恶性疟原虫不同虫株间环子孢子蛋白基因多态性分析

本文采用ＰＣＲ方法扩增了恶性疟原虫云南株（ＰＦＤ－３／ＹＮ）环子孢子蛋白（ＣＳＰ）部分基因，将扩增的基因片断克隆于Ｍ１３测序载体进行了基因序列测定。用ＰＣＧＥＮＥ软件对恶性疟原虫不同虫株ＣＳＰ基因序列进行了一系列比较分析。其结果表明恶性疟原虫虫株间ＣＳＰ基因存在多态性，ＰＦＤ－３／ＹＮ株ＣＳＰ基因序列与Ｔ４、Ｗｅｌｃｏｍｅ、ＮＦ５４、３Ｄ７及７Ｇ８等虫株均有不同程度的差异。     

恶性疟原虫海南株丝氨酸重复抗原部分基因序列分析

该文采用ＰＣＲ方法特异性扩增恶性原虫海南株（ＦＣＣ－１／ＨＮ）ＳＥＲＡ基因片段,并将该基因片克隆于Ｍ１３噬菌体,用双脱氧链末端终止法进行测序,ＰＣＧＥＮＥ软件对该基因序列进行了分析,结果显示该基因片段长度为４５３ｂｐ,Ａ＋Ｔ／Ｇ＋Ｃ为２．６：１,符合恶性瓶原虫结构基因的特点。同源性分析显示在不同虫株间高度保守,我国ＦＣＣ－１／ＨＮ虫株ＳＥＲＡ与Ｂ１、Ｂ２、Ｂ３（巴西）株及Ｓ１６（塞内加尔）株仅一个     

恶性疟原虫不同虫珠间环子孢子蛋白基因多态性分析

本文采用ＰＣＲ方法扩增了恶性疟原虫云南株环子孢子蛋白部分基因，将扩增的基因片断克隆于Ｍ１３测序载体进行了基因序列测定。用ＰＣＢＥＮＥ软件对恶性疟原虫不同虫珠ＣＳＰ基因序列进行了一系列比较分析。     

恶性疟原虫裂殖子表面蛋白—2基因克隆及其在大肠杆菌中 …

目的：克隆恶性疟原虫裂殖子表面蛋白２全基因,并在大肠杆菌中进行表达。方法：采用ＰＣＲ扩增恶性疟原虫ＦＣＣ－１／ＨＮ株ＭＳＰ２基因,克隆插入ｐＵＣ１９,并重组人表达质粒载体中,转化大肠杆菌,诱导重组质粒ｐＢＫ－ＣＭＶ／ｍｓｐ２表达ＭＳＰ２蛋白抗原,对表达产物进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ,ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ和Ｗｅｗｔｅｒｎ ｂｌｏｔ鉴定。结果：ＰＣＲ扩增出８２４ｂｐＤＮＡ片段,经酶切鉴定和部分序列测定证实为Ｍ     

中国脑型疟患者恶性疟原虫分离株裂殖子表面蛋白2基因的分子克隆及序列分析

目的为设计研制安全有效的人脑型疟疫苗提供科学依据。方法应用多聚酶链反应（ＰＣＲ）对５例中国脑型疟患者恶性疟原虫云南省勐腊县勐罕（ＣＭＨ／ＹＮ）分离株和云南省盈江县农场（ＣＹＪ／ＹＮ）分离株基因组裂殖子表面蛋白２（ＭＳＰ２）基因进行扩增，将扩增产物分别经ＢａｍＨＩ和ＨｉｎｄⅢ双酶切后，回收的ＭＳＰ２基因分子定向克隆Ｍ１３ｍｐ１８和Ｍ１３ｍｐ１９载体，按Ｓａｎｇｅｒ双脱氧链终止法进行ＤＮＡ序列测定，并与恶性疟原虫株ＦＣ２７、Ｋ１、ＩＣ１和ＣＡＭＰ株进行同源性分析比较。结果５例中国脑型疟患者恶性疟原虫ＣＭＨ／ＹＮ和ＣＹＪ／ＹＮ分离株ＭＳＰ２基因之间序列完全相同，全长为８００ｂｐ，编码２６４个氨基酸，中央的串联重复序列含２×３２肽序列，与ＦＣ２７、Ｋ１株之间核苷酸同源性为９８８％，而与ＩＣ１、ＣＡＭＰ株之间核苷酸同源性为２８２％。结论中国脑型疟患者恶性疟原虫分离株ＭＳＰ２基因突变及其表达的异常可能是导致脑型疟昏迷的一种重要的分子病因     

