雌激素与内皮细胞凋亡的关系

目的：观察雌激素（１７β－雌二醇）对氧化型低密度脂蛋白（ｏｘＬＤＬ）诱导人脐静脉内衣皮细胞（ＨＵＶＥＣ）凋亡的影响。方法：以ＨＵＶＥＣ为对象,观察不同浓度的１７β－雌二醇（１μｍｏｌ／Ｌ、１０μｍｏｌ／Ｌ和１００μｍｏｌ／Ｌ）对ｏｘＬＤＬ（４μｇ／Ｌ）诱导的凋亡的影响。结果：不同剂量的１７β－雌二醇对使用ｏｘＬＤＬ诱导的ＨＵＶＥＣ凋亡减少７０％～９３％,其抑制呈明显的正向量效关系,１７β－雌二醇１     

高密度脂蛋白对氧化型低密度脂蛋白诱导内皮细胞凋亡的影响

目的　探讨高密度脂蛋白 (HDL)对氧化型低密度脂蛋白 (ox L DL)诱导体外培养的人血管内皮细胞凋亡的影响及相关机制。方法　 ox L DL 单独或与 HDL 共同处理体外培养的人脐静脉内皮细胞株 (ECV- 30 4 )后 ,通过流式细胞仪、DNA电泳检测细胞凋亡并测定 Caspase- 3酶活性。结果　 10 0 μg/ml和 2 0 0 μg/m l浓度 ox L DL 作用内皮细胞后 ,其细胞凋亡率分别为 2 8.4 0± 5 .30 %、34.72± 4 .6 4 % ,DNA电泳呈典型的梯状图谱 ,Caspase- 3酶活性达到 16 6 .0 1± 16 .4 4、2 6 3.74± 4 6 .6 2 pmd/(m in· mg protein) ,与空白组比较均有显著性差异 (P<0 .0 1)。HDL(2 0 0 μg/ml)与 ox L DL(10 0 μg/ml、2 0 0 μg/m l)共同作用后 ,凋亡率降至 8.0 6± 2 .35 %及 9.4 0± 2 .5 8% ,未出现梯状图谱 ,Caspase- 3酶活性减低 (分别为 6 7.73± 14 .83、111.2 6± 2 7.13min· m g protein) ,与对应的 ox L DL 组比较均差异显著 (P<0 .0 1)。结论　 HDL 能减少 ox L DL 所致体外培养的内皮细胞凋亡 ,这一作用可能与降低Caspase- 3酶活性有关     

雌激素与内皮细胞凋亡的关系

目的 :观察雌激素 (17β 雌二醇 )对氧化型低密度脂蛋白 (oxLDL)诱导人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)凋亡的影响。方法 :以HUVEC为对象 ,观察不同浓度的 17β 雌二醇 (1μmol/L、10 μmol/L和 10 0 μmol/L)对oxLDL(4 μg/L)诱导的凋亡的影响。结果 :不同剂量的 17β 雌二醇对使用oxLDL诱导的HUVEC凋亡减少 70 %～ 93% ,其抑制呈明显的正向量效关系 ,17β 雌二醇 1μmol/L组细胞凋亡占 6 .98%～ 8.6 3 % ,10 0 μmol/L组细胞凋亡占 2 .94%～ 4.85 %。结论 :17β 雌二醇对oxLDL诱导的HUVEC凋亡有明显的抑制作用 ,且在一定浓度范围内呈正向量效关系 ,有利于减少细胞凋亡的发生。     

氢气对氧化低密度脂蛋白诱导的内皮细胞凋亡的抑制作用

目的探讨氢气(H2)饱和培养液对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的内皮细胞凋亡的影响。方法人脐静脉内皮细胞株EA-hy926分为:ox-LDL组,ox-LDL+不同浓度H2组和正常对照组;流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞内ROS水平;Western blot检测NF-κB p65蛋白水平。结果 ox-LDL+H2组(氢浓度0.6 mmol/L)与ox-LDL组相比,细胞凋亡率明显降低[(2.48±0.21)%vs(4.01±0.39)%,P<0.01],细胞内ROS含量减少[(2.05±0.22)vs(5.32±1.04),P<0.01],NF-κB p65蛋白水平降低[(0.29±0.02)vs(0.66±0.07),P<0.01],且上述作用随H2浓度增加而增强。结论 H2饱和培养液可减少ox-LDL诱导的内皮细胞凋亡,其机制可能与减少ROS含量和抑制NF-κB激活有关。     

