PTTG1促进结肠癌SW480细胞侵袭和迁移的作用机制

目的 研究垂体肿瘤转化基因 1（pituitary tumor transforming gene 1, PTTG1）过表达促进人结肠癌细胞SW480侵袭和迁移作用及其可能机制。方法 采用脂质体转染法将pcDNA3.1(+)-PTTG1及空载pcDNA3.1(+)转染人结肠癌SW480细胞,G418法筛选阳性克隆。Western blot和Real-time PCR法鉴定稳定过表达PTTG1细胞株建立。Transwell小室法检测细胞侵袭和迁移能力,Western blot检测MMP2、MMP9、E-cadherin、Vimentin和Snail的表达。结果 （1）成功获得稳定高表达PTTG1的SW480克隆细胞株PTTG1-SW480;（2）过表达PTTG1基因后,SW480细胞侵袭和迁移能力增强,MMP2和MMP9表达升高,上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition, EMT）标记分子E-cadherin表达降低,Vimentin和Snail的表达升高,差异均有统计学意义（P<0.01）;（3）过表达PTTG1基因后,SW480细胞中PI3K/AKT信号活化增强,使用LY29400干预后,抑制细胞侵袭、迁移和EMT,E-cadherin表达上调、Vimentin和Snail的表达下调,差异均有统计学意义（P<0.01）。结论 PTTG1基因过表达可能通过活化PI3K/AKT信号诱导SW480细胞EMT发生,发挥促进SW480侵袭和迁移作用;提示PTTG1蛋白可能成为结肠癌治疗的一个潜在靶点。     

下调基因PTTG1 对人胶质瘤细胞SHG44增殖、凋亡、迁移和侵袭能力的影响

背景与目的：研究表明垂体瘤转化基因1（pituitary tumor-transforming gene 1，PTTG1）在多种癌症中高表达。该研究旨在探讨其对胶质瘤细胞SHG44增殖、凋亡、迁移和侵袭能力的影响。方法：用PTTG1 siRNA干扰胶质瘤细胞SHG44的基因表达，通过实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction，RTFQ-PCR）和蛋白质印迹法（Western blot）分别在mRNA和蛋白质水平上评估PTTG1沉默效率，进一步检测其对SHG44细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力的影响。结果：沉默PTTG1基因表达可以显著抑制SHG44细胞增殖（P<0.05）、迁移（P<0.01）和侵袭（P<0.001）能力，增加细胞凋亡（P<0.05）。结论：下调PTTG1的表达可以降低神经胶质瘤的恶化程度，有望成为临床胶质瘤治疗的新靶点。     

促胃液素对结肠癌细胞侵袭力的影响

目的研究促胃液素对人结肠癌细胞侵袭力的影响,以及促胃液素-促胃液素受体-黏着斑激酶(FAK)信号通路在此过程中的作用。方法使用促胃液素受体的真核表达载体pCR3．1／GR转染人结肠癌细胞株Colo320(Colo320／GR),使其高表达促胃液素受体,达到上调信号通路的作用;使用反义寡核苷酸阻断FAK的表达,达到下调信号通路的作用。使用递增剂量的促胃液素(0,0．1,1,10,100nmol／L)刺激Colo320和Colo320／GR细胞,用Boyden小室检测各组细胞侵袭力变化;使用免疫沉淀和蛋白质印迹法,柃测细胞FAK第397位酪氨酸(tyr-397)磷酸化的状况。使用免疫沉淀、蛋白质印迹法和Boyden小室法检测正常细胞、Colo320／GR、转染反义寡核苷酸组细胞和对照组细胞在接受促胃液素刺激前后,细胞侵袭力和FAK tyr-397磷酸化的变化。结果促胃液素能够增强Colo320和Colo320／GR细胞侵袭力和FAK tyr-397磷酸化,具有剂量依赖性。促胃液素受体表达增加可以增强细胞的侵袭力和FAK tyr-397磷酸化。使用FAK反义寡核苷酸对FAK的表达进行阻断后,促胃液素的作用明显下降。结论促胃液素可有效地增强结肠癌细胞的侵袭力,其作用是通过促胃液素-促胃液素受体-FAK通路实现的。     

