体外循环聚氯乙烯管路地塞米松涂层的性能

背景：将地塞米松以某种涂层方式固定到体外循环管道表面,既可持续地起到抗炎作用,又不至于由于血药浓度过大而产生不良反应,最大限度地发挥地塞米松的抗炎作用。 目的：研制新型抗凝血活性的地塞米松磷酸钠涂层管路,评价涂层管道稳定性、抗凝活性及抗血小板等性能。 方法：用浓硫酸、聚乙烯亚胺依次预处理聚氯乙烯体外循环管路表面。分别通过预混、离子键两种方式制备地塞米松磷酸钠涂层聚氯乙烯体外循环管道,对涂层管道进行涂层物定量分析,以未涂层的聚氯乙烯体外循环管路为空白对照,评价3组抗凝血、抗血小板、抗蛋白黏附等性能及涂层聚氯乙烯体外循环管道的体外释放特性。 结果与结论：预混及离子键制备的地塞米松磷酸钠涂层聚氯乙烯管道表面固定地塞米松磷酸钠的最大固定量分别为(2.06±0.68),(3.33±0.75) μg/cm²。预混制备的地塞米松磷酸钠涂层聚氯乙烯管道抗凝血、抗血小板及蛋白黏附效果优于离子键制备的地塞米松磷酸钠涂层聚氯乙烯管道和空白对照组(P < 0.05),且体外释放效果优于离子键制备的地塞米松磷酸钠涂层聚氯乙烯管道。表明通过预混方式制备的地塞米松磷酸钠涂层缓释及抗凝性能良好,有抗血小板黏附及血栓形成的功能,能满足体外循环中短期转流的要求。     

新型多醛基海藻酸钠-肝素复合涂层的制备和筛选

背景：前期实验证明多醛基海藻酸钠-肝素复合涂层具有良好生物相容性和血液相容性,但对于最优制备条件和最优模式尚不清楚。 目的：研制一种新型多醛基氧化海藻酸钠-肝素复合涂层,筛选新型涂层制备的最佳条件。 方法：以正交实验筛选氧化海藻酸钠(或肝素)最优涂层条件,获得3种氧化海藻酸钠/肝素复合涂层模式,将复合涂层通过共价交联的方式固定到氨基化预处理/化学修饰的聚氯乙烯管道表面,从涂层物定量、蛋白黏附实验和表面接触角实验3个方面筛选最优复合涂层模式,并检测最优复合涂层的抗凝血性能。 结果与结论：氧化海藻酸钠涂层物最优涂层条件为50%浓硫酸、0.05%聚乙烯亚胺、反应溶液pH值3.5、反应温度为40 ℃和氧化海藻酸钠质量浓度为2 g/L。肝素涂层物最优涂层条件为70%浓硫酸、0.1%聚乙烯亚胺、反应溶液pH值3.5、反应温度为30 ℃和肝素质量浓度为0.1 g/L。复合涂层物最佳涂层模式氧化海藻酸钠、肝素涂层量分别为(4.07±1.35),(2.13±0.24) μg/cm²,此复合涂层具有良好的生物相容性及抗凝血性能。     

新型醛基化海藻酸钠-肝素复合涂层的制备及性能评价

研制一种新型基于多醛基海藻酸钠和肝素的复合涂层,并就其生物相容性和血液相容性进行实验和评价.通过高碘酸钠氧化海藻酸及重氮化处理肝素获得多糖分子片段,多糖分子片段通过共价交联固定于体外循环管路表面.通过红外及紫外扫描对固定的多糖分子片段进行定性及定量分析;通过血小板粘附实验及蛋白粘附实验对涂层管道的血液相容性进行评价;通过表面接触角实验评价涂层管路的亲水活性;通过凝血功能检测评价管路表面的抗凝血活性.结果显示:氧化海藻酸及重氮化处理后肝素在在管道表面固定确实;涂层组与未涂层组相比,血小板粘附量及血栓形成量均显著减少(P＜0.05);肝素涂层组(LMNH)组与空白对照(C)组相比,蛋白粘附量无显著差异(P＞0.05);海藻酸钠涂层(OSA)组、双涂层(OSA.LMNH)组与LMNH组相比,蛋白粘附量均显著减少(P ＜0.05);LMNH组、OSA.LMNH组APTT及TT时间均显著延长(P＜0.05),抗凝血性能优良;OSA组与C组相比,APTT时间显著延长(P＜0.05)具有一定的抗凝血性能;OSA组、OSA.LMNH组与C组相比,表面接触角明显减小(P ＜0.05);LMNH组与C组相比,表面接触角无显著差异(P＞0.05).实验结果表明,OSA涂层物具有更优的亲水性和抗蛋白粘附性,LMNH涂层物具有更优的抗凝血性能,多糖片段复合涂层综合了单涂层的优点,生物相容性和血液相容性较单涂层均明显改善.     

