烟碱抑制人牙周膜干细胞成骨能力的研究

目的：研究烟碱对人牙周膜干细胞（periodontalligamentstemcell，PDLSC）成骨能力的影响。方法运用流式细胞仪检测有限稀释法培养的 PDLSC 的表面抗原标志物，采用细胞增殖检测试剂盒检测分别经10－3 mol／L、10－5 mol／L、10－7 mol／L浓度烟碱刺激后PDLSC增殖能力变化。运用碱性磷酸酶定性染色和实时定量PCR检测不同浓度烟碱刺激及烟碱联合拮抗剂α－银环蛇毒素（α-bungarotoxin，α-BTX）刺激后，PDLSC成骨能力的改变。结果经过有限稀释法所得的细胞阳性表达间充质干细胞的标志物，不同浓度的烟碱可抑制PDLSC的增殖及成骨能力，加入拮抗剂α-BTX后，烟碱抑制PDLSC成骨的作用降低。结论烟碱能够抑制PDLSC的成骨能力。     

人牙周膜干细胞的初步鉴定及体外成骨诱导

目的：体外培养、鉴定人牙周膜干细胞（periodontal ligament stem cells,PDLSCs）并定向诱导分化为成骨细胞,探讨人PDLSCs的多向分化潜能：方法：体外分离、培养人牙周膜细胞,待细胞达一定量后用有限稀释法进行克隆化培养,筛选鉴定牙周膜干细胞（PDLSC）,矿化诱导培养21d后检测钙结节形成情况、ALP活性,免疫细胞化学检测骨涎蛋白（BSP）、Ⅰ型胶原表达,RT—PCR检测ALP、BSP mRNA表达。结果：人PDLSCs体外诱导培养21d后可见钙结节形成,成骨细胞相关蛋白及mRNA均阳性表达。结论：人PDLSCs在体外诱导条件下具有成骨潜能。     

人牙周膜干细胞的成脂诱导实验研究

目的体外分离培养成人的牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,hPDLSC),并进行成脂诱导实验。方法取新鲜拔除正畸牙的牙周膜为材料制成组织块,加入培养液分离培养,免疫磁珠法筛选人牙周膜干细胞,加入成脂诱导液诱导牙周膜干细胞向脂肪细胞转化。结果成功筛选人牙周膜干细胞,成脂诱导成功。结论免疫磁珠法是筛选人牙周膜干细胞的有效方法,人牙周膜干细胞可以向脂肪细胞分化。     

非编码RNA调控人牙周膜干细胞成骨向分化的研究进展

牙周炎是一种常见的炎症性疾病,以牙齿支持结构的进行性损伤为特点,是我国成人牙齿丧失的主要原因。治疗牙周炎的目的不仅是通过控制炎症来阻止疾病发展,更重要的是获得牙周再生。人牙周膜干细胞具有成骨向分化潜能,有望在牙周组织修复再生的临床应用上发挥重要作用。非编码RNA(ncRNA)一般是指不编码蛋白质的RNA。伴随高通量检测技术的不断发展,发现了大量的种类丰富的ncRNA,其生物学功能也被不断揭示。越来越多证据显示,ncRNA在分子机制及细胞组织层面对疾病的发生、发展起重要调控作用,因此探索ncRNA调控机制可为牙周再生的研究提供新思路。本综述主要阐述了目前研究较多的几种ncRNA在人牙周膜干细胞成骨向分化中的调控机制。     

釉基质衍生物对人牙周膜干细胞成骨分化的影响

目的研究釉基质衍生物对人牙周膜干细胞增殖和成骨分化的影响并探究其可能的机制。方法原代培养人牙周膜干细胞,经过流式鉴定后选取第3代细胞进行实验。采用CCK-8试剂盒检测不同浓度(0、20、50、100 mg·L^-1)的釉基质衍生物对人牙周膜干细胞增殖的影响;实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测不同浓度(0、20、50、100 mg·L^-1)釉基质衍生物对人牙周膜干细胞成骨分化的影响;通过Trichrome染色和Von Kosa’s染色检测不同浓度(0、20、50、100 mg·L^-1)釉基质衍生物对人牙周膜干细胞胶原合成和矿化结节形成的影响;不同浓度釉基质衍生物和DDK1作用人牙周膜干细胞之后,通过Western blot和qRT-PCR检测β-连环蛋白、RunX2、CaMKⅡ及NLK表达情况。结果釉基质衍生物对人牙周膜干细胞的增殖具有明显的促进作用,并呈现剂量和时间依赖性;釉基质衍生物处理人牙周膜干细胞之后,矿化结节形成和胶原合成显著增多,骨钙素、Ⅰ型胶原、RunX2的表达明显增多;另外,釉基质衍生物处理能显著增加β-连环蛋白、RunX2、CaMKⅡ和NLK的表达,且该作用可被DDK1抑制。结论釉基质衍生物对体外培养的人牙周膜干细胞有促进增殖和成骨分化的作用,其作用可能是通过Wnt/β-连环蛋白实现的。     

