miR-152调控糖尿病心肌病心肌成纤维细胞增殖的作用

目的探究miR-152调控糖尿病心肌病心肌成纤维细胞(CFs)增殖的作用。方法应用链脲佐菌素(STZ)构建糖尿病大鼠模型,应用高糖(33.3 mmol·L-1)诱导CFs增殖模型。多聚甲醛固定心肌组织后,行HE和Masson染色;Western blot检测心肌组织和CFs中α-SMA、CollagenⅠ的蛋白表达;qPCR检测心肌组织和CFs中miR-152的表达;MTT检测miR-152对细胞增殖活性的影响。结果HE和Masson染色显示,糖尿病组大鼠心肌胶原含量明显增多,细胞排列紊乱;在高糖模型中,α-SMA和CollagenⅠ表达增加,而miR-152表达降低;乳鼠CFs转染miR-152模拟物后,α-SMA和CollagenⅠ表达降低,同时CFs增殖活性减弱。结论miR-152可能在糖尿病心肌病CFs增殖中起重要作用,提示其可能改善糖尿病心肌病。     

犀角地黄汤合方对DC激活ITP患者T细胞增殖分化的影响

目的 观察犀角地黄汤合方含药血清对树突状细胞（DC）激活T细胞增殖分化的影响及其对免疫性血小板减少症（ITP）的作用机制。方法 将10只雄性SD大鼠随机分为含药血清组和空白血清组,每组5只,分别使用犀角地黄汤合方和蒸馏水连续灌胃3 d,腹主动脉取血制备含药血清和空白血清。分选15例健康志愿者及8例ITP患者CD4⁺ T细胞,将荷载血小板抗原的DC与CD4⁺ T细胞共培养,采用随机数字表法分为对照组,模型组,犀角地黄汤合方低、中、高剂量组。对照组为荷载血小板抗原的DC与健康志愿者CD4⁺ T细胞,模型组和犀角地黄汤合方低、中、高剂量组为荷载血小板抗原的DC与ITP患者的CD4⁺ T细胞,其中对照组和模型组加入大鼠空白血清,犀角地黄汤合方低、中、高剂量组分别加入体积分数为5%、10%及20%大鼠含药血清。流式细胞术（FCM）检测CD4⁺ T细胞的增殖情况,各组调节性T细胞（Treg）和效应性T细胞（Teff）的比例以及CD4⁺ T表面程序性死亡受体-1（PD-1）的表达量;酶联免疫吸附试验检测各组细胞上清液中促炎因子白细胞介素（IL）-2、干扰素-γ（IFN-γ）、IL-17以及抑炎因子转化因子-β（TGF-β）、IL-10的表达量。结果 与对照组比较,模型组CD4⁺ T细胞增殖百分比、Teff细胞比例以及促炎因子IL-2、IFN-γ和IL-17升高（P<0.05）,Treg细胞比例、CD4⁺ T细胞表面PD-1表达量以及抑炎因子TGF-β、IL-10水平降低（P<0.05）;与模型组比较,犀角地黄汤合方低、中、高剂量组CD4⁺ T细胞增殖百分比、Teff细胞比例依次降低,Treg细胞比例、CD4⁺ T细胞表面PD-1表达量和抑炎因子IL-10、TGF-β升高（P<0.05）,促炎因子IL-2的量降低（P<0.05）;与模型组相比,犀角地黄汤合方中、高剂量组IFN-γ和IL-17降低（P<0.05）。结论 犀角地黄汤合方尤其是高剂量组含药血清能够在体外调节ITP患者CD4⁺ T细胞的过度增殖分化及细胞因子的分泌,这可能是犀角地黄汤合方治疗ITP机制之一。     

