乙肝病毒外膜大蛋白检测及其对判定HBV DNA复制的意义

 目的 探讨血清乙肝病毒外膜大蛋白(LHBs)检测对于判定HBV DNA复制的临床意义.方法采用酶联免疫方法检测LHBs,Pre - S1和HBV M,采用实时荧光定量PCR法检测HBV DNA.结果(1)在HBeAg阳性血清中,HBV DNA与LHBs、Pre -S1之间的阳性率差异均无统计学意义(P＞0.05);(2)在HBeAg阴性血清中,HBV DNA与LHBs的阳性率差异无统计学意义(P＞0.05).HBV DNA与Pre -S1之间的阳性率差异有统计学意义(P＜0.05);(3) 90份乙肝患者血清中LHBs水平与HBV DNA拷贝数呈良好相关性(r=0.918),Pre - S1水平与HBV DNA拷贝数的相关系数为0.765.结论 血清LHBs水平能反映HBV DNA复制程度,其与HBV DNA的相关性优于pre - S1,可作为评判HBV DNA复制新的血清学指标.     

乙型肝炎病毒大蛋白时间分辨荧光免疫分析法的建立及应用

目的 建立定量检测患者血清HBV-大蛋白（LP）的TRFIA.方法 以抗人HBV-LP单克隆抗体和抗HBs多克隆抗体分别作为固相抗体和铕标记抗体,应用TRFIA和ELISA对标准品、66份慢性乙型肝炎患者血清、30份健康体格检查者血清中HBV-LP进行检测.分析TRFIA和ELISA的有效检测范围等,统计学比较采用χ^2检验和直线相关分析.结果 标准品TRFIA检测结果示该法剂量-反应曲线呈良好线性相关（r=0.999）.ELISA法测得的正常（30份健康者血清）95％参考范围为0～1.36 mg/L.TRFIA灵敏度（最小测定值）为0.10 mg/L,30份健康血清HBV-LP的检测结果均正常,特异性100％.66份患者血清TRFIA与ELISA检测结果的r为0.800 9（P＜0.001）,两者检测的阳性率差异有统计学意义[89.4％ （59/66）与77.3％（51/66）,χ^2=6.13,P＜0.01].TRFIA有效可测范围（CV＜ 10％）为1.35～2 764.00 mg/L,ELISA为10.80～691.00 mg/L.TRFIA回收率范围为95.93％ ～ 107.62％.结论 TRFIA法检测患者血清中的HBV-LP灵敏度和特异性高,检测范围宽,对早期筛选HBV患者及监测抗病毒治疗的疗效具有潜在的价值.     

血清病毒检出核苷(酸)类似物耐药突变的慢性乙肝患者PBMCs中HBV cccDNA基因突变特点分析

目的分析经核苷(酸)类似物治疗并已在血清病毒中产生耐药基因突变的慢性乙肝患者外周血单个核细胞(PBMCs)中HBV共价闭合环状DNA(cccDNA)反转录酶(RT)区的基因突变特点。方法收集2010年7月-2011年8月于解放军302医院住院的慢性乙肝患者30例,均经6个月以上的核苷(酸)类似物抗病毒治疗并已在血清中检测到耐药相关突变。采集与血清检测同一时间点的全血标本30份并分离PBMCs,提取总DNA,以不降解质粒的ATP依赖的DNA酶(PSAD)消化+滚环扩增+跨缺口PCR方法扩增HBV cccDNA的RT区,分析9个位点的核苷(酸)类似物耐药相关变异。结果 30份样本中,16例检出HBV cccDNA,检出率为53.3%,PBMCs中HBV cccDNA检出率与HBeAg阳性率、血清ALT水平及血清HBVDNA载量均无显著相关性。在16例HBV cccDNA检出者中,B基因型5例,占31.3%,C基因型11例,占68.8%,与血清HBV基因分型结果一致。但是,与血清HBV均检出耐药突变株不同,16例PBMCs cccDNA中检出的病毒均是无核苷(酸)类似物耐药相关突变的野生株。结论在经核苷(酸)类似物治疗的慢性乙肝患者血清中HBV DNA产生耐药突变的情况下,PBMCs中HBV cccDNA仍以原始野生株为优势种群,推测PBMCs可能是体内HBV野生株的"存储库"。     