恶性疟原虫海南、云南、安徽株裂殖子表面抗原MSA2基因的克隆和序列分析

应用ＰＣＲ技术扩增并克隆了恶性疟原虫海南、云南、安徽三个地理株的ＭＳＡ２基因，测定并分析了全基因序列。结果表明，海南、云南、安徽株ＭＳＡ２基因序列完全相同，全长为７９５ｂｐ，编码２６４个氨基酸，与ＦＣＱ－２７／ＰＮＧ株ＭＳＡ２高度同源。对抗原表位进行多参数综合分析表明，我国虫株除具有国外已确定的抗原表位ＳＴＮＳ、ＤＴＰＴＡＴＥ外，在第５３—７２位氢基酸间可能具有一个新的抗原表位。     

恶性疟原虫海南,云南,安徽株裂殖子表面抗原MSA1第二区基因…

应用ＰＣＲ技术扩增并克隆恶性疟原虫海南，云南，安徽３个地理株ＭＳＡ１第二区基因，测定并分析其基因序列。结果表明，海南，云南安徽株扩增片段长度为４２３ｂｐ，基因序列完全相同，我国虫株ＭＳＡ１与ＷＥＬＬＣＯＭＥ株最为相似，存在ＭＡＤ和Ｋ１两种等位基因型的基因内重现现象。     

恶性疟原虫海南、云南、安徽株裂殖子表面抗原MSA1第二区基因的克隆和序列分析

应用ＰＣＲ技术扩增并克隆恶性疟原虫海南、云南、安徽３个地理株ＭＳＡ１第二区基因，测定并分析其基因序列。结果表明，海南、云南、安徽株扩增片段长度为４２３ｂｐ，基因序列完全相同，我国虫株ＭＳＡ１与ＷＥＬＬＣＯＭＥ株最为相似，存在ＭＡＤ和Ｋ１两种等位基因型的基因内重组现象。     

中国脑型疟患者恶性疟原虫分离株裂殖子表面蛋白2基因的分子克隆及序列分析

为设计研制安全有效的人脑型疟疫苗提供科学依据。应用多聚酶链反应（ＰＣＲ）对５例中国脑型疟患者恶性疟原虫云南省勐腊县勐罕（ＣＭＨ／ＹＮ）分离株和云南省盈江县农场（ＣＹＪ／ＹＮ）分离株基因组裂殖子表面蛋白２（ＭＳＰ２）基因进行扩增，将扩增产物分别经Ｂａｍ...     

恶性疟原虫海南,云南,安徽株裂殖子表面抗原MSA2基因的克隆和序列…

应用ＰＣＲ技术扩增并克隆了恶性疟原虫海南、云南、安徽三个地理株的ＭＳＡ２基因，测定并分析了全基因序列。结果表明，海南、云南、安徽株ＭＳＡ２基因序列完全相同，全长为７９５ｂｐ，编码２６４个氨基酸，与ＰＣＱ－２７／ＰＮＧ株ＭＳＡ２高度同源。对抗原表位进行多参数综合分析表明，我国虫株除具有国外已确定的抗原表位ＳＴＮＳ、ＤＴＰＴＡＴＥ外，在第５３－７２位氨基酸间可能具有一个新的抗原表位。     

恶性疟原虫裂殖子表面蛋白基因在减毒伤寒杆菌诱导株中的表达

目的 用含ＰＬｔｅｔＯ启动子的ｐＺＥ１１质粒在减毒伤寒杆菌ＣＶＤ９０８疫苗株中表达恶性疟原虫主要裂殖子表面蛋白。方法 将克隆有恶性疟原虫裂殖子表面蛋白Ｃ末端基因（ＭＳＰ１－４２）的重组ｐＺＥ１１质粒用电穿孔转化法转化入减毒伤寒杆菌ＣＶＤ９０８／ｔｅｔＲ疫苗株中,用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、免疫印迹反应和免疫荧光反应检测ＭＳＰ１－４２在ＣＶＤ９０８／ｔｅｔＲ株中的体内外四环素诱导表达。结果 构建了ＣＶＤ０８     

恶性疟原虫海南、云南、安徽株裂殖子表面抗原MSA1第二区基因的克隆和序列分析

本文应用ＰＣＲ技术扩增并克隆了恶性疟原虫海南、云南、安徽三个地理株ＭＳＡ１第二区基因，测定并分析了基因序列。结果表明，海南、云南、安徽株扩增片段长度为４２３ｂｐ，基因序列完全相同，我国虫株ＭＳＡ１与ＷＥＬＬＣＯＭＥ株最为相似，存在ＭＡＤ和Ｋ１两种等位基因型的基因内重组现象。     

