黄连解毒汤通过调控巨噬细胞极化防治动脉粥样硬化的机制

目的:研究黄连解毒汤对动脉粥样硬化(AS)模型小鼠M1、M2型巨噬细胞极化的调控作用,初步阐明其防治AS的机制.方法:将60只雄性ApoE-/-小鼠随机分为空白对照组、模型组、辛伐他汀组[阳性对照,5 mg/(kg·d)]和黄连解毒汤低、中、高剂量组[5、10、20 mg/(kg·d),以生药总量计],每组10只.除空...     

姜黄素诱导HO-1的表达与抗动脉粥样硬化大鼠的脂质过氧化的研究

目的 观察姜黄素诱导HO -1高表达及其对动脉粥样硬化(AS)大鼠血清中氧化低密度脂蛋白(ox- LDL)、丙二醛(MDA)含量的影响.方法 将34只健康♂Wistar大鼠,随机分为正常对照组(n=8)、模型组(n=10)、姜黄素组(n=8)及抑制组(n=8),模型组、姜黄素组及抑制组同法复制AS模型,姜黄素组加用姜黄素,抑制组加用姜黄素及锌原卟啉Ⅸ;第14周末处死所有大鼠,取降主动脉检测HO -1的表达、分布及活力,经心脏取血检测ox - LDL、MDA的含量.结果 姜黄素组较模型组的HO -1表达量及活力明显增强(P＜0.05),ox - LDL、MDA含量显著降低(P＜0.05);抑制组较姜黄素组的HO -1表达量及活力明显下降(P＜0.05),ox - LDL、MDA含量显著增高(P＜0.05).结论 姜黄素可诱导HO -1高表达并显著减轻脂质过氧化程度,锌原卟啉Ⅸ抑制HO -1高表达可使姜黄素抗脂质过氧化作用显著下降.     

生长分化因子15调控巨噬细胞炎症影响动脉粥样硬化的机制研究

目的 研究生长分化因子15(GDF-15)对小鼠动脉粥样硬化及巨噬细胞炎症的影响。方法 构建ApoE^-/-动脉粥样硬化小鼠模型,苏木素-伊红(HE)染色和油红O染色观察冠状动脉病理学变化,Western blot方法检测冠状动脉中GDF-15、IL-6、IL-1β和CD36蛋白表达,免疫组化法检测巨噬细胞表达量。以ox-LDL诱导巨噬细胞RAW246.7,体外构建动脉粥样硬化巨噬细胞模型,同时设置转染pcDNA-GDF-15组,Western blot方法检测GDF-15、IL-6、IL-1β和CD36蛋白表达。结果 对照组小鼠冠状动脉的管腔内壁平整,内膜光滑,无脂质红染。动脉粥样硬化小鼠模型冠状动脉内壁粗糙不均匀,内膜明显增生,平滑肌纤维排列紊乱,有脂质沉淀,脂质沉淀被染成红色,细胞核为蓝色,间质为无色。动脉粥样硬化小鼠模型冠状动脉组织中GDF-15蛋白表达量降低,IL-6、IL-1β和CD36蛋白表达量升高,巨噬细胞的表达量明显增加。ox-LDL处理的巨噬细胞RAW246.7中GDF-15蛋白表达减少,IL-6、IL-1β和CD36蛋白表达增多。转染pcDNA...     

SHP2抑制剂PHPS1对 ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块及巨噬细胞的影响

目的研究SHP2抑制剂PHPS1对ApoE基因敲除(ApoE^-/-)小鼠动脉粥样硬化斑块及巨噬细胞的影响。方法体内实验:将ApoE^-/-小鼠随机分成模型组和PHPS1组,每组10只,并给予高脂饲料喂养,模型组腹腔注射0.9%氯化钠溶液3 mg·kg^-1·d^-1,PHPS1组腹腔注射PHPS1剂量3 mg·kg^-1·d^-1,注射1次/d,注射20 d。通过Movat染色分析斑块面积;通过天狼星红染色分析胶原所占比例;通过免疫组化分别分析巨噬细胞与平滑肌细胞的表达量;通过Western Blotting检测p-SHP2、p-Syk、CD36蛋白磷酸化水平。体外实验:将小鼠巨噬细胞RAW246.7细胞培养于DMEM培养基中,将其分为RAW246.7组(未做其他任何处理的DEMD培养基)、RAW246.7+ox-LDL组(给予ox-LDL处理的DEMD培养基),RAW246.7+ox-LDL+PHPS1组(同时给予ox-LDL+PHPS1处理的DEMD培养基)。体...     