丹柴合剂对树突状细胞的诱导分化作用

目的 研究中药复方制剂丹柴合剂对树突状细胞（DCs）的诱导分化作用,并探讨其机制。方法 制备丹柴合剂的大鼠含药血清。分离人外周血单个核细胞,经磁珠筛选出CD14+单核细胞,培养5-7 d获得未成熟树突状细胞（imDCs）,分为空白血清对照组与含药血清组,空白血清组分别加入含或不含脂多糖（LPS）的大鼠空白血清,含药血清组分别加入含或不含LPS的大鼠含药血清,用流式细胞术检测DCs表面分子CD86、CD11b和HLA-DR的表达,用酶联免疫反应（ELISA）法检测DCs分泌IL-10的情况,用流式细胞术检测DCs对T细胞增殖能力的影响,用实时定量PCR检测吲哚胺2,3双加氧酶（IDO）基因的表达。结果 经丹柴合剂作用后,DCs高表达CD11b,低表达CD86与HLA-DR,IL-10分泌增加。且该制剂通过促进DCs表达IDO进而抑制DCs介导的T细胞增殖能力。结论 丹柴合剂可将诱导DCs分化为DCregs并发挥免疫调节作用。     

壮药三七姜醇提物及含药血清对脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症的抗炎作用及机制

目的 研究壮药三七姜醇提物及含药血清对脂多糖（LPS）诱导RAW264.7细胞炎症的抗炎作用及机制。方法 将三七姜醇提物（75.35 g/kg）或纯净水灌胃大鼠以制备含药血清或空白血清。以RAW264.7细胞为研究对象，将细胞分为正常对照组，LPS组（1μg/mL），三七姜醇提物高、中、低剂量组（50、25、12.5μg/mL）,4%或15%空白血清组，4%或15%空白血清+LPS组，4%或15%含药血清组，4%或15%含药血清+LPS组，按相应条件培养24 h后，检测各组细胞活力和细胞中一氧化氮（NO）、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6含量，以及Toll样受体4(TLR4)、核因子κB(NF-κB)mRNA表达水平，一氧化氮合酶（NOS）、环氧化酶2(COX-2)蛋白表达水平。结果 各组细胞培养24 h后，细胞活力差异无统计学意义。与正常对照组比较，LPS组细胞中NO、TNF-α、IL-1β、IL-6含量，TLR4、NF-κB mRNA表达水平和NOS、COX-2蛋白表达水平均显著升高（P<0.05）。与4%或15%空白血清组比较，4%或15...     

犀角地黄汤合方含药血清调节ITP患者Teff/Treg分化及功能的研究#br#

目的　探究犀角地黄汤合方含药血清对免疫性血小板减少症（ITP）患者效应性T细胞（Teff）/调节性T细胞（Treg）分化的影响,并探讨磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路在其中的作用机制。方法　采用随机数字表法将20只大鼠分为含药血清组和空白血清组,每组10只,分别使用犀角地黄汤合方颗粒和蒸馏水连续灌胃3 d,收取2组大鼠全血制备含药血清和空白血清。收集健康志愿者和ITP患者外周血,提取外周血单个核细胞（PBMC）,磁珠分选CD4+ T细胞,抗CD3/CD28抗体培养体系活化后,分为对照组、模型组和实验组。对照组为健康志愿者CD4+ T细胞,模型组及实验组为ITP患者CD4+ T细胞,实验组采用含药血清干预72 h,对照组及模型组采用大鼠空白血清干预72 h。流式细胞术检测各组CD4+ T细胞中Teff/Treg比例;酶联免疫吸附试验（ELISA）检测各组培养上清液中白细胞介素（IL）-2、干扰素（IFN）-γ、肿瘤坏死因子（TNF）-α、IL-6、IL-17及Treg细胞因子转化生长因子（TGF）-β、IL-10水平;Western blot检测PI3K、Akt、mTOR蛋白及磷酸化蛋白水平。结果　CD4阳性率为（99.44±0.01）%。与对照组相比,模型组CD4+ T细胞中Teff细胞比例明显升高,Treg比例明显降低,Teff/Treg比值增大,IL-2、IL-6、IL-17、IFN-γ、TNF-α水平以及PI3K、p-PI3K、mTOR、p-mTOR蛋白水平升高,TGF-β、IL-10、p-Akt蛋白水平降低（P＜0.05）;与模型组相比,实验组CD4+ T细胞中Teff细胞比例降低,Treg细胞比例升高,Teff/Treg比值减小,IL-2、IL-6、IL-17、IFN-γ、TNF-α水平以及PI3K、p-PI3K、mTOR、p-mTOR蛋白水平降低,TGF-β、IL-10水平升高（P＜0.05）。结论　犀角地黄汤合方含药血清能够调节ITP患者Teff/Treg的分化及细胞因子的分泌,可能与抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路PI3K、mTOR蛋白表达及其磷酸化水平有关。     

