小鼠腹水型肝癌高低转移细胞株DARS2蛋白表达的差异

[目的]研究具有高、低转移潜能的小鼠腹水型肝癌细胞株Hca -F与Hca -P中线粒体的天门冬氨酰转移核糖核酸合成酶( DARS2)蛋白表达的差异.[方法]将Hca -F细胞与Hca -P细胞分别接种于615小鼠腹腔,抽取腹水,培养后收集细胞;用免疫印迹分析及免疫细胞化学方法检测Hca -F与Hca -P细胞的DARS...     

小鼠腹水型肝癌高淋巴道转移瘤株Hca-F的再克隆技术

[目的 ]探讨小鼠腹水型肝癌高淋巴道转移瘤株Hca -F的再克隆技术。 [方法 ]采用有限稀释法对已使用多年的小鼠腹水型肝癌高淋巴道转移瘤株Hca -F进行再克隆 ;6 15小鼠皮下接种 ,检测再克隆瘤株淋巴结转移能力。 [结果 ]共分离出 3个不同的瘤株 ,Hca -F - 2 - 2 4c6 ,Hca -F -3-d4 ,Hca -F - 3-a4 ,流式细胞仪检测证明 3株瘤细胞均为单克隆细胞。动物实验证明三株瘤细胞淋巴结转移率分别为 95 .5 % ,87% ,4 2 .5 %。 [结论 ]有限稀释法操作简单 ,克隆的形成率高     

百草枯中毒致大鼠急性肺损伤时NF-κB抑制剂对中性粒细胞凋亡的影响

目的:探讨在百草枯(PQ)中毒所致大鼠急性肺损伤时NF-κB抑制剂(PDTC)对中性粒细胞凋亡的影响。方法:120只大鼠随机分为4组:1正常对照组(C组):腹腔注射生理盐水3ml/kg;2PDTC对照组(PC组):腹腔注射PDTC120mg/kg,半小时后腹腔注射生理盐水3ml/kg;3急性肺损伤组(L组):大鼠腹腔注射2%PQ(25mg/kg);4急性肺损伤+PDTC干预组(L+P组):腹腔注射PDTC(120mg/kg),半小时后腹腔注射2%PQ。后两组分别以腹腔注射PQ后的1d、3d、5d作为观测点,处死动物、取材,每个时间点16只大鼠。取肺组织HE染色来评价肺组织损伤情况;检测血清中TNF-α水平、肺泡灌洗液中PMN的NF-κBp65表达、PMN中胞浆蛋白IκBα的含量和中性粒细胞凋亡率。结果:肺组织病理结果显示,C组和PC组大鼠的肺组织结构基本完整。L组炎性细胞浸润明显增多,肺组织损伤程度加重。P+L组肺组织损伤程度较轻。L组血清TNF-α水平较C组显著增加,P+L组降低。L组3d时PMN的凋亡率最低(3.52±0.34)%,P+L干预组与相应时间点L各组相比凋亡率均增加。结论:百草枯中毒导致了大鼠急性肺损伤,在预先应用NF-κB抑制剂(PDTC)后,使延缓的中性粒细胞凋亡恢复正常,从而有效地减轻了百草枯中毒所致的κB大鼠急性肺损伤。     