薯蓣皂苷对氧化低密度脂蛋白诱导血管内皮细胞凋亡的保护作用

目的:研究薯蓣皂苷对氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)诱导血管内皮细胞(EC)凋亡的保护作用,并探讨其作用机制.方法:实验分5组,对照组、模型组(150μg/mL的Ox-LDL)、薯蓣皂苷低中高剂量组(4.8、12、30μg/mL),用MTT法检测EC存活率;流式细胞术分析测定细胞凋亡率;硝酸还原酶法测定EC的NO浓度;双抗体夹心法检测内皮素(ET)浓度;Western Blot测定内皮细胞eNOS的蛋白表达.结果:与对照组相比,Ox-LDL使EC的凋亡率、ET的浓度显著升高(49.6±10.44vs 30.0±3.27,P＜0.01;25.89±2.07vs16.93±1.64,P＜0.05);使EC的存活率、NO的浓度、eNOS蛋白表达显著降低(64.89±1.02vs 100±0,P＜0.01;27.03±3.12vs59.46±16.19,P＜0.01;P＜0.01).薯蓣皂苷低中高剂量组能明显抑制EC的凋亡率,降低ET的浓度;提高EC的存活率、NO的浓度以及eNOS蛋白表达水平,且在此药物浓度范围内成浓度依赖性.结论:著蓣皂苷可能通过减少ET的合成与分泌,提高eNOS的表达,使NO的合成与释放增加,从而对Ox-LDL诱导血管内皮细胞凋亡起到保护作用.     

17β—雌二醇对脂蛋白损伤血管内皮细胞的保护作用

现代“损伤反应学说”认为，血管内皮细胞损伤是发生动脉粥样硬化的始动环节。内皮细胞形态及功能的变化，在动脉粥样硬化发生发展中起重要作用。国外临床资料显示，绝经后妇女血清总胆固醇和LDL水平升高，高密度脂蛋白（HDL）降低。予雌激素替代疗法可减少LDL，增加HDL水平。本文旨地探讨LDL和OxLDL及雌激素对血管内皮细胞的影响，以求进一步了解雌激素对血管的保护作用机制。     

氧化修饰型低密度脂蛋白与高糖对血管内皮细胞TGF—β1生成的影响及意义探讨

目的：通过用不同浓度的葡萄糖及氧化修饰型低密度脂蛋白（ox-LDL)刺激血管内皮细胞,测定其TGF－β的含量,探讨在高糖,高脂诱导下动脉粥样硬化形成中TGF－β1的分泌变化及其意义,方法：用酶消化法体外养血管内皮细胞,分别用LDL50ug/ml,100ug/ml,200ug/ml和D－葡萄糖5mmol/L,25mmol/L,50mmol/L刺激内此细胞,24小时后收集培养上清,ELISA法测定培养上清内TGF－β1的含量,结果：ox-LDL能明显促进内皮细胞分泌TGF－β1（P＜0．01）,且有剂量效应,D－葡萄糖在5mmol/L的浓度下,与对照组比无明显差异（P＞0．05）,在25mmol/L的浓度下内皮细胞的分泌明显增加（P＜0．01）,在50mmol/L时,TGF－β1含量无明显增加（P＞0．05）,结论：ox-LDL和高糖能明显诱导内皮细胞分泌TGF－β1,提示其在动脉粥样硬化的病理过程中起着重要作用。     

氧化低密度脂蛋白与血管内皮细胞损伤

<正>动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)以血管内皮细胞(Vascular endothelia cell,VEC)受损、功能障碍为起始,继而血浆脂质侵入内皮下,引起单核/巨噬细胞浸润及血管平滑肌细胞(Vascular smooth muscle cells,VSMC)迁移至内膜下增     