苗药理气活血滴丸对心肌缺血再灌注损伤模型大鼠的保护作用

目的:研究苗药理气活血滴丸对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)模型大鼠的保护作用。方法:将60只大鼠随机分为假手术组、模型组、辛伐他汀组(阳性对照,40 mg/kg)和理气活血滴丸低、中、高剂量组(43.75、87.50、175.00 mg/kg),每组10只。各给药组大鼠每天ig相应药物1次,连续10 d;假手术组和模型组大鼠ig等体积生理盐水。末次给药45 min后,除假手术组外其余各组大鼠均复制MIRI模型。复灌后监测大鼠心律失常情况;采用苏木精-伊红染色观察心肌组织病理学变化;采用酶动力学法测定血清中心肌酶[肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)]活性;采用酶联免疫吸附法测定血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)含量。结果:与假手术组比较,模型组大鼠心律失常程度较高,心肌组织损伤严重,血清中CK、LDH活性及TNF-α、IL-6含量均明显升高(P<0.01)。与模型组比较,辛伐他汀组和理气活血滴丸中、高剂量组大鼠心律失常程度降低,心肌组织病理损伤得到改善,血清中CK、LDH活性及TNF-α、IL-6含量均显著降低(P<0.01),且理气活血滴丸高剂量组与辛伐他汀组各指标水平接近(P>0.05)。结论:理气活血滴丸对MIRI模型大鼠具有一定保护作用,其机制可能与减少心肌细胞心肌酶的漏出、降低血清中TNF-α和IL-6含量、抑制炎性损伤有关。     

如意珍宝片含药血清对大鼠软骨细胞增殖及分化的影响

目的探讨如意珍宝片含药血清对大鼠软骨细胞增殖及分化的影响。方法以如意珍宝片给大鼠灌胃1周后的含药血清干预软骨细胞,观察不同时间点的细胞形态,用蛋白印迹法检测细胞增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白表达情况。进一步采用10ng／ml浓度的白细胞介素（IL）-1β诱导软骨细胞分化,分为空白血清组,IL-1β诱导＋空白血清组,IL-1β诱导＋含药血清组共3组培养,采用实时定量聚合酶链反应（RT—PCR）检测各组细胞的Sox-9和基质金属蛋白酶13（MMP-13）基因的表达,用蛋白印迹法检测各组细胞的B—catenin蛋白表达情况。结果如意珍宝片含药血清能促进软骨细胞的增殖,提高软骨细胞PCNA蛋白及Sox。9基因表达（P〈0．05）,但对MMP-13基因和β—catenin蛋白表达无明显影响（P〉0．05）。结论如意珍宝片含药血清具有一定的促进软骨细胞增殖,抑制细胞分化的作用。     

黄芪甲苷通过激活短链酰基辅酶A脱氢酶抑制Ang Ⅱ诱导的大鼠心肌成纤维细胞增殖和胶原表达北大核心CSCD

目的观察黄芪甲苷(astragaloside Ⅳ,AS-Ⅳ)对血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)诱导的大鼠心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)增殖和胶原表达的影响。方法原代提取并体外培养大鼠CFs,用短链酰基辅酶A脱氢酶(short-chain acyl-CoA dehydrogenase,SCAD)的沉默基因SiRNA1186预处理CFs 12 h后,加入Ang Ⅱ和AS-Ⅳ共同处理36 h。Western blot检测SCAD、α-SMA、collagen Ⅰ、collagen Ⅲ的蛋白表达水平;荧光定量PCR检测SCAD、α-SMA、collagen Ⅰ、collagen Ⅲ的mRNA表达水平;检测各组CFs中SCAD酶活性、ATP、羟脯氨酸和游离脂肪酸含量变化。结果Ang Ⅱ作用CFs 36 h后,与空白对照组比较,Ang Ⅱ组CFs增殖率,α-SMA、Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ的蛋白和mRNA表达水平明显增加(P均<0.01),SCAD表达和酶活性均明显降低(P<0.01,P<0.05),ATP生成减少(P<0.01),羟脯氨酸和游离脂肪酸含量升高(P均<0.01);AS-Ⅳ给药处理后,CFs增殖和胶原表达明显减少(P均<0.01),SCAD表达和酶活性明显升高(P均<0.01),ATP生成增加(P<0.01),羟脯氨酸和游离脂肪酸含量减少(P均<0.01);然而,与Ang Ⅱ+NC组相比,Ang Ⅱ+SiRNA1186+AS-Ⅳ组各项指标均无差异,在SCAD SiRNA1186的干扰下,AS-Ⅳ对Ang Ⅱ诱导的CFs增殖和胶原表达的保护作用被取消。结论AS-Ⅳ可能通过激活SCAD,从而抑制Ang Ⅱ诱导的大鼠心肌成纤维细胞增殖和胶原表达。     