NF-κB与系统性红斑狼疮鼠树突状细胞参与免疫耐受机制的关系

目的 探讨NF-κB与系统性红斑狼疮鼠树突状细胞(DCs)参与免疫耐受机制的关系.方法 系统性红斑狼疮模型小鼠18只,随机分为激素组、NF-κB特异性抑制剂吡咯啉烷二甲基硫脲(PDTC)组及病理对照组,每组6只;C57BL/6小鼠6只作为正常对照组.病理对照组与正常对照组每天予等量盐水灌胃,激素组以醋酸泼尼松混悬液2 mg/(kg·d)灌胃,PDTC组以PDTC 70 mg/kg隔天腹腔注射,干预8周后处死所有小鼠,取骨髓干细胞分离诱导培养DCs,观察并检测DCs,检测混合淋巴细胞反应(MLR)后IL-10、IFN-γ水平.结果 成熟树突状细胞(mDCs)与未成熟树突状细胞(iDCs)各组间比较:光镜下两者明显不同;流式细胞仪分析:iDCs激素组较病理对照组表面标志物CD80、CD86和 MHC-Ⅱ下降(P<0.05),PDTC组较激素组、病理对照组、正常对照组表面标志物表达均下降(P<0.05);mDCs激素组较病理对照组仅CD86表达下降(P<0.01),PDTC组CD80、CD86和 MHC分子表达均明显下降(P<0.001);MLR表明激素组刺激同种异体T细胞活化增殖能力下降(P<0.05),PDTC组较激素组明显下降(P<0.001);ELISA检测IL-10、IFN-γ表明激素组MLR培养上清液中IL-10、IFN-γ水平均下降(P<0.001),PDTC组较激素组明显下降(P<0.001).结论 系统性红斑狼疮鼠DCs参与免疫耐受机制可能与NF-κB有关.     

L-精氨酸诱导的小鼠急性胰腺炎中NF-κB活性的阻断及其对炎症发展的抑制效应

目的探讨吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)和N-乙酰半胱氨酸(NAC)在小鼠急性水肿性胰腺炎(AEP)中对核因子-κB(NF-κB)的DNA结合活性的抑制效应,并论证阻断NF-κB活性在AEP治疗中的可行性.方法20%L-精氨酸(2×2.0mg/g体重)腹腔注射诱导小鼠AEP;空白对照组给予等量生理盐水.抑制剂PDTC或NAC组在造模前1 h腹腔内分别注射0.1 mg/g PDTC、0.1 mg/g NAC.EMSA分析胰腺组织中NF-κB活性;碘比色法测定血清淀粉酶活力,放射免疫法测定血清IL-6水平留取胰腺组织分析病理形态学及湿干比值的变化;黄嘌呤氧化酶法测定胰腺组织SOD活力.结果L-精氨酸腹腔注射后,小鼠胰腺组织NF-κB活性较NS组明显升高.给予PDTC或NAC干预后,病变胰腺组织中NF-κB活性在0.5,3,6,12 h四个时间点受到不同程度的抑制,并且伴随着血清IL-6水平、胰腺组织学评分、湿干比值等指标的改善,但PDTC及NAC预处理对血清淀粉酶活力影响不大.结论NF-κB活化是L-精氨酸诱导的小鼠AEP早期的一个重要事件,PDTC或NAC可通过阻断NF-κB活性而抑制胰腺炎症的发展.     

吡咯烷二硫氨基甲酸对小鼠大剂量顺铂肾毒性损伤的防治作用

[目的]探讨抗氧化剂吡咯烷二硫氨基甲酸(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)对大剂量顺铂(cisplatin,DDP)所致肾毒性损伤的防治作用.[方法]昆明种小鼠100只,雌雄各半,依体重随机分为DDP组,DDP+PDTC组,生理盐水(NS)对照组.DDP 12 mg/kg单次腹腔内注射,PDTC 50 mg/kg每日皮下注射1次,连用3 d,等量NS对照.每组取10只小鼠,观察并记录其用药后的反应、体重变化及存活时间;分别取对照组小鼠和DDP用药后24、48、72 h的DDP组和DDP+PDTC组小鼠各10只,内眦静脉取血检测肾脏功能,然后剖腹取两侧肾脏,称重并计算肾系数,统计学分析. [结果]DDP用药后24 h,DDP用药组小鼠体重下降、肾系数增高;用药后48 h,小鼠血尿素氮、肌酐含量明显升高;用药72 h 66%小鼠死亡,与对照组小鼠比较差异具有显著性意义(P<0.01).PDTC可明显减轻DDP所致小鼠的体重下降,并能有效预防DDP用药后小鼠血尿素氮和肌酐的升高,明显提高小鼠的生存率,与DDP用药组小鼠比较差异具有显著性意义(P<0.01).[结论]PDTC可改善小鼠DDP用药的毒副作用,预防大剂量DDP所致的肾损伤.     