姜黄素对氧化型低密度脂蛋白诱导的血管内皮细胞炎症损伤的保护作用

目的:研究姜黄素是否可抑制血管内皮的损伤及炎症反应从而起到预防动脉粥样硬化(AS)的作用。方法:培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),加入外源性氧化型低密度脂蛋白(OX-LDL组)组构造与AS发病早期相似的体外模型,用姜黄素干预后(姜黄素组)观察HUVEC形态的改变及炎症因子[细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、白细胞介素-6(IL-6)、IL-8]表达的变化。结果:OX-LDL诱导的AS模型内皮细胞增殖减少,ICAM-1、IL-6、IL-8的表达增加,均高于阴性对照组(P0.01);姜黄素组可减少细胞凋亡,降低ICAM-1、IL-6、IL-8的表达,与OX-LDL组差异均有统计学意义(P0.01)。结论:姜黄素能降低内皮细胞炎症损伤时相关炎症因子的表达,保护血管内皮细胞,预防AS。     

血管紧张素-(1-7)对氧化低密度脂蛋白诱导人血管内皮细胞纤溶功能异常的调节

目的 探讨血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导血管内皮细胞分泌组织型纤溶酶原激活物(t-PA)及其抑制物-1(PAI-1)的影响。方法 用酶消化法收集并培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),分别以不同终浓度的Ang-(1-7)(10、100、1000nmol/L)和ox-LDL[25、50、100mg/L(蛋白质含量)]进行单独或联合刺激,并以A-779(终浓度为100nmol/L)进行干预,孵育24h。以ELISA方法检测培养基上清液中t-PA和PAI-1蛋白含量,RT-PCR法检测PAI-1和t-PAmRNA的表达。结果 ox-LDL使PAI-1的分泌量显著增加,t-PA分泌显著降低,PAI-1mRNA表达升高,t-PAmRNA表达降低(P<0.001~0.05),并呈剂量依赖性;Ang-(1-7)使PAI-1分泌量及PAI-1mRNA表达显著降低,亦呈剂量依赖性(P<0.01~0.05),而对t-PA分泌及t-PAmRNA表达无影响;在混合刺激组中,与ox-LDL组比较,Ang-(1-7)使PAI-1及PAI-1mRNA表达降低、t-PA及t-PAmRNA表达升高(P<0.01~0.05),但PAI-1及PAI-1mRNA表达仍高于对照组,t-PA及t-PAmRNA表达仍低于对照组(P<0.05)。加入A-779后,Ang-(1-7)的作用消失。结论 Ang-(1-7)对氧化低密度脂蛋白诱导的血管内皮细胞纤溶异常具有显著的调节作用,此作用是通过特异性受体介导的。     

米非司酮对人脐静脉内皮细胞增殖与凋亡的作用

目的 :研究米非司酮 (MIF)对人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)增殖与凋亡的作用。方法 :应用MTT比色法观察MIF对HUVEC细胞生长的影响 ;采用形态学观察、流式细胞术、免疫组织化学、DNA缺口原位末端标记法 (TUNEL)观察MIF作用前后HUVEC细胞增殖与凋亡变化。结果 :不同浓度MIF均能抑制HUVEC细胞生长。MIF≤ 2 0 μmol L对细胞生长的抑制作用在第 2 4h达高峰 ,此后呈下降趋势。MIF >2 0 μmol L对细胞生长产生剂量依赖性抑制作用。用 4 0 μmol L的MIF处理 72h后 ,HUVEC细胞的增殖降低、凋亡率增加 ,P<0 .0 0 0 1;且伴随ER PR、VEGF表达的下降。结论 :MIF具有抑制HUVEC细胞增殖、诱导HUVEC细胞凋亡的作用。     

植物血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体介导氧化型低密度脂蛋白对内皮祖细胞存活和功能的影响

目的 研究植物血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体（LOX—1）是否介导氧化型低密度脂蛋白（oxLDL）对内皮祖细胞（EPC）的存活及功能产生影响。方法 分选脐血CD34^＋细胞,培养于内皮细胞生长培养基（EGM-2）中。培养14d后,部分EPC与10、25、50μg/ml的oxLDL孵育48h;部分EPC先与LOX-1单克隆抗体（LOX—1mAb）预处理24h,再与50μg／ml oxLDL孵育48h;对照组不作处理。检测EPC存活率及EPC迁移、黏附和管状结构形成能力,并检测LOX-1的蛋白及mRNA表达。结果oxLDL浓度为25和50μg／ml时,凋亡率分别为（15．8±1．0）％和（18．8±2．0）％,显著高于对照组的（9．0±1．2）％（P〈0．05）;迁移率分别为（5．7±1．0）％和（5．1±0．8）％,显著低于对照组的（9．5±0．8）％,（P〈0．05）;黏附细胞数分别为（33±2）和（30±3）个,显著少于对照组的（37±5）个（P〈0．05）;形成的管状结构分别为（2．9±0．5）和（1．8±0．5）mm,显著短于对照组的（5．0±0．6）mm（P〈0．05）。OxLDL可增加LOX—1mRNA及蛋白的表达,oxLDL浓度为50μg／ml时,LOX—1mRNA表达由100％增加为（174±39）％,蛋白表达由100％增加为（172±8）％。OxLDL的上述作用能被LOX1mAb所阻断。结论OxLDL可降低EPC存活,抑制EPC功能,其作用是由LOX—1介导的。     