儿童尿液中8-羟基脱氧鸟苷水平的影响研究

目的探讨儿童尿液中8-羟基脱氧鸟苷水平与儿童生长发育的影响。方法采用双抗体夹心法检测尿液中8-羟基脱氧鸟苷的水平,同时收集儿童的身高、体重、头围、胸围和年龄等指标。结果尿液中8-羟基脱氧鸟苷水平,男童和女童之间差异无统计学意义;7～8岁组儿童高于3～4岁组儿童,差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论高年龄儿童处于一个较高的氧化应激水平,并可能对儿童生长发育造成影响。     

SHP2抑制剂PHPS1通过调节MAPK通路对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块的影响

目的 探讨SHP2抑制剂PHPS1通过调节MAPK通路对ApoE基因敲除(ApoE-/-)小鼠动脉粥样硬化斑块的影响.方法 体内实验:将8周龄雄性C57BL/6J-ApoE-/-小鼠随机选取10只作为对照组,不做其他特殊处理,其余小鼠进行6周的高脂饲料喂养建立动脉粥样硬化模型,建模成功后将其随机分为模型组[腹腔注射0....     

血清TNF-α升高对糖尿病肾脏脂质积聚的影响研究

目的明确糖尿病小鼠血清TNF-α升高与肾脏脂质代谢的关系。方法 CD1小鼠按体重腹腔注射链脲佐菌素(150 mg·kg-1),72 h后空腹血糖大于16.7 mmol·L-1者确定为1型糖尿病模型,饲养1个月后,采用ELISA方法检测血清中TNF-α水平,免疫组织化学和Western blot方法检测SREBP-1和ADRP的表达。结果与正常对照小鼠相比,糖尿病小鼠血清TNF-α水平明显升高,为正常对照小鼠的7.73倍。SREBP-1和ADRP主要表达于肾小管上皮细胞,糖尿病小鼠肾脏SREBP-1前体片段、成熟片段和ADRP表达明显高于正常对照小鼠,分别是对照组的2.31倍、1.74倍和1.72倍。小鼠血清TNF-α水平和肾脏ADRP表达的相关性分析证实二者间存在正相关,相关系数为0.914。结论糖尿病小鼠血清TNF-α升高可能是导致肾脏脂质积聚的因素之一。     

冠心病慢性房颤患者血清8-OHdG水平的研究

目的:探讨氧化应激标志物8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)在冠心病慢性房颤患者体内水平的变化。方法:选择冠心病慢性房颤患者30例、冠心病窦律患者30例及健康对照组30例,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测试验对象血清8-O-HdG水平。结果:冠心病慢性房颤组与冠心病窦律组相比血清8-OHdG浓度升高(P<0.05),与健康对照组相比8-OHdG浓度更高(P<0.05)。结论:冠心病慢性房颤患者体内存在8-OHdG水平的变化,氧化应激可能参与了冠心病慢性房颤的发生及发展,8-OHdG对冠心病后合并房颤具有预测价值。     

siRNA抑制IRE1α蛋白表达对巨噬细胞凋亡的影响

目的研究游离胆固醇诱导内质网应激状态下,抑制IRE1α蛋白表达后对巨噬细胞凋亡的影响。方法取自C57BL6/J小鼠腹腔的野生型巨噬细胞和用IRE1α特异性siRNA干扰的巨噬细胞分别在普通培养基及普通培养基加胆固醇乙酰转移酶抑制剂和乙酰低密度脂蛋白(促进游离胆固醇聚集条件下)中进行培养,分组孵育8h后Annexin-V和碘化丙锭双染色后流式细胞仪检测细胞凋亡。结果在FC-loaded状态下经8h孵育,野生型巨噬细胞组大量巨噬细胞凋亡,达到(21.83±2.47)%;siRNA干扰组巨噬细胞的凋亡明显减少。结论结果表明游离胆固醇聚集到内质网后引起内质网应激,而激活内质网跨膜蛋白IRE1α是诱导巨噬细胞凋亡的关键。     