Annexin 2基因对多发性骨髓瘤细胞侵袭力的影响及相关机制

 目的
了解Annexin 2(AnxA2)基因对骨髓瘤U266、RPMI8226细胞侵袭力的影响及相关机制。方法采用siRNA转染人骨髓瘤U266、RPMI8226细胞,应用Real-time PCR、Western blot鉴定干扰效果。继而应用Transwell板检测细胞侵袭力,应用Real-time PCR检测对侵袭相关基因的影响。结果AnxA2 siRNA转染U266和RPMI8226细胞可明显降低细胞侵袭力(P<0.05),同时降低侵袭相关因子MMP-2、MMP-9、MT1-MMP和TIMP-2的表达(P<0.05)。结论AnxA2基因在骨髓瘤细胞U266和RPMI8226侵袭中起促进作用。     

腺病毒介导PTEN基因对胶质瘤增殖与侵袭力的影响

脑胶质瘤为神经外科的常见病、多发病 ,约占颅内肿瘤的 45 % ,其主要治疗手段包括手术切除、化学治疗与放射治疗 ,其生存时间短、预后差 ,平均生存时间不足 1年 ,这与其具有高增殖性及高侵袭性有关。本实验应用腺病毒作为载体介导抑癌基因PTEN体外转染人脑胶质瘤细胞U87,检测其细胞增殖力与体外侵袭力的改变 ,进而探讨PTEN作为胶质瘤基因治疗靶点的可能性。分别用的Ad PTEN(实验病毒 )、Ad LacZ(对照病毒 )感染人胶质瘤细胞U87(病毒滴度为 5× 1 0 8pfu/ml,MOI为 5 0 ) ,同时用无病毒感染的U87作空白对照 ,首先用RT PCR检测PTE…     

神经节细胞胶质瘤1例

患者,男性,43岁。头痛、言语不清,视力、听力下降1个月。     

整合素αvβ3对胶质瘤细胞增殖和侵袭力影响的实验研究

目的:研究整合素αvβ3对胶质瘤细胞增殖和侵袭能力的影响。方法:采用MTT比色法和增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组化链霉亲和素-生物素-过氧化物酶复合物(SABC)法,观察不同浓度的整合素αvβ3抗体对体外培养的C6胶质瘤细胞增殖的影响;建立Boyden小室细胞侵袭模型,观察不同浓度的整合素αvβ3抗体对体外培养的C6胶质瘤细胞侵袭能力的影响。结果:对照组A值(0.2135±0.0325)、肿瘤细胞增殖抑制率(0)分别与实验组A值(0.1687±0.0403、0.1194±0.0512和0.0823±0.0338)和肿瘤细胞增殖抑制率[(31.56±3.36)%、(45.21±5.32)%和(68.27±4.49)%]比较,差异有统计学意义,F值分别为14.75和19.46,P均<0.01。实验组组间比较亦差异有统计学意义,F=7.86,P<0.05;F=13.77,P<0.01。对照组(0.7223±0.0318)与实验组(0.4592±0.0436,0.2967±0.0625)以及实验组组间PCNA表达水平的比较,差异有统计学意义,F=16.82,P<0.01;F=8.95,P<0.05。对照组(41.36±5.87)和实验组(32.53±3.89、18.82±4.02和13.71±2.94)以及实验组组间C6胶质瘤细胞透膜细胞计数比较,差异有统计学意义,F值分别为20.34和13.23,P均<0.01。结论:整合素αvβ3对胶质瘤的细胞增殖和侵袭性生长具有促进作用,其为抗整合素αvβ3治疗脑胶质瘤提供了实验依据。     

