人精浆中γ—精浆蛋白的分离纯化研究

通过离心，透析分离正常人精浆，再经二次Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００凝胶过滤层析，成功的纯化了γ－精浆蛋白。等电聚焦电泳法测等电点的约为ｐＩ６．５，凝胶过滤层析法测其分子量约为２８０００。     

人精浆中γ－精浆蛋白的分离纯化研究

通过离心，透析分离正常人精浆，再经二次ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤层析，成功的纯化了γ－精浆蛋白。等电聚焦电冰法测其等电点约为ｐＩ６．５，凝胶过滤层析法测其分子量约为２８０００。免疫电泳结果证明其纯度较高，并与人血清、唾液、初乳等无交叉抗原。在法医物征实践及临床诊断方面均具有重要意义。     

兔中性粒细胞抗菌肽的纯化和鉴定

Five antimicrobial peptides were extracted from the cytoplasmic granules of rabbit neutrophils with 0.01 mol/L citric acid. SDS-PAGE gel densitometric analysis of the citric acid extract showed that they accounted for 34%-42% of the total extract proteins. When subjected to acid urea polyacrylamide gel electrophoresis, five peptides migrated much further to the cathode than lysozyme. Beginning with the most cathodal component, they were in turn referred to as NP1, NP2, NP3, NP4, and NP5. They were purified from the citric acid extract by virtue of preparative polyacrylamide gel electrophoresis. Each of them was of low molecular weight (2,500-6,000) as determined by SDS-PAGE. Three of the peptides were tested in vitro for fungicidal activity. When Candida albicans (10(7)/ml) were incubated with 12.5 micrograms/ml of NP1 or NP2 at 37 degrees C for 2 h, the death rates of the organisms were 96.6% and 93.3% respectively. NP3 was shown to be active against Candida albicans although less potent than NP1 and NP2.     

人精液凝固蛋白Ⅰ衍生合成肽在不同pH值及Zn2+浓度下的抗菌活性研究

目的 研究5种人精液凝固蛋白Ⅰ衍生合成肽在不同PH值及Zn2+浓度下的抗菌活性,探讨人精液凝固蛋白Ⅰ衍生抗菌肽在不同条件下的抗菌机理.方法 在前期研究新发现的人精液凝固蛋白Ⅰ衍生肽SgI29及其衍生合成肽(SgI14、SgI19、SgI22及SgI25)具有抗菌活性的基础上,设置不同pH值及不同Zn2+浓度,通过琼脂糖弥散法抗菌试验进一步测定其在此环境下对泌尿生殖道感染常见细菌抗菌活性.结果 SgI29及其衍生合成肽在pH值为4时,无明显抗菌活性,pH值为6和7时,其抗菌活性最强.在试验所设置的不同Zn2+浓度下,各培养皿中均未见细菌生长.结论 pH值是影响人精液凝固蛋白Ⅰ衍生肽抗菌活性的重要因素之一.游离态Zn2+具有较强的抗菌活性,精液中Zn2+的抗菌活性值得进一步研究.     

黑水虻抗菌肽分离纯化及活性组分对HCT-8细胞的增殖抑制作用

目的 黑水虻抗菌肽抗癌效应的研究鲜见.文章旨在探讨黑水虻抗菌肽活性组分对敏感肿瘤细胞株(HCT-8)体外增殖的影响,探索其可能的抑癌机制.方法 采用RP-HPLC分离纯化黑水虻抗菌肽粗提物,抑菌实验筛选活性组分;酶标仪测定抗菌肽活性组分对豚鼠正常红细胞的溶血性;CCK-8法测定抗菌肽活性组分对敏感肿瘤细胞株(HCT-8...     

抗菌肽CM与血管内皮生长因子VEGF_(121)在大肠杆菌中表达及鉴定

目的：构建和表达人VEGF121的基因工程菌,为肿瘤血管的靶向治疗提供实验数据。方法：通过PCR引物延伸的方法,获得SUMO-CM-VEGF121融合基因;将该融合基因与原核表达载体pET22b连接后转化至Rosetta-gami(DE3)宿主细胞中,通过IPTG诱导获得可溶性表达。将融合蛋白经DEAE阴离子交换层析、Ni-NTA和分子筛等方法进行纯化,用SUMO酶切除分子伴侣SUMO后,最终获得融合蛋白CM-VEGF121。结果：DNA测序,设计合成的SUMO-CM-VEGF121融合基因为774 bp;所构建的表达菌株Rosetta-gami(DE3)/pET22b-SUMO-CM-VEGF121在20℃诱导24 h可溶性最好,其可溶性表达为菌体可溶性蛋白的21%。Western blotting检测该表达产物与人VEGF单克隆抗体具有特异性结合能力。结论：原核表达载体pET22b和Rosetta-gami宿主菌为CM-VEGF121最合适的条件,解决了其表达量低和不可溶问题。     

