白色念珠菌烯醇化酶双抗体夹心ELISA定量检测方法的建立

目的:建立定量检测白色念珠菌烯醇化酶(enolase,Eno)的双抗体夹心ELISA法,并应用于不同真菌培养上清液的检测,探讨其在侵袭性念珠菌感染中潜在的诊断价值?方法:将白色念珠菌Eno单抗作为包被抗体,HRP标记的羊抗Eno作为检测抗体,利用重组白色念珠菌Eno蛋白作为标准品评价该方法的精密度?线性范围?最低检测下限等性能指标?用建立的双抗体夹心ELISA法定量检测不同真菌培养上清和白色念珠菌在不同温度下培养上清中Eno水平?结果:Eno浓度为20 ng/ml和5 ng/ml时,批内和批间精密度分别为6.61%?9.19%和6.98%?13.81%,最低检出下限为1.25 ng/ml,线性范围为1.25~50.00 ng/ml?白色念珠菌37℃培养24 h时的上清中Eno含量为3.06 ng/ml,培养120 h时Eno水平上升到33.43 ng/ml,Eno水平与白色念珠菌菌丝含量呈正相关?本方法与近平滑念珠菌有微弱交叉反应,与热带念珠菌?光滑念珠菌?季也蒙念珠菌?新型隐球菌和酿酒酵母均无交叉反应?结论:成功建立了定量检测白色念珠菌Eno的双抗体夹心ELISA法,在侵袭性念珠菌感染研究中具有潜在的应用价值?     

新生儿缺氧缺血性脑病血小板活化因子和神经元烯醇化酶水平的研究

目的　探讨新生儿缺氧缺血性脑病的发病机制 ,寻求早期诊断的指标。方法　临床研究的指标是按临床症状分组 ,测定缺氧缺血性脑病新生儿血浆中血小板活化因子 (PAF)和血清中神经元烯醇化酶 (NSE)水平的变化。结果　新生儿缺氧缺血性脑病轻、中、重度患儿血清NSE浓度分别为 (1 9±5 7)、(3 9± 1 6 )、(83± 2 1 ) μg·L- 1 (P <0 0 1 ) ;血浆PAF分别为 (2 0± 7 6 )、(2 9± 6 4)、(5 6± 8) μmol·L- 1(P <0 0 5或P <0 0 1 )。结论　研究发现新生儿缺氧缺血性脑病的致病因子之一是PAF ,缺氧缺血性脑病患儿血浆中PAF增高 ,其水平与NHIE的严重程度有关。PAF参与了NHIE的发病过程。NHIE患儿血清NSE增高 ,其水平与本病的严重程度有关 ,故认为NSE可作为该病的早期诊断的血清学指标。     

双抗体夹心酶联免疫法检测不同样品中的蓖麻毒素

目的 应用酶联免疫吸附分析方法（ELISA）检测待测样品中的蓖麻毒素。方法 用蛋白 G亲和层析柱纯化蓖麻毒素单克隆抗体（4C13,3D74,5E4和5H6）,以3D74及辣根过氧化物酶(HRP)标记的4C13建立的双抗体夹心ELISA对含有蓖麻毒素的多种样品进行检测。结果 抗蓖麻毒素的单克隆抗体经亲和层析纯化后具有较高的蛋白纯度,应用HRP标记的4C13与3D74建立双抗体夹心ELISA,对于溶解于磷酸缓冲液中的蓖麻毒素标准品的检测灵敏度可达2.5 μg·L^-1;对于土壤、面粉、牛奶、咸菜汁、雪碧、可乐和腐乳汁中的蓖麻毒素样品检测的灵敏度为2.5～5.0 μg·L^-1;与磷酸缓冲液样品相比较,含有相同浓度蓖麻毒素的小鼠和人血清样品ELISA的阳性结果明显减弱。结论 双抗体夹心酶联免疫法能够有效用于含有蓖麻毒素样品的检测分析。     

双抗原夹心ELISA法检测抗-HCV的临床价值研究

目的 研究双抗原夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)的临床价值.方法 选取2018年1月至2019年12月在血站无偿献血的486份标本为研究对象.收集无偿献血筛查标本并均实施间接ELISA法、双抗体夹心ELISA法检查.观察间接ELISA法、双抗体夹心ELISA法诊断抗-HCV结果,并...     

