实验动物胚胎冷冻保存技术浅谈

实验动物胚胎冷冻保存技术浅谈马伟（中国科学院上海实验动物中心，上海２００２３３）随着整个科学研究事业的发展，用于生物医学研究的实验动物品种、品系的数量也在增加。目前，世界上常用的大鼠和小鼠品系数量已超过１２００个（仅包括近交系、远交系和突变系），并且...     

胚胎骨移植的动物实验研究

作者以异体胚胎骨和新鲜自体骨为移植材料，进行修复骨缺损的比较研究，结果说明，二者在促进骨再生，修复骨缺损方面基本一样。     

低温保存对大鼠胚胎脊髓细胞的影响

本实验目的是研究低温存保对大鼠胚胎脊髓细胞的影响。选用胎龄１４天的Ｗｉｓｔａｒ大鼠，分离胚胎脊髓，剪成１ｍｍ＾３的小块。放入冻存液，逐渐降温，最后置于液氮中保存。１５天后取出，快速复温，冲洗，并植入正常大鼠脊髓内，同时对死亡和存活细胞计数和涂片，经计算机图像处理，算出细胞存活率和核质比例。实验结果显示：经低温保存的胚胎脊髓细胞存活率低于未经低温保存组；两组的存活细胞形态和核质比无明显改变。经过低温     

关注和提高实验动物福利

1　实验动物是生命科学研究的重要科技资源和实验生物材料　　实验动物(Laboratoryanimal)是指经人工培育,对其携带微生物实行控制,遗传背景明确,来源清楚,可用于科学研究、药品、生物制品的生产和检定及其他科学研究的动物。它在培育技术、质量控制和应用领域等诸多方面有别于其他动物(如农用动物、观赏动物、伴侣动物、经济动物、野生动物等)。在21世纪,生命科学飞速发展,实验动物科学作为生命科学研究的基础和支撑条件,影响到生命科学多个研究领域,成为现代科学的重要组成部分,已受到世界各国政府和科技界的重视,甚至成为衡量一个国家科…     

超低温保存胆道组织的实验研究

以１６４０液加胎牛血清为保存液，二甲亚酚为抗冻剂，庆大霉素，用液氮－１９６℃超低温保存兔，狗，人的胆道组织，用保存液葡萄糖含量测定及病理学检查来监测组织的生物活性。以３７℃体外培养作为对照。保存３月，１年病理检查显示胆道各组织及细胞及细胞的结构良好，无变性，坏死，胆道粘膜上皮细胞存活，无脱落；     

冷冻保存骨骺软骨组织的实验研究

目的：通过对兔骨骺软组织的冷冻保存和进行同种异体移植模拟研究，为临床骨骺软骨的保存和应用提供理论依据。方法：选用1个月龄的新西兰大白兔的髂骨骨骺24份。用10％二甲亚砜（DMSO）冷冻保护液保护后，用温度速 降仪使骨骺软骨的环境温度逐渐降至－80℃，然后迅速放入液氮中保存1、3、6周。取出后在室温下置入等渗盐水中复温。其中12份进行组织学和组织化学检查；另12份作为供体，植入同种成年兔股骨头部分缺损中，分别观察4、12和24周。然后取出股骨头进行大体、 组织学和组织化学检查。结果：实验显示，在上述冷冻条件下，大部分骨骼可存活并保存骨骺组织生长塑形，逐渐骨化和替代关节软骨的功能。结论：只要冷冻条件合适，骨骺软骨组织保存一定时间后仍具有生理功能，这为临床上修复骨骺损伤和关节软骨缺损提供了一条新的途径。     

实验动物品系数据库的建立

目的基于国内外部分实验动物数据库和文献,收集整理世界上现有的200多种共计26 000多个品系的实验动物数据,建立关系型检索数据库,使其成为世界上最大最全的实验动物品系数据库。方法构建基于My SQL数据库软件的中小型数据库,建立检索界面、录入界面和数据库接口。结果本文建立了实验动物品系数据库,已经收录小鼠品系数据21 596条;大鼠品系数据2062条;猴品系数据13条;地鼠品系数据2条;犬品系数据5条;兔品系数据5条。以后会逐步完善数据,实现实验动物品系数据库的定期更新。讨论该数据库的建立方便我国科研人员查阅和使用国内外实验动物品系资源,为引进欧美日等发达国家的实验动物品系资源提供链接。     

转基因技术和冷冻胚胎技术的实验数据建立

目的 建立一系列转基因技术和冷冻胚胎技术的实验室数据库。方法 a)显微注射法注射1864个1-细胞期受精卵,注射后存活的1283个胚胎进行胚胎移植,获得20只阳性转基因动物。b)设计不同单位的激素剂量(PMSG HCG)获得每个品系的小鼠平均排卵量和最佳激素剂量。e)采用常规法和玻璃化法进行胚胎冷冻保存,并就囊胚和桑椹胚两个不同时期进行复苏成活率的比较。结果 和讨论a)建立转基因技术和胚胎冷冻保存的实验数据库(随着实验技术的不断提高还将不断的完善)。胚胎显微注射存活率为68．8％;转基因阳性鼠出生率为16．16％;基因整合率为1．56％。b)激素诱发5种品系小鼠的平均超排卵数为：C57BL/6J(日本)15．6;C57BL/6J 19．6;BDF1(日本)21．4;C3H(日本)14．8;KM 30。e)胚胎冷冻保存复苏,出生幼子存活率为30％～31％。     

