志贺菌诱导耐药相关基因序列分析

目的获取并分析志贺菌由抗生素诱导产生的耐多药相关基因序列。方法以志贺菌敏感株(Z23)和诱导株(YD)基因组DNA为模板,利用引物设计软件Primer 5.0根据已测得基因序列(Y16B3、Y16B8和Y16A11)设计引物,PCR扩增诱导耐多药相关基因并将相关基因克隆到pMD19-T载体上,测序并将结果在序列相似性搜索工具Blast上检索分析相关基因序列。结果Y16B3和Y16B8基因片段分别在诱导株中扩增出320和225 bp产物,在敏感株中未扩增出;而Y16A11基因片段在诱导株扩增出310 bp产物,在敏感株中扩增出554 bp产物,并且产物序列同源性极低。结论志贺菌在抗生素诱导下产生的耐多药株与敏感菌株比较,具有基因组差异。     

多药耐药大肠埃希菌携带CTX-M-14与CTX-M-15酶基因的研究

目的了解多药耐药大肠埃希菌携带质粒介导的CTX-M-14与CTX-M-15酶基因分布及其对常见抗菌药物的耐药性,为临床合理选择抗菌药物提供依据。方法收集2007年7月-2008年7月感染患者送检标本中分离出的大肠埃希菌71株,采用纸片扩散法(K-B法)对其中多耐30株、双耐19株及单耐16株大肠埃希菌进行药物敏感试验,提取质粒DNA,以此为模板采用聚合酶链反应(PCR)法对CTX-M-14与CTX-M-15酶基因进行扩增,PCR产物送上海生工进行基因测序。结果 71株大肠埃希菌耐药模式为多耐30株、双耐19株、单耐16株、全敏6株,分别占42.2%、26.8、22.5%、8.5%;56株多药耐药大肠埃希菌对亚胺培南、阿米卡星的耐药率较低,15.0%,对头孢噻肟、氨曲南、庆大霉素等的耐药率均50.0%;56株多药耐药大肠埃希菌中,44株检出CTXM-14酶基因,28株检出CTX-M-15酶基因,检出率分别为78.6%和50.0%;携带CTX-M-14与CTX-M-15酶基因的多药耐药大肠埃希菌对头孢噻肟、头孢他啶的耐药率分别81.8%、52.2%和96.4%、60.7%,两者相比较,差异有统计学意义(P0.01)。结论多药耐药大肠埃希菌中,含CTX-M-14与CTX-M-15酶基因菌株是常见的,携带CTX-M-14与CTX-M-15酶基因的多药耐药大肠埃希菌对头孢噻肟耐药率高于头孢他啶。     

志贺菌外排泵cmr基因克隆及耐药作用

目的研究志贺菌外排泵cmr基因的耐药作用。方法以志贺菌临床多耐药株H24基因组为模板，扩增出含cmr基因的1620bp DNA片段，将所得片段与pMD18-T载体连接，转化到大肠埃希菌DH5α中，酶切鉴定阳性克隆，对其进行序列测定并用琼脂平皿二倍稀释法对重组菌株进行药敏测试和泵抑制剂实验。结果含有志贺菌cmr基因的大肠埃希菌较不含有该大肠埃希菌对红霉素和四环素的耐药性提高1倍，并且这种耐药性提高可被质子泵抑制剂氰氯苯腙（CCCP）所抑制。结论cmr基因与志贺菌耐药株H24对红霉素和四环素的耐药性相关。     

