还原青蒿素合并呋喃双胺预防日本血吸虫病的研究

我们于1981—01985年将我国创制的还原青蒿素和呋喃双胺合并应用(以下简称青蒿—双胺),进行杀灭早期童虫的预防血吸虫病作用的实验研究和现场临床研究 1、预防小鼠血吸虫病的效果 (1) 不同间歇时间给药杀灭童虫的效果比较:以感染后第7天开始给药,间歇7天给药一次组的效果最佳,其成虫率达95.6％,减雌率92.9％,无虫鼠数7/10,预防血吸虫病的给药间歇时间以7天一次为宜。     

吡喹酮对映体及吡喹酮三种衍生物的抗血吸虫作用

新型广谱抗蠕虫药吡喹酮的母核吡喹异喹啉环的11b位上有一不对称的碳原子,具有左旋和右旋两种对映体。目前临床主要用其消旋体。左旋吡喹酮250mg/kg和417mg/kg灌胃一次治疗人工感染日本血吸虫小鼠,减虫率分别为50.0％和71.9％。右旋吡喹酮用上述两种同样剂量治疗感染小鼠,减虫率分别为-5.9％和4.3％,几无抗虫活性。     

青蒿琥酯抗血吸虫病作用研究

青蒿琥酯是一种重要的青蒿素类衍生物，不仅具有抗疟作用，而且能有效杀灭血吸虫童虫，预防血吸虫病。本文综述了青蒿琥酯体内、体外抗血吸虫作用、现场应用以及药物作用机制的研究进展。     

日本血吸虫酪蛋白激酶2α的表达、定位与免疫效果观察

目的:克隆、表达日本血吸虫酪蛋白激酶2α(SjCK2α)基因,并定位表达,观察其表达产物的免疫效果。方法:首先针对SjCK2α基因的开放阅读框设计特异性引物,以日本血吸虫成虫RNA逆转录后的cDNA为模板,扩增目的基因;并使其带上限制性内切酶酶切位点,获得SjCK2α的目的基因片段,回收后连入表达质粒pET28a(+)。重组质粒pET28a(+)-SjCK2α转化入BL21细胞,构建表达菌;并用IPTG诱导表达菌的表达;用Ni-NTA树脂纯化后透析,收集重组目的蛋白。用重组蛋白免疫家兔制备多克隆血清。免疫组化法对皮肤型童虫、肺型童虫和常规培养肺型童虫进行组织学定位。将重组蛋白免疫小鼠,再用日本血吸虫尾蚴攻击感染,6周后剖杀,灌注法收集日本血吸虫成虫,计算减虫率;摘取肝脏组织剪碎、KOH消化后收集虫卵,计算减卵率;摘取眼球取血,收集血清,ELISA检测细胞因子干扰素γ(IFN-γ)和白细胞介素4(IL-4)的含量。另设感染对照组和化工剂对照组进行比较分析。结果:扩增的目的基因SjCK2α基因片段长度为1047bp,构建的重组质粒pET28a(+)-SjCK2α转化入BL21细胞后,构建的表达菌在IPTG诱导下获得大量重组蛋白,纯化后免疫家兔获得多克隆血清。免疫组化染色发现,SjCK2α主要定位于童虫表面。将重组蛋白免疫小鼠后,攻击感染6周后获得15%的减虫率和17%的减卵率,与对照组的减虫率和减卵率差异无统计学意义(P0.05);此时,感染对照组的IFN-γ和IL-4含量分别为42.77±12.11和17.31±9.13,佐剂对照组的IFN-γ和IL-4的含量分别为30.99±16.55和18.65±7.52,重组蛋白免疫组的IFN-γ和IL-4的含量分别为36.19±14.56和9.90±5.20,三组间两指标比较均无统计学差异(P0.05)。结论:本实验成功克隆和表达SjCK2α基因,其主要表达于童虫表面;SjCK2α免疫小鼠后未能获得免疫性保护。     

