汞染毒大鼠脊髓及脊神经节中胶质纤维酸性蛋白的表达

为了探讨职业性汞中毒疼痛机制及有效治疗方法,笔者对汞染毒大鼠脊髓及脊神经节中胶质纤维酸性蛋白的表达进行了观察.     

HgCl2中毒大鼠脊髓胶质纤维酸性蛋白表达上调

目的 观察HgCl2对大鼠脊髓星形胶质细胞的影响.方法 SD大鼠30只,雌雄各半,体重160～200 g.随机分为3组,每组10只(5♀,5 ♂).①大剂量组,按17 mg/kg(1/4LD50)经口灌胃HgCl2溶液,每天1次.②小剂量组,按85 mg/kg(1/8LD50)经口灌胃HgCl2溶液,每天1次.③对照组,经口灌胃生理盐水2ml,每天1次.三组均连续灌胃(20±2)d,染汞组制成亚急性汞中毒模型后,各组均处死5只雄鼠,留5只雌鼠作药物干预实验.用二巯丙磺钠(DMPS)按28 mg/kg腹腔注射驱汞2疗程,在此基础上,大剂量组加用己酮可可碱(POF),小剂量组仅用DMPS.实验结束后处死全部动物,灌注固定取出脊髓L5-6节并制成病理切片.用免疫组化SABC法测定脊髓胶质纤维酸性蛋白(GFAP).结果 两染汞组GFAP平均灰度均显著低于对照组,阳性细胞率均显著高于对照组.DMPS+POF显著降低GFAP阳性细胞率,提高平均灰度值,单纯应用DMPS无此作用.结论 亚急性HgCl2中毒大鼠脊髓GFAP表达上调,POF能够有效抑制脊髓星形胶质细胞激活.     

汞中毒大鼠脊髓GFAP表达与药物干预研究

目的观察HgCl2对大鼠脊髓星形胶质细胞的影响。方法SD大鼠30只,雌雄各半,体重160~200 g。随机分为3组,每组10只。大剂量组按17 mg/kg（1/4 LD50）经口灌胃HgCl2溶液,1次/d。小剂量组按8.5 mg/kg（1/8 LD50）经口灌胃HgCl2溶液,1次/d。对照组经口灌胃生理盐水2 ml,1次/d,3组均连续灌胃（20±2）d。染汞组建成亚急性汞中毒模型后,各组均处死5只雄鼠,留5只雌鼠作药物干预试验。染汞组用二巯丙磺钠注射液（DMPS）按28 mg/kg腹腔注射驱汞2个疗程,小剂量组仅用DMPS,大剂量组在用DMPS的期间内,按29.22/（kg.d）经口灌胃己酮可可碱（POF）溶液14 d。实验结束后处死全部动物,灌注固定取出脊髓L5-6节并制成病理切片。用免疫组化链酶亲和素-生物素-过氧化物酶聚合物（SABC）法测定脊髓胶质纤维酸性蛋白（GFAP）。结果大、小剂量组GFAP平均灰度均显著低于对照组,阳性细胞率均显著高于对照组。DMPS＋POF显著降低GFAP阳性细胞率,提高平均灰度值,单纯应用DMPS无此作用。结论亚急性HgCl2中毒大鼠脊髓GFAP表达上调,POF能够有效抑制星形胶质细胞激活。     

水囊压迫大鼠脑组织致星形胶质细胞中胶质纤维酸性蛋白的变化

目的 研究水囊压迫大鼠颅脑造成损伤后星形胶质细胞的反应.方法 将改装后的5F漂浮导管球囊部位全部插入颅内硬膜外后,注射0.5 ml无菌生理盐水人球囊使其扩张并维持压力2 h.于伤后不同时间将大鼠处死,取脑组织进行HE染色和胶质纤维酸性蛋白(Glial fibrillary acidic protein,GFAP)免疫组...     