人牙周膜干细胞的分离培养及体外诱导分化研究

目的:从成体人牙周组织中分离培养牙周膜干细胞,研究其生物学特性并进行诱导分化,为牙周组织工程提供可靠的种子细胞来源.方法:选取12～20岁的年轻患者因正畸拔除的健康牙齿,采用酶消化组织块培养法得到牙周膜细胞,待细胞达一定量后用有限元稀释法进行单细胞克隆,筛选牙周膜干细胞( PDLSCs).计算细胞克隆形成率(CFU- ...     

牙周膜相关蛋白1在人牙周膜细胞成骨分化过程中的表达

目的 研究牙周膜相关蛋白1（PLAP-1）在人牙周膜细胞（PDLC）成骨分化过程中的表达变化,为明确PLAP-1 在牙周组织中的作用奠定基础.方法 酶消化法培养人PDLC,免疫细胞化学染色鉴定其来源和PLAP-1 的表达,茜素红染色和碱性磷酸酶（ALP）实验鉴定其成骨分化能力,定量反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测其成骨分化过程中,PLAP-1、Periostin、RGD-CAP、RUNX2、OCN 和OPN mRNA 表达变化,Western blot 检测PLAP-1、RUNX2 和OCN 蛋白表达变化并进行统计分析.结果 培养的人PDLC 来源于间充质;人PDLC 矿化诱导21 d 后茜素红染色阳性,矿化诱导后7、14、21 d 时ALP 活性较对照组明显增高（P ＜ 0.05）,具有成骨分化能力;PLAP-1 免疫细胞化学染色阳性;定量RT-PCR 和Western blot 结果显示,人PDLC 在mRNA 和蛋白水平均表达PLAP-1,且mRNA 表达量随人PDLC 成骨分化过程发生变化,诱导14 d上调,诱导21 d 下调,较对照组有明显差异（P ＜ 0.05）,Western blot 检测蛋白表达显示类似的表达趋势.结论 PLAP-1 在基因及蛋白水平均高表达于人PDLC,其表达量随人PDLC 成骨分化成一定模式,提示其参与调控牙周膜的功能与稳定,但其精细的调控功能还有待进一步深入研究.     

3种烤瓷基底合金对人牙周膜干细胞增殖和骨相分化的影响

目的：通过测定人牙周膜干细胞（hPDLSCs）在3种不同金属基底提取液培养过程中的增殖和骨相分化能力,比较3种金属基底冠对牙周组织的影响。方法：在人牙周膜干细胞体外培养系统中分别加入镍铬合金、钴铬合金、纯钛浸泡后提取液,常规进行培养及成骨分化诱导,分别测定并比较各组干细胞增殖能力及成骨分化能力。结果：纯钛提取液组人牙周膜干细胞增殖能力和成骨分化能力明显高于镍铬合金组和钴铬合金组（P〈O．05）,差异有统计学意义,与空白对照组相比无明显差异。镍铬合金组与钴铬合金组相比无明显差别,差异无统计学意义。结论：镍铬合金和钴铬合金非贵金属组可降低人牙周膜干细胞增殖和成骨分化能力,而纯钛材料对其影响不大,提示纯钛合金的良好生物相容性。     

低氧对人牙周膜干细胞骨向分化影响的实验研究

基因,如碱性磷酸酶、骨钙素和富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白的表达,从而抑制了人牙周膜干细胞骨向分化.     

低强度高频振动对人牙周膜干细胞成骨分化能力的影响

目的 研究低强度高频振动（low-magnitude high frequency vibration,LMHFV）对人牙周膜干细胞（human periodontal ligament stem cells,hPDLSCs）增殖、迁移、成骨分化能力的影响。方法 体外分离培养hPDLSCs;流式细胞术检测间充质干细胞表面标志物;加载LMHFV（加速度=0.3 g,频率=40 Hz,时间=15 min/24 h）刺激后,采用CCK-8试剂盒检测细胞增殖能力,通过细胞划痕实验检测细胞迁移能力;通过qRT-PCR、Western免疫印迹检测成骨相关基因、蛋白表达水平,通过茜素红染色检测细胞成骨分化能力。采用SPSS 21.0软件包对数据进行统计学分析。结果 加载振动刺激后,hPDLSCs的增殖能力增强,迁移能力上升;RUNX2、ALP、Col-1、OCN的mRNA表达量和蛋白表达量均上升,茜素红染色结果与qRT-PCR、Western免疫印迹结果一致。结论 LMHFV可提高hPDLSCs的增殖、迁移能力和成骨分化能力。     