核因子κB在支气管哮喘模型大鼠气道平滑肌细胞增殖中的作用

目的探讨核因子κB(NFκ-B)在支气管哮喘模型大鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖中的作用。方法采用卵清蛋白(OVA)致敏OVA激发的方法制备大鼠哮喘模型。将18只Wistar大鼠分为:①哮喘组;②吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)组:OVA激发前腹腔注射NFκ-B的特异性抑制剂PDTC(100 mg/kg);③对照组:注射及吸入等量生理盐水。采用流式细胞术、MTT法及增殖细胞核抗原(PCNA)免疫荧光技术等方法观察ASMCs增殖;免疫荧光技术及电泳迁移率改变分析(EMSA)检测NFκ-B活性;Western blot检测NFκ-B的抑制蛋白I-κBα表达。结果①PDTC组ASMCs S期比例、A值、PCNA阳性表达率分别为(11.77±3.37)%、(0.283±0.034)、(27.9±6.7)%,与哮喘组[(22.17±3.64)%、(0.469±0.050)、(77.3±8.4)%]比较均显著降低(均P<0.05),与对照组[(12.08±2.86)%、(0.302±0.059)、(25.3±3.8)%]比较差异均无显著性意义(均P>0.05)。②PDTC组ASMCs NFκ-B活性与哮喘组比较显著降低(P<0.05),与对照组比较差异无显著性意义。结论NF-κB参与哮喘大鼠ASMCs增殖,抑制NF-κB活性能降低哮喘大鼠ASMCs增殖。     

TNFα及PDTC诱导雄激素非依赖性前列腺癌细胞凋亡的实验研究

目的　探讨雄激素非依赖性前列腺癌治疗的新途径。方法　以含 2 0 %小牛血清的RPMI - 16 4 0为培养基 ,在 37℃、5 %CO2 培养箱中孵育雄激素非依赖性前列腺癌细胞株 (PC - 3) ,倍增至所需的细胞数后 ,行SCID鼠右腋皮下接种 ,建立雄激素非依赖性前列腺癌动物模型。待瘤体长至约 1.0cm3 大小时 ,随机分成 4组 :A组 (对照组 ) ,皮下注射生理盐水每只 0 .2ml;B组瘤体内注射TNFα(2 0 0 μg/kg体重 ) ;C组腹腔注射PDTC(2 0 0mg/kg体重 ) ;D组同时注射TNFα及PDTC(剂量同B、C组 )。隔日 1次 ,2 8d后取出瘤体 ,进行瘤体大小及细胞凋亡的检测。结果　各用药组瘤体大小及凋亡率与对照组相比有显著性差异 (P <0 .0 1) ,B组抑瘤率为 70 .9% ,C组为4 5 .9% ,D组为 89.5 %。用药前后的瘤重相比 ,D组有显著性差异 (P <0 .0 1) ,B、C组无显著性差异 (P >0 .0 5 )。在治疗过程中 ,对照组死亡 1只 ,用药组无死亡。结论　TNFα、PDTC对雄激素非依赖性前列腺癌细胞的生长均有抑制作用 ,TNFα联合PDTC可显著缩小瘤体大小 ,其作用机制可能为 :TNFα诱导PC - 3细胞的凋亡 ,PDTC对TNFα的诱导起增强作用。     