母婴分离对大鼠成年后海马星形胶质细胞的影响

[目的]研究生后早期长期反复母婴分离对子代大鼠成年后海马星形胶质胶质细胞的影响.[方法]新生大鼠分为母婴分离组和对照组,每组分别有雄性和雌性大鼠各10只.母婴分离组大鼠于生后第2 d至生后第14 d每日与母鼠分离3 h,对照组大鼠不受干扰.各组大鼠于生后第60 d处死.采用免疫组化方法分析各组大鼠背侧和腹侧海马星形胶质细胞标记物(GFAP和S100β)的表达.[结果]双因素方差分析显示:与对照组相比,母婴分离组雄性大鼠成年后腹侧海马GFAP和S100β染色阳性细胞数显著减少(P＜0.05);背侧海马星形胶质细胞中GFAP和S100β平均光密度明显下降(P＜0.001).[结论]母婴分离可使子代雄性大鼠成年后腹侧海马星形胶质细胞数量减少,背侧海马星形胶质细胞中GFAP和S100β含量下降.     

大鼠脊髓损伤后脑和脊髓胶质纤维酸性蛋白表达变化研究

目的研究大鼠脊髓损伤后脑和脊髓胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的变化情况。方法建立大鼠脊髓损伤模型,用免疫组织化学方法对脑和脊髓GFAP阳性细胞进行定性和定量分析,邻位切片尼氏染色对阳性细胞所在的区域或核团进行定位。结果脊髓损伤后1、2、24、72 h组的第一运动皮质区(M1),第一躯体感觉皮质区(S1)、海马区(CA1、CA3)、齿状回(DG)、丘脑腹后核(VP)、延髓和损伤处脊髓的阳性细胞体明显肥大,突起分枝增多,呈现出被激活的增殖状态,细胞数明显增多,与正常组比较差异有统计学意义(P<0.01)。损伤处脊髓星形胶质细胞增殖幅度最大,其形态变化也最明显。海马CA3区和损伤部位在术后24 h和72 h反应性星形胶质细胞比较差异无统计学意义(P>0.05),其余组间比较均有统计学差异(P<0.01)。结论脊髓损伤后,反应性星形胶质细胞在损伤早期就出现增殖,表现为在相应的功能区域出现形态和数量上的变化,而随着时间的推移,其增殖的幅度会下降,但反应性星形胶质细胞的数目仍高于正常水平。     

高热对星形胶质细胞GFAP表达的影响

目的　研究高热对大脑星形胶质细胞中胶质原纤维酸性蛋白 (glialfibrillaryacidicprotein ,GFAP)表达的影响及后果。方法　分离培养脑星形胶质细胞 ;42℃分别作用细胞 1、2、4h后 ,进行免疫学染色 ,观察GFAP表达的变化 ;采用改良Lowry法测定星形胶质细胞条件培养液中总蛋白含量。结果　在高温条件下 ,脑星形胶质细胞反应性增生。 42℃作用 4h后 ,GFAP表达显著减少 ,细胞条件培养液中总蛋白含量减少 2 6μg/ml(由 3 83 μg/ml降低到 3 5 7μg/ml)。 结论　高热条件可以下调脑星形胶质细胞GFAP的表达 ,影响星形胶质细胞生物学功能 ,在中枢损伤的发生发展过程中发挥作用     