蝎毒多肽提取物对前列腺癌细胞侵袭力影响的体外研究

目的:观察蝎毒多肽提取物(PESV)对前列腺癌DU-145细胞侵袭力的影响,并探讨其可能作用机制.方法:前列腺癌DU-145细胞经PESV处理后,用MTT法检测其生长与增殖的变化;Transwell小室法观察其体外侵袭能力的变化;免疫组织化学方法及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法研究其基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)的蛋白水平和mRNA水平表达的变化.结果:经PESV处理后,DU-145细胞的增殖受抑制.体外侵袭实验结果显示,对照组每100倍视野穿过的细胞数平均为(51.29±7.56)个,而5、10和20 μg/mL PESV作用24 h后,每100倍视野穿过的细胞数分别为(20.43±1.51)、(12.29±2.75)和(5±1.73)个,不同浓度组比较差异有统计学意义,F=38.933,P=0.000.PESV组侵袭细胞数目较对照组明显减少,P值均为0.000;免疫组化及RT-PCR结果显示,经PESV处理后,MMP-9表达下调,TIMP-1表达上调.结论:PESV抑制DU-145细胞侵袭力的作用可能与其下调MMP-9,上调TIMP-1的表达有关.     

LGI1基因对胶质瘤细胞作用的研究

目的:研究富亮氨酸胶质瘤失活基因1(LGI1)与胶质瘤细胞生长及胶质瘤细胞凋亡的关系。方法:构建pcDNA3.1/LGI1质粒,采用脂质体介导的方法转染LGI1缺失的胶质瘤细胞系。RT-PCR法和免疫组化法检测转染细胞的LGI1基因表达,MTT法检测转染细胞的增殖活性,AnnevinV-FITC法检测转染细胞的凋亡。结果:pcDNA3.1/LGI1转染胶质瘤细胞系A172后,A172细胞LGI1mRNA和蛋白表达阳性;细胞增殖活性受到抑制,MTT吸收值在转染后24和48小时下降,与正常对照组相比有统计学意义(P<0.05);转染后24小时早期凋亡细胞较多,48小时后早期凋亡减少。结论:LGI1基因可抑制肿瘤细胞的增殖,诱导细胞凋亡。     

PTTG蛋白表达与胶质瘤病理分级及预后的相关性研究

目的探讨垂体瘤转化基因（Pituitary Tumor Transforming Gene，vriG）蛋白表达与胶质瘤病理分级及预后的相关性。方法回顾性研究手术切除的胶质瘤标本80例，病理学分级低度恶性组工级16例、Ⅱ级22例，高度恶性组Ⅲ级26例、Ⅳ级16例；患者生存时间〈12月22例，12-36月41例，〉36月17例；复发时间〈12月18例，12-36月39例，〉36月23例。采用免疫组化s-P法检测vriG的表达情况。结果vriG蛋白表达随肿瘤病理级别的增高而增加，组间比较差异有显著性（P〈0．01）；生存时间及复发时间各组间差异有显著性（P〈0．01）。结论vrIG蛋白表达与胶质瘤的病理学分级及预后密切相关，可以作为判断恶性程度及预后的指标。     

miR-200b通过靶向PROM1抑制胶质瘤细胞侵袭

目的 探讨miR-200b靶向调控PROM1的表达对胶质瘤细胞侵袭能力的影响以及miR-200b抑瘤的分子机制.方法 构建PROM1 3’端非翻译区(3'UTR)荧光素酶报告载体,荧光素酶报告检测miR-200b对PROM1 3'UTR-荧光素酶活性的影响.将miR-200b模拟物转染胶质瘤U87细胞,采用实时荧光定量PCR和Western blot检测PROM1 mRNA和蛋白的表达水平.将PROM1 siRNA转染U87细胞,Transwell侵袭实验检测PROM1下调对U87细胞侵袭能力的影响.结果 双荧光素酶报告检测显示,miR-200b能特异性地与PROM1 3'UTR结合,抑制其荧光素酶活性,其荧光素酶活性强度下降了57.0％,差异有统计学意义(P＜0.01).过表达miR-200b的U87细胞中PROM1蛋白和mRNA表达水平均降低,转染miR-200b组和对照组中PROM1 mRNA的表达水平分别为0.64 ±0.05和0.95 ±0.09,差异有统计学意义(P＜0.05).siRNA于扰PROM1表达能抑制U87细胞的生长和侵袭能力.转染PROM1siRNA组和对照组中穿膜细胞数分别为(85±9)个和(155±16)个,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 miR-200b可通过靶向调控PROM1的表达而抑制胶质瘤细胞的侵袭力.     