1121例慢性乙型肝炎患者HBV反转录酶区的耐药突变分析

目的 分析大样本慢性乙型肝炎患者HBV反转录酶基因上的多位点核苷(酸)类似物的耐药相关突变情况及其临床意义.方法 提取1 121例患者血清HBV DNA,采用巢式PCR方法 扩增HBV反转录酶(RT)基因,对PCR产物进行DNA双向测序,对12个位点上的耐药相关突变进行检测,并结合临床资料进行分析.结果 检出拉米夫定(LAM)耐药突变228例,阿德福韦(ADV)耐药突变32例,恩替卡韦(ETV)耐药突变13例,替比夫定(L-dT)耐药突变4例.多药耐药5例.LAM耐药突变中以M204V和M2041最常见,前者通常伴随U80M突变,后者常单独出现;ADV耐药突变中以N236T±A181位碱基替换为主;ETV耐药突变发生在LAM耐药基础上,以T184位碱基替换为主;L-dT的耐药突变为M2041.结论 用基因序列测定法检测HBV RT基因多位点耐药相关突变,有助于临床及时发现乙肝患者是否存在HBV基因耐药,合理进行抗病毒治疗.     

HBV不同模式感染者血清HBV-DNA与Pre-S_2相关性研究

目的　探讨HBV感染者不同模式血清Pre S2 与HBV DNA之间的关系。方法　应用聚合酶链反应技术 (PCR)和酶联免疫吸附法 (ELISA)对 742例HBV感染者血清 ,同时进行HBV DNA和Pre S2 检测。结果　HBeAg阳性血清中 ,HBV DNA和Pre S2 阳性率分别为 89.8%和 88 3 % ,均明显高于HBsAg阳性 (第二、三模式 )血清中HBV DNA(阳性率为 2 1 8%和 5 5 6 % )和Pre S2 (阳性率为 6 3 2 %和 81 2 % )的阳性率 (P <0 .0 1)。结论　HBeAg(+ )患者血清中 ,HBeAg ,HBV DNA和Pre S2 三者有较好的相关性 ,均可表示病毒复制活跃 ;HBsAg(+ )患者血清中 ,Pre S2 阳性率 (分别为 6 3 2 %和 81 2 % )明显高于HBV DNA阳性率 (2 1 8%和 5 5 6 % ) (P <0 .0 1) ,此时Pre S2 (+ )不能作为判断HBV复制活跃的确切指标。     

原发性肝癌经肝动脉栓塞治疗后血清HBV DNA近期变化

目的 探讨原发性肝癌介入治疗后HBV DNA的变化及临床意义.方法 收集在本科行肝动脉化疗栓塞治疗(TACE)的伴有慢性HBV感染的肝癌患者56例,观察术后血清HBV DNA载量和肝功能的变化.结果 肝癌患者以HBsAg、HBeAb、HBcAb 3项阳性模式最常见(23/56),大部分患者HBV处于复制活跃状态(36/56).HBeAg(+)及HBeAg(-)模式血清HBV DNA载量差异有统计学意义(P<0.05).TACE可加重肝功能损害,使血清HBV DNA载量一过性升高(27/56),前者有显著性统计学意义(P<0.01),后者无统计学意义(P>0.05).术后4周有11例患者血清HBV DNA持续性升高(19.64%),与未升高患者肝功能比较,差异有极显著性统计学意义(P<0.01).结论 TACE可使部分伴有慢性HBV感染的肝癌患者HBV DNA复制激活,使肝功能损害加剧,术后定期监测血清HBV DNA载量变化具有重要的临床价值.     