吡咯二硫代氨基甲酸乙酯对戊四氮致痫大鼠海马组织TLR-4与NF-κB表达的影响

目的 观察和探讨NF-κB信号传导通路抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)干预后戊四氮(PTZ)致痫大鼠海马Toll样受体4(TLR-4)表达和核转录因子κB(NF-κB转录)的变化,进一步研究TLR-4/NF-KB信号通路在癫痫发生发展过程中的作用机制.方法 SD大鼠45只,随机分为正常对照组(NS组)、癫痫模型组(PTZ组)和PDTC干预组(PDTC组),每组15只.PTZ组和PDTC组采用腹腔注射戊四氮制作大鼠慢性点燃模型,PDTC组在注射PTZ前60 min行腹腔注射PDTC,NS组注射等量的生理盐水,现察3组大鼠的行为学改变.28 d后断头迅速取脑,采用免疫组化方法检测海马组织CA1区NF-κB/p65表达的变化;同时用Western blotting检测海马组织TLR-4和NF-κ B/p65蛋白的变化.结果 与PTZ组相比,PDTC组癫痫发作级别明显减低,发作潜伏期延长.PTZ组大鼠NF-κB/p65阳性细胞数、NF-κB/p65蛋白表达水平均高于NS组和PDTC组,差异有显著性(P＜0.05),PTZ组大鼠NF-κB/p65阳性细胞数、NF-κB/p65蛋白表达水平均高于NS组,差异有显著性(P＜0.05).PTZ组大鼠TLR-4蛋白表达水平均高于NS组和PDTC组,差异有显著性(P＜0.05),PDTC组大鼠TLR-4蛋白表达水平均高于NS组,差异有显著性(P＜0.05).结论 NF-κB抑制剂PDTC对大鼠癫痫惊厥的干预作用可能与其抑制NF-κB/p65核转录,下调TLR-4表达有关.     

二硫代氨基甲酸吡咯烷预防腹腔粘连及其机制探讨

目的:探讨腹腔内注射核因子κB(NF-κB)抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)对腹腔粘连的预防作用及其作用机制.方法:健康成年SD雄性大鼠96只,随机分成对照组、盲肠型肠粘连模型组(模型组)及PDTC 组(术前1 h腹腔注射PDTC)(n=32).各组大鼠随机分成4个亚组,每组8只,分别于术后第1、3、5、7天开腹观察腹腔粘连情况,进行粘连程度分级评定;同期抽取大鼠下腔静脉血,测定血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)的含量.结果:腹腔粘连程度分级评定,PDTC组和模型组分别为(1.94±1.16)、 (2.63±1.16),明显高于对照组(0.22±0.42,P<0.01);与模型组相比,PDTC组腹腔粘连程度显著减轻(P<0.05).与模型组相比,PDTC组血清IL-6、TNF-α含量显著降低(P<0.05, P<0.01);对照组与PDTC组无显著差异.结论:腹腔粘连早期,细胞因子TNF-α、IL-6明显升高;PDTC可通过降低血清TNF-α、IL-6的含量来预防腹腔粘连.     

维拉帕米对脑膜瘤生长影响的实验研究

目的探讨钙通道阻滞剂维拉帕米对脑膜瘤细胞增殖的影响.方法将不同浓度的维拉帕米作用于培养的脑膜瘤细胞,MTT法观察其对细胞增殖的抑制作用.建立裸鼠皮下脑膜瘤模型,观察服用维拉帕米后肿瘤的生长情况,免疫组化检测皮下肿瘤增殖细胞核抗原(PCNA)的表达.结果维拉帕米浓度呈依赖性地抑制脑膜瘤细胞增殖,浓度为1μ mol/L时即有抑制效应,100μmol/L时抑制作用最明显.服药组肿瘤的体积明显小于对照组(P＜0.01),其PCNA的表达也低于对照组(P＜0.05).结论维拉帕米在体外和体内均可抑制脑膜瘤细胞的增殖和生长.     

NF-κB抑制剂PDTC对人黑素瘤A375细胞增殖的影响

目的研究核转录因子-κB(NF-κB)特异性抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲盐酸(PDTC)对人黑素瘤A375细胞的生长抑制作用。方法不同浓度的PDTC作用于A375细胞不同时间后,MTT法测定其对A375细胞增殖的抑制率,免疫细胞化学方法检测PDTC作用下A375细胞增生细胞核抗原(PCNA)的表达情况。结果经PDTC处理的实验组,肿瘤细胞增殖活性明显受到抑制(P<0.05,P<0.01),呈时间和剂量依赖性;与对照组相比,PDTC作用后A375细胞PCNA表达降低(P<0.01),且呈明显的剂量依赖关系。结论 PDTC具有显著抑制人黑素瘤A375细胞生长及PCNA表达的作用,是一种有潜力的抑制黑素瘤增殖的药物。     