噬菌体表达短肽模拟日本血吸虫肝门型童虫表膜抗原表位的研究

目的　从噬菌体随机 12肽库免疫筛选日本血吸虫肝门型童虫表膜抗原 (SjHmAg)的模拟短肽分子 ,探讨其抗日本血吸虫的免疫保护效果。方法　以纯化的SjHmAg免疫血清IgG为配基免疫筛选噬菌体 12肽库 ,按吸附 洗脱 扩增的淘洗过程进行 3轮筛选 ;随机挑取噬菌体克隆用ELISA检测其特异性 ,并测序 ;用混和噬菌体克隆皮下免疫小鼠 3次 ,分别在 0、2、4周进行 ,第 6周每鼠经腹部感染 4 0± 1条日本血吸虫尾蚴 ,4 2d后剖杀冲虫 ,观察减虫及减卵效果。结果　经 3轮筛选 ,特异性噬菌体得到有效的富集 ,产出率为第一轮的 2 10倍 ;随机挑取 2 4个噬菌体克隆经ELISA鉴定 ,有 2 1个克隆能与SjHmAg免疫血清特异性反应 ;自动测序仪测序 ,结果发现它们的外源肽具核心序列 (STRKD) ;与对照组相比 ,混和噬菌体克隆免疫小鼠的减虫率为 16 .2 % ,减卵率为 5 9.0 %。结论　利用噬菌体展示技术可获得模拟SjHmAg短肽 ,这些短肽分子能诱导部分抗日本血吸虫保护力。     

日本血吸虫中国株次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶真核重组质粒的构建及其动物免疫保护性研究

目的 克隆日本血吸虫次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶（SjHGPRT）全长编码基因，研究其DNA疫苗诱导小鼠的免疫保护作用。方法 将全长SjHGPRT基因克隆到真核表达载体pcD—NA3上，构建真核表达质粒pcDNA3-SjHGPRT，用经双酶切、PCR和测序鉴定正确的真核表达质粒免疫昆明小鼠3次，每次间隙2周，第3次免疫后第2周进行日本血吸虫尾蚴攻击感染，感染后42d处死小鼠，收集成虫、肝脏和24h粪便，计算减虫率和减卵率。结果 成功构建真核表达质粒pcDNA3-SjHGPRT。动物免疫实验结果显示：pcDNA3-SjHGPRT疫苗组减虫率23．17％、肝减卵率41．64％、粪减卵率40．57％，每雌虫子宫内卵减卵率26．95％，与对照组相比差异均具有统计学意义（P〈0．05，P〈0．01）。每雌虫子宫内卵减卵率及肝、粪减卵率明显高于减虫率，表明pcDNA3-SjHGPRT疫苗可能主要在抗血吸虫卵胚发育或抗生殖方面起作用。结论 日本血吸虫次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶DNA疫苗可诱导抗血吸虫卵胚发育或抗生殖作用，具有潜在的疫苗研究与开发价值。     

青蒿琥酯对曼氏血吸虫雌虫生殖作用的影响

目的 :通过观察青蒿琥酯对曼氏血吸虫雌虫产卵的影响 ,分析药物的抗生殖作用。方法 :小鼠尾部接触感染曼氏血吸虫尾蚴后口服不同剂量青蒿琥酯 ,灌流后收集虫体 ,记数。解剖小鼠取出肝、肠 ,组织溶解后计数虫卵 ,分析药物作用后雌虫平均产卵量的变化 ;收集无损虫体进行体外培养 ,计数雌虫体外产卵并观察虫卵形态。结果 :在 30 0mg kg和 5 0 0mg kg给药组小鼠的肝、肠中未查到虫卵 ,10 0mg kg给药组小鼠的雌虫平均产卵量与对照组存在极显著性差异 ;体外培养结果中 ,30 0mg kg和 5 0 0mg kg给药组的虫体未见产卵 ,10 0mg kg给药组雌虫平均产卵量与对照组存在显著差异。显微观察发现 10 0mg kg给药组雌虫体外培养所产的虫卵多外附泡状物 ,侧棘受损 ,虫卵结构异常。结论 :青蒿琥酯能降低或完全抑制存活雌虫的平均产卵量、导致雌虫异常卵的产生 ,具有抗曼氏血吸虫雌虫生殖的作用 ,能有效预防曼氏血吸虫病的发生和传播     

青蒿琥酯预防日本血吸虫病的研究

青蒿琥酯(Artesunate)是由桂林制药厂研制成功的高效抗疟药物。治疗恶性疟,间日疟、及凶险型疟疾具有高效、速效、低毒等特点。我所就该药预防日本血吸虫病的效果进行了研究,实验和现场试验证明、青蒿琥酯能杀灭进入宿主体内的血吸虫童虫、防止血吸虫虫卵肉芽肿的危害,从而使宿主免患血吸虫病。     