TGF-β/Smads信号通路在姜黄素改善糖尿病大鼠心肌纤维化中的作用

目的探讨TGF-β/Smads信号通路在姜黄素改善糖尿病心肌纤维化中的作用。方法高糖高脂饮食联合腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ)35 mg·kg~(-1)建立2型糖尿病大鼠模型,自由饮用300 mg·kg·d~(-1)姜黄素进行干预;天狼猩红染色检测各组大鼠心肌内胶原表达情况;免疫荧光检测各组大鼠心肌内CollagenⅠ和CollagenⅢ的表达情况;葡萄糖(5.5、20、25、30、35、50 mmol·L~(-1))刺激大鼠乳鼠心肌成纤维细胞(CFs)24 h确定最佳高糖造模浓度;30 mmol·L~(-1)高糖加姜黄素(10、25、50、100、200μmol·L~(-1))刺激CFs 24h确定最佳姜黄素给药浓度;Western blot法检测细胞内CollagenⅠ、CollagenⅢ、TGF-β1、p-Smad2、Smad2、p-Smad3、Smad3、TβR-Ⅲ的蛋白表达水平。结果相比于正常组,糖尿病组大鼠心肌组织胶原出现明显沉积,CollagenⅠ和CollagenⅢ表达明显增多,给予姜黄素治疗后,糖尿病大鼠心肌组织胶原沉积明显减少,CollagenⅠ和CollagenⅢ表达明显减少;30 mmol·L~(-1)高糖刺激CFs 24 h可以明显促进细胞增殖(P<0.05);而10μmol·L~(-1)姜黄素可以明显抑制高糖诱导的CFs增殖(P<0.05);30 mmol·L~(-1)高糖诱导CFs24 h以后,CollagenⅠ、CollagenⅢ、TGF-β1、p-Smad2、pSmad3、TβR-Ⅲ的蛋白表达明显增多(P<0.05),给予25μmol·L~(-1)姜黄素以后,上述各蛋白表达水平明显下降(P<0.05)。结论姜黄素可通过TGF-β/Smads信号通路改善糖尿病大鼠心肌纤维化,对糖尿病大鼠心肌具有保护作用。     

基于TGF-β/Smad2/3信号通路探讨鸢尾素对哮喘气道重塑的实验研究

目的 探究鸢尾素（Irisin）对TGF-β1诱导的肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化的调控及机制。方法 体外培养人胚肺成纤维细胞HFL-1,用10 ng/mL TGF-β1诱导HFL-1细胞,同时用不同浓度(25、50、100、200) ng/mL的irisin干预细胞24 h、48 h和72 h。利用CCK8试剂盒检测细胞增殖率。随后,将细胞分为空白对照组（NC组）、TGF-β1组（10 ng/mL）、TGF-β1+irisin组（10 ng/mL TGF-β1和100 ng/mL irisin）。采用细胞划痕实验检测不同组细胞的迁移能力。通过免疫荧光法检测不同处理组细胞α-SMA蛋白的表达情况。Western blot法检测不同处理组细胞α-SMA、胶原蛋白I (collagen I)、Smad2、pSmad2、Smad3、p-Smad3的蛋白表达水平。结果 与NC组相比,TGF-β1能有效促进HFL-1细胞的增殖和迁移（P<0.05）;与TGF-β1组相比,加入irisin进行干预后能有效抑制TGF-β1诱导的HFL-1细胞的增殖和迁移（P<0.01）。与NC组相比,T...     