新型醛基化海藻酸钠抗凝血涂层物制备及性能评价

应用醛基化海藻酸钠交联涂层体外循环管路,并对涂层管路的血液相容性和生物相容性等性能进行研究和评价。将多醛基的氧化海藻酸钠(OSA),固定到体外循环聚氯乙烯(PVC)管路表面,评价其血液相容性和生物相容性等指标,并与空白对照组(PVCC)和进口产品美敦力肝素涂层组(PVCM)比较。结果表明,OSA涂层物有效固定在PVC管道表面,且OSA涂层管路(PVCS)具有良好的抗凝血性能,仅次于PVCM(P<0.05),显著优于PVCC(P<0.05);PVCS蛋白粘附率显著低于PVCC(P<0.05)和PVCM(P<0.05);PVCS血小板粘附量显著低于PVCC(P<0.05),与PVCM相比无显著差异(P>0.05)。PVCS与PVCM脱落率相比,有着相似的趋势。OSA涂层体外循环管路,具有良好的抗凝血性能、优越的生物相容性和较好的稳定性。     

三种温控脱细胞载体的制备与性能评估

背景：设计、制备新型温敏高分子三维细胞支架是目前高分子科学研究的热点之一。 目的：制备3种不同的温控脱细胞载体,并评估其性能。 方法：分别制备共聚异丙基丙烯酰胺温控脱细胞支架、大孔共聚异丙基丙烯酰胺温控脱细胞支架与大孔共聚异丙基丙烯酰胺交联醛基化海藻酸钠温控脱细胞支架,检测3组支架的比表面积、温敏性能、孔隙率、孔径及细胞相容性。 结果与结论：共聚异丙基丙烯酰胺温控脱细胞支架、大孔共聚异丙基丙烯酰胺温控脱细胞支架与大孔共聚异丙基丙烯酰胺交联醛基化海藻酸钠温控脱细胞支架的比表面积分别为135,386,421 m2/g,最低临界溶解温度分别为30,28.5,29.5 ℃,细胞毒性反应分别为2级、2级、1级,说明3种支架均具备温度敏感特性,而且最低临界溶解温度相近;大孔共聚异丙基丙烯酰胺交联醛基化海藻酸钠温控脱细胞支架的细胞相容性明显优于另两种支架。大孔共聚异丙基丙烯酰胺温控脱细胞支架、大孔共聚异丙基丙烯酰胺交联醛基化海藻酸钠温控脱细胞支架的孔隙率与孔径大于共聚异丙基丙烯酰胺温控脱细胞支架(P < 0.05),说明大孔共聚异丙基丙烯酰胺温控脱细胞支架与大孔共聚异丙基丙烯酰胺交联醛基化海藻酸钠温控脱细胞支架具有更加明显的孔洞结构。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料;骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性;组织工程     