近交系小鼠胚胎玻璃化冷冻技术研究

目的 对近交系小鼠体内受精的胚胎在三种不同处理温度(20℃、25℃、28℃)进行玻璃化冷冻保存。方法 不同温度下,胚胎在10％EG溶液中预处理5min,再投入EFS40玻璃化溶液中1min,平衡后冷冻。结果 与20℃和28℃相比,三个品系小鼠的胚胎都在25℃冷冻时获得最佳效果,解冻后培养观察发育率分别是87．77％、90．00％、87．18％。结论 该结果对近交系小鼠胚胎保存具有重要意义。     

人类冻存胚胎及配子的管理和伦理问题探讨

随着辅助生殖技术（简称ART）的开展,人类冻存胚胎及配子使用现状是：冻存胚胎、配子越来越多,医源性不起用次一级的冻存胚胎,对捐赠胚胎及配子的科研需求增加等。存在着监管和伦理审查难题：即知情同意的难题;冻存胚胎及配子的使用和自由流动问题;伦理审查往往流于形式。提出相应的对策有：完善相关法律法规;发挥伦理委员会职能,建立健全医疗机构相关管理制度;加强伦理委员会的能力建设和监管制度建设。     

实验动物信息学与中国实验动物数据信息网建设

实验动物信息学是应用信息科学与数理科学理论、技术研究实验动物的一个交叉学科。其主要内容包括实验动物的科学与管理标准化、信息分类编码、完整基因组和功能的信息结构分析与比较、信息系统的研究。开展实验动物信息学研究,为实验动物在电子商务、专家系统、动物模拟替代实验、基因产业等领域的拓展和应用提供广阔空间。中国实验动物信息网络建设将有助于推进我国实验动物科学产业化、信息化、社会化的进程,是实验动物科学实现跨越式发展的重要领域。     

小鼠胚胎玻璃化冷冻的研究进展

玻璃化冷冻是继常规冷冻方法之后发展起来的一种冷冻方法,它操作简单且不需要高精度的冷冻仪。玻璃化冷冻的效果与玻璃化溶液的种类、冷冻方法及胚胎的不同品种及时期有关。本文综述了近年来有关胚胎玻璃化冷冻的研究进展。     

高校动物实验教学与实验动物福利

目前在高校动物实验教学过程中,培养学生实验动物福利观念是一项非常重要的任务。该文主要从实验动物福利的含义、培养实验动物福利观念的意义以及措施几方面论述,旨在为高校动物实验教学中促进动物福利提供参考。     

HBV转基因小鼠胚胎玻璃化冷冻保存研究

目的研究OPS法对不同基因型的HBV转基因小鼠胚胎玻璃化冷冻的效果，为建立转基因小鼠胚胎库奠定基础。方法采用乙二醇作为冷冻保护剂，以野生型P21^ / 小鼠为对照，用OPS法对P21^HBsAg／HBsAg及P21^HBx/HBx两种HBV转基因小鼠3．5d的胚胎进行玻璃化冷冻，并比较不同基因型小鼠的超数排卵数，胚胎的复苏率及发育率。结果P21^ / 、P21^HBsAg／HBsAg及P21^HBx/HBx小鼠平均超排数分别为27．89、15．56、9．14枚；复苏率分别为88．7％、81．1％、80．3％；发育率分别为82．6％、79．4％、56．6％。结果表明HBV转基因小鼠的超排数明显低于野生型小鼠的超排数，解冻后三种小鼠的胚胎复苏率之间无显著差别，而解冻后发育率，P21^HBx／HBx小鼠要明显低于其它两种小鼠。结论超排数、胚胎复苏率及解冻后发育率受小鼠的基因型影响。     

改良程序化慢冻提高活检人胚胎的冻存率

[目的]探讨及Jericho改良方案用于冷冻活检后胚胎的效能.[方法]将92个质量相对较好的废弃人胚胎随机分配到单纯冷冻组(n=30),胚胎活检后标准程序化慢冻组(n=32)及胚胎活检后Jericho改良程序化慢冻组(n=30).将活检后的胚胎继续培养6～10 h,3组胚胎同时进行冷冻.观察各组胚胎冷冻解冻后的冻存率及囊胚形成率.[结果]活检胚胎采用Jericho改良方案冷冻后,胚胎存活率、完整率及囊胚率分别为73%,40%和23%,较活检后标准冷冻组(16%,13%和3%)显著提高(P值分别<0.001,0.05,0.05),达到单纯冷冻组的水平(P均>0.05).[结论]采用Jericho改良方案冷冻活检人胚胎优于目前的标准化慢冻方案,Jericho方案冷冻后的胚胎具备良好的发育潜能.     

实验动物垫料的标准化

垫料与实验动物关系密切,是对实验动物产生直接作用和影响的环境因素.本文从实验动物垫料的种类和消毒、垫料质量控制与评价体系的建立、垫料的商品化等方面的问题进行探讨.为实验动物垫料的研发和完善实验动物国家标准提供重要参考依据.     

Straw-top玻璃化与程序化冷冻小鼠8-细胞胚胎效果的比较

目的比较慢速程序化法与玻璃化法冷冻小鼠8-细胞胚胎的效果。方法将小鼠卵母细胞行体外受精后培养至8-细胞,分别采用慢速程序化法与玻璃化法进行冷冻,解冻后比较两组胚胎存活率及囊胚形成率。结果慢速程序化冷冻法解冻后的胚胎存活率为79.6%,囊胚形成率为70.7%;玻璃化冷冻法解冻后的胚胎存活率为94.9%,囊胚形成率为89.9%,胚胎存活率与囊胚形成率均显著高于前者（均P〈0.01）。结论在进行小鼠8-细胞胚胎冷冻时,玻璃化法冷冻效果较慢速程序化法效果好。