CCL18通过与Nir1结合促进胶质瘤细胞侵袭的研究

背景与目的：Nir1是CCL18的跨膜受体,CCL18能与之特异性结合而促进乳腺癌细胞的侵袭与转移,但其在胶质瘤细胞中的作用尚不清楚。该文旨探讨Nir1在胶质瘤侵袭中的作用及分子机制。方法：应用蛋白［质］印迹法(Western blot)检测Nir1在不同胶质瘤细胞系中的表达;利用siRNA技术抑制U251细胞中Nir1的表达;采用Western blot检测转染后Nir1蛋白的表达和转染前后U251细胞中Akt磷酸化的情况;使用体外侵袭实验检测转染后细胞的运动和侵袭能力;采用F-actin聚合实验检测F-actin的聚合能力。结果：Nir1在各胶质瘤细胞中均呈高表达;小RNA干扰技术沉默Nir1基因后,U251细胞中Nir1的蛋白表达量明显下降,侵袭并穿透Matrigel胶的细胞数目明显比对照组少(P=0.00);在CCL18刺激后细胞内的F-actin聚合量比对照组减少;Akt磷酸化试验结果显示,对照组细胞在CCL18的刺激下Akt更易发生磷酸化,实验组细胞无论是否存在CCL18,Akt磷酸化都受到抑制。结论：在胶质瘤细胞中存在Nir1蛋白高表达,通过与细胞膜上CCL18特异性结合来调节胶质瘤细胞的F-actin聚合和Akt的磷酸化进而调控胶质瘤细胞的运动和侵袭能力。     

miR-186通过下调垂体瘤转化基因1的表达抑制骨肉瘤细胞的增殖侵袭并诱导其凋亡

目的:探讨miR-186对骨肉瘤细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响,并探讨其可能机制.方法:实时荧光定量PCR检测骨肉瘤细胞HOS、U2-OS、Saos-2及成骨细胞NHOst中miR-186表达,并运用人工合成的miR-186模拟片段及对照scramble mimic转染至人骨肉瘤HOS及U2-OS细胞内,运用实时荧光定量PCR检测转染后细胞中miR-186的表达水平;分别运用CCK-8法、流式细胞检测技术及Transwall体外侵袭实验检测过表达miR-186对HOS及U2-OS细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响;运用Westem blotting及实时荧光定量PCR检测miR-186过表达对细胞中垂体瘤转化基因1(pituitary tumor transforming gene 1,PTTG1)的蛋白及mRNA表达水平的影响.结果:骨肉瘤细胞中miR-186呈现低表达;转染人工合成的miR-186片段可上调HOS及U2-OS细胞中miR-186的表达;miR-186过表达组细胞的增殖能力较scramble组明显下降(P＜0.01),转染组HOS[(16.9±2.1)％ vs(10.4±1.6)％,P＜0.05]及U2-OS[(22.6±2.9)％ vs (14.1±2.2)％,P＜0.05]细胞的凋亡比例明显高于scramble组,转染组HOS及U2-OS细胞的穿膜数明显低于scramble组(P＜0.01);转染组细胞中PTTG1的蛋白及mRNA表达水平均明显下降(P＜0.01),而scramble组无明显变化(P＞0.05);结论:miR-186能够抑制骨肉瘤细胞的增殖及侵袭并促进细胞凋亡,其作用机制可能与抑制PTTG1表达相关.     

Knockdown of HMGB1 improves apoptosis and suppresses proliferation and invasion of glioma cells

Background

The purposes of this study were to explore the effects of high mobility group protein box 1 (HMGB1) gene on the growth, proliferation, apoptosis, invasion, and metastasis of glioma cells, with an attempt to provide potential therapeutic targets for the treatment of glioma.