志贺菌敏感株与基因转移耐多药株蛋白组学分析

目的 对志贺菌敏感株与基因转移耐多药株全菌蛋白进行蛋白质组比较,寻找细菌耐多药相关蛋白.方法 采用接合基因转移实验对临床分离鉴定志贺菌敏感株进行基因转移耐多药试验;并对志贺菌敏感株及基因转移耐多药株全菌蛋白进行双向电泳;电泳图谱采用Image Master 2D Platinum软件分析,并对差异表达蛋白进行基质辅助激光解吸飞行时间质谱(MOLDITOF-TOF)分析.结果 成功获得志贺菌基因转移耐多药株,在志贺菌敏感株与耐多药株全菌蛋白质图谱中分析别检出(946±37)和(1 013±157)个蛋白质斑点;经分析共发现43个差异表达的蛋白点,初步对其中7个差异表达蛋白进行质谱鉴定,基因转移耐多药株中发现2个新出现的耐多药相关蛋白分别为成簇插入的DNA重复序列(CRISPR)相关蛋白及Hsp60的分子伴侣蛋白(Groel-Groes-Adp7);ATP结合盒(ABC)转运蛋白、胱氨酸合成酶、预测的胞浆脂蛋白表达量上调;翻译延长因子Tu及DNA单链结合蛋白表达量下降.结论 对7个耐多药相关蛋白鉴定分析表明,供体菌中一些耐多药相关基因通过基因转移方式插入志贺菌敏感株中并大量表达,同时一些在细胞代谢中起重要作用的酶类表达量上调,ABC转运蛋白在志贺菌基因转移耐多药机制中也起重要作用.     

腹泻标本产志贺样毒素且具侵袭力大肠埃希菌(ESIEC)的分离与实验研究

本文报告自腹泻使中检出6株产志贺样霉素且具侵袭力大肠埃希菌（ESIEC）生化鉴定、DNA探针反应、药敏试验及动物致病试验结果。生化鉴定符合大肠埃希菌，经10种大肠菌DNA探针检测，该组细菌同时与Inv及SLT2探针杂交，对HEP－2细胞呈集聚状粘附，但不与EAggEC探针反应。菌株感染昆明小鼠后，动物表现竖毛、拒食、腹泻、呼吸困难、肢体麻痹、结膜水肿等症状，死亡率85％。解剖取心血、肝脾及肠腔内容物均分离到相应纯菌，对照组正常。23种抗生素敏感试验说明该细菌的抗药谱很广，多重耐药株发生率为100％，临床治疗可选药甚少。     

DNA扩增制备探针并用于临床白色念珠菌感染鉴定

目的应用聚合酶链反应技术扩增特异DNA片段,并制备成为可应用于临床鉴定白色念珠菌的基因探针. 方法采用聚合酶链反应技术特异地扩增白色念珠菌标准株DNA EO3 125 bp基因片段,然后用半抗原地高辛配基标记,在完成基因探针显色敏感度检测之后,应用该基因探针分别对血液病病房分离的白色念珠菌、热带念珠菌及大肠埃希菌等多种细菌进行斑点杂交测试. 结果基因扩增制备Dig-125 bp DNA探针显色敏感度为0.01 pg,具有白色念珠菌特异性,与其他念珠菌和细菌不发生杂交. 结论基因扩增制备EO3 125 bp DNA探针方法简便可靠,具有很强特异性,可应用于临床鉴定白色念珠菌感染.     

大肠埃希菌中质粒介导喹诺酮类耐药基因的检测及其耐药性分析

目的 研究临床分离的大肠埃希菌中质粒介导喹诺酮类耐药基因qnr的发生率及其耐药性.方法 药物敏感性试验以ATB仪器检测抗菌药物的最低抑菌浓度;PCR技术扩增大肠埃希菌中的qnr基因.结果 qnr阳性菌株对所有抗菌药物的耐药率均高于qnr阴性菌株;PCR检测结果显示,大肠埃希菌中qnr基因的检出率为24.0％;PCR阳性扩增产物DNA测序结果显示,产qnrB-4基因和qnrS-1基因菌株分别为35、7株,未检测到qnrA和qnrC基因;42株产qnr基因的菌株中,95.0％为产ESBLs菌株.结论 产qnr基因菌株在临床分离的大肠埃希菌中已较为普遍,且绝大多数为多药耐药株,临床应重视此类菌株的出现.     