鱼皮胶原蛋白海绵组织相容性的体内实验研究

为评价鱼皮胶原蛋白海绵作为植入型生物材料的组织相容性,对草鱼皮胶原海绵的体内细胞附着性、免疫原性、致炎性、稳定性与形变进行了实验研究,并与猪皮胶原海绵相比较。鱼皮酸溶性胶原蛋白（FA）、鱼皮酶溶性胶原蛋白（FP）和猪皮酶溶性胶原蛋白（PP）海绵均为细纤维组成疏松多孔显微结构。2 mm× 2 mm × 8 mm杆状胶原海绵植入SD大鼠后肢（每组n=6）长收肌1周,3种材料内部均有大量有核细胞入驻。比较炎性细胞浸润面积,FP组（（7.93 ± 0.77）mm2）与PP组（（7.49 ± 1.03）mm²）没有显著差异,FA组（（9.81 ± 1.42）mm²）与其他两组具有显著性差异。FP组材料截面变形但边缘清晰,疏松纤维结构完整。FA组材料边缘模糊,内部见散在断裂纤维。PP组材料边缘已失去,未见纤维结构。昆明小鼠（每组 n=5）接受胶原蛋白溶液注射后检测血清特异性IgG水平,酶联免疫吸光度值FA组（0.602 ± 0.036）、FP组（0.518 ± 0.019）、PP组（0.390 ± 0.085）,仅FA组与PP组间有显著性差异。以上结果显示三种材料均适于细胞附着,FP的免疫原性及致炎性接近于PP,FP海绵体内稳定性好于FA海绵与PP海绵。实验结果表明3种检测材料中鱼皮酶溶性胶原海绵（FP）具有组织相容性优势。     

牵张刺激对乳大鼠心房肌细胞瞬时外向钾电流和内向整流钾电流的影响

 目的：探究牵张刺激对乳鼠心房肌细胞瞬时外向钾电流（Ito）、内向整流钾电流（IK1）和动作电位时程（APD）的影响。方法：取1日龄SD乳大鼠心脏,分离、消化获得心房肌细胞。于细胞牵引装置培养24 h分组：对照组不予牵张刺激;牵张组予增加12%硅胶膜面积牵张刺激24 h。膜片钳全细胞记录方法记录细胞膜Ito、IK1和APD的变化。结果：在+60 mV刺激电压水平,牵张组Ito密度与对照组相比明显降低［(16±04）pA/pF vs (121±29) pA/pF,P<001］。在-120 mV刺激电压下,牵张组IK1密度较对照组增大［（-108± 08） pA/pF vs (-88±09)pA/pF,P<001］。牵张组动作电位复极50%（APD50）和复极90％（APD90）均较对照组明显缩短［(105±14）ms vs (155±24) ms,(300± 28) ms vs (563±36) ms,P<001］。结论：牵张刺激可降低乳大鼠心房肌细胞Ito密度,增大IK1密度,缩短APD,这可能是压力负荷增大致心房电重构的基础之一。     

免疫纳米微粒靶向胰腺癌细胞输送siRNA的方法研究

 目的：构建一种向胰腺癌细胞安全、高效输送siRNA的免疫纳米载体。方法：检测纳米载体IONP-PEI（非靶向组）及其与siRNA复合物的表征;通过琼脂糖凝胶电泳检测siRNA结合力、MTS法检测细胞活力和流式细胞术检测转染率以确定其复合siRNA的最佳N/P比值;细胞免疫荧光和普鲁士蓝染色观察scFvCD44v6偶联IONP-PEI的靶向纳米载体（靶向组）在细胞内分布;流式细胞术、荧光显微镜观察、real-time PCR和Western blotting检测靶向组和非靶向组的转染率和转染siKRAS后的干扰效果。结果：IONP和PEI的最适质量比为0.75;纳米载体复合siRNA的最佳N/P比值为20;IONP-PEI/siRNA复合物的电位为（21.73±8.07）mV,粒径为（51.3±2.2）nm。荧光显微镜显示,非靶向组和靶向组转染后均在细胞内,靶向组的转染率为（89.75±1.81）%,高于非靶向组的（59.87±4.52）%,且靶向组的荧光强度高于非靶向组。靶向组的KRAS mRNA的相对表达量为（34.02±615）%,低于非靶向组的（51.09±6.70）%;Western blotting显示靶向组的KRAS蛋白表达量低于非靶向组。结论：非靶向组和靶向组均能够将siRNA转染进细胞内,且靶向组具有更高的转染效率和更好的干扰基因表达效果。本课题构建的scFvCD44v6-IONP-PEI是一种高效、安全和靶向识别胰腺癌细胞的免疫纳米载体。     