过量氟暴露对体内外星形胶质细胞及其胶质纤维酸性蛋白表达的影响

目的探讨过量氟暴露对体内外星形胶质细胞及其胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响。方法 (1)体内实验:选择24只SPF级SD大鼠, 雌雄各半, 按性别、体重采用随机数字表法分为对照组和染氟组, 每组12只, 分别饮用自来水配制的< 1 mg/L和50 mg/L氟化钠溶液, 饲养6个月。实验结束后采用免疫荧光法、免疫组织化学法和蛋白质免疫印迹法检测大鼠脑组织GFAP蛋白表达水平。(2)体外实验:分离成年(6月龄)大鼠大脑皮质星形胶质细胞进行原代培养(4 mmol/L氟化钠溶液培养24 h), 采用免疫荧光法鉴定星形胶质细胞, 实时荧光定量PCR法和蛋白质免疫印迹法分别检测GFAP mRNA及蛋白表达水平, 流式细胞术检测星形胶质细胞凋亡情况及钙离子含量。结果 (1)体内实验:免疫荧光法、免疫组织化学法、蛋白质免疫印迹法检测结果均显示, 染氟组大鼠脑组织GFAP蛋白表达水平高于对照组(0.440 ± 0.200比0.250 ± 0.120, t =-5.93, P = 0.027;0.270 ± 0.020比0.240 ± 0.050, t =-4.87, P = 0.040;1....     

Propentofylline对体外培养的星形胶质细胞GFAP表达的影响

目的观察体外培养的星形胶质细胞损伤后，propentofylline对其胶质纤维酸性蛋白（GFAP）表迭的改变，探讨propentofylline对损伤星形胶质细胞的影响。方法建立体外培养大鼠纯化的星形胶质细胞机械损伤模型，利用免疫细胞化学方法观察propentofylline干预后星形胶质细胞GFAP的变化，星形肢质细胞机械损伤后星形胶质细胞随机分为2组（n=2）：药物干预组、对照组。药物干预组子propentofylline处理，用免疫细胞化学染色的方法和图像分析测定法观察星形胶质细胞GFAP蛋白表达的变化及星形胶质细胞的数量。结果机械损伤后12h后损伤边缘区GFAP细胞数目增加、胞体肥大，GFAP表达增强，propentofylline干预后GFAP表达增强被抑制，胞体肥大程度减轻，GFAP阳性细胞数减少。结论propentofylline对损伤后的体外培养的星形胶质细胞的活性具有明显的调节作用。     

亚急性砷暴露对小鼠海马区胶质纤维酸性蛋白表达的影响

目的探讨亚急性砷暴露对小鼠海马各区星形胶质细胞的影响。方法将昆明种小鼠随机分为对照组及低、中和高剂量染毒组。以自由饮水方式饮含砷水,对照组小鼠饮蒸馏水。染毒8周后,心脏灌流固定,取大脑,进行胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫组化染色,分析砷对小鼠海马各区GFAP表达情况,判断其对星形胶质细胞的影响。结果雌鼠海马CA1、CA3和DG区的GFAP积分光密度(IOD)值均先升高而后下降;在海马CA1和DG区,低剂量组的IOD值最高,并显著高于对照组,而高剂量组的IOD值则显著低于对照组;但在海马CA3区,低、中剂量组的IOD值均显著高于对照组,以中剂量组的IOD值最高,而高剂量组则显著低于对照组。雄鼠海马CA1和DG区GFAP的IOD值也先升高而后下降,中剂量组的IOD值最高,并显著高于对照组;但在海马CA3区,IOD值随染砷剂量的增加不断增高,高剂量组的IOD值最高,并显著高于对照组。结论低水平砷暴露可使小鼠海马星形胶质细胞活化,而高水平砷暴露会损伤海马星形胶质细胞;雌鼠海马星形胶质细胞对砷作用比雄鼠敏感;而无论雌、雄鼠,其海马CA1和DG区星形胶质细胞对砷的作用比CA3区敏感。 更多还原     

神经营养素-3对大鼠脊髓损伤后神经丝蛋白及胶质纤维酸性蛋白表达的影响及意义

目的研究神经营养素-3(NT-3)对大鼠脊髓损伤后神经元中丝蛋白(NF200)及星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响,探讨NT-3在脊髓损伤修复中的作用。方法SD大鼠24只,分为假手术组、损伤对照组和NT-3组,每组8只,于损伤前和损伤后1 d、7 d、14 d、21 d和28 d用BBB评分评定大鼠运动功能,然后处死动物用免疫组化染色及图像分析方法观察NF200及星形胶质细胞GFAP的表达。结果BBB评分,14 d、21 d和28 d点NT-3组明显高于损伤对照组;脊髓损伤后NF200及GFAP表达增加,且NT-3干预后表达更为明显,与其他2组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论NT-3促进星形胶质细胞增生及神经元功能的活跃,可能是促进神经纤维再生的一个重要因素。     