大肠埃希菌质粒介导的bla_(NDM-1)基因耐药及传播性研究

目的探讨某院携带bla_(NDM-1)基因大肠埃希菌的流行现况及传播机制。方法收集2016年1—12月南昌大学某附属医院对碳青霉烯类抗生素不敏感的大肠埃希菌92株,对其进行bla_(NDM-1)基因筛查,并对bla_(NDM-1)基因阳性的大肠埃希菌进行其他常见碳青霉烯酶基因检测。将bla_(NDM-1)基因阳性的大肠埃希菌(供体菌)与大肠埃希菌J53(受体菌)进行接合试验,采用药敏试验及mCIM试验对接合子进行表型验证,提取供体菌及接合子的质粒采用Southern blot技术对bla_(NDM-1)基因进行基因定位,并验证其水平转移的能力。结果在对碳青霉类抗生素不敏感的92株大肠埃希菌中发现2株携带bla_(NDM-1)基因,携带率2.2%。此2株大肠埃希菌未发现同时携带其他常见碳青霉烯酶基因。接合试验及Southern blot发现此2株大肠埃希菌的bla_(NDM-1)基因均位于菌株的质粒上,且有1株大肠埃希菌的bla_(NDM-1)基因可以通过质粒向大肠埃希菌J53转移。药敏试验结果显示,此2株大肠埃希菌对临床使用的多种抗菌药物耐药,且接合子获得了与供体菌相似的药敏结果。mCIM试验表明,此2株大肠埃希菌及接合子均产NDM-1型碳青霉烯酶。结论该院存在携带bla_(NDM-1)基因而产NDM-1型碳青霉烯酶的大肠埃希菌,携带bla_(NDM-1)基因的大肠埃希菌对临床使用的大多数抗菌药物耐药,质粒可介导bla_(NDM-1)基因的水平传播。     

太原地区携带OI一28毒力基因组岛致泻大肠埃希菌性小儿腹泻

目的探讨携带OI-28毒力基因组岛致泻大肠埃希菌在小儿腹泻中的病原学作用。方法在山西省儿童医院采集257例腹泻病患儿粪便,做肠道病原菌常规培养和致泻大肠埃希菌血清学分型鉴定,用PCR和DNA斑点杂交检测致泻大肠埃希菌EHEC OI-28毒力基因组岛中与RTX相关的5个毒力基因。结果257例腹泻病患儿检出病原菌206株(80.16%)。其中大肠埃希菌149株(57.98%),其他肠道致病菌57株(22.18%)。血清分型检出致泻大肠埃希菌EPEC 3株(2.01%)、ETEC 2株(1.34%)、EHEC 2株(1.34%),其余142株为"疑似致泻大肠埃希菌"(55.25%)。149株大肠埃希菌中OI-28 5个基因全阳性者21株(14.09%),1个基因阳性者8株(5.37%),2个基因阳性者2株(1.34%)。21例携带OI-28毒力基因组岛大肠埃希菌感染的腹泻患儿,以3岁以下小儿为主(80.95%)。结论携带OI-28毒力基因组岛大肠埃希菌是夏季小儿腹泻的重要病原菌之一。     

山东省首次检出O157大肠埃希菌志贺毒素Ⅱ变种

目的：了解山东省E．coli O157大肠埃希菌携带Stx2及Stx2vha情况。方法：采用从山东省5个监测点腹泻病人和家禽、家畜等粪便标本中分离的O157大肠埃希菌，用PCR方法检测特异性志贺毒素2及其变种毒素；提取菌株的染色体DNA进行限制性内切酶PstI消化，使用slt2探针进行Southern杂交检测菌株毒素的变化情况。结果：从腹泻病人、家禽家畜等粪便标本分离的O157大肠埃希菌PCR检测STL2(c，d)阳性的9株，用slt2探针杂交方法检测有4株为Stx2vha阳性，其中1株杂交带型不同于其他菌株，是否为新的毒素变种需进一步研究。结论：山东省从腹泻病人和外环境分离的O157大肠埃希菌存在志贺毒素Ⅱ变种。