伊维菌素驱除犬钩虫和人钩虫感染的效果观察

为观察伊维菌素驱治犬钩虫和人钩虫感染的效果,采用伊维菌素6.25、12.5和25μg/kg灌服治疗犬钩虫感染犬,同时用10.6mg/kg阿苯哒唑作对照;采用伊维菌素0.2mg/kg顿服治疗人钩虫感染者,并用400mg/次阿苯哒唑作对照。结果6.25、12.5和25μg/kg伊维菌素对犬钩虫治愈率分别为20%(1/5)、60%(3/5)和100.0%(5/5);而对照组阿苯哒唑对犬钩虫治愈率为0(0/5)。伊维菌素与阿苯哒唑对人钩虫感染者的治愈率分别为20.5%(9/44)和76.5%(26/34),对十二指肠钩虫较美洲钩虫敏感。因此,伊维菌素治疗犬钩虫感染疗效优于阿苯哒唑,治疗人钩虫感染疗效不及阿苯哒唑。     

青萬素衍生物预防血吸虫病的初步实验研究

对一硝基苯甲酰还原青蒿素(代号79019)为上海医工院合成的又一种青蒿素衍生物。一、急性毒性试验:79019对小鼠口服与肌肉注射的急性LD(50)分别为:1307.12mg/kg(95％可信限为1159.9-1446.3mg/kg);177.5mg/kg(158.5-192.6mg/kg);     

日本血吸虫童虫细胞免疫母鼠的子代抗攻击感染的保护性研究

目的以2种日本血吸虫易感小鼠为动物模型,探讨日本血吸虫(Schistosoma japonicum,S.j)童虫细胞免疫母鼠的子代鼠抗日本血吸虫攻击感染的应答水平。方法用S.j童虫细胞分别免疫昆明母鼠和Balb/c母鼠,将免疫母鼠或正常母鼠与相应鼠种的正常公鼠进行配对饲养,用其子代鼠建立2个感染模型共4组(A1:免疫昆明子代感染组;B1:正常昆明子代感染对照组;A2:免疫Balb/c子代感染组;B2:正常Balb/c子代感染对照组);计数A1、B1、A2、B2组经日本血吸虫尾蚴攻击感染后从其子代鼠体内收获的虫荷和每克肝卵荷(liver eggs per gram,LEPG);测量上述4组小鼠经HE染色后的肝组织切片内虫卵肉芽肿的大小;间接ELISA检测血清中抗S.j可溶性童虫抗原(soluble juvenile worm antigens,SJWA)IgG(H+L)水平。结果与正常昆明株、Balb/c株子代对照组B1、B2组相比,2组S.j童虫活细胞免疫母鼠子代A1、A2组均表现出不同程度的抗攻击感染的免疫力,尤其抗生殖效果显得尤为突出。其中,A1获得35.6%的减虫率和59.4%的LEPG减卵率;A2获得29.8%的减虫率和47.4%的LEPG减少率。从肝脏外表来看,B1、B2组子代对照鼠肝脏的坏死程度明显高于A1、A2免疫子代鼠。此外,A1组肝脏虫卵肉芽肿平均直径和面积比B1组分别减少23.8%和43.4%,A2组肝脏虫卵肉芽肿平均直径和面积较B2组减少28.4%和50.3%。A1、A2与B1、B2各指标结果的组间差异均具有统计学意义(P0.05)。间接ELISA结果显示,不同时间点采集的2株免疫子代鼠血清中的抗SJWA-IgG水平高于同期相应对照组血清中的特异性IgG水平。结论用S.j童虫细胞接种母鼠所诱生的保护性免疫能传给子代,进而使子代鼠产生针对后天初次感染的保护性免疫。     