聚左乳酸己内酯-胶原蛋白静电纺人工血管的降解研究

探讨聚左旋乳酸己内酯-胶原蛋白构建的可降解人工血管材料的降解规律以及生物相容性。聚左旋乳酸己内酯-胶原蛋白混合溶液通过静电纺丝技术制成静电纺人工血管材料作为实验组(n=40),市售聚四氟乙烯人工血管材料作为对照组(n=40),分别植入兔背部脊柱两侧肌肉,于术后10、30、90、180 d取材,行形态学、组织学观察;并在400 倍光学显微镜视野下进行中性粒细胞、巨噬细胞和淋巴细胞的分类计数。结果镜下聚左旋乳酸己内酯胶原蛋白组材料周围组织炎症反应轻,术后90 d材料碎裂,纤维组织长入材料网孔间隙内,逐步取代材料部位,形成囊状纤维膜;术后180 d材料基本降解殆尽,植入区域组织重塑后形态接近正常组织。聚四氟乙烯组材料周围组织炎症反应轻,术后180 d仍基本保持原有结构,材料周围有薄层纤维组织膜包绕。细胞计数结果提示植入后不同时期两组材料引起的细胞反应类型和反应趋势相同;仅术后10 d时实验组中性粒细胞数量较对照组增多(2244±372 vs 1922±181 个/025 mm2, P<005),其余两组各期各类细胞均无明显差异(P>005)。实验材料降解时间为3～6月,具有生物相容性好、降解规律适宜的良好生物学性能,有作为血管替代物的潜在可能性。     

阴性少免疫沉积型新月体性肾炎患者血清AECA与临床表现的关系研究

目的：探讨抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）阴性少免疫沉积型新月体性肾炎患者血清抗内皮细胞抗体（AECA）表达情况,及其与临床表现的关系。方法：选取2010年至2015年在我院治疗的少免疫沉积型新月体性肾小球肾炎患者,其中ANCA阴性患者45例（观察组）,ANCA阳性患者49例（对照组）,采用Western blot检测各组患者血清AECA水平。结果：观察组平均年龄和伯明翰血管炎活动性评分（BVAS）分别为（4108±943）岁和（1503±382）分,明显低于对照组（P＜005）;观察组出现发热、关节痛的比例分别为2667%和1333%,明显低于对照组（P＜005）;观察组出现肾病综合征比例为4889%,高于对照组（P＜005）;观察组血清AECA阳性率为4667%,明显低于对照组的8163%（P＜005）;观察组IgG AECA共识别7种蛋白,而对照组共识别11种蛋白,其中观察组抗90 kD抗体阳性率为1333%（6/45）,明显低于对照组的5102%（25/49）（P＜005）;观察组抗76 kD抗体阳性患者出现皮疹的比例为100%,明显高于阴性患者（P＜005）,抗200 kD抗体阳性患者BVAS评分为（1802±251）分,明显高于阴性患者（P＜005）。 〖HTH〗结论：〖HTSS〗ANCA阴性少免疫沉积型新月体性肾炎患者血清存在不同的AECA,可能与某些临床表现有关;ANCA阴性和阳性患者AECA有所不同,两者临床表现的差异可能与AECA的不同有关,需待进一步研究。     

生长抑素阳性神经元在大鼠纹状体的形态分布

目的 探讨成年大鼠纹状体内生长抑素（SOM）阳性神经元的形态分布。方法 选取6只SD大鼠,应用免疫细胞化学染色ABC法观察脑纹状体SOM神经元的分布特征。 结果 在大鼠纹状体内SOM免疫反应阳性神经元呈棕黄色,为强阳性或中等阳性染色,免疫反应阳性物质主要存在于胞质和突起。SOM阳性神经元在纹状体呈散在分布,胞体中等大小［（111.81±21.42）μm2］,多为卵圆形、椭圆型或多边形。背侧［（113.52±22.36）μm2］SOM阳性神经元胞体面积大于腹侧［（110.14±20.59）μm2］,外侧［（126.23±23.45）μm2］大于内侧［（97.26±23.63）μm2］。腹内侧区SOM阳性细胞数量百分比最多［（28.34±3.20）％］,其次是背内侧区［（27.64±3.52）％］和腹外侧区［（2498±317）％］,背外侧区最少［（1904±312）％］。 结论 SOM神经元在纹状体结构各区分布的大小及数量不完全相同。     