恶性疟原虫海南,云南,安徽株裂殖子表面抗原MSA1第二区基因的克…

本文应用ＰＣＲ技术扩增并克隆了恶性疟原虫海南、云南、安徽三个地理株ＭＳＡ１第二区基因，测定并分析了基因序列。结果表明，海南、云南、安徽株扩增片段长度为４２３ｂｐ，基因序列完全相同，我国虫株ＭＳＡ１与ＷＥＬＬＣＯＭＥ株最为相似，存在ＭＡＤ和Ｋ１两种等位基因型的基因内重组现象。     

用流式细胞仪检测脉冲磁场对HL-60细胞程序性死亡及周期的影响

目的：研究脉冲磁场（ＰＥＭＦ）对人早幼粒白血病（ＨＬ－６０）细胞程序性死亡（ＰＣＤ）及周期的影响。方法：以ＨＬ－６０细胞为研究对象，用流式细胞仪进行分析。结果：以ＰＥＭＦ频率为２５０Ｈｚ，场强为５ＭＴ照射ＨＬ－６０细胞，流式细胞仪分析的结果表明，ＰＣＤ呈时间依赖性增加。作用后８ｈ，ＰＣＤ增加到３８．８６％，明显高于对照组。ＰＥＭＦ对ＨＬ－６０细胞周期有影响，随着磁场作用后时间的延长，Ｇ０／Ｇ１期细胞逐渐减少，Ｇ２／Ｍ期细胞逐渐增加。磁场作用后８ｈ，Ｇ０／Ｇ１期细胞减少到４７．４４％，磁场作用后１６ｈ，Ｇ２／Ｍ期细胞增加到４６．５５％。结论：ＰＥＭＦ诱发ＨＬ－６０细胞ＰＣＤ可能与ＰＥＭＦ改变ＨＬ－６０细胞周期有关。     

血糖快测法与胰岛素释放试验,C肽对糖尿病前期诊断的研究

探讨胰岛素释放试验（ＧＳＩＲＴ）、Ｃ肽（ＣＰ）对糖尿病前期（ＰＤＰ）的诊断价值，５０例Ⅱ型糖尿病（Ⅱ－ＤＭ）用血清胰岛素（ＩＲＩ）餐后３小时值／空腹值≥４，ＣＰ〉４μｇ／Ｌ及葡萄糖耐量试验进行验证，ＧＳＩＲＴ及ＣＰ对Ⅱ－ＤＭ诊断的敏感性和特异性分别为９６％及７６％。用ＧＳＩＲＴ及ＣＰ查出ＰＤＰ３５例中，符合葡萄糖耐量减低（ＩＧＴ）占２２．８５％。并随机抽查６０例Ⅱ－ＤＭ中的不同时期血糖快测情况，Ｆ     

表皮生长因子对体外建株瘤细胞的促增殖作用及其对瘤细胞顺铂敏感性的影响

本文采用３，４，５－二甲基噻唑－２，５－二苯基－四唑溴化物（ＭＴＴ）比色法及乳酸脱氢酶释放法，研究了表皮生长因子（ＥＧＦ）对人骨髓红白血病细胞系（Ｋ５６２）、人Ｂ淋巴细胞白血病细胞系（Ｒａｊｉ）、人宫颈癌细胞系（Ｈｅｌａ）的促增殖作用及其对３种瘤细胞顺铂（ＣＤＤＰ）敏感性的影响。结果显示，ＥＧＦ能够促进Ｒａｊｉ、Ｈｅｌａ细胞增殖，对Ｋ５６２细胞的生长没有促进作用。ＥＧＦ与ＣＤＤＰ同时接触瘤细胞，不能增高瘤细胞对ＣＤＤＰ的敏感性，但提前２４小时接触瘤细胞，Ｒａｊｉ、Ｈｅｌａ细胞对ＣＤＤＰ敏感性明显增高；Ｋ５６２细胞的敏感性则未见增高。表明ＥＧＦ增高肿瘤细胞ＣＤＤＰ敏感性可能与其提前激活瘤细胞表面的ＥＧＦ功能性受体有关。揭示ＥＧＦ激活的信号传导通路在ＣＤＤＰ细胞毒作用中起调节作用。     

血小板衍化内皮细胞生长因子原核表达载体的构建

目的 构建血小板衍化内皮细胞生长因子（ＰＤ－ＥＣＧＦ）的原核表达载体。方法 设计引物扩增ＰＤ－ＥＣＧＦ的ｃＤＮＡ,然后亚克隆入原核表达载体ｐＱＥ和ｐＱＥ－３２ａ,并转化入大肠杆菌ＪＭ１０９。结果 通过菌落原位杂交、ＰＣＲ和重组质粒酶切分析等方法,筛选出重组阳性克隆。结论 此重组质粒可用于原核表达等进一步研究。dir     