Methods

The expressions of HMGB1 in glioma cells (U251, U-87MG and LN-18) and one control cell line (SVG p12) were detected by real time PCR and Western blotting, respectively. Then, the effects of HMGB1 on the biological behaviors of glioma cells were detected: the expression of HMGB1 in human glioma cell lines U251 and U-87MG were suppressed using RNAi technique, then the influences of HMGB1 on the viability, cycle, apoptosis, and invasion abilities of U251 and U-87MG cells were analyzed using in a Transwell invasion chamber. Also, the effects of HMGB1 on the expressions of cyclin D1, Bax, Bcl-2, and MMP 9 were detected.

Results

As shown by real-time PCR and Western blotting, the expression of HMGB1 significantly increased in glioma cells (U251, U-87MG, and LN-18) in comparison with the control cell line (SVG p12); the vitality, proliferation and invasive capabilities of U251 and U-87MG cells in the HMGB1 siRNA-transfected group were significantly lower than those in the blank control group and negative control (NC) siRNA group (P<0.05) but showed no significant difference between the blank control group and NC siRNA group. The percentage of apoptotic U251 and U-87MG cells was significantly higher in the HMGB1 siRNA-transfected group than in the blank control group and NC siRNA group (P<0.05) but was similar between the latter two groups. The HMGB1 siRNA-transfected group had significantly lower expression levels of Cyclin D1, Bcl-2, and MMP-9 protein in U251 and U-87MG cells and significantly higher expression of Bax protein than in the blank control group and NC siRNA group (P<0.05); the expression profiles of cyclin D1, Bax, Bcl-2, and MMP 9 showed no significant change in both blank control group and NC siRNA group.

Conclusions

HMGB1 gene may promote the proliferation and migration of glioma cells and suppress its effects of apoptosis. Inhibition of the expression of HMGB1 gene can suppress the proliferation and migration of glioma cells and promote their apoptosis. Our observations provided a new target for intervention and treatment of glioma.     

垂体瘤转化基因1在胃腺癌组织中的表达及其与患者预后的关系

目的鉴定胃腺癌新的预后标志物和治疗靶点。方法通过Gene Expression Omnibus(GEO)数据库下载GSE33335和GSE63089基因表达数据集,共含有70例胃腺癌组织和配对的胃正常组织基因芯片数据,使用R语言分析胃癌组织和胃正常组织间差异表达基因。通过String在线分析工具构建差异表达基因的蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络。使用Cytoscape软件和分子复合物检测(MCODE)插件分离出关键基因集。使用在线数据库鉴定分离出与预后相关的关键基因,分别用数据库信息和南通大学附属医院2019年7—9月收治的32例胃腺癌组织和癌旁正常组织从mRNA和蛋白水平进行验证。结果使用R语言分析显示,2个数据集中有128个共同差异表达基因,其中85个基因在胃腺癌组织中表达上调,43个基因在胃腺癌组织中表达下调。通过String在线工具和Cytoscape软件建立了PPI网络和MCODE模型,获得27个关键基因,其中有25个基因与胃腺癌患者的预后有关(P<0.05)。25个与预后相关的基因中,有14个基因在胃腺癌组织中表达显著,其中有3个基因[垂体瘤转化基因1(PTTG1)、细胞周期蛋白B1(CCNB1)和polo样激酶1(PLK1)]在细胞周期途径中显著富集。PTTG1在胃腺癌和胃正常组织中的阳性表达率分别为68.8%(22/32)和18.8%(6/32),差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PTTG1在胃腺癌组织和胃正常组织中存在表达差异,是胃腺癌形成的关键基因。过表达PTTG1的胃腺癌患者预后更差。PTTG1可能通过调控细胞周期参与胃腺癌的发生发展。     