炎症微环境下芦丁对牙周膜干细胞成骨分化能力的影响

目的 研究芦丁（rutin）对炎症微环境下牙周膜干细胞成骨分化能力的影响。方法 采用有限稀释法分离纯化获得牙周膜干细胞,采用流式细胞术鉴定牙周膜干细胞。以脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）刺激牙周膜干细胞,建立体外炎症模型。实验分为4组,第1组使用α-MEM培养基培养牙周膜干细胞,第2组使用含有脂多糖的α-MEM培养基培养牙周膜干细胞,第3组在含有脂多糖的α-MEM培养基加入芦丁培养牙周膜干细胞,第4组使用含有芦丁的α-MEM培养基培养牙周膜干细胞。通过碱性磷酸酶染色、碱性磷酸酶活性测试、茜素红染色、RT-PCR以及蛋白免疫印迹等方法检测成骨分化能力的改变。采用SPSS 17.0软件包对数据进行统计分析。结果 CCK-8和碱性磷酸酶活性测试结果显示,10 μmol/L芦丁对炎症状态下牙周干细胞增殖和成骨分化作用最明显。碱性磷酸酶染色和茜素红染色结果显示,10 μmol/L芦丁可以改善炎症微环境下牙周膜干细胞的成骨分化能力。RT-PCR、蛋白免疫印迹结果显示,芦丁可以增强炎症状态下COL1、ALP、RUNX2等成骨基因和成骨蛋白的表达。结论 芦丁可以增强炎症微环境下牙周膜干细胞的成骨分化能力。     

牙周膜干细胞中乙酰基转移酶MORF调控成骨的研究

目的：：比较正常与炎症来源牙周膜干细胞( H-PDLSCs与P-PDLSCs)中乙酰基转移酶MORF表达水平的差异及其对PDLSCs分化的调控。方法：有限稀释法培养H-PDLSCs与P-PDLSCs, LPS、 TNF-α、IL-β及三者混合物体外模拟炎症微环境诱导H-PDLSCs ( IP-PDLSCs );基因与蛋白检测方法对比2种来源 PDLSCs 中 MORF 的表达水平;蛋白检测方法检测 IP-PDLSCs中MORF的表达水平;基因、蛋白检测与茜素红染色方法对比H-PDLSCs及下调MORF基因后的PDLSCs成骨基因表达的差异。结果：与 H-PDLSCs 相比,P-PDLSCs 中 MORF 的表达显著下降(P <0.05);IP-PDLSCs 中 MORF 的表达下降;MORF基因被下调后,PDLSCs成骨能力下降(P<0.05)。结论：牙周炎及炎症微环境会导致PDLSCs中MORF表达的下降,从而使其成骨分化受到抑制。     

姜黄素通过调控Wnt通路改善牙周膜干细胞成骨分化能力

目的:探讨姜黄素对人牙周膜干细胞(PDLSCs)成骨分化的影响。方法:取第4~6代的PDLCs进行实验,用CCK-8实验检测姜黄素对PDLCs增殖活性影响,通过检测碱性磷酸酶(ALP)活性、矿化结节染色以及ALP、OCN和Runx2等成骨相关基因的表达水平来探讨姜黄素对牙周膜干细胞成骨分化能力的影响,同时检测姜黄素对经典Wnt通路及其配体的影响。结果:姜黄素对PDLSCs的增殖能力无影响。与对照组相比较,姜黄素能增加PDLSCs的ALP活性、上调ALP、OCN和Runx2等成骨相关基因的表达、增加矿化结节数量(P<0.05)。姜黄素能阻断Wnt信号通路,但加入Wnt信号通路激动剂(氯化锂)后,PDLSCs的成骨分化能力显著下降。结论:姜黄素能通过抑制Wnt信号通路,增强牙周膜干细胞成骨分化能力。     

正畸力调控牙周膜干细胞成骨分化的动物实验研究

目的 研究不同正畸力值对牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs)分化的作用及机制.方法 分别用50 g、150 g力值建立大鼠牙齿移动模型,加力7d后分离培养PDLSCs,检测其生物学功能和分子信号通路.结果 相比对照组,加力7d后,50 g力值组大鼠第一磨牙近中移动...     