原卟啉Ⅸ介导的声动力疗法对S180 肿瘤细胞膜损伤研究

探讨频率为1.1 MHz、强度为3 W/cm2的聚焦超声,结合1 μg/mL的原卟啉Ⅸ（PpⅨ）对S180肿瘤细胞膜结构和功能的损伤作用。超声联合PpⅨ作用于S180肿瘤细胞后,通过酸性磷酸酶活力检测细胞生长活力;扫描电子显微镜观测细胞膜表面超微结构;生化分析方法检测Na⁺-K⁺-ATPase、Ca²⁺-ATPase活性,细胞膜唾液酸 (SA)及细胞内谷胱甘肽（GSH）含量;通过荧光酶标仪检测细胞线粒体膜电位及细胞色素C氧化酶含量。实验结果显示：与对照组（Control）、原卟啉Ⅸ组（PpⅨ）、超声组相比,超声联合PpⅨ处理组的细胞生长明显受到抑制,其酸性磷酸酶活力（OD值）由对照组063±003下降至0.34±0.01;细胞膜结构严重破坏,表现为微绒毛消失和胞质部分成分流失;膜表面重要成分如Na⁺-K⁺-ATPase和Ca²⁺-ATPase活性明显下降（P<0.05）,细胞膜唾液酸含量及胞内GSH水平急剧降低（P<0.01）。研究表明：超声联合PpⅨ作用于S180肿瘤细胞后,细胞膜蛋白受到严重破坏,部分膜蛋白流失。研究结果还提示：声动力处理后细胞线粒体膜电位水平显著降低（Rhodamin 123平均荧光强度由对照组14 082.78 ± 840.44下降至7 801.53± 409.15）;细胞色素C氧化酶活性由对照组的（0.015 6 ± 0.002 0）U/min/mg降低至（0.008±0.000 0）U/min/mg,提示线粒体也可能是超声联合PpⅨ对S180肿瘤细胞的作用靶点。     

成骨细胞与镁合金表面硅酸盐-磷酸盐复合涂层的体外相容性

目的 评价成骨细胞在镁合金表面硅酸盐磷酸盐复合涂层上的生长状况,探讨镁合金表面硅酸盐磷酸盐复合涂层与成骨细胞的生物相容性。 方法 用胶原酶消化法分离培养大鼠成骨细胞,并用免疫荧光和茜素红染色法进行鉴定;然后将第4代大鼠的成骨细胞接种于材料表面,用扫描电镜观察成骨细胞在不同表面上黏附形态的变化,同时制备材料浸提液,用浸提液法培养细胞,并通过四甲基偶氮唑盐（MTT）法和碱性磷酸酶（ALP）活性法检测成骨细胞的增殖和分化情况。 结果 将成骨细胞与材料进行复合培养后,扫描电镜下可见,涂层组的成骨细胞生长活力旺盛、形态饱满、分布均匀,而单纯镁合金组未见细胞生长;MTT和ALP活性分析结果显示,硅含量为1%~5%涂层对大鼠成骨细胞的体外生长、增殖和分化的促进作用最佳。 结论 镁合金表面硅酸盐磷酸盐涂层与成骨细胞具有良好的相容性,在体外培养的环境下,有利于细胞的生长、黏附、增殖和分化。     