巨噬细胞移动抑制因子和细胞间黏附分子 -1在慢性牙周炎合并动脉粥样硬化大鼠模型中的表达分析

目的 分析慢性牙周炎(CP)合并动脉粥样硬化(AS)大鼠血清及动脉组织中巨噬细胞移动抑制因子(MIF)以及细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的表达.方法 24只成年雄性SD大鼠用随机数字表法分为四组,分别为正常对照(NC)组、CP组、AS组及CP+AS组,每组各6只.采用钢丝结扎双侧上颌第二磨牙联合口腔内接种牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis)建立牙周炎模型;高脂饮食、腹腔注射维生素D3联合左侧颈动脉球囊损伤法建立AS模型.四组分别接受相应的建模处理.12周后,组织病理学观察颈动脉组织的病理改变;体视显微镜下观察各组大鼠牙槽骨吸收面积;全自动生化分析仪检测大鼠血清血脂的表达水平;酶联免疫吸附测定(ELISA)和免疫组织化学法分析血清中和主动脉组织中MIF及ICAM-1的表达水平.结果 组织病理学检查发现:NC组颈动脉组织未见明显异常,CP组血管壁较NC组略增厚,AS组、CP+AS组颈主动脉组织中出现动脉粥样硬化斑块病变;AS组、CP+AS组血清三酰甘油、总胆固醇、低密度脂蛋白(LDL)水平较NC组、CP组明显升高(P<0.05),AS组、CP+AS组血清高密度脂蛋白(HDL)水平较NC组、CP组明显降低(P<0.05).两项检测结果提示AS模型建立成功.ELISA检测血清MIF表达水平,AS组(50.88±4.20)μg/L、CP+AS组(59.40±3.92)μg/L明显高于NC组(42.93±2.63)μg/L及CP组(45.57±2.59)μg/L(P<0.05),且CP+AS组表达水平最高(P<0.05);CP组(3.99±0.44)μg/L、AS组(4.19±0.89)μg/L、CP+AS组(6.77±1.47)μg/L血清ICAM-1表达水平明显高于NC组(1.33±0.25)μg/L(P<0.05),且CP+AS组表达水平最高(P<0.05),CP与AS组间差异无统计学意义(P>0.05).免疫组织化学法检测动脉组织中MIF表达(吸光度),AS组(0.127±0.011)、CP+AS组(0.152±0.022)明显高于NC组(0.096±0.010)、CP组(0.010±0.011)(P<0.05),且CP+AS组表达水平最高(P<0.05);AS组(0.183±0.025)、CP+AS组(0.197±0.033)动脉组织中ICAM-1表达(吸光度)明显高于NC组(0.133±0.012)、CP组(0.156±0.006)(P<0.05),AS组与CP+AS组间差异无统计学意义(P>0.05).结论 同CP组和AS组相比,CP+AS组血清及主动脉组织中MIF的表达水平及血清中ICAM-1的表达水平明显增高,提示慢性牙周炎可能通过升高炎性因子MIF及ICAM-1表达的方式促进AS病变的形成过程.     

EGCG通过miR-33a上调ABCA1表达减少巨噬细胞脂质蓄积

目的研究EGCG是否通过影响miR-33a的表达,进而调控ABCA1表达,促进巨噬细胞内胆固醇流出。方法先建立THP~(-1)巨噬细胞源性泡沫细胞,然后用EGCG处理,Real time PCR检测细胞miR-33a表达。细胞随机分为3组:空白对照组、50μmol·L~(-1)EGCG处理组、50μmol·L~(-1)EGCG+80 nmol·L~(-1)miR-33a mimic处理组,Real time PCR和Werstern blot检测细胞ABCA1 mRNA和蛋白表达,油红O染色和高效液相色谱法检测细胞内脂质含量,[3H]法检测细胞内胆固醇流出。结果在不影响细胞活性状况下,EGCG呈浓度和时间依赖性下调miRNA33a表达;EGCG能明显上调ABCA1 mRNA和蛋白的表达,但能被转染miRNA33 mimic抑制;EGCG可减少THP~(-1)巨噬细胞源性泡沫细胞中的脂质蓄积,但能被细胞中转染miRNA33 mimic所弱化;EGCG减少细胞内胆固醇蓄积是与其促进细胞内胆固醇流出有关,细胞中转入过量miRNA33a可以抑制胆固醇流出。结论 EGCG可通过减少miRNA33a的生成,进而上调ABCA1表达,促进巨噬细胞中胆固醇流出,这可能是EGCG抗动脉粥样硬化作用的分子机制之一。     

沙格列汀激活AMPK-PPARα途径促进巨噬细胞向M2型极化减轻动脉粥样硬化的作用研究

目的 探讨沙格列汀对巨噬细胞极化的影响,以及沙格列汀减轻动脉粥样硬化的可能机制.方法 ApoE-/-小鼠给予高脂饲料喂养,建立动脉粥样硬化模型,以C57BL/6小鼠作为对照组,喂养8周后,以15 mg/kg沙格列汀灌胃给药,1次/d,给药12周后,全自动生化仪分析小鼠血脂水平变化,HE染色观察主动脉组织形态学变化,油红...     