丙酸睾酮对HIBD新生大鼠海马、皮层GFAP表达的影响及其意义

目的:观察新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后不同时间点皮层与海马胶质原纤维酸性蛋白(gial fibrillaryacidic protein,GFAP)表达情况,以及不同剂量丙酸睾酮(T)预处理后对其表达的影响,揭示丙酸睾酮对HIBD新生大鼠脑保护作用及其时间、量效关系。方法:200只3日龄SD大鼠随机分为3组,T预处理组80只、HIBD对照组80只和假手术组40只;T组和HIBD对照组再各自分为30 mg/kg组、120 mg/kg组。T组中每剂量组每只大鼠均给丙酸睾酮,HIBD对照组中每剂量组每只大鼠均给相应ml数花生油,方法同T组。7日龄时T组和HIBD对照组制作HIBD模型,对比观察HI后不同组别及各剂量组在24、48、72 h、7天和14天海马和大脑皮层GFAP表达的动态变化。结果:HIBD对照组脑组织30、120 mg/kg组GFAP的平均光密度数值均显著高于相同时间点的假手术组,其差异具有统计学意义(P<0.01)。T干预后,海马、皮层30、120 mg/kg两个剂量组GFAP的平均光密度较HIBD对照组各相同剂量组在相同时点GFAP平均光密度量显著减少,且差异有统计学意义(P<0.01)。HIBD对照组以及T组内的两个剂量组之间比较,在海马、皮层相同时间点GFAP的表达量的差异无统计学意义(P>0.05)。结论:新生大鼠HIBD后,脑组织GFAP的表达增加。T干预可抑制脑组织因HIBD所致的GFAP的过度表达,有抑制脑损伤区星形胶质细胞的过度增殖分裂,减少胶质瘢痕形成对神经轴突修复的不利影响的脑保护作用。     

牵拉性脊髓损伤后FK506对半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3凋亡通路的干预作用

目的：探讨大鼠脊髓牵拉性损伤后应用FK506对半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）凋亡通路的干预作用。方法：成年雄性Wistar大鼠96只，随机分为脊髓牵拉性损伤后应用FK506治疗组和应用生理盐水对照组．于伤后不同时间点（6h、1、3、7、14、21d）取材，应用尼氏染色观察神经元病理变化，免疫组化和图像定量分析法检测Caspase-3蛋白表达，四肽酶荧光底物法检测Caspase-3活性水平，原位末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导duTP标记技术观察神经细胞凋亡。结果：尼氏染色显示治疗组病理学改变明显轻于对照组；治疗组和对照组均存在Caspase-3的表达和神经细胞凋亡，两者都于伤后7d达高峰，但治疗组较对照组明显减少（P〈0．05，P〈0．01）；Caspase-3活性检测治疗组与对照组相比显著降低（P〈0．05，P〈0．01）。结论：FK506能抑制Caspase-3蛋白的表达，降低Caspase-3活性，减少神经细胞凋亡从而减轻继发性脊髓损害。     

三七总皂苷对大鼠脊髓半横断损伤后神经保护作用及cPLA2相关机制

目的 探讨三七总皂苷(panax notoginseng saponins,PNS)对大鼠脊髓半横断损伤后继发性损害的保护作用及相关机制.方法 成年SD大鼠55只按随机数字表法分为3组:假手术组(n=5),脊髓损伤组(n=25),PNS干预组(n=25).造模成功后1、3、7、14、21d应用BBB评分标准对大鼠后肢运动功能进行行为学评分,相应时间点取材后对大鼠脊髓组织进行病理形态学观察、免疫组化分析.结果 PNS干预后3、7、14、21d大鼠运动功能恢复显著高于损伤组.尼氏染色示神经元坏死减少,形态完整.PNS组胞浆型磷脂酶A(cPLA2)阳性细胞数减少,神经元形态完整,cPLA2表达升高被抑制.结论PNS可通过抑制cPLA2表达在脊髓损伤中发挥神经保护作用,促进运动功能恢复.     