黄芪、水蛭含药血清对大鼠肾小球系膜细胞产生TGF-β1的影响

目的：观察黄芪、水蛭及其不同比例方剂含药血清,对体外培养大鼠系膜细胞（MC）产生的转化生长因子（TGF）-β1的影响.方法：将大鼠系膜细胞随机分为9组：阴性对照组、阳性对照组、空白组、黄芪高剂量组、低剂量组、水蛭高剂量组和低剂量组、水蛭低剂量黄芪高剂量组、水蛭高剂量黄芪低剂量组.每组设5个复孔,取培养上清液,采用ELISA法检测各组大鼠MC分泌TGF-β1的含量.结果：阳性对照组TGF-β1含量明显升高,与阴性对照组相比差异有统计学意义（P＜0.01）.中药各含药血清TGF-β1表达量均低于空白血清组（P＜0.01）,以水蛭高剂量黄芪低剂量组最低,其次是水蛭高剂量组,水蛭高剂量组低于水蛭低剂量组（P＜0,01）.结论：水蛭和以水蛭为主药的方剂在抑制体外培养的大鼠MC分泌TGF-β1作用方面强于黄芪和以黄芪为主药的方剂.     

金银花含药血清对脂多糖诱导的人牙周膜细胞活性及NLRP3/IL-1β通路的影响

目的 探讨金银花含药血清对脂多糖(LPS)诱导的人牙周膜细胞(HPDLCs)活性及核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、白细胞介素1β(IL-1β)通路的影响。方法 将20只大鼠按随机数字表法分为对照组(生理盐水)和金银花组(5.0 g·kg^-1)，每组10只，灌胃给药，1次/d，持续14 d。将HPDLCs分为对照组(空白血清培养)、LPS组(10μg·mL^-1 LPS+空白血清培养)、金银花低浓度(HPDLCs+10μg·mL^-1 LPS+75μL空白血清培养+75μL 5%金银花含药血清)、中浓度(HPDLCs+10μg·mL^-1 LPS+75μL空白血清培养+75μL 10%金银花含药血清)、高浓度(HPDLCs+10μg·mL^-1 LPS+75μL空白血清培养+75μL 20%金银花含药血清)组。MTT检测HPDLCs细胞增殖率，Transwell小室检测HPDLCs细胞迁移，流式细胞仪检测HPDLCs细胞凋亡率，PCR检测HPDLCs中IL-1β、NLR...     

肾茶提取物含药血清对大鼠肾小球系膜细胞增殖及TGF-β1表达的影响

目的 探讨肾茶两种不同化学提取物对大鼠肾小球系膜细胞（MCs）增殖与TGF-β1分泌、TGF-β1 mRNA表达的影响.方法 对肾茶提取分离得到乙酸乙酯、正丁醇两种不同化学提取物,分别给大鼠灌胃后,采血制备含药血清.以肾茶提取物含药血清为干预因素,体外培养的肾小球系膜细胞（MCs）为研究对象,采用CCK-8、ELISA、RT-PCR技术,探讨其对脂多糖（LPS）诱导的系膜细胞增殖、TGF-β1分泌及TGF-β1 mRNA表达的影响.结果 不同剂量的肾茶正丁醇与乙酸乙酯提取物的含药血清均明显抑制LPS刺激的大鼠MCs增殖及TGF-β1分泌（P＜0.01或P＜0.05）;肾茶正丁醇提取物高、低剂量组与乙酸乙酯提取物高剂量组的含药血清可明显抑制LPS刺激的大鼠MCs TGF-β1 mRNA表达（P＜0.01或P＜0.05）.其中,肾茶正丁醇提取物抑制作用明显优于乙酸乙酯提取物,二者同剂量比较差异有统计学意义（P＜0.01）,且抑制作用呈一定的剂量相关性（P＜0.01）.结论 体外实验表明,肾茶二种提取物含药血清可抑制MCs的异常增生及TGF-β1的过度表达,其中正丁醇提取物作用优于乙酸乙酯提取物,为肾茶开发新制剂治疗肾小球疾病提供参考.     