双抗原夹心法与间接ELISA法在HCV抗体检测中的应用比较

目的探讨双抗原夹心法与间接酶联免疫吸附试验(ELISA)法在丙型肝炎病毒(HCV)抗体检测中的应用价值。方法选择2018年1月至2020年1月我院收治的67例疑似丙型肝炎患者,所有患者均行双抗原夹心法检测、间接ELISA法检测及荧光定量PCR血液筛查,将荧光定量PCR血液筛查结果作为"金标准",分析双抗原夹心法检测及间接ELISA法检测HCV抗体的诊断价值。结果双抗原夹心法检测的准确度(94.03%)、灵敏度(96.08%)均高于间接ELISA法检测[(82.09%)、(84.31%)],差异有统计学意义(P<0.05);双抗原夹心法检测的特异度(75.00%)、阳性预测值(92.45%)及阴性预测值(85.71%)略高于间接ELISA法检测[(75.00%)、(91.49%)、(60.00%)],但差异不显著(P>0.05);双抗原夹心法检测HCV抗体与荧光定量PCR血液筛查结果具有极好的一致性(Kappa=0.836);间接ELISA法检测与荧光定量PCR血液筛查结果具有较为理想的一致性(Kappa=0.546)。结论与间接ELISA法相比,双抗原夹心法检测HCV抗体具...     

双抗原夹心法与间接酶联免疫吸附试验法检测丙型肝炎病毒抗体的应用效果分析

目的探讨双抗原夹心法与间接酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测丙型肝炎病毒抗体的应用效果,旨在分析两种检测方法的灵敏度及特异度,为血液筛查提供参考。方法选取2016年3月至2018年3月我县无偿献血者血液标本1200例作为研究对象,其中抗丙型肝炎抗体(抗-HCV)阴性标本1123例,抗-HCV阳性标本77例。采用双抗原夹心法与间接ELISA法分别进行检测,记录检测结果与丙型肝炎病毒核酸符合率,并进行统计学分析。结果77例抗-HCV阳性标本中,双抗原夹心法阳性检出率96.1%(74/77)高于间接ELISA法87.0%(67/77),差异具有统计学意义(P<0.05),双抗原夹心法检测及间接ELISA法分别有3份和10份假阴性样本出现;双抗原夹心法检测准确度、灵敏度、特异度均高于间接ELISA法,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在检测丙型肝炎病毒抗体的方法中,相比于间接ELISA法,双抗原夹心ELISA法的检测结果较为理想,能够有效提高其阳性检出率、准确度、灵敏度及特异度。     

双抗原夹心法和间接法检测丙型肝炎病毒抗体对比研究

目的:研究双抗原夹心法和间接法酶联免疫吸附试验(ELISA)检测丙型肝炎病毒(HCV)抗体的临床价值。方法:选取输血前、术前及孕前拟行HCV抗体检测的患者1674例,采用促凝管取患者空腹肘静脉血5ml,以3000r/min离心10min后取上清-20℃保存备用,分别采用间接ELISA法和双抗原夹心ELISA法检测抗-HCV抗体,所有操作均严格按照试剂盒内说明书要求完成,采用一致性Kappa检验分析间接法和双抗原夹心法诊断价值。结果:上海科华间接法、英科新创间接法和北京万泰双抗原夹心法对HCV检出率分别为4.30%、4.06%和3.52%(P>0.05),且三种检测试剂吸光度值/临界值(S/CO)差异均无统计学意义(P>0.05);以确证实验结果为"金标准",间接ELISA法检测HCV灵敏度为94.00%,特异度为98.27%,阳性预测值为62.67%,阴性预测值为99.81%,准确率为98.15%,一致性Kappa为0.743;双抗原夹心法检测HCV灵敏度为97.91%,特异度为99.26%,阳性预测值为79.66%,阴性预测值为99.94%,准确率为99.22%,一致性Kappa为0.875;Mc Nemar检验结果显示,间接法和双抗原夹心法检测HCV结果比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:双抗原夹心ELISA法用于HCV检测灵敏度和特异度均明显高于间接ELISA法,对控制HCV感染和传播具有较高临床价值和应用前景。     

