对使用不同浓度的羽扇豆醇处理48 h后的SMMC-7721细胞,利用流式细胞仪检测S M M C-7721细胞的细胞周期以及细胞凋亡情况,还使用Western blot检测细胞细胞增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear a n t i g e n,P C N A)、B淋巴细胞瘤-2(B-c e l l lymphoma-2,Bcl-2)基因及Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)蛋白的表达情况,最后我们通过免疫组织化学的方式检测在裸鼠体内接种的SMMC-7721细胞瘤体的微血管密度(microvessel density,M V D)值,检测羽扇豆醇对抑制肿瘤血管生成的作用.结果:相较于对照组,通过不同浓度的羽扇豆醇处理后的SMMC-7721细胞增殖水平均受到不同程度的抑制,而且既显示出量效关系又显示出时效关系;受到羽扇豆醇体外诱导处理后的SMMC-7721细胞能够使G0/G1期受到阻滞,甚至出现凋亡现象,SMMC-7721细胞的PCNA和Bcl-2蛋白表达情况下调,Bax蛋白的表达情况上调(P0.05).肿瘤瘤体MVD值下降(P0.01).结论:SMMC-7721细胞的增殖会因为羽扇豆醇的处理而受到抑制,并且还会因为羽扇豆醇的处理而出现凋亡.羽扇豆醇还可以抑制肿瘤瘤体血管生成.