美托洛尔对心力衰竭大鼠心肌细胞磷酸化缝隙连接蛋白43表达及心肌细胞凋亡的影响

 目的：观察美托洛尔对心力衰竭（HF）大鼠在体心肌组织磷酸化缝隙连接蛋白43（p-Cx43）表达水平和心肌细胞凋亡的影响,并探讨其可能机制。方法：SD大鼠100只随机分为5组（n=20）：假手术（sham）组、HF组、小剂量（1.25 mg·kg-1·d-1）美托洛尔治疗（MetoA）组、中剂量（5 mg·kg-1·d-1）美托洛尔治疗（MetoB）组和大剂量（20 mg·kg-1·d-1）美托洛尔治疗（MetoC）组。缩窄腹主动脉建立HF动物模型,术后第4周开始给药至第8周。术后第4周和第8周超声心动图测定血流动力学指标;术后第8周取出心脏,HE和Masson染色观察心脏结构改变和胶原纤维增生情况,Western blotting检测p-Cx43表达水平,TUNEL法检测心肌细胞凋亡,p-Cx43表达水平与心肌细胞凋亡指数进行Pearson相关分析。结果：(1) 美托洛尔治疗改善HF大鼠血流动力学,在治疗剂量范围内美托洛尔剂量增加可有效逆转HF时的心肌重塑,呈剂量依赖效应。(2) HF组中p-Cx43表达量显著高于sham组（P<001）,而随美托洛尔治疗剂量的增加,p-Cx43表达量较HF组逐渐降低,各治疗组间两两比较亦有显著差异（P<001）。(3) HF组心肌细胞凋亡指数［(51.17±6.94)%］较sham组［(4.62±1.60)%］明显增加（P<001）;MetoA组凋亡指数为(40.60±4.15)%, MetoB组凋亡指数为(30.66±4.00)%,MetoC组凋亡指数为(22.24±5.69)%,均显著低于HF组（P<001）,各治疗组间两两比较亦有显著差异（P<001）。(4) 大鼠心肌组织p-Cx43表达水平与心肌细胞凋亡指数呈显著正相关（r=0.905, P<001）。结论: 美托洛尔对抗HF诱导的心肌细胞凋亡的机制可能与其抑制p-Cx43表达有关。     

海藻酸钠/壳聚糖复合凝胶的制备与细胞毒性评价

背景：海藻酸钠和壳聚糖分别是聚阳离子和聚阴离子的天然高分子材料,二者可以互为交联剂形成复合凝胶,避免使用普通交联剂产生的细胞毒性。 目的：制备海藻酸钠壳聚糖复合凝胶并评价其体外细胞毒性。 方法：以0.25 mol/L乙酸溶解壳聚糖,制成质量浓度30 g/L溶液,再以0.1 mol/L的NaOH中和酸性得到壳聚糖絮状沉淀,将壳聚糖絮状沉淀与质量浓度3%海藻酸钠等比例混合,高频振动混匀,使二者形成复合凝胶。使用傅里叶变换红外光谱、扫描电镜分析观察凝胶成分和交联纤维网络结构。分别以海藻酸钠壳聚糖复合凝胶24,72 h浸提液、聚乙烯24,72 h浸提液及苯酚溶液培养L-929细胞,体外检测其细胞毒性。 结果与结论：傅里叶变换红外光谱检测到海藻酸钠壳聚糖复合凝胶特征性峰值改变,扫描电镜显示其内部形成丰富间隙的空间网络结构。浸提液法检测海藻酸钠壳聚糖复合凝胶的细胞毒性为合格,表明海藻酸钠/壳聚糖复合凝胶具有成为组织工程支架材料的良好条件。中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料;骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性;组织工程全文链接：     

糖尿病足伤口皮肤细胞凋亡情况及AGEs对人皮肤成纤维细胞凋亡的影响

 目的：检测糖尿病足伤口皮肤细胞凋亡情况,探讨晚期糖基化终产物（AGEs）对人皮肤成纤维细胞凋亡的影响。方法：选择36例足部伤口患者,糖尿病组18例,非糖尿病组18例。对2组临床和生化数据进行统计分析。采用免疫组化和TUNEL法检测伤口皮肤细胞凋亡情况。体外培养人原代皮肤成纤维细胞,分别给予正常浓度糖、持续高糖、波动高糖和AGEs干预72 h,采用蛋白质印迹法和流式细胞术测定细胞凋亡情况。结果：与非糖尿病组相比,糖尿病组血糖水平明显增高,伤口持续时间长（P<0.05）。Cleaved caspase-3在非糖尿病组和糖尿病组的免疫反应评分分别为1.04±0.23和3.04±0.31（P<0.05）;TUNEL检测非糖尿病组和糖尿病组的细胞凋亡指数分别为（3.8±0.8）%和（8.4±1.5）%（P<0.05）。人原代皮肤成纤维细胞在正常浓度糖、持续高糖、高糖波动、AGEs干预下,cleaved caspase-3蛋白表达水平分别为0.80±0.13、1.22±0.18、1.46±0.32和1.83±025,凋亡率分别为（2.43±0.19）%、（2.89±0.51）%、（3.99±0.24）%和（6.83±0.36）%。 AGEs组cleaved caspase-3蛋白表达水平和凋亡率均明显高于正常浓度糖组和持续高糖组（P<0.05）。结论：糖尿病皮肤创面细胞凋亡增加,可能是糖尿病皮肤伤口难愈的重要原因之一。与持续高糖、高糖波动组相比,AGEs促进人皮肤成纤维细胞凋亡的作用更强。     