双抗原夹心法与间接ELISA法在HCV抗体检测中的应用比较

目的探讨双抗原夹心法与间接酶联免疫吸附试验(ELISA)法在丙型肝炎病毒(HCV)抗体检测中的应用价值。方法选择2018年1月至2020年1月我院收治的67例疑似丙型肝炎患者,所有患者均行双抗原夹心法检测、间接ELISA法检测及荧光定量PCR血液筛查,将荧光定量PCR血液筛查结果作为"金标准",分析双抗原夹心法检测及间接ELISA法检测HCV抗体的诊断价值。结果双抗原夹心法检测的准确度(94.03%)、灵敏度(96.08%)均高于间接ELISA法检测(82.09%)、(84.31%),差异有统计学意义(P<0.05);双抗原夹心法检测的特异度(75.00%)、阳性预测值(92.45%)及阴性预测值(85.71%)略高于间接ELISA法检测(75.00%)、(91.49%)、(60.00%),但差异不显著(P>0.05);双抗原夹心法检测HCV抗体与荧光定量PCR血液筛查结果具有极好的一致性(Kappa=0.836);间接ELISA法检测与荧光定量PCR血液筛查结果具有较为理想的一致性(Kappa=0.546)。结论与间接ELISA法相比,双抗原夹心法检测HCV抗体具有更高的...     

检测水痘-带状疱疹病毒糖蛋白水平双抗体夹心ELISA法的建立和验证

建立可快速检测水痘-带状疱疹病毒（VZV）糖蛋白抗原水平的双抗体夹心ELISA法,并验证其特异性、线性、准确性和精密性。     

抗-HCV双抗原夹心酶联免疫法检测试剂的应用评价

丙型肝炎是由丙型肝炎病毒(HCV)感染引起的世界性传染病,主要通过输血和使用血液制品等途径传播。为控制HCV经血传播,要求对献血员进行抗-HCV检测。目前使用的抗-HCV检测试剂,采用的是间接酶联免疫法第三代诊断试剂,包被用抗原一般包     

酵母菌烯醇化酶单克隆抗体的制备及鉴定

目的制备并鉴定抗酵母菌烯醇化酶单克隆抗体杂交瘤细胞株.方法用面包酵母烯醇化酶做抗原,用细胞融合技术制备单克隆抗体,并采用ELISA法对单克隆抗体进行筛选和鉴定.结果建立了2株持续分泌抗面包酵母烯醇化酶单克隆抗体的杂交瘤细胞株.其中3G5-F3-F5小鼠腹水单克隆抗体的最高稀释度达1:12 800;单克隆抗体的重链属IgG1亚类,轻链属K型;Western Blotting证实单抗能与面包酵母的烯醇化酶抗原(4.8×104)特异性地结合.结论本研究建立了抗酵母菌烯醇化酶杂交瘤细胞株单克隆抗体,为快速诊断系统性念珠菌感染打下了实验基础并创造了条件.     