生松素对AngⅡ诱导的大鼠肾小球系膜细胞细胞外基质合成的影响及其机制研究

目的 探讨生松素（Pb）对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的大鼠肾小球系膜细胞细胞外基质（ECM）合成的影响及其机制。方法 以大鼠肾小球系膜细胞为研究对象,将实验分为以下5组：正常对照（NC）组、1×10-6mol/L AngⅡ（Ng）组、1×10-6 mol/L AngⅡ+1‰ DMSO（Ng-D）组、 1×10-6 mol/L AngⅡ+30 μmol/L Pb（Ng-Pb）组、1×10-6 mol/L AngⅡ+10 μmol/L缬沙坦（Ng-Val）组。分别在干预12、24、48 h搜集细胞和上清液,采用Western blot检测Ⅳ型胶原（ColⅣ）、纤连蛋白（FN）、转化生长因子-β（ 1 TGF-β1 ）、Smad3、磷酸化Smad3（p-Smad3）、核因子κB（NF-κB）、磷酸化NF-κB（pNF-κB）的蛋白水平,酶联免疫吸附法（ELISA）检测上清液中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）水平,实时荧光定量PCR（qPCR）检测细胞中ColⅣ、FN、TGF-β1、TNF-α、IL-6的mRNA水平。结果 （1）Pb对 AngⅡ诱导的系膜细胞合成ECM的影响：与NC组相比,Ng组细胞内ColⅣ和FN的蛋白质和mRNA 水平升高（P＜0.05）,而Ng-Pb组和Ng-Val组细胞内ColⅣ和FN的蛋白质和mRNA水平均较Ng组降低（P＜0.05）。（2）Pb对TGF-β1/Smad3通路的 影响：与NC组相比,Ng组细胞内TGF-β1的蛋白质和mRNA水平增加,p-Smad3/Smad3水平增加（ P＜0.05）,而Ng-Pb组和Ng-Val组细胞内TGF-β1的蛋白质和mRNA水平以及p-Smad3/Smad3水平均较Ng组降低（P＜0.05）。（3）Pb对NF-κb介导的促炎症因子产生的影响：与NC组相比,Ng组 p-NF-κb/NF-κb水平增加,IL-6和TNF-α的蛋白质和mRNA水平增加（P＜0.05）,而Ng-Pb组和 Ng-Val组p-NF-κb/NF-κb水平以及IL-6和TNF- α的蛋白质和mRNA水平均较Ng组降低（P＜0.05）。结论 Pb可能通过抑制TGF-β1/Smad3信号通路和NF-κb介导的促炎症因子的产生, 从而抑制AngⅡ诱导的大鼠系膜细胞合成ECM。     

青蒿鳖甲汤对急性白血病缓解期患者CD34~＋源DC诱导过程中IL-12的影响

目的：探讨青蒿鳖甲汤对AML-CR患者CD34＋源DC诱导过程IL-12的影响。方法：选择贵州省人民医院AML-CR患者4例,免疫磁珠法提取CD34＋细胞后以细胞因子扩增CD34＋细胞,再以含药血清与细胞因子共诱导DC,观察DC形态,ILISA法分别检测第0、6、9天的IL-12水平。结果：各组IL-12水平随DC的逐渐成熟而逐渐升高,其中含药血清组与空白、因子组比较有显著差异（P〈0.05）,其中高剂量组与中低剂量组比较有显著差异（P〈0.05）,高剂量组与因子、空白组比较有显著差异（P〈0.01）,中剂量组与低剂量组、因子与空白组比较无显著差异（P〉0.05）。结论：青蒿鳖甲汤在体外能从造血干细胞层面提高AML-CR患者IL-12水平,且以高剂量组效果最佳。     