外周血维生素D3在原发性干燥综合征患者中的表达及与病情程度的关系

目的：探讨25（OH）D3在原发性干燥综合征患者中的表达及与病情程度的关系。方法：收集2015年3月至2016年3月于我院就诊的98例原发性干燥综合征患者。按照SSDAI积分分为pSS稳定期组（n=49例）和pSS活动期组（n=49例）,同期选择98例在我院体检的健康志愿者作为对照组。采集所有实验者的B淋巴细胞指标（CD27^high浆细胞、CD27⁺记忆性B细胞）和T淋巴细胞指标肿瘤坏死因子（TNF-α）、IL-6、IL-10、IL-17,检测并分析。采用ELISA法检测维生素D3的水平。观察pSS组和对照组B淋巴细胞指标、T淋巴细胞指标对比,pSS活动期组和pSS稳定期组B淋巴细胞指标、T淋巴细胞指标对比。结果：在B淋巴细胞中,pSS组CD27^high浆细胞、CD27+记忆性B细胞显著低于对照组［（0.87±0.23）vs（1.80±0.20）,（21.75±4.32）vs（33.92±3.19）］（P＜0.05）,在T淋巴细胞指标中,pSS组TNF-α、IL-6、IL-17水平显著高于对照组［（135.89±15.83）μg/L vs（69.03±11.07）μg/L,（98.52±20.17）μg/L vs（40.02±9.42）μg/L,（89.36±16.26）μg/L vs（45.92±9.01）μg/L］（P＜0.05）,IL-10水平显著低于对照组［（46.16±17.05）μg/L vs（9689±10.37）μg/L］（P＜0.05）;在B淋巴细胞中,pSS活动期组CD27high浆细胞、CD27+记忆性B细胞显著低于pSS稳定期组［（0.70±0.10）vs（1.23±0.30）,（17.04±1.90）vs（25.10±2.80）］（P＜0.05）,在T淋巴细胞指标中,pSS活动期组TNF-α、IL-6、IL-17水平显著高于pSS稳定期组［（205.86±28.98）μg/L vs（124.57±16.04）,（114.02±20.73）μg/L vs（81.98±7.40）μg/L,（101.86±15.97）μg/L vs（76.39±4.53）］μg/L（P＜0.05）,IL-10水平显著低于pSS稳定期组［（31.92±8.09）μg/L vs（60.86±6.18）μg/L］（P＜0.05）,pSS活动组为(22.45±3.27)pg/ml,pSS稳定组为(39.03±3.21)pg/ml,对照组为(41.64±5.59）pg/ml。活动组25(OH)D3 水平低于稳定组和对照组(P＜0.05),但稳定组与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05)。结论：原发性干燥综合征患者25（OH）D3水平显著低于正常人,25(OH)D3的不足可使T淋巴细胞和B淋巴细胞浸润及活化,造成腺体功能损伤,与原发性干燥综合征的病情程度以及免疫功能之间存在密切的关系。     