体外介导白细胞杀伤日本血吸虫童虫的单克隆抗体

本文报道了一种在体外具有介导白细胞杀伤日本血吸虫童虫的单克隆抗体(AD_(12)F_6),经成虫冰冻切片免疫荧光试验(IFA)法证明,其靶抗原在成虫表皮。与日本血吸虫尾蚴、虫卵冰冻切片及丝虫冰冻切片、食蟹猴疟原虫血片及利什曼鞭与体玻片的IFA 试验均呈阴性反应。与培养3小时的血吸虫童虫共同温育,并进行IFA 试验,童虫表膜出现亮绿的特异荧光,其内容物则呈红色阴性反应,酶联免疫印渍试验表明,此单克隆抗体能识别ASE抗原中分子量为23K的部份,体外细胞杀伤试验证明,在有补体参与下,AD_(12)F_6对3小时童虫的杀伤率为 64％,对照血清为20％。     

不同剂量吡喹酮治疗慢性血吸虫病的对比观察

本组选择四川省西昌县大兴乡作为山区血吸虫病以吡喹酮治疗为主的防治对策现场,8984年12月对当年粪检查出的364例慢性早期血吸虫患者随机分成2组,分别采用吡喹酮10mg/kg顿服及60mg/kg2次分服2种疗法。结果2组病例均足量完成治疗,无反应率分别为46.7％(150/173)及93.7％(1719/191),2组间无显著差异。不良反应仍以神经系统和消     

NTG处理日本血吸虫尾蚴诱导小鼠的保护性免疫

本文报告试用化学诱变剂 N-methyl-N’-Nitro-N-nitrosoguanidine(NTG)处理中国大陆株日本血吸虫尾蚴,免疫小鼠诱导产生保护力的初步结果。尾蚴用0、20、30、50、75及100微克/毫升 NTG处理30或60分钟后,经肤感染C3H小鼠,6周后解剖检虫,结果NTG浓度超过 30微克/毫升各组都无虫,NTG 20 微克/毫升处理 30分钟组观察到肝脏病变。选用 NTG 30微克/毫升处理30或60分钟及20微克/毫升处理60分钟的尾蚴进行免疫试验。C3H 小鼠免疫接种NTG处理尾蚴40条,2周后再接种一次,初次感染后 8周以 40条正常尾蚴进行攻击。结果NTG 20微克/毫升处理60分钟尾蚴免疫组减虫率达39.2％,经t测验证明有显著性差异。此检虫率低于X-射线照射尾蚴免疫所获得的结果,而更近似于伴随免疫作用。     

日本血吸虫感染对小鼠肝微粒体药物代谢酶系统的影响

本实验观察了日本血吸虫感染对小鼠肝微粒体药物代谢酶系统的影响。一、对小鼠戊巴比妥钠催眠时间的影响:小鼠分别感染日本血吸虫尾蚴20、40、60条,于感染后第6周,按40mg/kg ip戊巴比妥钠,测定催眠时间。结果表明血吸虫感染一定时间后,小鼠戊巴比妥钠催眠时被明显延长,并随感染度的增加延长更明显。     

青蒿素调控p53蛋白诱导肝癌细胞凋亡的机制研究

目的 通过探讨青蒿素调控p53表达进而诱导肝癌细胞凋亡的情况研究青蒿素抗肿瘤的机理.方法 20只C57小鼠随机分为空白组、PBS组、青蒿素组及青蒿素+Pifithrin-α组,每组5只.以PBS组、青蒿素组及青蒿素+Pifithrin-α组小鼠联合应用DEN/CCM/乙醇构建肝癌模型.空白组小鼠正常饲养3周,PBS组腹腔注射PBS 3周,青蒿素组腹腔注射青蒿素(100mg/kg)3周,青蒿素+Pifithrin-α组应用Pifithrin-α (50 mg/kg)隔日作用1周后,再与青蒿素作用3周.处死各组小鼠,分离小鼠肿瘤组织,Western blot检测肿瘤组织中Caspase3及p53的表达.结果 成功构建小鼠肝癌模型,青蒿素组荷瘤小鼠经作用后肿瘤组织Caspase3及p53蛋白表达显著增加,青蒿素+Pifithrin-α组荷瘤小鼠经Pifithrin-α预处理后,青蒿素诱导的细胞凋亡蛋白Caspase3显著降低.结论 青蒿素通过调控p53的表达诱导肝癌细胞凋亡,进而发挥抗肿瘤作用.     