活血解毒中药含药血清对氧化低密度脂蛋白诱导的内皮细胞损伤和凋亡的影响

目的：比较单纯活血中药含药血清与活血解毒中药配伍含药血清对氧化低密度脂蛋白（oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL）刺激的人脐静脉内皮细胞（human umbilical veinendothelial cell,HUVEC）活力、氧化损伤及凋亡的影响。方法：32只Wistar大鼠随机分为空白对照组（蒸馏水）、阳性对照组（辛伐他汀1.8mg/kg）、活血组（芎芍胶囊0.135g/kg）和活血解毒组（芎芍胶囊合用黄连胶囊,各0.135g/kg）。连续灌胃7d,末次给药后1h,腹主动脉采血制备含药血清。胶原酶消化法制备HUVEC,将ox-LDL（100μg/L）和（或）相应含药血清作用于HUVEC,24h后倒置显微镜下观察细胞形态,四氮唑蓝比色法观察含药血清对HUVEC活力的影响,乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）漏出率检测法观察细胞膜损伤,比色法检测细胞内超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性,硫代巴比妥酸法检测细胞丙二醛（malondialdehyde,MDA）水平,流式细胞仪结合Annexin V异硫氰酸荧光素/碘化丙啶双染色法测定HUVEC凋亡率。结果：与空白对照组比较,ox-LDL刺激24h后HUVEC活力和SOD活性降低,细胞内MDA含量升高,HUVEC早、晚期凋亡比例增加（P〈0.01,P〈0.05）。与单纯使用ox-LDL刺激相比,活血药、活血解毒药和辛伐他汀含药血清均能明显减轻ox-LDL对HUVEC的损伤,抑制HUVEC早期凋亡（P〈0.01,P〈0.05）,但对LDH漏出无明显抑制作用;活血中药和辛伐他汀含药血清可明显降低HUVEC内MDA含量,提高SOD活性（P〈0.01,P〈0.05）,活血解毒中药含药血清对上述指标无明显影响。活血药物血清与活血解毒药物血清比较差异无统计学意义。结论：活血及活血解毒中药配伍对ox-LDL导致的HUVEC氧化损伤和早期凋亡均具有一定的保护作用。     

LOX-1介导苯扎贝特对ox-LDL所引起PAI-1表达的影响

目的 探讨苯扎贝特对ox-LDL所诱导HUVECs表达PAI-1的影响及是否通过LOX-1介导.方法 体外培养HUVECs,RT-PCR检测PAI-1 mRNA表达,ELISA法观察PAI-1蛋白含量表达.结果 ox-LDL组,PAI-1 mKNA和蛋白表达明显增加(P<0.05),poly(Ⅰ)组,PAI-1 mRNA和蛋白表达明显减少(P<0.05);不同浓度苯扎贝特组,PAI-1 mRNA和蛋白表达明显减少(P<0.05),组间比较差异有统计学意义,呈浓度依赖关系(P<0.05);Poly(Ⅰ)+100μmol/L苯扎贝特组,与未加poly(Ⅰ)组比较,PAI-1mR-NA和蛋白表达均明显减少(P<0.05).结论 LOX-1介导了ox-LDL所诱导HUVECs PAI-1的表达;苯扎贝特可以下调ox-LDL所诱导的HUVECs PAI-1的表达,呈浓度依赖关系,部分机制可能通过LOX-1介导.     