白念珠菌Csa2蛋白双抗原夹心ELISA方法的建立及诊断价值

目的 建立以白念珠菌Csa2蛋白抗体为靶标的双抗原夹心ELISA,初步评价其鉴别诊断白念珠菌尿道感染的应用价值。方法 通过间接免疫荧光染色定位Csa2蛋白在白念珠菌菌体分布情况;应用棋盘滴度法优化反应条件,建立双抗原夹心ELISA并进行方法学评价;检测324例健康体检者血清,确定该方法的cutoff值;检测120例健康体检者及30例念珠菌属尿路感染患者血清,分析其诊断的灵敏性、特异性、阳性预测值、阴性预测值。结果 Csa2蛋白是一种特异性分布在白念珠菌菌丝态表面的蛋白;以0.1 μg/mL的rCsa2蛋白为包被抗原,1∶1 000稀释的rCsa2-HRP蛋白为检测抗原,建立双抗原夹心ELISA,可最低检测1∶16 000稀释的rCsa2蛋白免疫兔血清并不与正常兔血清发生反应;该方法的cutoff值为0.072,诊断白念珠菌尿路感染敏感性为65.2% (15/23),特异性为98.4% (125/127),阳性预测值88.2%（15/17）,阴性预测值为94.0%（125/133）。结论 成功建立检测白念珠菌特异性Csa2蛋白抗体双抗原夹心ELISA;初步评价该方法对诊断白念珠菌尿路感染具有较高的特异性,得出较高阳性预测值和阴性预测值;Csa2抗体靶标对区分白念珠菌感染和定植具有一定价值。     

22例急性脑梗死患者血清神经元特异性烯醇化酶变化

目的 探讨急性脑梗死患者血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)变化的临床意义.方法 采用酶联免疫吸附法测定22例急性脑梗死患者(分为腔隙性脑梗死组、小面积脑梗死组及大面积脑梗死组)发生梗死后第2、14天及26例健康者(对照组)血清NSE含量.结果 3组脑梗死患者血清NSE浓度均明显高于对照组,且NSE水平变化与梗死面积呈明显正相关.在梗死发生第2天血清NSE水平达到峰值;第14天明显下降,与第2天相比差异有统计学意义(P<0.05),但仍高于对照组水平.结论 血清NSE水平较好地反映了急性脑梗死脑损伤程度,可提示脑梗死急性期脑损伤程度及现察疗效和判断预后.     

双抗原夹心法检测艾滋病病毒抗体2种方法的比较

检测艾滋病病毒抗体是诊断AIDS／HlV感染的常规方法,用于检测艾滋病病毒抗体的试剂必须具有高灵敏度,高特异性和可重现性。目前常用的初筛试验有固相酶联免疫吸附试验、明胶颗粒凝聚试验、乳胶颗粒凝聚试验等多种方法,笔者对国产检测艾滋病病毒抗体(HIV1／2)双抗原夹心酶联免疫吸附试验和胶体金双抗原夹心免疫层析快速法进行了比较,现报告如下。     

白色念珠菌在夫妻之间传染的临床探讨

目的了解白色念珠菌在夫妻之间的传染，探讨念珠菌性阴道炎女性患者及其丈夫或性伴侣同时治疗的意义。方法选取临床上念珠菌阴道炎患者172例，分为两组，一组单纯女方治疗，另一组夫妻双方同时治疗，并观察治疗效果及复发情况。结果夫妻之间治疗组与对照组比较，他们的治愈率及治疗有效率差异均无统计学意义，P〉0．05；但是复发率却明显降低，P〈0．01。结论白色念珠菌在配偶之间也有较高的传染率，念珠菌阴道炎患者、性伴侣同时治疗可降低此病的复发率。     

癫痫患儿血清及脑脊液中神经元特异性烯醇化酶变化的研究

目的探讨癫痫患儿血清和脑脊液中神经元特异性烯醇化酶(NSE)浓度的变化。方法采用酶联免疫双抗法测定EP、GCSE、FE及VE组患儿癫痫发作后24小时内血清和脑脊液中NSE水平。结果EP、GCSE、FE及VE组患儿癫痫发作后血清和脑脊液NSE水平均明显高于对照组(P<0.01),而且GCSE及VE组要较EP及FE组患儿血清和脑脊液NSE水平也明显增高(P<0.01)。血清和脑脊液中NSE浓度之间存在着明显的相关性。结论患儿癫痫发作能够产生脑神经元的损伤,并导致血清和脑脊液中NSE浓度的增高,而且NSE浓度的变化和癫痫发作的类型及频繁程度密切相关。     

