腹泻型肠易激综合征患者结肠黏膜组织异常表达蛋白质的筛选与鉴定

目的 筛选及鉴定腹泻型肠易激综合征(D-IBS)患者与正常人结肠黏膜组织中的差异表达蛋白.方法 D-IBS患者及健康志愿者各4例,分别为D-IBS组和正常对照组.通过结肠镜取回盲部及乙状结肠黏膜进行活检,用含0.1% PMSF的冰盐水将标本洗净后立即置于液氮中保存.提取蛋白质,采用双向凝胶电泳法筛选差异表达蛋白,并采用质谱法对变化最明显的蛋白点进行鉴定.结果 利用双向凝胶电泳技术成功得到人结肠黏膜组织的蛋白质组图谱.正常对照组图谱平均得到蛋白点336个,组内图像平均匹配率92%,D-IBS组图谱平均得到蛋白点426个,组内图像平均匹配率95%.D-IBS组与正常对照组之间进行平均胶图谱的比较,两组间匹配率为74%.Volume值变化大于2倍以上的点共24个,其中21个点表达上调,3个点表达下调.表达上调最明显的2个蛋白点经鉴定分别为免疫球蛋白J链(Ig-j)和热休克蛋白27(HSP27),表达下调最明显的2个蛋白点则分别为血红蛋白β亚基和果糖二磷酸醛缩酶A.结论 采用双向凝胶电泳法可以成功得到人结肠黏膜组织蛋白质组表达图谱,D-IBS患者与正常人结肠黏膜组织蛋白质表达存在差异,已经鉴定出来的4个蛋白可能在D-IBS的发病机制中起一定作用.     

两种原发大肠肿瘤细胞株蛋白质表达谱差异初步分析

目的应用双向电泳技术分析大肠侧向发育型肿瘤(LST)细胞株和结肠肿瘤SW480细胞株间的蛋白质表达谱差异。方法以双向电泳技术分离两种细胞株总蛋白质,银染显色,进行差异蛋白质分析。结果LST和SW480细胞株双向电泳图谱蛋白质点数分别为1285±51和1184±47,共获得96±7的蛋白质差异点,其中50±6个点仅在LST细胞株中表达或表达明显增强,47±5个点仅在SW480细胞中表达或表达明显增强。结论大肠LST细胞株与SW480细胞株的蛋白质表达谱存在一定的差异,对这些蛋白质点进行鉴定将为研究大肠LST特殊性生物学行为提供一定的线索。     

姜黄素对人结肠癌耐药细胞HCT-8/VCR蛋白质双向电泳图谱的影响

目的 探讨姜黄素处理对人结肠癌耐药细胞HCT-8/VCR蛋白质表达谱的影响.方法 实验分两组,姜黄素处理组用25-μmol/L的姜黄素作用于人结肠癌耐药细胞HCT-8/VCR 24h,对照组加入相应体积的生理盐水.应用同相pH梯度双向凝胶电泳技术分离姜黄素处理组与对照组人结肠癌耐药细胞HCT-8/VCR的总蛋白,凝胶银...     

Brain abscesses after<Emphasis Type="Italic"> Serratia marcescens</Emphasis> infection on a neonatal intensive care unit: differences on serial imaging

Serratia are known to be a possible cause of severe cerebral infections in neonates. We describe imaging of three premature infants infected with Serratia marcescens. Born in the 31 ^st, 25 ^th and 28 ^th weeks of gestation, they presented with signs of septicaemia on postnatal days 9, 24 and 32. Initial sonography showed cysts in the first child, two areas with anechoic centre and echogenic rim in the second, and several echogenic areas in the third. Lesions were seen on CT, of low density in two cases and minimally increased density in the third. MRI in the first patient showed cysts with incomplete contrast enhancement of the lesions, while patient 2 showed five ring-enhancing fluid-containing lesions with thick walls. In the third patient two abscesses with contrast enhancement and several high-signal spots were seen. We discuss the pathophysiology of the lesions and the impact of the various imaging methods.     

长期递增负荷训练后大鼠心室肌蛋白质组的差异性表达

目的:探讨递增运动负荷训练后大鼠心室肌蛋白质组的表达特征,为进一步筛选对运动性疲劳的研究具有重要意义的蛋白提供实验依据。方法:将10只SD雄性大鼠随机分为对照组和实验组。实验组经过7周的递增运动负荷训练(最后一次为力竭)后与对照组同时麻醉处死,取心室肌,提取心肌组织的全蛋白进行双向凝胶电泳分离。运用Bio-radPDquest图像分析软件对图谱进行分析。结果与结论:在电泳图谱上运动组可见蛋白质点338±17个,对照组可见352±17个。运动后差异表达的蛋白质点共有99个。运动后消失的点有5个,表达量上调4倍以上和下调幅度超过80%的点各12个,表达量上调1倍以上和下调幅度超过50%的点分别有52个和42个。递增负荷运动训练后,大鼠心室肌蛋白质组发生了明显的质变和量变。运动后表达量差异比较大的蛋白质点的分子量主要集中在35～57kD,等电点主要集中在6.0～7.4和8.6～9.6,在这个范围的蛋白质多为能量代谢酶,提示心室肌能量代谢的改变可能是运动引起心肌疲劳的原因。     