乙型肝炎患者不同血清标志物HBV DNA的表达及意义

 目的探讨血清HBV DNA水平与HBV标志物(HBVM)表现模式的相关性.方法血清HBV DNA定量检测采用PCR ELISA法,HBVM采用ELISA法.结果在HBVM阳性的366例血清中,有199例HBV DNA阳性,占54.4%.血清HB-/ml占65.2%;HBsAg、抗-HBe、抗-HBc阳性者HBV DNA-HBc阳性者HBV DNA阳性率占95.2%,≥106 copiessAg、HBeAg、抗阳性率占29.1%,≥106 copies/ml占17.6%.结论血清HBVM阳性患者中约55.0%的血清HBV DNA阳性,且HBeAg阳性患者中HBV DNA含量及阳性率均明显高于抗-HBe阳性者;在抗-HBs、抗-HBc阳性或HBsAg阴性者血清内也有HBV DNA阳性者.     

拉米夫定耐药慢性乙型肝炎患者HBV聚合酶基因的突变模式分析

目的 分析慢性乙型肝炎患者在拉米夫定(LAM)治疗过程中出现LAM耐药后,HBV聚合酶基因的突变模式及临床特征.方法 对2005年12月-2007年12月于第二军医大学长海医院住院或感染科门诊诊治的慢性乙型肝炎LAM耐药患者进行HBV聚合酶基因测序,回顾性分析LAM耐药时HBV聚合酶基因的不同突变模式及患者临床特征.结果 215例患者诊断为LAM耐药,192例患者检测到LAM相关的HBV聚合酶基因突变.患者血清HBV DNA水平为6.25±1.31(log10拷贝/ml),ALT中位水平为75U/L(19～821U/L),72.4%(139/192)的患者出现ALT升高、肝炎发作.99.0%(190/192)的患者存在YMDD基序突变,其中4种主要突变类型是:rtM204I(33.9%),rtL180M rttM204V(26.0%),rtLl80M rtM204I(21.9%)rtV173L rtL180M rtM204V(11.5%).与rtM204I相比,rtM204V多以联合rtL180M突变的形式存在(P<0.05).LAM耐药时,4种突变类型患者的血清HBVDNA、ALT岍差异均无统计学意义(P>0.05).结论 YMDD基序突变是LAM耐药后HBV聚合酶基因突变的主要模式,LAM耐药后患者临床病情轻重可能与HBV聚合酶基因突变类型无关.     

乙型肝炎e抗原、前S1抗原、前S2抗原与乙型肝炎病毒DNA关系探讨

目的 探讨乙型肝炎e抗原(HBeAg)、前S1抗原(Pre-S1)、前S2抗原(Pre-S2)与其病毒DNA(HBVDNA)的关系。方法 收集268例乙型肝炎患者血标本,以荧光定量PCR法检测HBVDNA,时间分辨荧光免疫分析法检测HBeAg,酶联免疫吸附法检测Pre-S1、Pre-S2。结果 HBVDNA阳性组HBeAg、Pre-S1、Pre-S2阳性率分别为48.2%、76.4%、100%,HBVDNA阴性组分别为1.6%、36.3%、32.3%,两组间每指标阳性率比较,差异均有显著性(均P<0.01)。结论 HBeAg、Pre-S1、Pre-S2与HBVDNA关系密切,以HBVDNA阳性为参照标准,反映病毒复制的敏感性Pre-S2最高,其次为Pre-S1,HBeAg较低;Pre-S1、Pre-S2可作为HBVDNA的补充指标。     