二氢杨梅素调控自噬抑制氧化低密度脂蛋白诱导人脐静脉内皮细胞损伤的研究

目的观察二氢杨梅素（DMY）对氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）损伤的影响,并探讨自噬在其中的作用。方法DMY（0.01、0.10、1.00和10.00 μmol/L）预处理HUVECs 2 h,用100.0 mg/L ox-LDL 继续培养细胞24 h。以辛伐他汀作为阳性对照组。采用噻唑蓝法检测细胞活力,Hoechst33258染色观察细胞核形态,透射电镜观察自噬体,Western blot检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3（LC3）、Beclin-1和p62/SQSTM1的表达,观察自噬抑制剂对DMY作用的影响。结果与对照组比较,ox-LDL组细胞的存活率降低（p <0.05）,细胞核呈集中高强度蓝色荧光,固缩致密浓染或碎块状致密浓染,颜色发白,细胞核较小,形态不规则,自噬体和自噬溶酶体数量增加;Beclin-1、LC3-Ⅱ的表达和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值上调,而p62的表达下调（p <0.05）。与ox-LDL组比较,0.1、1.0和10.0μmol/L DMY预处理组细胞存活率均升高;细胞核荧光强度降低,核固缩致密浓染和碎块状致密浓染减少,形态较规则;1.0 μmol/L DMY 预处理组的自噬体和自噬溶酶体数量增加;Beclin-1、LC3-Ⅱ的表达和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值上调,而p62 的表达下调（p <0.05）。自噬抑制剂3-MA 部分抵消DMY 抑制ox-LDL诱导的HUVECs 存活率降低（p <0.05）。结论DMY 能抑制ox-LDL诱导的HUVECs 损伤,其机制与诱导自噬有关。     

子痫前期患者血浆对HUVEC凋亡和增殖的影响及其与LPA受体的关系

目的：探讨子痫前期（pre-eclampsia,PE）患者血浆对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）凋亡和增殖的影响,并进一步分析其与溶血磷脂酸（lyso-phosphotidic acid,LPA）受体的关系,为其临床研究提供可参考依据。方法：收集2012年1月～2013年6月70例我院确诊的PE孕妇,其中轻度PE 38例,重度PE 32例,同时随机抽取30例正常孕妇作为对照组。所有孕妇空腹抽取静脉血,分别配成不同成分培养液对健康产妇分娩后的HUVEC进行培养,应用MTT比色法检测HUVEC的凋亡和增殖,采用免疫组化检测LPA受体Edg4、Edg7的表达。结果：重度PE组细胞增殖抑制率（IR）及LPA水平均高于轻度PE组及对照组,轻度PE组IR及LPA水平均高于对照组,差异均有统计学意义（P〈0.05）。PE孕妇HUVEC由长梭形变为圆（椭圆）形,细胞间隙增大,且细胞排列疏松,而重度PE组上述情况更明显。重度PE组Edg4阳性例数、mRNA表达及Edg7阳性例数、mRNA表达均高于轻度PE组及对照组,轻度PE组Edg4阳性例数、mRNA表达及Edg7阳性例数、mRNA表达均高于对照组,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论：内皮细胞损伤是PE发生的原因之一,且血浆LPA水平升高及其受体Edg4、Edg7表达增加可能参与了PE孕妇血管内皮细胞损伤的发生、发展过程。     

金黄色葡萄球菌诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的观察

目的观察人脐静脉内皮细胞株ECV．304对金黄色葡萄球菌（S．aureus）感染的反应。方法常规方法制备金黄色葡萄球菌悬液,以1：1、1：10和1：100的感染复数感染ECV．304细胞1、3、6、12h和24h后,估算细胞吞噬细菌数,采用Hoechst33258染色,DNAladder及细胞凋亡相关因子RT．PCR检测细菌感染后细胞凋亡情况。结果金黄色葡萄球菌感染复数越高,细胞内吞噬的活细菌数越多。金黄色葡萄球菌感染导致ECV-304细胞发生凋亡,凋亡具有时间依赖性,随着感染时间的延长,凋亡小体增多,DNA片段也随之增多。抗凋亡细胞因子Bcl2mRNA表达量随着感染时间的延长下降,而促凋亡细胞因子Bax和Caspase．3表达量增多。结论金黄色葡萄球菌感染ECV-304细胞后,通过下调抗凋亡细胞因子Bcl2、上调促凋亡细胞因子Bax和Caspase-3诱导细胞凋亡。金黄色葡萄球菌感染内皮细胞的可能致病机制为临床治疗提供了实验依据。