Comparative proteomic profiling of human dental pulp stem cells and periodontal ligament stem cells under in vitro osteogenic induction

ObjectiveThis study aimed to compare the proteomic profiling of human dental pulp stem cells (DPSCs) and periodontal ligament stem cells (PDLSCs) under in vitro osteogenic induction, which imitates the microenvironment during osteo-/odontogenesis of DPSCs and PDLSCs.DesignThe proteomic profiles of osteoinduced DPSCs and PDLSCs from a single donor were compared using the isobaric tag for relative and absolute quantitation (iTRAQ) technique and subsequent bioinformatics analysis.ResultsA total of 159 differentially expressed proteins in PDLSCs and DPSCs were identified, 82 of which had a higher expression level in PDLSCs, while 77 were more highly expressed in DPSCs. Among these enriched proteins, certain members from the collagen, heat shock protein and protein S100 families may distinguish osteoinduced PDLSCs and DPSCs. Gene ontology (GO) classification revealed that a large number of the enriched terms distinguishing PDLSCs and DPSCs are involved in catalytic activity, protein binding, regulation of protein metabolic processes and response to stimulus. Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG) analysis indicated several involved pathways, including the fatty acid biosynthesis pathway, pantothenate and CoA biosynthesis pathway, arachidonic acid metabolism pathway and PPAR signaling pathway. Further verification showed that the mineralization and migration capacities of PDLSCs were greater than those of DPSCs, in which heat shock protein beta-1, Protein S100-A10 and S100-A11 may play a part.ConclusionsLess than 5% of the differentially expressed proteins make up the comparative proteomic profile between osteoinduced PDLSCs and DPSCs. This study helps to characterize the differences between osteoinduced PDLSCs and DPSCs in vitro.     

人牙周膜干细胞成骨分化过程中P2X7受体mRNA的表达特点及作用研究

目的：探讨P2X7受体在人牙周膜干细胞成骨分化中的作用。方法：将原代培养获得的人牙周膜干细胞分为对照组、三磷酸腺苷组、成骨诱导液组和三磷酸腺苷+成骨诱导液组,比较4组的成骨分化相关基因RUNX2、OCN基因表达和P2X7受体mRNA表达的差异,采用SPSS 16.0软件包进行统计学分析。结果：成骨后1周和2周,三磷酸腺苷+成骨诱导液组的RUNX2和OCN mRNA表达显著高于成骨诱导液组（P<0.05）。三磷酸腺苷+成骨诱导液组成骨后1周的RUNX2和OCN mRNA表达显著高于成骨后2周（P<0.05）。成骨后1周和2周,三磷酸腺苷组和三磷酸腺苷+成骨诱导液组的P2X7受体mRNA表达均显著高于对照组和成骨诱导液组（P<0.05）;成骨后2周,三磷酸腺苷组的P2X7受体mRNA表达显著高于三磷酸腺苷+成骨诱导液组（P<0.05）;三磷酸腺苷组成骨后1周的P2X7受体mRNA表达显著高于成骨后2周（P<0.05）。结论：P2X7 受体明显提高牙周膜干细胞的成骨效果,三磷酸腺苷可激活P2X7 受体的表达。     

2型糖尿病伴牙周炎患者牙周膜干细胞骨向分化研究

目的:比较牙周炎和2型糖尿病伴牙周炎患者牙周膜干细胞成骨分化能力。方法:体外组织块法和有限稀释法克隆化培养牙周炎患者牙周膜干细胞(P-PDLSCs组)和2型糖尿病伴牙周炎患者牙周膜干细胞(D-PDLSCs组),计算克隆形成率,免疫荧光检测细胞表型分子CD146、STRO-1进行干细胞鉴定,矿化诱导后茜素红染色观察矿化结节形成,实时定量聚合酶链反应(real time PCR)检测成骨相关基因表达。结果:P-PDLSCs组和D-PDLSCs组细胞的克隆形成率分别为(25.6±2.7)%和(17.9±1.7)%(P﹤0.05);P-PDLSCs组CD146和STRO-1表达明显高于D-PDLSCs组;成骨诱导21 d后茜素红染色,2组均出现不同程度的矿化结节,P-PDLSCs组的矿化能力较D-PDLSCs组强;成骨诱导1周后D-PDLSCs组碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、Runx-2和Ⅰ型胶原蛋白(type-Ⅰcollagen,Col-Ⅰ)的mRNA表达均明显低于P-PDLSCs组(P<0.05)。结论:糖尿病伴牙周炎患者牙周膜干细胞成骨分化能力低于单纯牙周炎患者牙周膜干细胞。