慢性乙型肝炎血清e系统与HBV DNA的相关性

目的　探讨慢性乙型肝炎患者血清e系统与HBVDNA的相关性。方法　采用ELISA法及荧光定量PCR法 ,检测 60例慢性乙型肝炎 (慢乙肝 )患者乙肝病毒标志 (HBV M)及血清HBVDNA含量 ,并与肝组织炎症活动度进行对比。结果　慢乙肝患者e系统与血清丙氨酸转移酶 (ALT)无显著差异 (P >0 .0 5 ) ;但HBeAg阳性组血清HBVDNA含量显著高于抗 HBe阳性组 (P <0 .0 1 ) ,在各级肝组织炎症活动度组 ,其HBeAg阳性率与抗 HBe阳性率在各组间无显著差异(P >0 .0 5 )。结论　临床上不宜单独凭慢乙肝患者e系统的检测结果作为评判病人是否有HBV的复制的指标 ,而应采用荧光定量PCR法 ,动态观察慢乙肝患者血清HBVDNA水平的变化 ;有条件的地方应尽可能开展肝脏活体组织检查术 ,以正确判断肝组织的病变。     

乙型病毒性肝炎不同血清学模式前S1抗原、乙型肝炎病毒-DNA和肝功能指标的关系

目的检测乙型肝炎病毒（HBV）感染者不同血清学模式前S1抗原（pre-S1-Ag）、HBV～DNA和乙型肝炎抗原、抗体含量,结合血清肝功能（丙氨酸转氨酶ALT、天冬氨酸转氨酶AST）分析病毒性肝炎临床诊断、病情判断和预后。方法用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测94例HBV感染者血清中pre-S1-Ag和乙型肝炎抗原、抗体,用荧光定量一聚合酶联反应（FQ-PCR）方法检测HBV-DNA含量,用全自动生化分析仪检测血清AI,T和AST指标。结果HBsAg（＋）、HBeAg（＋）、HBcAb（＋）模式的pre-S1-Ag检出率为79．4％,HBV—DNA检出率为97．1％,肝功能异常的为94．1％;HBsAg（＋）、HBeAb（＋）、HBcAb（＋）模式的Pre-S1Ag检出率为52．4％,HBV—DNA检出率为83．3％,肝功能异常的为88．1％;在HBsAg（＋）和HBcAb（＋）模式中pre-S1-Ag检出率为33．3％,HBV—DNA检出率为66．7％,肝功能异常的为33．3％。结论HBV-DNA检测在反映乙型肝炎病毒复制情况的检出率明显高于HBVpre—S1-Ag,但是HBVpre-S1-Ag检测成本低廉,与HBV—DNA的符合度较高,是对乙型肝炎“两对半”和HBV—DNA测定的重要补充和加强。乙型肝炎抗原、抗体及HBV-DNA联合pre-S1-Ag检测可以提高HBV的检出率,更能真实地反映出HBV在体内的复制情况,为乙型肝炎患者的诊断、治疗和预后判断提供依据。     

PCR法检测慢性乙肝患者外周血单个核细胞中HBV-DNA

目的：了解慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞（PBMCs）HBV的感染情况及其与血清HBV的关系。方法：采用聚合酶链反应（PCR）检测55例慢性乙型肝炎患者PBMCs和血清中HBV。结果：PBMCsHBV－DNA检出率为69％（38例／55例），血清HBV－DNA检出蓄为36％（20例／55例），PBMCsHBV－DNA与血清HBV－DNA无一致性，P＜0．05，PCR法检测慢性乙型肝炎患者HBV－DNA、PBMCs检出率优于血清检出率，P＜0．05。结论：在慢性乙型肝炎患者中，PBMCs存在HBV－DNA。     