人纤维蛋白溶酶原kringle5(K5)抑制小鼠肝癌的血管生成和肿瘤生长

[目的]体内、体外实验观察人纤维蛋白溶酶原kringle5(K5)对肝癌血管生成和肿瘤生长的影响.[方法]大肠杆菌中表达,组氨酸结合柱亲和层析、纯化获得K5蛋白,SDS-PAGE和Western blot方法鉴定K5蛋白的表达;MTT法分析K5对牛视网膜毛细血管内皮细胞(BRCEC)和肝癌细胞株Bel-7402、HepG2增殖的影响;建立皮下种植肝癌鼠模型,瘤内注射K5,检测抑瘤率及肝癌组织微血管密度(MVD).[结果]SDS-PAGE及Western blot鉴定获得K5纯化蛋白;K5特异性地抑制BRCEC的增殖,IC50=160 nmol/L,而对肝癌细胞株Bel-7402、HepG2的增殖无抑制作用;K5显著抑制小鼠肝癌生长,治疗组肝癌组织MVD明显低于对照组.[结论]K5抑制移植性小鼠肝癌血管生成和肿瘤生长,特异性抑制血管内皮细胞的增殖可能是K5抑制肝癌血管生成的主要机制.K5具有治疗肝癌的潜在临床价值.     

CD146过表达对SKOV3细胞在裸鼠体内成瘤能力的影响

目的：研究 CD146基因在卵巢癌细胞 SKOV3中过表达对其接种裸鼠皮下生成肿瘤能力的影响。方法:以脂质体介 导的CD146基因转染卵巢癌细胞SKOV3,G418筛选阳性克隆细胞,并经Western blot鉴定其过表达CD146蛋白。分别应用MTT 与软琼脂克隆形成试验评价过表达 CD146克隆细胞对细胞增殖与体外集落形成能力的影响,并将这些细胞接种裸鼠皮下组 织,每周观察、记录肿瘤的生长状况至裸鼠处死,称量肿瘤重量并对肿瘤组织进行免疫组织化学染色观察。结果:SKOV3细胞经 脂质体转染与 G418筛选后,可获得过表达 CD146的阳性克隆细胞。CD146过表达明显抑制了 SKOV3细胞的体外增殖能力与 集落形成能力,亦明显抑制了裸鼠皮下的肿瘤生成能力,其肿瘤重量与体积明显比对照组小（P < 0.05）。免疫组织化学染色结 果表明过表达CD146的SKOV3细胞接种裸鼠生成的肿瘤组织仍可高表达CD146蛋白分子。结论:CD146过表达明显抑制卵巢 癌细胞SKOV3的体外增殖能力与裸鼠体内的致瘤性,可能是卵巢癌预后的一个潜在分子标记。     

NF-κB特异性抑制剂PDTC对鼠黑素瘤B16细胞增殖及VEGF表达的影响

目的:探讨核因子-κB(NF-κB)特异性抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)对鼠黑素瘤B16细胞增殖及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:不同浓度的PDTC作用于B16细胞不同时间后,MTT法测定其对B16细胞增殖的抑制率,ELISA检测PDTC作用下B16细胞VEGF的表达情况。结果:经PDTC处理的实验组,肿瘤细胞增殖活性明显受到抑制(P0.01);与对照组相比,PDTC作用后B16细胞VEGF表达降低(P0.01)。结论:PDTC具有显著抑制鼠黑素瘤B16细胞生长及VEGF表达的作用,是一种有潜力的抑制黑素瘤增殖的药物。     

TWEAK在肝癌细胞系高/低淋巴道转移株中表达的初步分析

[目的]研究肿瘤坏死因子样弱凋亡因子（TWEAK）在小鼠腹水型肝癌细胞系高／低淋巴道转移株（Hca—F／Hca—P）中的表达及差异。[方法]分别提取Hca—F和Hca—P细胞的总RNA，通过RT—PCR在mRNA水平检测TWEAK基因的表达；提取Hca—F和Hca—P细胞的总蛋白，用蛋白印迹法从蛋白表达水平验证差异表达。[结果]RT—PCR检测到两株细胞均在358bo处出现特异性扩增的条带，并且Hca—F的条带亮度低于Hca—P，图像分析显示，Hca—F细胞中TWEAK的转录子含量低于Hca—P细胞（P〈0．05）；蛋白免疫印迹法验证两株细胞表面均有TWEAK蛋白的表达，Hca—P强于Hca—F，与基因芯片的结果一致。[结论]TWEAK在鼠腹水型肝癌细胞系Hca—F和Hca—P均有表达，且Hca—F中较低，而在Hca—P中表达较高。这说明了TWEAK可能与淋巴道转移有关，同时可能参与了细胞的凋亡与组织分化。     