CpG协同calpain DNA疫苗诱导BALB/c鼠TH1免疫应答和抗日本血吸虫感染

目的 探讨含非甲基化CpG单核苷酸(cpG-ODN)协同calpain DNA疫苗抗日本血吸虫感染的保护性作用、诱导的免疫应答类型及其免疫机理。方法 calpain基因从原核表达载体pGEX-2TK亚克隆到含小鼠IL-2基因启动序列的真核表达载体pVAC，构建含日本血吸虫疫苗候选分子calpain基因的真核表达体系pVAC-calpain的DNA疫苗，构建的DNA疫苗与CpGODN免疫BALB/c小鼠，在不同阶段采血测定免疫鼠抗体的动态变化、RT-PCR分析免疫鼠细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-12的表达，加强免疫1周后用日本血吸虫尾蚴攻击感染免疫鼠，用减虫率、减卵率及其病理组织学指标考核保护性免疫的效果。结果 pVAC-calpain的DNA疫苗体系诱导了IgG抗体的产生，免疫3周后细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-12的表达表现出差异。特别是在CpG-ODN和pVAG-calpain免疫组IFN-γ、IL-12有高度表达，而IL-4的表达受到相对抑制，对攻击感染的日本血吸虫表现出了45％的减虫效果，虫卵肉芽肿的面积显著性的减少。结论 Cp GODN协同日本血吸虫calpain DNA疫苗诱导了THl为主的免疫应答，并能部分抵抗日本血吸虫感染和减轻感染鼠由于TH2免疫应答所导致的虫卵肉芽肿反应，提示CpG ODN能够协同calpain DNA疫苗抗日本血吸虫感染和缓解日本血吸虫免疫病理反应。     

国产格列美脲药效学试验研究

为观察国产格列美脲的降血糖作用及对胰岛素分泌的影响,将大鼠、家兔灌服格列美脲2.5mg/kg、5mg/kg、10mg/kg后,通过测血糖、耐糖试验和测血浆胰岛素水平研究格列美脲的作用。结果显示,给药后血糖均明显降低(P<0.01),且药效强于格列本脲;大鼠灌服2.5mg/kg格列美脲已能明显对抗糖负荷引起的血糖升高,随给药剂量升高对抗作用增强;家兔灌服该药上述三种剂量后亦明显对抗糖负荷引起的血糖升高;大鼠和家兔灌服格列美脲后血清胰岛素水平上升,其升高程度与给药剂量正相关。以上结果表明格列美脲能刺激胰岛并增加胰岛素的分泌,对比实验表明格列美脲促胰岛素分泌作用强于格列本脲。     

司帕沙星对试验动物的一般药理研究

小鼠单次经口灌服司帕沙星4、20和100mg/kg后,动物的活动正常,未出现兴奋的抑制作用;小鼠单次经口灌服司帕沙星4、20和100mg/kg,与戊巴比妥钠镇静催眠无明显协同作用;给猫静脉注射司帕沙星4、16和64mg/kg,对动物呼吸和心血管系统无明显影响。     

东方田鼠ADCC体外杀伤日本血吸虫童虫效果的初步观察

为了进一步了解东方田鼠抗日本血吸虫病的机理,我们对东方田鼠抗体依赖细胞介导细胞毒(ADCC)体外杀伤日本血吸虫童虫效果进行了观察.用来源于东方田鼠和昆明鼠腹腔细胞的巨噬细胞(M)、嗜酸性粒细胞(Eos)作为效应细胞,分别以东方田鼠阳性/阴性血清、昆明鼠阳性/阴性血清进行ADCC试验.在培养3～6h时,所有东方田鼠M和Eos样本孔中均有大量细胞粘附于童虫,而昆明鼠M和Eos样本孔中几乎没有细胞粘附;培养20～24h、44～48h的童虫死亡率显示1.东方田鼠阳性/阴性血清的杀伤力明显高于相应的昆明鼠阳性/阴性血清的杀伤力;2.东方田鼠/昆明鼠的阳性血清诱导的童虫死亡率高于相应的东方田鼠/昆明鼠的阴性血清诱导的童虫死亡率;3,4种效应细胞样本孔以及细胞空白对照孔中的童虫死亡率基本相似.上述结果提示,东方田鼠血清具有明显的杀伤日本血吸虫童虫的作用,可能是东方田鼠抗日本血吸虫病机理中起决定作用的因子;东方田鼠M和Eos对日本血吸虫童虫具有天然粘附能力.