序贯使用胸腺肽α-1与阿德福韦酯治疗慢性HBV携带者的临床研究

目的探索对慢性HBV携带者具有更好疗效的抗病毒治疗方案。方法检测未予抗病毒治疗、单用阿德福韦酯及序贯使用胸腺肽和阿德福韦酯抗病毒治疗的共98例慢性HBV携带者基线水平及第6、12、18个月时血HBVDNA、ALT及肝纤维化标志物水平,通过分析不同时期以上指标的变化评价抗病毒疗效。结果未抗病毒治疗组随观察期延长HBVDNA下降率、肝纤维化标志物显著下降率无明显增加,而血ALT水平保持正常率下降且差异具统计学意义;单用阿德福韦酯组和序贯治疗组均随疗程延长HBVDNA下降率、ALT保持正常率及抗肝纤维化有效率均逐渐增加,差异具统计学意义：第18个月时序贯治疗组HBVDNA下降率高于单用阿德福韦酯组,差异有统计学意义,但两组之间ALT保持正常率与抗肝纤维化有效率差异无统计学意义。结论相比未抗病毒治疗者,单用阿德福韦酯及序贯使用胸腺肽和阿德福韦酯抗病毒治疗对慢性HBV携带者仍有疗效且随疗程延长疗效增加,总体而言,序贯抗病毒治疗比单用阿德福韦酯疗效更好。     

乙型肝炎前S1、S2抗原与HBV-DNA的相关性分析

 目的 对比分析乙型肝炎(乙肝)前S1、S2抗原和HBV-DNA的相关性,探讨乙肝前S1、S2抗原的临床应用价值。方法 随机选取乙肝患者420例,采用ELISA法对前S1、前S2抗原进行检测,采用荧光定量PCR对HBV-DNA进行检测,从血清学标志类型、HBV-DNA载量和HBV感染类型角度对HBV-DNA和前S1、S2抗原检测结果进行分析。结果 乙肝大三阳患者乙肝前S1、S2抗原和HBV-DNA阳性率分别为98.48%、95.45%、100.0%;小三阳患者乙肝前S1、S2抗原和HBV-DNA阳性率分别为53.25% 、45.45% 、46.75%。HBsAg(+)HBcAb(+)患者乙肝前S1、S2抗原和HBV-DNA阳性率分别为53.75%、43.28%、44.78%。在高HBV-DNA载量组中乙肝前S1、S2抗原检出率较高。结论 乙肝前S1、S2抗原与HBV-DNA有较好的相关性,可作为反映病毒感染与复制的指标。     

乙型肝炎相关性肝细胞肝癌HBV血清标志物特征探讨

目的探讨乙型肝炎相关性肝细胞肝癌（HCC）乙型肝炎病毒（HBV）血清标志物特征。方法选择2009年6月~2013年6月临床确诊的有明确HBV感染史的HCC患者312例,分析患者HBV DNA载量,定量检测HBV标志物（包括HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb）并分析其组合方式。结果①312例HCC患者中,HBV DNA阳性299例（299/312,95.83%）。HBeAg阳性者41例（41/312,13.14%）,其HBV DNA载量为（5.79±2.53）Log10copies/ml;HBeAg阴性者271例（271/312,86.86%）,其HBV DNA载量为（4.59±1.66）Log10copies/ml（P〈0.01）。②HBV标志物存在6种组合方式,6.09%患者HBsAg阴性,86.86%患者HBeAg阴性。结论 HBV DNA多为低至中等水平,HBV DNA阳性者中高病毒载量者仅为少数;HBeAg阴性者远多于HBeAg阳性者;HBsAg滴度较低,少数患者HBsAg阴性。     

HBeAg阴性慢性乙型肝炎肝组织病理与血清标志物的相关性分析

目的了解HBeAg阴性慢性乙型肝炎(CHB)患者肝组织病理和临床血清学指标的关系。方法对187例HBeAg阴性CHB患者进行肝组织病理炎症活动度分级和纤维化分期与同期血清HBV DNA水平、血生化指标进行相关性分析。结果 187例HBeAg阴性CHB患者肝组织病理炎症活动度分级与血清HBV DNA水平相关(χ2=30.26,P<0.01);肝组织纤维化程度分期与血清HBV DNA水平无明显相关性(χ2=10.94,P>0.05)。血清TBIL、ALT、AST、GGT水平与肝组织炎症活动度呈正相关,ALB、PTA与之呈负相关。结论 HBeAg阴性CHB患者病毒复制活跃和血清TBIL、ALT、AST、GGT能反映肝组织炎症活动。