纤维蛋白原、极低密度脂蛋白对人脐静脉内皮细胞t-PA和PAI-1mRNA含量的影响

目的　拟建立逆转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）半定量法,探讨纤维蛋白原（Ｆｇ）、极低密度脂蛋白（ＶＬＤＬ）对人脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣｓ）组织型纤溶酶原激活物（ｔ－ＰＡ）、Ｉ型纤溶酶原灭活剂（ＰＡＩ－ｌ）ｍ ＲＮＡ 表达的影响。　方法　（ｌ）用异硫氰酸胍一步法（ＴＲＩｚｏｌ试剂）提取细胞总ＲＮＡ,用单管ＲＴ－ＰＣＲ 法、三对引物分别逆转录、扩增ｔ－ＰＡ,ＰＡＩ－１ 及内参照三磷酸甘油醛脱氢酶（ＧＡＰＤＨ）的特异性片段,扩增产物经２．０％ 琼脂糖凝胶电泳分离后,用凝胶图像分析仪照相、计算各条带分子量并扫描其光密度值（ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ｄｅｎｓｉｔｙ ｖａｌｕｅ,ＩＤＶ）,ｔ－ＰＡ、ＰＡＩ－１ ｍ ＲＮＡ的ＩＤＶ 用ＧＡＰＤＨ ｍ ＲＮＡ 的ＩＤＶ 进行校正,其相对表达量用各实验组与对照组比较的倍数表示。（２）以ＥＬＩＳＡ 法测定内皮细胞（ＥＣ）培养上清液（ＣＭ）中ｔ－ＰＡ,ＰＡＩ－１总抗原的含量。（３）ＥＣ与不同浓度Ｆｇ（２,２０,２００,２０００ μｇ／ｍ ｌ）或ＶＬＤＬ（５,１０,２０,３０,４０ μｇ／ｍ ｌ）共同孵育１２ ｈ 或２４ ｈ 后,观察ＥＣｔ－ＰＡ 和ＰＡＩ－１ ｍ ＲＮＡ 水平及ＣＭ 中抗原含量的变化。（４     

大肠杆菌L－天门冬酰胺酶Ⅱ基因的高效表达

用一对与大肠杆菌天门冬酰胺酶Ⅱ基因（ＡｎｓＢ）两侧序列互补的寡核苷酸Ｅ１，Ｅ２作引物，以大肠杆菌野生株ＣＰＵ２１０００９的染色体ＤＮＡ为模板，通过ＰＣＲ扩增得到约１．２ｋｂ的ＤＮＡ片段，将此片段插入ｐＫＫ２３３－２的ｔａｃ启动子下游，转化不同的大肠杆菌宿主菌株，结果表明以ＣＰＵ２１０００９为宿主菌时，转化子的酶表达量最高，重组Ｌ－天门冬酰胺酶占菌体总蛋白４８．３％，发酵液酶活力达４００ＩＵ／ｍｌ；比活为４８ＩＵ／ｍｇ蛋白，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示纯化后的重组Ｌ－天门冬酰胺酶分子量与天然酶相同，均为１４０ＫＤ。     

重组人促红细胞生成素cDNA在CHO-dhfr-细胞中的高效表达

目的：使重组人促红细胞生成素（ｒｈＥＰＯ）在ＣＨＯ细胞中获得高效表达。方法：利用基因重组构建了两个人促红细胞生成素ｃＤＮＡ重组表达质粒ｐＥＤ－ＥＰＯ和ｐＥＦ－ＥＰＯ，分别用ＤＥＡＥ－ｄｅｘｔｒａｎ法转染ＣＯＳ７细胞，作瞬时高表达，选ｐＥＦ－ＥＰＯ用磷酸钙共沉淀法转染ＣＨＯ－ｄｈｆｒ－细胞，加入氨甲喋呤（ＭＴＸ）扩增、选择，作稳定性高表达。结果：ｐＥＤ－ＥＰＯ和ｐＥＦ－ＥＰＯ转染ＣＯＳ７细胞后７２ｈ表达量分别为１７．８和２１．０ｎｇ／ｍｌ，ｐＥＦ－ＥＰＯ转染ＣＨＯ－ｄｈｆｒ－细胞，随着ＭＴＸ浓度的增加，ＣＨＯ－ｄｈｆｒ＋的克隆数减少，而混合克隆的ＥＰＯ表达量逐渐升高。筛选了一株稳定性高表达ｒｈＥＰＯ的细胞株，其３ｄ表达量为１６μｇ／ｍｌ。结论：ｒｈＥＰＯ在ＣＨＯ细胞中获得了高表达