肝宁方含药血清对人肝星状细胞增殖及凋亡的影响

目的研究肝宁方含药血清对人肝星状细胞(HSC-LX2)增殖及凋亡的影响。方法40只SD大鼠随机分为4组,每组10只,空白对照组与TGF-β1组SD大鼠给予生理盐水灌胃,TGF-β1+肝宁方组及肝宁方组SD大鼠给予肝宁方灌胃给药(7mL·kg^-1·d^-1),连续灌胃10d后取血离心,制备干燥血清粉末备用。将HSC-LX2分为空白对照组、TGF-β1组、TGF-β1+肝宁方组及肝宁方组。根据分组加入相应的20%大鼠血清对HSC-LX2进行培养造模。CCK8检测各组HSC-LX2细胞增殖率;流式细胞术检测各组HSC-LX2细胞的周期和细胞凋亡;qRT-PCR以及Western blotting分别检测各组α-SMA、Samd2、Samd3、Samd4、Samd7 mRNA及蛋白的表达。结果CCK8结果显示,TGF-β1+肝宁方组及肝宁方组HSC-LX2增殖受到抑制;流式细胞术结果显示,TGF-β1+肝宁方组及肝宁方组HSC-LX2周期停滞在G0/G1期并能促进细胞凋亡;qRT-PCR及Western blotting结果显示,TGF-β1+肝宁方组及肝宁方组α-SMA、Samd2、Samd3、Samd4 mRNA及蛋白的表达受到抑制,Samd7 mRNA及蛋白的表达增强。结论肝宁方具有抑制HSC-LX2增殖、促进HSC-LX2凋亡的作用,其作用与调控TGF-β1/Samd信号通路相关。     

二氢杨梅素对异丙肾上腺素诱导小鼠心肌纤维化的影响及机制研究

目的：初探二氢杨梅素（DMY）对异丙肾上腺素（ISO）诱导的小鼠心肌纤维化的作用及机制。方法：将C57BL/6小鼠随机分成正常对照组、模型组、DMY高、低剂量组、阳性对照药美托洛尔组。模型组小鼠背部皮下注射ISO,首次剂量为5 mg·kg-1·d-1,之后以2.5 mg·kg-1·d-1维持至30天,诱导心肌纤维化模型。给药组造模同时给与药物灌胃治疗。30天后,小鼠处死取心脏;检测血清中LDH、CK、TNF-α、IL-6含量;心室肌组织行Masson染色;检测心肌组织羟脯氨酸、丙二醛（MDA）含量、抗氧化物酶SOD和GSH-Px活性。检测心肌组织中TNF-α和IL-6 mRNA表达,Ⅰ、Ⅲ型胶原、α-SMA、Nrf2、p65-NF-κB及TGF-β1信号通路蛋白表达。结果：与正常组相比,模型组小鼠血清LDH和CK含量、心重指数均显著增加,心肌出现明显纤维化,心肌组织中羟脯氨酸含量显著增加;Ⅰ、Ⅲ型胶原和α-SMA蛋白表达显著增高。与模型组相比,DMY能减轻心肌损伤及纤维化程度。同时,DMY降低心肌组织中TGF-β1、p-Smad2、p-Smad3的蛋白表达,减少心肌中MDA含量,增强抗氧化物酶SOD和GSH-Px活性,增加Nrf2的入核。此外,DMY减少TNF-α、IL-6在血清中含量和在心肌中mRNA表达,减少p65-NF-κB入核。结论：本研究表明,二氢杨梅素能显著减轻ISO诱导的小鼠心肌纤维化,其机制可能与其干预TGF-β1信号通路、抗氧化及抗炎作用有关。     

活血通腑优化方对实验性肠粘连大鼠的保护作用

目的：观察活血通腑优化方对实验性肠粘连的防治效果。通过对大鼠血清IL-6、IL-1β、TNF-α及腹腔液中转化生长因子-β1和结缔组织生长因子的蛋白含量的检测,探讨其对肠粘连防治作用的机理。方法：SD大鼠随机分为6组：正常组、模型组、四磨汤组,活血通腑优化方低、中、高剂量组;每组10只。除正常对照组外,其余各组大鼠均制备肠粘连模型。正常组和模型组灌胃生理盐水。活血通腑优化方低、中、高剂量组在造模后,灌胃给予活血通腑优化方（0.65、1.3、2.6 g/100 g）,连续给药10 d。四磨汤组灌服1 mL/100 g的四磨汤,连续给药10 d。各组大鼠于术后第11 d麻醉取下腔静脉血,ELISA法测定血清IL-6、IL-1β和TNF-α含量;并取腹腔液检测TGF-β₁和CTGF的含量,同时记录大鼠肠粘连级别。结果：与正常组相比,模型组血清IL-1β和TNF-α含量增高（P<0.01）,腹腔液中TGF-β₁和CTGF的含量也升高（P<0.01）。与模型组相比,活血通腑优化方低、中、高剂量组的肠粘连程度明显减轻（P<0.05）,血清IL-1β和TNF-α含量明显降低（P<0.05）,腹腔液中TGF-β₁和CTGF的含量明显下降（P<0.05）。结论：活血通腑优化方可剂量依赖的减轻肠粘连的程度,对肠粘连具有防治作用。其作用可能是通过下调炎性因子TNF-α、IL-1β的表达,同时与抑制TGF-β₁信号通路有关。     