子宫内膜黏液抗菌肽的分离纯化及鉴定

目的从人子宫内膜黏液酸溶性提取物纯化及鉴定抗菌多肽,探讨子宫内膜的抗菌机制。方法采用酸性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳琼脂糖弥散法分析人子宫内膜黏液酸溶性提取物的抗菌活性,切下相应的抗菌条带进行洗脱电泳,并用反相高效液相色谱进一步分离纯化。用琼脂糖弥散法检测纯化分子抗菌活性;Trieine-SDS-PAGE电泳检测其相对分子质量。根据N端氨基酸序列和质谱分析的测序结果推导纯化分子的氨基酸序列,并进行生物信息学分析。结果从人子宫内膜酸溶性提取物中纯化出一种相对分子质量为6777的抗菌肽HUP-39,经鉴定为人血红蛋白α链N端第33-95的氨基酸残基片段。该片段富含碱性氨基酸,包含3个完整的α螺旋跨膜结构域,对大肠埃希菌氨苄西林耐药株ML-35p、标准株ATCC25922和临床分离株54080有较强的抑菌活性。结论本研究从人子宫内膜黏液酸溶性提取物中分离纯化出的抗革兰阴性菌多肽,为人血红蛋白α链片段。子宫内膜黏液中的抗菌分子不仅来源于上皮细胞和白细胞,也可来源于红细胞。     

人载脂蛋白H的分离、纯化和鉴定

 目的 探索一种相对简便而高效的方法,从人血浆中分离、纯化载脂蛋白H。方法 用高氯酸预处理血浆,以离子交换色谱和亲和色谱相结合的方法进行蛋白质的分离和纯化。用SDS-聚丙烯凝胶电泳和Western blot对纯化产品进行鉴定。用BCA蛋白质定量测定试剂盒测定获得载脂蛋白H的量。结果 连续分离、纯化3次,每次获得的产品纯度均大于98%,且经Western blot分析均能与抗β₂-Glycoprotein I单克隆抗体呈阳性反应。3次纯化共获得apoH 12.56 mg,平均21 mg/L。结论 本方法重复性好、可靠性高,较传统方法更为简便和经济。     

人精浆免疫抑制因子的分离、提取及生物活性测定

目的从人精浆中分离提取精浆免疫抑制因子(SP IF).方法取常规检测正常精液50份, 离心分离精子和精浆,将精浆低温高速离心,取上清液,经Sephadex G-100层析, 收集第1峰, 作DEAE纤维素离子交换层析, 收集第2峰, 浓缩, 经SDS-PAGE分析呈单带.在体外对其生物活性进行了测定,并以其为抗原经ELISA间接法对100例不育男子和50例生育男子精浆中抗SPIF IgG和IgA进行了测定.结果测定分子量为52kd.当浓度分别为50、100、200μg/ml时,对PHA诱导的人外周血淋巴细胞转化抑制率、NK细胞活性抑制率分别为27.1%、33.9%、66.9%和23 .7%、32.4%、57.4%.ELISA结果, 不育组与生育组间抗SPIF IgG和IgA分别为38%、26% 和6%、2%.结论该实验提取的52kd的蛋白达到电泳纯且在体外具有一定的生物活性.ELISA间接法结果显示,不育组与生育组间存在显著性差异(P＜0.05).     

用亲和层析法纯化牛精浆蛋白

目的：从牛精浆中纯化牛精浆（BSP）蛋白。方法：利用盐析及亲和层析等方法对BSP蛋白进行纯化。结果：用Gelatin-Sephorase4B亲和胶纯化出一个蛋白峰,经电泳及氮基础测序证实为BSP－A1／－A2蛋白。结论：用市售Gelatin-Sephorase4B亲和胶可方便的纯化出BSP－A1／A2蛋白。     

Effects of Seminal Plasma Relaxin on Human Sperm Motility

To clarify the role of endogenous relaxin on sperm motility, relaxin in semen was neutraliged by anti-relaxin antibody in vitro.22 semen samples were collected from infertility clinic and tested with Hamilton-Thorn 2000 Motility Analyzer to detect spermmotility(%),progressive motility(%),path velocity (micro/sec) and velocity(0-4 grade) at the time of 0,15,30 and 60 min respectively.The results showed that sperm motility declined significantly after being incubated with anti-relaxin serum.Sperm progressive motility declined more obviously.This experiment revealed that endogenous relaxin could play an important role in the physiological process of maintaining sperm motility,especially progressive motility.     

Effects of Seminal Plasm a Relaxin on Hum an SpermMotilit

Ｒｅｌａｘｉｎ（ＲＬｘ）ｉｓａ６ＫＤｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｈｏｒｍｏｎｅ．Ｉｔｗａｓｏｒｉｇｉｎａｌｌｙｃｏｎｓｉｄｅｒｅｄａｓｔｈｅｈｏｒｍｏｎｅｒｅｌａｔｅｄｔｏｐｒｅｇｎａｎｃｙａｎｄｐａｒｔｕｒｉｔｉｏｎｏｎｌｙ．ＳｉｎｃｅＲＬｘｗｉｔｈｂｉｏｌｏｇｉｃａｌａｃ－ｔｉｖｉｔｙｗａｓｐａｒｔｌｙｓｅｐａｒａｔｅｄｆｒｏｍｓｅｍｉｎａｌｐｌａｓｍａｂｙＷｅｉｓｓ［１］ｉｎ１９８６，ｍａｎｙｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃｒｅｓｅａｒｃｈｅｒｓｈａｖｅｔｈｏｕｇｈｔｔｈａｔｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓＲＬｘｉｎｓ…     

人血浆前白蛋白的分离和纯化

建立一种新的分离纯化人血浆前白蛋白（ＰＡ）的方法。由酚试剂沉淀后的血浆，通过离子交换树脂分离所得ＰＡ，用高效液相色谱仪（ＨＰＬＣ）进行纯化，经ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳测定，其分子量在５５０００左右，纯度达到电泳纯和免疫纯。此法步骤简单，用血量少，适用于实验室常规操作和临床人体研究。     

人淋巴因子激活的杀伤细胞抗生素肽的分离纯化

目的　分离纯化人淋巴因子激活的杀伤细胞 (lym phokine activated killer,L AK)内源性抗生素肽。方法　采用密度梯度离心法分离人外周血单核细胞 ,并用 IL- 2和 PHA刺激培养。 5 %乙酸匀浆细胞获得其酸溶性提取物。应用制备性酸性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳技术和反相高效液相色谱技术分离纯化多肽 ,Tricine- SDS-PAGE鉴定其分子量 ,并运用琼脂糖弥散法鉴定其抗菌活性。结果　从人 L AK细胞酸溶性提取物中纯化出多个多肽 ,其中 HL P- 2 b、HL P- 3a完全纯化 ,分子量分别为 7.9× 10 3u和 4× 10 3u。HL P- 2 a、HL P- 2 c、HL P- 3b和 HL P- 3c基本纯化 ,主带分子量分别为 7.2× 10 3u、10 .4× 10 3u、6 .4× 10 3u、6 .4× 10 3u。 HL P- 3a具有抗金黄色葡萄球菌活性 ,HL P- 2 a、HL P- 2 b、HL P- 2 c、HL P- 3b、HL P- 3c具有抗金黄色葡萄球菌活性和抗白色念珠菌活性。结论　人 L AK细胞含多种内源性抗生素肽分子     

人类精浆特异性抗原p30理化性质的初步研究

作者在分离纯化人类精浆特异性抗原p30的基础上,用不同凝胶浓度的SDS-PAGE检测该纯化p30的分子量,用等电聚焦检测其等电点,并分析其氨基酸组成。结果证明p30与前列腺特异性抗原属同一种糖蛋白。本文还探讨了不同作者所测p30理化参数不一致的原因。     

人子宫颈粘液抗菌活性多肽的分离纯化

目的　从人子宫颈粘液分离纯化新的抗菌多肽。方法　用 5 %乙酸提取人子宫颈粘液可溶物 ,经电泳凝胶琼脂糖弥散法抗菌试验发现 ,子宫颈粘液酸溶性提取物有一条主带对大肠杆菌耐氨苄株 ML - 35 P有强抗菌活性 ,命名为 HCP。应用制备性酸性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳技术及洗脱电泳技术得到构成该主带的混合物 ,最后应用反相高效液相色谱技术分离纯化多肽。经 Tricine- SDS- PAGE鉴定其相对分子质量 ,并运用琼脂糖弥散法鉴定其抗菌活性。结果　从子宫颈粘液酸溶性提取物中纯化出一多肽 ,相对分子质量约为 14× 10 3,命名为 HCP- 1,具有抗耐药性大肠杆菌和绿脓杆菌的活性。结论　 HCP- 1可能是宫颈粘液天然免疫机制中的新的效应分子     

人子宫颈粘液抗菌多肽的分离

用５％乙酸提取人子宫颈粘液可溶物，经电泳凝胶琼脂糖弥散法抗菌试验发现，子宫颈粘液酸溶性提取物有两条主带对致病性大肠杆菌２５９２２株和金葡球菌２５９２３株有强抗菌活性，并分别命名为Ｈｃｐ－１和Ｈｃｐ－２。经Ｔｒｉｃｉｎｅ－ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳分析，Ｈｃｐ－１分子量为６．７ｋｄ、１０ｋｄ和１５．４ｋｄ，Ｈｃｐ－２分子量为４．４ｋｄ、６．７ｋｄ、９ｋｄ和１５．４ｋｄ，均为多肽混合物。实验结果提示子宫颈粘膜能合成一类抗菌多肽，在子宫颈抗菌机理中发挥重要作用。     

Cytokines in Human Seminal Plasma and Their Effect on Male Fertility

Human semen contains cellular compartment and seminal plasma. A cellular compart- ment consists of spermatozoa and population of non-spermatozoal cells[1]. Non-spermato- zoa] cells in semen include immature germ cells, leukocytes and epithelial cells and their normal concentration is usually less than 15% of the total sperm concentration. Seminal plasma is composed of products secreted from various glands along the male reproductive tract, mainly epididymis, seminal vesicles, prostate and bulb…