CB-839通过抑制谷氨酰胺代谢对巨噬细胞向M1型极化的影响

目的:研究谷氨酰胺酶抑制剂CB-839对巨噬细胞极化分型的影响.方法:准备小鼠骨髓来源巨噬细胞(bone marrow-derived macrophages,BMDM)和RAW264.7细胞,分为对照组和CB-839处理组.以CCK8检测巨噬细胞的增殖,用ELISA法检测M1型巨噬细胞相关因子肿瘤坏死因子α(TNF-...     

白头翁有效成分通过调控肿瘤相关巨噬细胞极化干预肿瘤发生发展的机制

目的对白头翁成分进行筛选,探讨白头翁有效成分对肿瘤相关巨噬细胞极化的影响及其抗肿瘤免疫机制。方法 CCK-8法检测白头翁各成分对THP-1巨噬细胞与MCF-7乳腺癌细胞的IC_(50)值;通过Transwell将THP-1巨噬细胞与MCF-7细胞进行共培养,筛选能够抑制共培养体系中MCF-7细胞增殖的白头翁有效成分;将筛选出的有效成分作用于巨噬细胞24 h,通过实时PCR检测巨噬细胞M1型相关细胞因子(白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α、白细胞介素12、白细胞介素23)以及M2型相关细胞因子(甘露糖受体、精氨酸酶1、白细胞介素10)的mRNA表达情况;流式细胞术(FACS)检测巨噬细胞表面抗原CD68、CD86的表达;Western印迹检测巨噬细胞TLR4信号通路相关蛋白的表达。结果通过筛选发现白头翁成分PA能够显著抑制共培养体系中MCF-7的增殖;实时PCR结果显示,白头翁成分PA低剂量(0.05 g·L~(-1))和高剂量(0.1 g·L~(-1))可显著增加M1型巨噬细胞相关因子IL-1β,TNF-α,IL-12,IL-23和CXCL11m RNA的表达,降低M2型巨噬细胞相关因子CD206,IL-10和Arg-1 mRNA的表达(P<0.05);FACS结果表明,白头翁成分PA组M1型巨噬细胞表面标志物CD86表达显著增高(P<0.01);Western印迹结果显示,白头翁成分PA可以促进巨噬细胞TLR4,My D88,TRAF6,NF-k B,P38,Ikbα和IRF5等蛋白的表达。结论白头翁有效成分PA可能通过影响巨噬细胞TLR4/My D88/TRAF6/NF-k B通路,诱导巨噬细胞向M1型极化、抑制M2型极化,启动巨噬细胞相关抗肿瘤免疫应答,从而干预肿瘤细胞的生长。     

差异表达基因巨噬细胞移动抑制因子及相关因子在早期宫颈鳞癌组织中的表达及临床意义

目的检测早期宫颈鳞癌基因芯片差异表达基因——巨噬细胞移动抑制因子(MIF)、白细胞介素(IL)-8与基质金属蛋白酶(MMP)-9在早期宫颈鳞癌中的表达及相互关系,探讨这些因子在早期宫颈鳞癌淋巴转移中的作用机制。方法采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测63例无淋巴结转移,23例有淋巴结转移早期宫颈鳞癌组织中MIF、IL-8、MMP-9的mRNA表达水平;收集126例新鲜及归档早期宫颈鳞癌组织蜡块制作组织芯片,采用免疫组织化学方法检测MIF、IL-8、MMP-9蛋白的表达。结果 MIF、IL-8、MMP-9 mRNA和蛋白水平的表达在有淋巴结转移的早期宫颈鳞癌组织中显著高于无转移组织(P<0.01),各因子的表达均与早期宫颈鳞癌的淋巴结转移呈正相关(r=0.34;r=0.48;r=0.495)。MIF和IL-8、MMP-9之间均有等级相关性(r=0.272;r=0.54);IL-8与MMP-9的表达呈正相关(r=0.409)。结论 MIF、IL-8、MMP-9在早期宫颈鳞癌中高表达,且与淋巴结转移密切相关,提示这些因子可能参与早期宫颈鳞癌的淋巴转移;MIF可能是调控IL-8和MMP-9表达的上游因子。     