烯醇化酶1及烯醇化酶2与神经系统疾病的研究进展

烯醇化酶（enolase,ENO）是一类高度保守的酶蛋白,除了参与糖酵解过程,还参与肿瘤、感染、免疫、代谢等疾病的病理生理过程。神经系统疾病严重影响人们的健康和生存质量,本文主要介绍烯醇化酶1、烯醇化酶2分子结构和功能、在神经系统疾病中的表达及其意义,为判断神经系统疾病患者的病情和预测预后提供参考。     

ELISA（双抗体夹心法）共系统检测抗-HBe与HBeAg结果分析

目的探讨用双抗体夹心法检测HBeAgEIA商品试剂盒共系统检测抗-HBe与HBeAg的可行性及结果判定方法。方法用双抗体夹心法检测HBeAgELISA试剂盒结合配套中和（竞争）抑制法检测抗-HBeELISA试剂盒中的中和试剂（HBeAg）等试剂组分共系统检测1000份随机血清（浆）标本抗-HBe与HBeAg,并分别以常规ELISA检测抗-HBe与HBeAg作平行对照。结果ELISA共系统检测抗-HBe与HBeAg易于目测;它们的比色判定临界值同常规ELISA易于设定（或使用临界值血清,检测HBeAg时也使用抗-HBe阴性对照）,与常规ELISA检测比色判定无显著性差异（配对计数资料比较的χ2检验：相关检验均为P〈0.005,υ=1,a=0.05;抗-HBe优劣检验（ELISA共系统检测抗-HBe前两项COV与抗-HBe临界值血清）均为P〉0.900,υ=1,a=0.05;HBeAg优劣检验依次为HBeAg临界值血清：（1）P〉0.900,υ=1,a=0.05,抗-HBe阴性对照;（2）0.100〉P〉0.050,υ=1,a=0.05,ELISA共系统检测HBeAgCOV;（3）0.100〉P〉0.050,υ=1,a=0.05,但χ^21〈χ^22〈χ^23）。结论用双抗体夹心法检测HBeAgELISA试剂盒与配套中和（竞争）抑制法检测抗-HBeELISA试剂盒试剂组分重组共系统检测抗-HBe与HBeAg是可行的,两种试剂盒能够相互替代,在有优质现代酶标仪的实验室,可以省去常规ELISA试剂盒其中之一,实用价廉,值得推广。     

弥漫性轴突损伤患者血清S100B和神经元特异性烯醇化酶的变化及意义

目的:探计弥漫性轴突损伤(diffuseaxonalinjury,DAI)患者血清S100B和神经元特异性烯醇化酶(neuron specifis enolase,NSE)浓度的变化及临床意义。方法:选择符合DAI诊断标准的脑外伤患者46例,对照组为同期受伤20例单纯头皮挫裂伤,无失血性休克患者.按照格拉斯哥预后评分Ⅰ～Ⅲ级(死亡,植物生存,严重残残)为预后不良组18例;Ⅳ-Ⅴ级(轻-中度致残和完全恢复)为预后良好组28例;于损后1h,3h,6h,12h,24h和48h采血检测血清中S100B和NSE浓度。结果:与对照组比较,DAI组S100B蛋白在伤后1h就明显增高(P<0.01),并持续升高至伤后6h,但预后良好组12～24h有所下降(P>0.05),48h下降有统计学意义(P<0.05);预后不良组S100B蛋白持续不下降。而NSE于伤后3h开始升高(P<0.05),6h达高峰(P<0.01),预后良好组12h下降(P<0.01),24h降至正常;预后不良组NSE持续不下降。结论:DAI患者血清S100B蛋白和NSE含量明显升高,联合监测血清S100B和NSE蛋白含量的变化不但能准确地反映出脑损害和程度而且可以判断DAI的预后。