表面矿化修饰煅烧骨/BMP2活性多肽复合MC3T3-E1细胞构建组织工程骨

探讨表面矿化修饰煅烧骨/BMP₂活性多肽复合材料、表面矿化修饰煅烧骨和单纯煅烧骨复合MC3T3-E1细胞构建的组织工程骨在体内的成骨能力。实验分3组,A组：表面矿化修饰煅烧骨/BMP₂活性多肽复合材料,B组：表面矿化修饰煅烧骨,C组：单纯煅烧骨。诱导培养MC3T3-E1细胞,将其分别接种于3组材料,倒置相差显微镜和环境扫描电镜分别观察细胞生长情况。将18只新西兰大白兔随机分成3组,每只大白兔作两侧骶棘肌肌袋模型,然后将3组材料分别植入大白兔骶棘肌内,分别于术后第4、8周各组处死大白兔3只,行组织学观察及新生骨面积测定。通过观察发现MC3T3-E1细胞在3组材料表面生长良好,表面矿化修饰煅烧骨/BMP₂活性多肽复合材料能促进MC3T3-E1细胞在其表面粘附与增殖并能较好地保持细胞的形态。术后第4、8周组织学观察A组材料新生骨明显多于B组,B组多于C组。术后4周和8周新生骨面积测定值A、B、C组分别为（19 712.524±3 782.126）μm²、（28 227.617±2 455.375）μm²,（11 648.507±1 047.221）μm²、（14 592.892±899.532）μm²,（7 986.655±903.487）μm²,（11 254.822±669.508）μm²。表面矿化修饰煅烧骨/BMP₂活性多肽复合材料是一种较理想的骨组织工程复合材料,有望应用于临床。     

静电纺胶原/丝素复合微纳米纤维的制备及细胞相容性研究

采用静电纺丝技术制备胶原/丝素复合微纳米纤维,对其理化性能进行表征并观察其细胞相容性。以六氟异丙醇(HFIP)为溶剂,将胶原和丝素以 100:0.70:30.50:50.30:70.0:100的质量比共混进行电纺。制备的五种材料经戊二醛蒸汽交联12 h。采用扫描电镜、红外光谱、X射线衍射、热重分析和拉伸力学性能测试等方法对其理化性能进行表征。材料种植成纤维细胞后,通过扫描电镜和噻唑兰(MTT)比色法观察其细胞相容性。结果显示制备的纤维平均直径在550~1 100 nm之间,随着丝素含量的增加纤维平均直径增加。交联后纤维的β化程度、结晶度和热稳定性均有一定提高,且随着丝素含量的增加提高越明显;交联后材料的力学性能优于交联前;当丝素含量为70%时,纤维膜的平均断裂强度为(8.70±1.05) MPa,高于其它配比的纤维膜。细胞在材料表面生长状态良好;丝素含量为70%组的细胞粘附和增殖高于其它组,与细胞培养板相比无显著性差异,表明其细胞相容性良好,可望成为一种新型的组织工程支架材料。     

左旋门冬酰胺酶与盐霉素联合作用对急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞株增殖凋亡的影响

 目的：研究左旋门冬酰胺酶（L-asparaginase,L-ASP）与盐霉素（salinomycin,Sal）联合作用对急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞株增殖和凋亡的影响及其机制。方法：CCK-8试剂盒检测细胞增殖情况;Western blotting方法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、caspase-3、caspase-8、caspase-9及细胞色素C表达的变化;流式细胞术分析各实验组细胞凋亡率之间的差别。结果：不同浓度的L-ASP和Sal单独处理Jurkat细胞株后均显示出明显的增殖抑制作用,L-ASP的IC50为812 IU/L,Sal 的IC50为0.75 μmol/L。而两药联合使用的增殖抑制作用更显著（P<0.05）;合用指数计算公式结果显示两药为协同作用。Western blotting 显示联合用药组与L-Asp、Sal单独处理组相比,Bcl-2蛋白表达明显减少,caspase-3、caspase-8、caspase-9和胞浆细胞色素C水平明显增高;干预48 h后行流式细胞术检测结果显示L-ASP（25 IU/L）单独处理组和Sal（0.5μmol/L）单独处理组细胞凋亡率分别为（7.11±0.23）%和（25.43±047）%,与对照组（6.67±0.13）%比较差别有统计学意义（P＜0.05),联合用药组细胞凋亡率（39.12±1.97）%分别与L-ASP、Sal单独处理组比较,差别有统计学意义（P＜0.05)。结论：左旋门冬氨酸酶与盐霉素联合作用于Jurkat细胞具有协同抑制增殖和诱导凋亡的作用。