GFAP及PKC在电磁脉冲辐照大鼠额叶皮层中的表达及意义

目的探讨胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)及蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)在电磁脉冲(electromagnetic pulse,EMP)辐照成年雄性SD大鼠额叶皮层中的含量变化及其意义。方法将成年雄性SD大鼠随机分为假辐照组(sham)和辐照组,辐照组又按辐照后取材时间不同分为0.5 h,1 h,3 h,6 h和12 h。采用免疫组化法分析EMP辐照后额叶皮层中GFAP表达情况,采用酶联免疫吸附实验(ELISA)分析额叶皮层中总PKC含量;选用Western Blot法分析PKC(PKC-α,PKC-βⅠ,PKC-βⅡ),PKC-α和PKC-βⅡ蛋白含量。结果 EMP辐照后额叶皮层中GFAP阳性表达细胞数增加,胞体增大,且峰值均出现在辐照后3 h(P<0.05)。额叶皮层中总PKC含量在EMP辐照后0.5 h增加且达到峰值(P<0.05),之后逐渐恢复,至12 h达到假辐照组水平;Western Blot结果显示PKC及PKC-βⅡ在EMP辐照后0.5 h和1 h表达量增加(P<0.05),之后恢复至假辐照组水平,PKC-α在...     

胰岛素样生长因子-1在急性脊髓损伤后对胶质细胞源性神经营养因子表达的影响

目的：观察急性脊髓损伤后胰岛素生长因子-1（IGF-1）对胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）表达的影响。方法：Wistar成年大鼠以改良Allen打击装置制成脊髓损伤（SCI）模型。将大鼠随机分成2组：对照组，实验组（在脊髓损伤节段注入IGF=1），2组分别在4个时相点（脊髓损伤后6、12、24、48h）采用半定量逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）技术观察GDNFmRNA在损伤脊髓中的表达情况。同时应用Tarlov评分法测定各组大鼠后肢的运动功能。结果：脊髓损伤后的4个时相点，实验组GDNF的表达较对照组明显增强，组间差异均具有统计学意义（P〈0．05）。实验组大鼠的后肢运动功能评分较对照组高，组间差异也具有统计学意义（P〈0．05）。结论：IGF-1可以促进脊髓损伤后大鼠肢体运动功能的恢复和损伤脊髓的修复。并且上调损伤脊髓段GD-NF的表达，其可能是IGF-1促进脊髓损伤修复的机制之一。     

鞘内注射氯普鲁卡因对大鼠脊髓的神经毒性

目的评价鞘内注射氯普鲁卡因对大鼠脊髓的神经毒性。方法选取鞘内置管成功的清洁级SD大鼠40只。体重180～250g,随机分为4组（n=10）：分别鞘内注射生理盐水40μl（NS组）、2％氯普鲁卡因40μl（CP1组）、3％氯普鲁卡因25μl（CP2组）、3％氯普鲁卡因40μl（CP3组）。注药后记录运动阻滞显效时间,于注药前、注药后10、30、60、120和150min（T1-6）对大鼠双后肢运动阻滞进行评分;注药后第3天取腰段脊髓组织,HE染色后光镜观察病理学结果并行损伤评分。结果CP1组、CR组和CB组出现双后肢瘫痪时间递减（P〈0．01）。与NS组比较,CP1组和CP2组T2—4时、CP3组L—S时双后肢运动阻滞评分升高（P〈0．05）;与CB组比较,CP1组和CP2组T4-5时双后肢运动阻滞评分降低。与CP1组和CR组比较,CP3组脊髓组织损伤评分升高（P〈0．05）,病理学损伤较重。结论大剂量3％的氯普鲁卡因可能会对脊髓组织造成损害。