小鼠不同发育阶段脑蛋白质组学初步研究

目的:本研究为国际脑蛋白质组计划(HUPO BPP)的预实验部分,旨在获得可靠的小鼠脑蛋白质组数据库,比较和评估小鼠不同发育阶段的脑蛋白质组,为下一步进行神经系统疾病的蛋白质组学研究奠定基础。方法:样品来源于国际脑蛋白质组委员会所提供的胚胎16 d、出生后7 d及生后60 d等3个发育时期的C57/B l6雌性小鼠脑组织。常规方法提取组织总蛋白,采用固相pH梯度的二维电泳分离和串联质谱分析等进行鉴定,使用M ascot软件搜索Un iProt数据库,鉴定蛋白种类。结果:获得3个不同发育时期小鼠脑组织蛋白质表达谱,完成国际脑蛋白质组计划的预实验所要求的质量控制,鉴定出各发育阶段均有稳定表达的4个蛋白点,包括α烯醇酶、磷蛋白质P19及2个肌动蛋白。经进一步评估后鉴定出随年龄增大而丰度减低的C14orf166同源蛋白、28×103热/酸稳定的磷蛋白、3-巯基丙酮酸硫基转移酶、40S核糖体蛋白S3 a等4个蛋白。其中α烯醇酶及C14orf166同源蛋白曾有文献报道与神经发育及组织发生密切相关。结论:蛋白质组学的方法为脑发育研究提供了有参考价值的数据,其差异蛋白的发现可促进对神经发育机制的了解,并将为后续启动神经系统疾病蛋白质组学研究提供参考。     

时相温度梯度凝胶电泳在线粒体基因突变检测中的应用

目的 评价时相温度梯度凝胶电泳技术(TTGE)在肿瘤患者线粒体基因同质性和异质性突变检测中的应用。方法 对117例肿瘤组织和配对正常组织的全线粒体基因进行PCR扩增和TTGE突变筛选分析,对TTGE显示在肿瘤和配对正常组织中具有不同类型电泳带型变化的片段进行测序。结果 TTGE在总共3654片段中发现160个体细胞性线粒体基因突变片段,经与直接测序结果比较,TTGE检测体细胞性突变的敏感性和特异性分别达96．27％和94．05％。结论 TTGE是筛选线粒体基因体细胞性同质性突变和各种比例异质性突变的一种敏感方法。     

双向电泳法比较两种蛋白质组样品制备方法

目的：比较两种破碎方法提取的蛋白质样品在双向电泳（2-DE）中的分离效果。方法用超声破碎和玻璃珠振荡破碎方法分别制备革兰阴性菌、革兰阳性菌、动物组织的蛋白抽提样品,通过2-DE比较两种制样方法的实际效果。结果获得了革兰阴性菌、革兰阳性菌、动物组织在两种制样条件下的2-DE图。结论通过对比不同样品的电泳结果发现,玻璃珠振荡破碎法制样背景更低,更有利于后续的图像分析。     

上槽缓冲容量不足导致双向电泳纵向拖尾原因初探

目的 探讨上槽缓冲容量对双向电泳纵向拖尾的影响.方法 保持上槽缓冲液体积不变,分别采用1×buffer电泳2块或1块SDS胶,或1.5×、2×、3×buffer电泳2块胶,比较纵向拖尾情况.结果 1×buffer电泳2块胶,整块胶出现严重纵向拖尾,电泳1块胶时无纵向拖尾.1.5×buffer电泳2块胶,纵向拖尾只存在于...     

心理训练对心理应激后陆军特种兵血清蛋白质谱特征的影响

目的观察采取不同方式进行心理训练后,陆军特种兵心理应激时血清蛋白质谱的变化特点,以评价心理训练效果。方法将96名特种兵新兵随机均分为单纯心理训练组、循环心理训练组和对照组(n=32),训练4周后,参加高强度模拟防暴演习。采用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术结合蛋白质芯片检测各组血清蛋白表达谱的变化。结果方差分析结果显示,3组血清中质荷比(M/Z)为6417.89、134.21、5 171.91、4 972.7Da的4种蛋白相对含量差异显著(P<0.05);与对照组比较,单纯心理训练组M/Z为9134.21、5 171.9Da的2种蛋白表达显著升高(P<0.05),而循环心理训练组4种蛋白的表达均显著升高(P<0.05);与单纯心理训练组比较,循环心理训练组M/Z为6417.81、4 972.7Da的2种蛋白表达显著升高(P<0.05)。M/Z为6417.8和14 972.7Da的蛋白组成的分类树模型在学习模式及测试模式下可将96名战士完全正确分组。结论心理训练可使应激后低表达的蛋白明显上调,提高机体对心理应激的适应能力,且循环心理训练的效果优于单纯心理训练。