氧化苦参碱下调ZNF580以抑制LTC-14细胞分泌细胞外基质的分子机制研究

目的 探讨氧化苦参碱（OM）对转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导的大鼠胰腺星状细胞 LTC-14中细胞外 基质（ECM）分泌的影响及其分子机制。方法 取生长良好的 LTC-14细胞株,分为对照组（正常培养的 LTC-14细 胞）,TGF-β1组（10 μg/L TGF-β1刺激 12 h）,TGF-β1+OM组（1 g/L OM预处理 30 min,再加入 10 μg/L TGF-β1刺激 12 h）,TGF-β1 + SiZNF850组（LTC-14细胞中瞬时转染 ShRNA-ZNF580质粒,24 h后加入 10 μg/L TGF-β1刺激 12 h）。实时定量 PCR、Western blot 检测细胞内 Smad2、Smad3、ZNF580、α-肌动蛋白（α-SMA）、基质金属蛋白酶-2 （MMP-2）、基质金属蛋白酶组织抑制剂1（TIMP1）的mRNA和蛋白表达情况,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测ECM中 胶原蛋白-Ⅰ（Col-Ⅰ）、Col-Ⅲ、纤维连接蛋白（FN）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-1β（IL-1β）的分泌情 况。结果 TGF-β1诱导的 LTC-14细胞中 Smad2、Smad3、ZNF580和 α-SMA的 mRNA和蛋白表达水平均升高（P＜ 0.05）,MMP-2/TIMP1比值下降（P＜0.05）,且 Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、FN、TNF-α和 IL-1β的分泌水平升高（P＜0.05）;而用 OM预处理或沉默 ZNF580基因后,LTC-14细胞中 TGF-β1/Smads通路 Smad2、Smad3、α-SMA和 ZNF580的 mRNA和 蛋白表达水平均下调（P＜0.05）,MMP-2/TIMP1表达比值升高（P＜0.05）,细胞外基质 Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、FN、TNF-α和 IL-1β分泌水平均降低（P＜0.05）。结论 OM通过抑制胰腺星状细胞LTC-14中TGF-β1/Smads通路激活,下调ZNF580, 阻滞胰腺星状细胞的活化,使ECM分泌减少、降解增多,减轻胰腺纤维化。ZNF580可能是OM作用的分子靶点。     

夏枯草提取物含药血清的体外抗炎活性研究

目的 研究夏枯草提取物含药血清的体外抗炎作用。方法 SD大鼠经灌胃连续给予夏枯草提取物,末次给药后,腹主动脉取血,收集含药血清。采用MTT法检测制备得到的含药血清对小鼠单核巨噬细胞白血病细胞（RAW 264.7）增殖度的影响。将RAW 264.7细胞分成阴性对照组,模型对照组和各提取物高、中、低剂量组。除阴性对照组外均给予1μg/mL的脂多糖（LPS）造成炎症模型,同时给予不同浓度、不同提取物的含药血清孵育24 h。采用ELISA法比较各组细胞上清液中一氧化氮（NO）、肿瘤坏死因子（TNF-α）、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)含量。结果 夏枯草各提取物含药血清对RAW 264.7的增殖无影响。与模型对照组比较,高、中、低剂量的夏枯草氯仿提取物含药血清均能降低IL-6和NO含量（P<0.05）;与模型对照组比较,高、中剂量的夏枯草氯仿提取物含药血清还能降低IL-1β和TNF-α含量（P<0.05）。结论 夏枯草氯仿提取物含药血清能显著降低LPS诱导的炎症模型中炎性因子含量,有较好的抗炎作用。