甲壳低聚糖对THP-1源性巨噬细胞脂质转运相关基因表达的影响

目的观察甲壳低聚糖(COS)对离体培养的THP-1源性巨噬细胞脂质转运相关基因表达的影响,以初步探讨COS降低血脂的可能分子机制。方法离体培养人THP-1单核细胞,诱导分化成巨噬细胞后,用100μg/mL的COS处理THP-1源性巨噬细胞6,12,24,48 h,运用半定量RT-PCR方法检测其LDL受体、SR-BⅠ、ABCA1和CD36mRNA表达水平的变化。结果COS处理THP-1源性巨噬细胞24和48 h后,LDL受体mRNA的表达与对照组比较分别下调了15.6%(P<0.05)和30.7%(P<0.01);处理6,12,24,48 h后,SR-BⅠmRNA的表达与对照组比较分别上调了14.7%,23.0%,14.6%(P<0.05)和33.9%(P<0.01);处理6和12 h后,ABCA1 mRNA的表达与对照组比较分别上调了12.6%和14.5%(P<0.05);处理6和12 h后,CD36 mRNA的表达与对照组比较分别下调了25.5%和10.2%(P<0.05)。结论通过细胞离体培养实验表明,COS具有的降低血脂作用可能与其能上调巨噬细胞中AB-CA1和SR-BⅠmRNA表达水平以及降低LDL受体和CD36 mRNA水平有关。     

GLP-1类似物Exendin-4对糖尿病肾病大鼠肾脏SOD、8-OHdG的影响

目的通过GLP-1类似物对糖尿病肾病大鼠肾脏组织SOD、8-OHdG表达的影响研究,探讨GLP-1类似物对糖尿病肾病时肾脏氧化应激的影响。方法制备DN实验模型,分组后干预后采用免疫组化观察肾脏组织SOD、8-OHdG表达的变化。结果经治疗后,与DN组相比,高剂量治疗组和低剂量治疗组的血糖、24h尿蛋白定量明显改变,高的治疗组改善非常明显(P<0.05)。低剂量治疗组和高剂量治疗组大鼠肾组织的SOD表达明显上升,8-OHdG表达明显下降(P<0.05),高剂量治疗组大鼠肾组织的表达变化更明显(P<0.05)。结论 GLP-1类似物可以剂量依赖地降低糖尿病肾病时肾脏组织氧化应激的水平,从而延缓糖尿病肾病的进展。     

儿茶素对小鼠巨噬细胞VCAM-1表达的影响

<正>血管细胞黏附因子介导的血管炎性病变是很多疾病[如动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)[1]、风湿病、肾病等]共同的病理基础。研究发现[2]AS的血管壁中有VCAM-1的大量表达。过量表达的VCAM-1介导的炎症反应参与了AS发生发展的全过程[3]。儿茶素(catechin)是从茶叶中提取的酚类物质,有良好的     

金花茶叶醇提物通过调节胆固醇逆向转运关键蛋白的表达抑制动脉粥样硬化

目的:探讨金花茶叶醇提物调节胆固醇逆向转运(RCT)关键蛋白细胞质膜微囊蛋白-1(caveolin-1)、清道夫受体B1(SR-B1)、A1型三磷酸腺苷结合盒转运体(ABCA1)、蛋白激酶A(PKA)的表达而抑制巨噬细胞向泡沫细胞衍变、拮抗动脉粥样硬化(AS)的潜在药理作用机制.方法:乙醇回流提取获得金花茶叶醇提物,制...     

牛磺酸对动脉粥样硬化模型兔的抗炎作用研究

目的:研究牛磺酸对动脉粥样硬化模型兔的抗炎作用。方法:取兔随机分为空白对照组、模型组和牛磺酸高、低剂量(4、2 g.d-1)组,每组10只,除空白对照组喂饲普通饲料外,其余3组喂饲高脂饲料,同时牛磺酸2个剂量组分别喂饲相应药物,12周后处死,观察各组兔主动脉细胞形态学改变,采用免疫组化法检测血管切片中炎症标记物巨噬细胞移动抑制因子(MIF)、白细胞介素(IL)8水平,采用夹心酶联免疫吸附法测定血清中肿瘤坏死因子(TNF)α水平。结果:与空白对照组比较,其余3组的主动脉内膜厚度、内膜/中膜厚度比及MIF、IL-8和TNF-α水平的表达均显著升高(P<0.01);与模型组比较,牛磺酸高、低剂量组的主动脉内膜厚度、内膜/中膜厚度比及MIF、IL-8和TNF-α水平的表达均显著降低(P<0.01)。结论:牛磺酸可能具有抗炎性因子MIF、IL-8、TNF-α的作用,从而对动脉粥样硬化产生预防作用。