siRNA干扰ARK5蛋白表达对U251细胞侵袭潜能影响机制探讨

目的：探讨siRNA干扰降低腺苷酸活化蛋白激酶5（AMPK—related protein kinase5,ARK5）表达对U251细胞侵袭潜能的影响及其机制。方法：采用蛋白质印迹法检测U251细胞中ARK5表达。应用siRNA干扰技术转染U251细胞株,并采用蛋白质印迹法检测瞬时转染后ARK5蛋白表达情况。通过体外侵袭实验检测细胞转染后侵袭能力的变化。ARK5下降后,蛋白质印迹法检测间质细胞来源的YKL-40、N—cadherin、Vimentin蛋白和调节因子Snail、Slug、Twistl和Zebl的表达。结果：转染ARK5质粒的U251细胞ARK5表达下降。ARK5表达降低的U251细胞侵袭并穿透Matrigel膜基质的细胞数量为22,U251对照组为41,SCR／u251对照组为42,两两比较,ARK5表达降低的实验组透膜数比两对照组少（P〈O．001）,同时蛋白质印迹法结果显示,YKL-40、N-cadherin和Vimentin蛋白表达量降低,与间质转化相关的转录因子仅Snail的表达降低,而转录因子Slug、Twistl和Zebl表达无明显改变。结论：应用siRNA干扰技术降低ARK5蛋白的表达使u251细胞侵袭转移能力降低,同时YKL-40、N-cadherin和Vimentin蛋白和转录因子Snail的表达量降低,提示ARK5蛋白表达降低可通过调节间质转化影响u251细胞的侵袭。     

shRNA沉默Sp1对胶质瘤细胞放射敏感性的影响

目的 探讨下调Sp1基因表达对胶质瘤细胞放射敏感性的影响。方法 设计并合成编码shRNA的寡核苷酸序列,克隆入LV3（H1/GFP&Puro）载体中构建重组体。然后重组慢病毒分别感染U251和U87细胞,嘌呤霉素筛选得到稳定转染细胞株。荧光定量RT-PCR和蛋白质印迹法分别检测细胞中Sp1 mRNA和蛋白表达水平;克隆存活法检测细胞存活;流式法检测细胞周期;免疫荧光法检测DNA损伤程度。结果 两株胶质瘤细胞在感染72 h后荧光显微镜观察Sp1慢病毒载体均高表达,RT-PCR和蛋白质印迹法结果显示转染后shRNA-U87和shRNA-U251细胞Sp1 mRMA和蛋白表达量均明显降低（P<0.01）,Sp1敲除率达90%以上。shRNA-U251和shRNA-U87细胞在10%细胞存活水平下的放射增敏比（SER）分别为1.39和1.18;两株Sp1敲除组细胞经辐照后G₂/M期比率及γ-H2AX foci数目与对照组相比均极显著增大。结论 shRNA沉默Sp1增大了X线诱导的G₂/M期阻滞,加重了DNA双链断裂程度,提高了胶质瘤细胞的放射敏感性。     

shRNA沉默Sp1对胶质瘤细胞放射敏感性的影响北大核心CSCD

目的探讨下调Sp1基因表达对胶质瘤细胞放射敏感性的影响。方法设计并合成编码shRNA的寡核苷酸序列,克隆入LV3(H1/GFP&Puro)载体中构建重组体。然后重组慢病毒分别感染U251和U87细胞,嘌呤霉素筛选得到稳定转染细胞株。荧光定量RT-PCR和蛋白质印迹法分别检测细胞中Sp1 mRNA和蛋白表达水平;克隆存活法检测细胞存活;流式法检测细胞周期;免疫荧光法检测DNA损伤程度。结果两株胶质瘤细胞在感染72 h后荧光显微镜观察Sp1慢病毒载体均高表达,RT-PCR和蛋白质印迹法结果显示转染后shRNA-U87和shRNA-U251细胞Sp1 mRMA和蛋白表达量均明显降低(P<0.01),Sp1敲除率达90%以上。shRNA-U251和shRNA-U87细胞在10%细胞存活水平下的放射增敏比(SER)分别为1.39和1.18;两株Sp1敲除组细胞经辐照后G2/M期比率及γ-H2AX foci数目与对照组相比均极显著增大。结论shRNA沉默Sp1增大了X线诱导的G2/M期阻滞,加重了DNA双链断裂程度,提高了胶质瘤细胞的放射敏感性。