槲皮素-锌抗肿瘤作用及对HepG22的细胞凋亡诱导机制研究

[目的]观察槲皮素-锌配合物的体内外抗肿瘤作用及其机制。[方法]采用四氮唑盐(MTT)法观察槲皮素-锌配合物对人肝癌细胞HepG2的抑制率,并采用流式细胞术(FCM)观察分析癌细胞周期;通过建立荷瘤小鼠模型,观察槲皮素-锌配合物对S180荷瘤小鼠瘤重和H22小鼠生存时间的影响,观察其体内抗肿瘤作用。[结果]槲皮素-锌配合物可显著抑制HepG2的体外增殖,且抑制作用呈浓度依赖性,可使G0/G1期细胞增多,S期和G2/M期细胞减少。对S180小鼠的瘤体生长有显著的抑制作用,对H22小鼠的生存时间有显著的延长作用。[结论]槲皮素-锌配合物在体内、外均能有效抑制肿瘤细胞的增殖,并诱导HepG2肿瘤细胞的凋亡。     

重组人血管内皮抑素对Lewis肺癌抑制作用的实验研究

[目的]研究重组人血管内皮抑素对Lewis肺癌的抑制作用。[方法]采用MTT法检测不同剂量不同时间重组人血管内皮抑素对Lewis肺癌细胞增殖的影响;建立Lewis肺癌自发转移模型,将40只荷瘤小鼠随机分为重组人血管内皮抑素小、中、大剂量组(5、15、30 mg.kg-1.d-1)及对照组各10只,连续给药14 d,停药1周后处死小鼠,绘制肿瘤生长曲线,计算原发瘤抑瘤率;利用光镜和透射电镜技术,观察重组人血管内皮抑素对Lewis肺癌细胞以及对荷瘤小鼠血管内皮细胞和肿瘤细胞的形态学改变。[结果]重组人血管内皮抑素对Lewis肺癌细胞增殖的抑制作用与浓度和作用时间呈正相关,400 ng处理72 h后的抑制率为(68.4±1.5)%,与处理24 h后的抑制率(21.9±2.1)%比较,差异有显著性意义(P<0.05)。各给药组肿瘤生长均较对照组缓慢,小、中、大剂量组的抑瘤率分别为28.2%、49.7%、52.8%。各给药组小鼠瘤组织内均有大面积坏死,血管内皮细胞和肿瘤细胞均发生早期凋亡的改变,且具有剂量依赖性。[结论]重组人血管内皮抑素对Lewis肺癌的抑制作用可能表现为对肿瘤细胞和毛细血管内皮细胞的双重抑制作用。     

吡咯二硫代氨基甲酸乙酯干预人视网膜色素上皮细胞增殖的实验研究

目的 研究PDTC对体外培养的人视网膜色素上皮（hRPE）细胞增殖及细胞中细胞增殖核抗原（PCNA）表达的影响。方法 体外培养人视网膜色素上皮细胞（hRPE），采用MTT法和免疫组化图像分析系统研究不同浓度PDTC对hRPE细胞增殖及细胞中细胞增殖核抗原（PCNA）表达的影响。结果 作用24h组．浓度0．062g／L以上PDTC可有效抑制RPE细胞增殖，并呈浓度依赖性。作用48h组，浓度0．031g／L以上PDTC即可有效抑制RPE细胞增殖，亦呈浓度依赖性。浓度0．062g／L以上PDTC作用24h组PCNA表达水平较阴性对照组明显下降，差异有显著性意义（P〈0．05）。结论 PDTC可以抑制体外培养的人视网膜色素上皮细胞的增殖，抑制效应与药物浓度和作用时间正相关，其作用机制可能与降低细胞内PCNA表达有关。PDTC可望成为治疗增殖性玻璃体视网膜病变新的药物。